多基因联合建树多基因联合建树是一种常用的分子进化分析方法，它可以通过多个基因序列的比较来推断物种间的进化关系。
在本文中，我们将详细介绍多基因联合建树的原理、方法、应用和优缺点。
一、多基因联合建树的原理1. 分子进化和系统发育分子进化是指生物体内遗传物质（如DNA或蛋白质）随时间发生的变化。
这些变化可以反映出不同物种之间的亲缘关系，也就是系统发育。
系统发育是指生物体之间历史上的演化关系，包括亲缘关系、分类级别和演化时间等。
2. 多序列比对为了研究不同物种之间的演化关系，需要对它们的基因序列进行比较。
多序列比对是指将两个或以上的序列进行比较，并寻找它们之间相同和不同的部分。
这些相同和不同部分可以用来推断这些序列之间的亲缘关系。
3. 基于距离矩阵法建树距离矩阵法是一种常用于构建系统发育树（phylogenetic tree）的方法。
它首先计算不同序列之间的距离，然后将这些距离转化为一个矩阵。
接着，通过不同的算法（如UPGMA、NJ等）将这个矩阵转化为一棵系统发育树。
4. 多基因联合建树多基因联合建树是指将多个基因序列进行比对，并将它们的比对结果合并起来进行系统发育分析。
这种方法可以提高系统发育分析的准确性和可靠性。
二、多基因联合建树的方法1. 数据获取和处理多基因联合建树需要大量的数据支持，包括不同物种的基因序列、相应的注释信息和分类信息等。
这些数据可以从公共数据库（如NCBI、Ensembl）中获取，并通过一系列数据处理步骤（如序列清洗、去冗余、去污染等）进行预处理。
2. 序列比对和质量评估序列比对是多基因联合建树中最关键的步骤之一。
它可以通过不同的软件（如ClustalW、MUSCLE、MAFFT等）进行。
在比对过程中，需要考虑到序列长度、相似度和缺失情况等问题，并进行相应的质量评估。
3. 构建进化模型和计算距离矩阵在多基因联合建树中，需要选择适当的进化模型来描述不同基因序列之间的进化关系。
这些模型可以通过软件（如ModelTest、jModelTest等）进行选择，并用于计算距离矩阵。
doi: 10.7541/2021.2019.235萨梅诺娃新佩雷斯虫中国新记录刘新华1, 2翁美其2, 3宋 锐5赵媛莉2, 3章晋勇2, 3, 4*肖调义1*(1. 湖南农业大学动物科学技术学院, 长沙 410128; 2. 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室, 农业农村部淡水养殖病害防治重点实验室, 淮安研究中心, 武汉 430072; 3. 中国科学院大学, 北京 100049; 4. 青岛农业大学海洋科学与工程学院, 青岛 266109; 5. 湖南省水产科学研究所, 长沙 410153)摘要: 研究报道了中国首例摇蚊微孢子虫, 结合各发育阶段形态特征、生态学特征及分子特征, 鉴定其为萨梅诺娃新佩雷斯虫Neoperezia semenovaiae Issi, et al . 2012, 系我国新记录。
萨梅诺娃新佩雷斯虫寄生于羽摇蚊幼虫脂肪体组织, 导致其体表呈白浊状。
成熟孢子呈卵圆形, 孢子长(5.7±0.2) μm (5.3—6.3 μm), 宽(3.7±0.1) μm (3.4—4.0 μm)。
透射电镜观察显示各发育阶段均为离核, 发育不同步, 与宿主细胞质直接接触。
早期发育阶段为高电子密度的多核裂殖体阶段, 经原生质团分裂形成单核或多核产孢体, 进一步发育为单核孢子母细胞。
孢子母细胞形状不规则, 周围被内质网环绕, 并逐渐形成微孢子虫的典型结构如极丝、极质体和三层孢壁等。
成熟孢子卵圆形, 离核, 细胞核较大, 位于孢子正中央, 被大量核糖体包围。
极质体分为两部分, 前半部分为海绵状, 后半部分薄膜状。
锚状盘位于孢子前端, 呈蘑菇状。
孢壁三层, 外层为高电子密度层, 厚26.5—62.7 nm, 中间层为电子透明层, 厚151.8—236.1 nm, 里层为质膜层。
同型极丝, 30—31圈, 分2—3列排列。
扩增获得其小核糖体序列为1356 bp, 序列比较发现其与俄罗斯列宁格勒区羽摇蚊的N. semenovaiae 相似性为99.1%。
第４０卷㊀第２期应用海洋学学报Ｖｏｌ ４０，Ｎｏ ２㊀２０２１年５月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙＭａｙ，２０２１中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征张㊀薇１，罗肇河１，高㊀越２，顾海峰１∗㊀收稿日期：２０１９⁃１０⁃２４㊀基金项目：福建省自然科学基金资助项目（２０１９Ｊ０５１５０）；国家自然科学基金资助项目（４１６７６１１７）㊀作者简介：张薇（１９９３ ），女，硕士研究生；Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｗｅｉ＠ｔｉｏ．ｏｒｇ．ｃｎ∗通讯作者：顾海峰（１９７１ ），男，博士，研究员；Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｇｕｈａｉｆｅｎｇ＠ｔｉｏ．ｏｒｇ．ｃｎ（１．自然资源部第三海洋研究所，福建厦门３６１００５；２．厦门大学近海海洋环境科学国家重点实验室，福建厦门３６１００５）摘要：共生藻属（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ）主要指一类与无脊椎动物或原生生物共生的甲藻，是热带和亚热带海洋生态系统常见物种㊂本研究从中国沿海和一艘停靠在厦门港的货轮压舱水中分离出了４株贪食共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ）㊂贪食共生藻运动细胞较小（长９．７ʃ１．３μｍ，宽８．７ʃ０．９μｍ），能够产生不动细胞（直径１１．４ʃ０．３μｍ）和二分裂细胞（直径１２．２ʃ０．６μｍ）㊂扫描电子显微镜下运动细胞顶部有一个单线长甲板型顶沟复合体（ＥｌｏｎｇａｔｅＡｐｉｃａｌＶｅｓｉｃｌｅ，ＥＡＶ），其甲板方程式为ｘ，ＥＡＶ，４ᶄ⁃５ᶄ，５ａ⁃６ａ，９ᶄᶄ，？ｓ，？ｃ，６ᶄᶄᶄ，２ᶄᶄᶄᶄ㊂透射电子显微镜显示其具有Ｅ型眼点㊁单茎的大淀粉核㊁扁平囊泡组成的高尔基体和三层膜组成的叶绿体类囊体㊂４株贪食共生藻的核糖体基因（ＳＳＵｒＤＮＡ，ＩＴＳ和ＬＳＵｒＤＮＡ）㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列完全一致㊂利用最大释然法和贝叶斯方法构建的基于ＬＳＵｒＤＮＡ序列的系统发育树显示：中国沿海和世界其他地方的贪食共生藻很好的聚类在一起，共同组成系群Ｅ㊂中国株系和其他地方贪食共生藻的遗传分化很小，显示它们之间有频繁的基因交流㊂关键词：海洋生物学；甲藻；贪食共生藻；形态分类；分子特征ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．２０９５⁃４９７２．２０２１．０２．００２中图分类号：Ｐ７３５文献标识码：Ａ文章编号：２０９５⁃４９７２（２０２１）０２⁃０１８９⁃１１㊀㊀共生藻属（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ）主要指一类与无脊椎动物或原生生物共生的甲藻，是热带和亚热带海洋生态系统常见物种［１⁃２］㊂其中最常见的是与珊瑚共生的种类，与珊瑚的共生关系是维持珊瑚存活和生长的关键，因此得以被广泛而深入的研究［３⁃４］㊂Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ（１９６２）首次描述了共生藻属，并且认为所有共生的甲藻都是微小亚德里共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎ⁃ｉｕｍｍｉｃｒｏａｄｒｉａｔｉｃｕｍ）［５］，但是后来的研究表明甲藻许多物种的生活史都涉及共生阶段，例如：前沟藻属（Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ）㊁原甲藻属（Ｐｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍ）㊁梨甲藻属（Ｐｙｒｏｃｙｓｔｉｓ）㊁斯克里普藻属（Ｓｃｒｉｐｐｓｉｅｌｌａ）㊁黏球藻属（Ｇｌｏｅｏｄｉｎｉｕｍ）和单沟藻属（Ｐｅｌａｇｏｄｉｎｉｕｍ）的部分物种［６⁃９］㊂共生藻属最早因为其生活史共生阶段的细胞呈球形被划分到共生藻科［１０］，后来Ｍｏｅｓｔｒｕｐ等（２００９）依据其模式种微小亚德里共生藻和最近报道的自在共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｎａｔａｎｓ）具有Ｅ型眼点（ＴｙｐｅＥｓｅｎｓｕＭｏｅｓｔｒｕｐ＆Ｄａｕｇｂｊｅｒｇ，２００７：由一系列砖墙状排列具有膜结构的水晶泡组成且位于叶绿体体外部）和单线长甲板型顶沟复合体（ＥｌｏｎｇａｔｅＡｐｉｃａｌＶｅｓｉｃｌｅ，ＥＡＶ）建议将其划归到修斯藻科［１１］㊂由于大部分共生藻属物种不易体外培养或者因为与无脊椎动物或原生生物长期共生使得其本身形态特征并不显著或者容易变形，很难运用传统的形态学来定义和描述它们［１２⁃１４］㊂基于核糖体大亚基（ＬａｒｇｅＳｕｂｕｎｉｔＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ，ＬＳＵｒＤＮＡ）和叶绿体核糖体（ＣｈｌｏｒｏｐｌａｓｔＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ，ｃｐ２３Ｓ）序列的系统发育研究形成了普遍认可的以系群（Ｃｌａｄｅ）为阶元的共生藻属进化遗传学分类系统［１２，１５⁃１６］㊂共生藻属目前包含Ａ－Ｉ共９个系群，每个系群基于转录间隔区（ＩｎｔｅｒｎａｌＴｒａｎｓｃｒｉｂｅｄＳｐａｃｅｒ，ＩＴＳ）系统发育又可细分为多个亚系群［１７］㊂ＬａＪｅｕｎｅｓｓｅ等（２０１２）基于综合的进化遗传学证据定义了两个新的共生藻：微小共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｍｉｎｕｔｕｍ）和嗜冷共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｐｓｙｇｍｏｐｈｉｌｕｍ），并且建议推广进化遗传学分类系统作为未来定义新共生藻属物种的方法［１３］㊂进化遗传学分类方法虽然解决了共㊃１９０㊀㊃应用海洋学学报４０卷生藻属部分分类学问题，但依然没有形成一个公认的物种命名系统㊂目前仅微小亚德里共生藻㊁自在共生藻和贪食共生藻具有形态和超微结构描述，而多毛共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｐｉｌｏｓｕｍ）㊁川口共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｋａｗａｇｕｔｉｉ）㊁戈罗共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉ⁃ｕｍｇｏｒｅａｕｉｉ）和林奇共生藻（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｌｉｎｕｃｈｅａｅ）仅具有超微结构描述，另外还有８个种（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉ⁃ｕｍｂｅｒｍｕｄｅｎｓｅ㊁Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｃａｒｉｂｏｒｕｍ㊁Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉ⁃ｕｍｃｏｒｃｕｌｏｒｕｍ㊁Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｍｅａｎｄｒｉｎａｅ㊁Ｓｙｍｂｉｏ⁃ｄｉｎｉｕｍｍｕｓｃａｔｉｎｅｉ㊁Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｐｕｌｃｈｒｏｒｕｍ㊁Ｓｙｍｂｉｏ⁃ｄｉｎｉｕｍｇｌｙｎｎｉｉ和Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｔｒｅｎｃｈｉ）没有形态学描述［８，１８⁃２０］㊂贪食共生藻是一种既可以和珊瑚共生又可以自由生活的共生藻，在西北㊁西南和东北温带太平洋地区以及地中海均有报道［２１⁃２２］，但直到最近才被正式命名［２３］㊂Ｊｅｏｎｇ等（２０１４）收集了来自世界各地的共生和自由生活的系群Ｅ共生藻株系，基于形态学和分子生物学方法证明了它们属于同一个种 贪食共生藻［２３］㊂研究表明来自世界各地的贪食共生藻株系的核糖体基因（ＬＳＵｒＤＮＡ，ＩＴＳ和ＳＳＵｒＤＮＡ）㊁ｃｐ２３Ｓ和线粒体细胞色素ｂ基因（ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＣｙ⁃ｔｏｃｈｒｏｍｅｂ，ｃｏｂ）序列高度一致［２３］㊂这些来自细胞内不同位置（细胞核㊁叶绿体和线粒体）的基因常被用于共生藻属物种多样性和生态学研究的标记基因，它们的一致说明不同地理种群的贪食共生藻之间存在不间断的基因交流或者它们具有共同的起源直到近代才因为自然或者人为因素分散到世界各地，但是目前还没有直接的证据来证明这些推断㊂基于ＳＳＵｒＤＮＡ序列的系统发育结果，一株分离自胶州湾的Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｓｐ．（株系Ｇ１５）首次被鉴定为 自由生活 的共生藻［２４］㊂后来的研究推测其也是贪食共生藻［２３］，但是目前还没有相应的形态和超微结构证据㊂我们从中国沿海以及一艘停靠在厦门港的货轮压舱水的底部沉积物中分离出了４株贪食共生藻，运用光镜㊁扫描电子显微镜㊁透射电子显微镜对它们的形态和超微结构进行了细致的研究，并且结合核糖体基因㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列差异和（或）系统发育来讨论世界各地贪食共生藻的遗传进化和人类活动的辅助传播㊂１㊀材料与方法１．１㊀样品采集和培养株系ＳＣＸＭ８２分离自厦门港表层海水㊂采集到的海水经１００μｍ筛绢过滤并且收集滤过液（小于１００μｍ）㊂在奥林帕斯ＢＸ５１显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，Ｔｏ⁃ｋｙｏ）下寻找并挑取单个甲藻细胞到预装有ｆ／２⁃Ｓｉ海水培养基［２５］的９６孔细胞培养板㊂样品在２０ħ㊁９０μｍｏｌ／（ｍ２㊃ｓ）光照和１２ｈʒ１２ｈ光暗循环（标准培养条件）下培养富集㊂株系ＧＬＮ和株系ＳｙｍＮＤ由厦门大学海洋微型生物保种中心（ＣＣＭＡ）提供，并且在ｆ／２⁃Ｓｉ培养基和标准条件下培养㊂株系ＸＩＮＧ分离自一艘停靠在厦门港货轮压舱水的底部沉积物中的不动细胞，并且在ｆ／２⁃Ｓｉ培养基和标准条件下培养㊂样品具体采集时间地点见表１㊂表１㊀贪食共生藻株系㊁采集地点和时间Ｔａｂ．１㊀ＳｔｒａｉｎｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ，ｓｉｔｅｓａｎｄｔｉｍｅｏｆｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ株系采集地点采集时间北纬东经ＧＬＮ黄海２０１３年１月３６ʎ０３．４９ᶄ１２０ʎ１５．７２ᶄＳｙｍＮＤ东海２０１３年２月２６ʎ３７．９１ᶄ１１９ʎ４５．２８ᶄＳＣＸＭ８２东海２００９年１２月２４ʎ２６．０１ᶄ１１８ʎ０４．７９ᶄＸＩＮＧ压舱水２００４年５月１．２㊀光镜观察利用装备有微分干涉光源（ＤＩＣ）和ＡｘｉｏｃａｍＨＲｃ数码相机的蔡司显微镜（ＣａｒｌＺｅｉｓｓ，Ｇöｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）观察并拍摄贪食共生藻的不动细胞㊁对数生长期的运动细胞和二分裂状态的细胞（ＤｏｕｂｌｅｔＣｅｌｌ）㊂运用蔡司软件系统（ＡｘｉｏｖｉｓｉｏｎＳｏｆｔｗａｒｅＶ４．８．２）在拍摄到的高分辨率图上对细胞进行大小测量，株系ＧＬＮ和ＸＩＮＧ分别量取５０个细胞㊂１．３㊀扫描电子显微镜观察取１ｍＬ对数生长期细胞与无菌海水配制的锇酸（２％，体积占比，下同）等体积混合在２０ħ下避光隔夜固定㊂将自然沉降下来的细胞滴加到涂有左旋多聚赖氨酸（分子量７００００ １５００００，Ｓｉｇｍａ）的盖玻片上，静置３０ｍｉｎ以便细胞粘附在盖玻片上㊂样品先后经过无菌海水㊁５０％无菌海水和Ｍｉｌｌ⁃Ｑ水各浸泡１０ｍｉｎ除去盐分，然后乙醇梯度脱水（１０％㊁２期张㊀薇，等：中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征㊃１９１㊀㊃３０％㊁５０％㊁７０％㊁９０％和３次１００％，每次１０ｍｉｎ）㊂样品经过Ｋ８５０临界点干燥仪（Ｑｕｏｒｕｍ／Ｅｍｉｔｅｃｈ，ＷｅｓｔＳｕｓｓｅｘ）干燥㊁喷金，最后在ＬＥＯ１５３０扫描电子显微镜（Ｚｅｉｓｓ／ＬＥＯ，Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ）下观察拍照㊂１．４㊀透射电子显微镜观察取戊二醛（ＴｅｄＰｅｌｌａ，Ｒｅｄｄｉｎｇ，ＣＡ）缓慢加入到２０ｍＬ对数生长期藻液中（终浓度２．５％），２０ħ固定３ｈ㊂离心（４０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）收集细胞并用无菌海水洗涤３次，每次１０ｍｉｎ，然后加入１％无菌海水配制的锇酸在４ħ避光隔夜固定㊂离心（４０００ｒ／ｍｉｎ，３ｍｉｎ）收集细胞并且用无菌海水洗涤３次，每次１０ｍｉｎ㊂样品经乙醇梯度脱水（１０％㊁３０％㊁５０％㊁７０％㊁９０％和３次１００％，每次１０ｍｉｎ），然后用Ｓｐｕｒｒ包埋剂包埋［２６］㊂包埋块经ＥＭＵＣ７超薄切片机（Ｌｅｉｃａ，Ｖｉｅｎｎａ）切片，然后乙酸双氧铀和柠檬酸铅染色，最后在ＪＥＯＬＪＥＭ⁃１４００透射电子显微镜（ＪＥＯＬ，Ｔｏｋｙｏ）下观察拍照㊂１．５㊀ＤＮＡ提取㊁序列扩增和测序取大约２０ｍＬ对数生长期藻液室温下离心（１３４００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ）收集细胞㊂用ＭｉｎｉＢＥＳＴＵ⁃ｎｉｖｅｒｓａｌＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ（Ｔａｋａｒａ，Ｔｏｋｙｏ）试剂盒按其说明书步骤提取样品总ＤＮＡ㊂ＬＳＵｒＤＮＡ（Ｄ１⁃Ｄ６区）序列扩增引物为Ｄ１Ｒ［２７］和２８⁃１４８３Ｒ［２８］㊂ＳＳＵｒＤＮＡ序列扩增用真核生物通用引物ＰｒｉｍｅｒＡ和ＰｒｉｍｅｒＢ［２９］㊂５０μＬ聚合酶链反应（ＰＣＲ）体系：１ˑＰＣＲ缓冲液，４种脱氧核糖核酸各０．２ｍｍｏｌ／Ｌ，正反方向引物各０．２μｍｏｌ／Ｌ，１０ｎｇ模板ＤＮＡ和１Ｕ的ＥｘＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｔａｋａｒａ，Ｔｏｋｙｏ）㊂ＰＣＲ反应程序：９４ħ预变性１０ｍｉｎ；然后３０个循环扩增，每个循环包括９４ħ变性１ｍｉｎ，４５ħ退火５０ｓ，７２ħ延伸１ｍｉｎ；最后７２ħ延伸１０ｍｉｎ㊂ＩＴＳ（ＩＴＳ１⁃５．８Ｓ⁃ＩＴＳ２）序列扩增引物为ＩＴＳＡ和ＩＴＳＢ［３０］㊂除了退火温度改为５０ħ外，ＰＣＲ反应体系和程序和前述ＬＳＵｒＤＮＡ序列扩增方案相同㊂ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列分别按照Ｓａｎｔｏｓ等（２００２）和Ｚｈａｎｇ等（２００５）提供的引物和反应程序进行扩增［３１⁃３２］㊂以上ＰＣＲ产物经过纯化后送生工生物工程（上海）股份有限公司，利用ＡＢＩＰＲＩＳＭ３７３０ＸＬ测序仪（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）双向直接测序㊂１．６㊀序列处理和系统发育分析中国沿海贪食共生藻的ＬＳＵｒＤＮＡ序列和基因库（Ｇｅｎｂａｎｋ）上下载的其他共生藻的序列首先经过ＭＡＦＦＴＶ７．１１０［３３］在线系统在Ｌ⁃ＩＮＳ⁃Ｉ方案［３４］下进行比对，然后用ＢｉｏＥｄｉｔＶ７．０．５人工切除头尾多余的序列［３５］㊂对于贝叶斯（ＢａｙｅｓｉａｎＩｎｆｅｒｅｎｃｅ，ＢＩ）系统发育，我们首先采用ｊＭｏｄｅｌＴｅｓｔ２Ｖ２．１．４［３６］在Ａｋａｉｋｅ信息准则（ＡＩＣ）下选择最优进化模型，然后运用ＭｒＢａｙｅｓ３．２［３７］和选出的最优模型（ＴＩＭ３＋Ｉ＋Ｇ）来构建系统发育树㊂４条马尔可夫链蒙特卡尔分析（ＭＣＭＣ，３条热链１条冷链）同时运行１ˑ１０６代，每１００代取样一次㊂马尔可夫链蒙特卡尔的收敛利用ＡＷＴＹ在线工具的累积函数来作图形化的评估［３８］，并且分析每个分支的后验概率（ＰｏｓｔｅｒｉｏｒＰｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ，ＰＰ）值㊂最大似然法（ＭａｘｉｍｕｍＬｉｋｅｌｉ⁃ｈｏｏｄ，ＭＬ）系统发育树利用Ｔ⁃ＲＥＸ网站［３９］上的ＲａｘＭＬＶ７．２．６［４０］进行构建，并运行１０００次自展分析来衡量分支的节点支持率㊂ＩＴＳ和基因库（Ｇｅｎｂａｎｋ）上下载的其他地区的贪食共生藻序列同样经过ＭＡＦＦＴＶ７．１１０［３３］在线系统比对，然后运用ＰＡＵＰ∗４ｂ１０软件［４１］来计算不同地理株系间的遗传距离（未校正Ｐ距离）㊂ＳＳＵｒＤＮＡ㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列和基因库上下载的其他地区贪食共生藻的对应序列用ＤＮＡｍａｎ（Ｖｅｒｓｉｏｎ６．０，ＬｙｎｎｏｎＢｉｏｓｏｆｔ）进行比对并且计算相似度㊂２㊀结果与讨论２．１㊀形态和超微结构贪食共生藻ＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍＪｅｏｎｇ，Ｌｅｅ，Ｋａｎｇ＆ＬａＪｅｕｎｅｓｓｅ的形态和超微结构见图１ ４㊂３株贪食共生藻（ＳＣＸＭ８２，ＧＬＮ，ＧｙｍＮＤ）分离自中国沿海水体，１株（ＸＩＮＧ）采集自一艘停靠在厦门港的货轮压舱水的底部沉积物（表１）㊂株系ＸＩＮＧ的运动细胞长９．７ʃ１．３μｍ，宽８．７ʃ０．９μｍ（ｎ＝５０）；球形不动细胞直径１１．４ʃ０．３μｍ；近球形二分裂细胞直径１２．２ʃ０．６μｍ㊂运动细胞上鞘略大于下鞘，鞭毛长大约是细胞长的１．５倍［图１（ａ）］㊂细胞核大且呈球形位于上鞘，有一个淀粉核位于细胞核下方［图１（ｂ）㊁（ｃ）］㊂眼点位于腹面纵沟位置［图１（ｃ）］㊂细胞常在一个很小范围内旋转，几个月甚至半年不更新培养基都可存活㊂在培养液底部常见许多不动细胞［图１（ｄ）］和二分裂细胞［图１（ｅ）］，且它们都有一个明亮的红色体，培养条件下未见四分裂和八分裂细胞㊂在扫描电子显微镜下对株系ＸＩＮＧ㊁ＧＬＮ和ＧｙｍＮＤ进行观察和拍照，它们均显示出相似的甲板排列㊂运动细胞上鞘呈球形，下鞘从背腹面看略微不对称［图２（ａ）㊁（ｂ）］㊂一个单线长甲板型顶沟复合体位于细胞顶部［图２（ｃ）至（ｇ）］，顶沟复合体中心有大约１３个球形突起（Ｋｎｏｂ）［图２（ｃ）㊁（ｄ）］㊂一块方形的小板（Ｘ板）位于顶沟复合体的腹面［图㊃１９２㊀㊃应用海洋学学报４０卷２（ｃ）至（ｇ）］㊂运动细胞具有５块顶板（ＡｐｉｃａｌＰｌａｔｅ），一些细胞（大约１６％）的甲板２ᶄ和３ᶄ可能融合成一块［图２（ｆ）㊁（ｇ）］㊂细胞具有９块沟前板（ＰｒｅｃｉｎｇｕｌａｒＰｌａｔｅ）和６块前间插板（ＡｎｔｅｒｉｏｒＩｎｔｅｒ⁃ｃａｌａｒｙＰｌａｔｅ）［图２（ａ）㊁（ｂ）㊁（ｃ）㊁（ｇ）］㊂甲板３ａ㊁４ａ和５ａ可变，极少量细胞（大约１％）的甲板４ａ和５ａ合并成一块，而３ａ则可能分裂成两块（未列出）㊂横沟（Ｃｉｎｇｕｌｕｍ）和纵沟都很宽［图２（ａ）］㊂横沟位于细胞中部，由两排五边形甲板组成，下旋大约一个横沟宽度［图２（ａ）㊁（ｉ）］㊂鞭毛孔位于纵沟位置，鞭毛孔之间有一个捕食茎（Ｐｅｄｕｎｃｌｅ）［图２（ｈ）］㊂下鞘由６块沟后板（ＰｏｓｔｃｉｎｇｕｌａｒＰｌａｔｅ）和２块底板（ＡｎｔａｐｉｃａｌＰｌａｔｅ）组成［图２（ｊ）至（ｌ）］㊂２块纵沟板（ｓｐ和ｓ）清晰可见，另外还有一块（ｓ？）仅露出了一部分［图２（ｌ）］㊂图３画出了中国沿海贪食共生藻典型的甲板排列示意图㊂图１㊀贪食共生藻（株系ＸＩＮＧ）光镜图片Ｆｉｇ．１㊀ＬｉｇｈｔｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ（ｓｔｒａｉｎＸＩＮＧ）（ａ）：运动细胞腹面观，示纵沟鞭毛（箭头）；（ｂ）：运动细胞背面观，示椭圆形细胞核（Ｎ）和单茎的淀粉核（Ｐｙ）；（ｃ）：细胞侧面观，示眼点（箭头）和淀粉核（Ｐｙ）；（ｄ）：不动细胞，示红色体（箭头）；（ｅ）：二分裂细胞，示红色体（箭头）㊂㊀㊀在透射电子显微镜下对株系ＸＩＮＧ和ＧＬＮ进行观察和拍照，它们均显示出相似的超微结构㊂横切面和纵切面显示有许多形状不规则的叶绿体分布在细胞周围［图４（ａ）至（ｃ）］㊂细胞核位于细胞上鞘，内含许多染色体；油滴和线粒体随机散落于细胞内部［图４（ａ）㊁（ｂ）］㊂１个外包淀粉鞘的单茎大淀粉核（Ｐｙｒｅｎｏｉｄ）位于细胞中上部［图４（ａ）㊁（ｃ）］㊂周质膜由一层外膜和内部的一系列甲板组成；位于细胞顶端的球形突起清晰可见［图４（ｄ）］㊂眼点在叶绿体外部位于纵沟，由一系列砖墙状排列具有膜结构的水晶泡组成［图４（ｅ）］㊂高尔基体由许多平行排列扁平的囊泡组成，两侧有许多运输囊泡［图４（ｆ）］㊂叶绿体内含平行排列的３层膜组成的类囊体［图４（ｇ）］㊂２．２ 分子特征和系统发育本研究分离到的４株贪食共生藻的核糖体基因（ＳＳＵｒＤＮＡ㊁ＩＴＳ和ＬＳＵｒＤＮＡ）㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列完全一致㊂对于ＬＳＵｒＤＮＡ，它们和胶州湾（株系Ｇ１５，ＡＹ１６０１２３部分序列）㊁地中海（株系ＲＣＣ１５２１，ＫＦ３６４６０６）的贪食共生藻序列相同，但和韩国（株系ＳｖＦＬ１，ＨＦ５６８８３０）㊁英国（株系ＣＣ⁃ＭＰ４２１，ＡＹ６８４２６４）以及美国（株系ｒｔ⁃３８３，ＫＦ３６４６０５）的贪食共生藻序列分别有１ｂｐ㊁１ｂｐ以及２ｂｐ的差异㊂基于ＬＳＵｒＤＮＡ序列由最大似然法和贝叶斯方法构建的系统发育树显示出相似的分支结构（图５）㊂中国沿海和世界其他地方的贪食共生藻很好的聚类在一起组成系群Ｅ，自展分析支持率和后验概率值都达到了最大值（分别为１００％和１．００）㊂但是该种和其他类群的距离较远，表明该种为一个完全分化的物种㊂对于ＩＴＳ（５８０ｂｐ），它们和胶州湾（株系Ｇ１５，ＡＹ１６０１２３）㊁韩国（株系ＳｖＦＬ１，ＨＦ５６８８３０）㊁英国（株系ＣＣ⁃ＭＰ４２１，ＥＵ０７４９０７）㊁日本（株系ＲＩＫＥＮ，ＡＢ５４６５９９）以及美国（株系ｒｔ⁃３８３，ＡＦ３３４６５９）的贪食共生藻分别有１ｂｐ（相似度９９．８２％）㊁３ｂｐ（相似度９９．４７％）㊁３ｂｐ（相似度９９．４７％）㊁４ｂｐ２期张㊀薇，等：中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征㊃１９３㊀㊃图２㊀贪食共生藻（株系ＸＩＮＧ）运动细胞扫描电子显微镜图片Ｆｉｇ．２㊀ＳｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍｍｏｔｉｌｅｃｅｌｌｓ（ｓｔｒａｉｎＸＩＮＧ）（ａ）：腹面观；（ｂ）：背面观；（ｃ）：顶面观，示ＥＡＶ型顶沟（箭头）；（ｄ）至（ｆ）：顶面观，示ＥＡＶ型顶沟和其周围的板块；（ｇ）：顶面观，示Ｘ板㊁顶板和间插板；（ｈ）：腹面观，示捕食茎（箭头）；（ｉ）：背面观，示横沟板；（ｊ）㊁（ｋ）：底面观，示底板和沟后板；（ｌ）：底面观，示纵沟板㊂（相似度９９．２９％）以及５ｂｐ（相似度９９．１２％）的差异㊂世界各地贪食共生藻株系间基于ＩＴＳ序列的遗传距离（未校正Ｐ距离）为０．００１７ ０．００８７（表２）㊂对于ＳＳＵｒＤＮＡ（序列长度１７５２ｂｐ），它们和胶州湾（株系Ｇ１５，ＡＹ１６０１２３）㊁韩国（株系ＳｖＦＬ１，ＨＦ５６８８３０）㊁英国（株系ＣＣＭＰ４２１，ＡＦ２７４２７９）以及美国（株系ｒｔ⁃３８３，ＡＦ２２５９６５）的贪食共生藻都有２ｂｐ（相似度９９．８９％）的差异，而对于ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ，它们和世界各地的贪食共生藻序列完全相同㊂中国株系和其他地方贪食共生藻的遗传分化很小，显示它们之间有频繁的基因交流㊂㊃１９４㊀㊃应用海洋学学报４０卷图３㊀贪食共生藻典型的甲板排列示意图Ｆｉｇ．３㊀ＬｉｎｅｄｒａｗｉｎｇｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｐａｔｔｅｒｎｔｈｅｃａｌｐｌａｔｅｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ图４㊀贪食共生藻（株系ＸＩＮＧ）运动细胞透射电子显微镜图片Ｆｉｇ．４㊀ＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍｍｏｔｉｌｅｃｅｌｌｓ（ｓｔｒａｉｎＸＩＮＧ）（ａ）：纵切面，示细胞核（Ｎ）㊁叶绿体（ｃｈｌ）㊁淀粉核（Ｐｙ）㊁线粒体（ｍｔ）和油滴（Ｌ）；（ｂ）：横切面，示细胞核（Ｎ）和环绕的叶绿体（ｃｈｌ）；（ｃ）：横切面，示单茎的淀粉核（Ｐｙ）；（ｄ）：纵切面，示甲板（ｔ）㊁甲板间隙（ｓ）㊁外膜（ｏｍ）和顶部的球形突起（ｋ）；（ｅ）：Ｅ型眼点；（ｆ）：高尔基体和两侧的运输囊泡（箭头）；（ｇ）：叶绿体及其三层膜组成的类囊体（箭头）㊂２期张㊀薇，等：中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征㊃１９５㊀㊃图５㊀基于核糖体大亚基（ＬＳＵｒＲＮＡ，Ｄ１－Ｄ２区）序列由最大似然法构建的共生藻属系统发育树Ｆｉｇ．５㊀ＰｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｉｎｆｅｒｒｅｄｆｒｏｍＬＳＵｒＤＮＡ（Ｄ１－Ｄ２ｒｅｇｉｏｎ）ｓｅｑｕｅｎｃｅｂａｓｅｄｏｎｍａｘｉｍｕｍｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ（ＭＬ）单沟藻（Ｐｅｌａｇｏｄｉｎｉｕｍｂéｉｉ）选为外源类群；节点的数字是最大似然法的自展分析支持度（左）和贝叶斯的后验概率（右）；自展分析支持度小于５０或者后验概率小于０．５的以 ⁃ 代替㊂表２㊀基于转录间隔区序列（５８０ｂｐ）的贪食共生藻不同地理株系间的遗传距离（未校正Ｐ距离）Ｔａｂ．２㊀Ｅｓｔｉｍａｔｅｄｕｎｃｏｒｒｅｃｔｅｄｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｓ（Ｐｖａｌｕｅｓ）ｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｏｇｒａｐｈｉｃＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍｓｔｒａｉｎｓｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆＩＴＳｒｅｇｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ（５８０ｂｐ）株系（采集地点）ｒｔ⁃３８３（美国）ＳｖＦＬ１（韩国）ＲＩＫＥＮ（日本）ＣＣＭＰ４２１（英国）Ｇ１５（中国）ＸＩＮＧ／ＳｙｍＮＤ（中国）ｒｔ⁃３８３（美国）０．０００００．００１７０．００１７０．００３５０．００８７０．００６９ＳｖＦＬ１（韩国）０．００１７０．０００００．０００００．００１７０．００６９０．００５２ＲＩＫＥＮ（日本）０．００１７０．０００００．０００００．００１７０．００６９０．００５２ＣＣＭＰ４２１（英国）０．００３５０．００１７０．００１７０．０００００．００５２０．００３５Ｇ１５（中国）０．００８７０．００６９０．００６９０．００５２０．０００００．００１７ＸＩＮＧ／ＳｙｍＮＤ（中国）０．００６９０．００５２０．００５２０．００３５０．００１７０．００００２．３㊀讨论２．３．１㊀形态和超微结构特征㊀目前只有微小亚德里共生藻㊁自在共生藻和贪食共生藻的甲板结构被描述［２３，４２⁃４３］㊂中国沿海采集到的共生藻株系的甲板方程为：ｘ，ＥＡＶ，４ᶄ⁃５ᶄ，５ａ⁃６ａ，９ᶄᶄ，？ｓ，？ｃ，６ᶄᶄᶄ，２ᶄᶄᶄᶄ，基本符合贪食共生藻的最初描述㊂然而Ｊｅｏｎｇ等（２０１４）报道称英国的贪食共生藻（株系ＣＣＭＰ４２１）顶板为５ ７块㊁沟前板为８块［２３］，而中国沿海株系的顶板为４ ５块，沟前板为９块，这可能是不同地理株系的贪食共生藻甲板具有可变性㊂实际上㊃１９６㊀㊃应用海洋学学报４０卷不仅上鞘，韩国贪食共生藻（株系ＳｖＦＬ１）下鞘的沟后板是６块或７块，而底板也在２块和３块之间变化［２３］㊂甲板可变的情况也同样出现在微小亚德里共生藻和自在共生藻［４２⁃４３］，说明共生藻属物种甲板结构在一定的范围内具有可变的通性，这给共生藻属的分类学研究增加了困难㊂超微结构显示英国（株系ＣＣＭＰ４２１）和韩国贪食共生藻（株系ＳｖＦＬ１）的淀粉核都具有２个茎［２３］，而中国沿海株系的淀粉核都只有１个茎㊂目前除了戈罗共生藻的淀粉核具有３个茎外，其他已报到的共生藻属物种（微小亚德里共生藻㊁自在共生藻㊁林奇共生藻㊁川口共生藻和多毛共生藻）的淀粉核都是２个茎［２，４２⁃４４］㊂淀粉核的茎数目变化是由于地理种群间的差异，还是存在亚种水平的差别，需要更多的株系和实验来阐明㊂以往的研究很少涉及共生藻属物种的高尔基体形态，仅Ｂｌａｎｋ（１９８７）通过冷冻电镜三维重构技术展示了一株分离自疣表孔珊瑚（Ｍｏｎｔｉｐｏｒａｖｅｒｒｕｃｏｓａ）的共生藻不动细胞的高尔基体［４５］，我们首次报道了贪食共生藻运动细胞中由许多平行排列扁平囊泡组成的高尔基体形态㊂贪食共生藻运动细胞中高尔基体两侧的运输小泡比前者多［４５］，说明贪食共生藻运动细胞的高尔基体代谢活动显著高于疣表孔珊瑚共生藻的不动细胞㊂２．３．２㊀兼性营养特性㊀研究表明许多共生藻属物种具有捕食茎［２，２３，４２⁃４３］，共生藻物种的兼性营养能力极大的增强了它们在时常处于低营养盐的珊瑚礁环境下存活和繁殖的能力［４６］㊂室内培养条件下显示中国沿海贪食共生藻株系生命力顽强，几个月甚至半年不更新培养基都可良好存活，兼性营养能力可能是重要的原因㊂Ｊｅｏｎｇ等（２０１２）通过实验证明了贪食共生藻能够通过捕食茎摄食细菌㊁蓝藻和小型藻类，并且观察记录到了它能够摄食掉珊瑚礁地区很大一部分的聚球藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）［４６］㊂另外，Ｓｈａｏ等（２００４）从珠江口附近的一次赤潮水体中分离出了贪食共生藻［４７］，说明其可能在某些物种赤潮的消亡过程中扮演非常重要的角色㊂２．３．３㊀分子特征与传播的关系㊀自１５世纪大航海时代以来，船运极大地促进了世界经济㊁科技㊁文化的交流，缩短了世界各地的时空距离㊂日益发达的船运线路使得包括甲藻在内的许多生物通过水产进出口或者压舱水被带往世界各地，极大的拓展了它们的地理分布［４８⁃５０］㊂基于ＬＳＵｒＤＮＡ序列的系统发育显示世界各地贪食共生藻很好的聚类在一起，而且它们ＩＴＳ序列遗传距离也显著的低于甲藻种间遗传距离的统计值（０．０１ ０．０４）［５１］㊂Ｊｅｏｎｇ等的研究［２３］和本研究表明，西北㊁西南和东北温带太平洋地区以及地中海分离出的贪食共生藻的核糖体基因㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ基因序列高度一致㊂这些来自细胞核㊁叶绿体和线粒体等细胞内不同位置的基因常常被用于共生藻属物种多样性和生态学研究的标记基因［１２，３１⁃３２］㊂综合的形态和进化遗传证据表明世界各地贪食共生藻具有极其相近的亲缘关系㊂我们从一艘停靠在厦门港的货轮压舱水底部沉积物中分离出贪食共生藻不动细胞并且成功的培养成株系，表明其可以在船舶压舱水中长期存活，暗示世界各地的贪食共生藻可能具有共同的起源直到近代才因为人类活动扩散到世界各地㊂３㊀结论我们从中国沿海及一艘停靠在厦门港的货轮压舱水中分离出了４株贪食共生藻，它们的核糖体基因㊁ｃｐ２３Ｓ和ｃｏｂ序列完全一致㊂中国沿海和世界其他地方的贪食共生藻很好的聚类在一起组成系群Ｅ㊂中国株系和其他地方贪食共生藻的遗传分化很小，显示它们之间有频繁的基因交流㊂室内培养条件下贪食共生藻生命力顽强，兼性营养能力可能是它们能够在压舱水中存活的重要原因㊂形态和遗传证据表明世界各地贪食共生藻具有极其相近的亲缘关系，采样记录也表明其不动细胞可以在船舶压舱水中长期存活，暗示世界各地的贪食共生藻可能具有共同的起源并且直到近代才因为人类活动扩散到世界各地㊂参考文献：［１］㊀ＭＵＳＣＡＴＩＮＥＬ，ＰＯＲＴＥＲＪＷ．Ｒｅｅｆｃｏｒａｌｓ：ｍｕｔｕａｌｉｓｔｉｃｓｙｍｂｉｏｓｅｓａｄａｐｔｅｄｔｏｎｕｔｒｉｅｎｔ⁃ｐｏｏｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，１９７７，２７（７）：４５４⁃４６０．［２］㊀ＴＲＥＮＣＨＲＫ，ＢＬＡＮＫＲＪ．Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｍｉｃｒｏａｄｒｉａｔｉｃｕｍｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ，Ｓ．ｇｏｒｅａｕｉｉｓｐ．ｎｏｖ．，Ｓ．ｋａｗａｇｕｔｉｉｓｐ．ｎｏｖ．ａｎｄＳ．ｐｉｌｏｓｕｍｓｐ．ｎｏｖ．：ｇｙｍ⁃ｎｏｄｉｎｉｏｉｄｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｎｔｓｏｆｍａｒｉｎｅｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９８７，２３（３）：４６９⁃４８１．［３］㊀ＨＩＲＯＳＥＭ，ＫＩＮＺＩＥＲ，ＨＩＤＡＫＡＭ．Ｔｉｍｉｎｇａｎｄｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅｎｔｒｙｏｆｚｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａｅｉｎｔｏｏｏｃｙｔｅｓｏｆｈｅｒｍａｔｙｐｉｃｃｏｒａｌｓ［Ｊ］．ＣｏｒａｌＲｅｅｆｓ，２００１，２０（３）：２７３⁃２８０．［４］㊀ＫＥＭＰＤＷ，ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ⁃ＰＥＣＨＸ，ＩＧＬＥＳＩＡＳ⁃ＰＲＩＥＴＯＲ，ｅｔａｌ．ＣｏｍｍｕｎｉｔｙｄｙｎａｍｉｃｓａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｓｐｐ．ｂｅｆｏｒｅ，ｄｕｒｉｎｇ，ａｎｄａｆｔｅｒａｃｏｒａｌｂｌｅａｃｈｉｎｇｅｖｅｎｔ［Ｊ］．ＬｉｍｎｏｌｏｇｙａｎｄＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ，２０１５，５９（３）：７８８⁃７９７．［５］㊀ＦＲＥＵＤＥＮＴＨＡＬＨＤ．Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｇｅｎ．ｎｏｖ．ａｎｄＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｍｉｃｒｏａｄｒｉａｔｉｃｕｍｓｐ．ｎｏｖ．，ａＺｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａ：ｔａｘｏｎｏｍｙ，ｌｉｆｅｃｙｃｌｅ，ａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ２期张㊀薇，等：中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征㊃１９７㊀㊃［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｒｏｔｏｚｏｏｌｏｇｙ，１９６２，９（１）：４５⁃５２．［６］㊀ＴＡＹＬＯＲＤＬ．ＯｎｔｈｅｓｙｍｂｉｏｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎＡｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍｋｌｅｂｓｉｉ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）ａｎｄＡｍｐｈｉｓｃｏｌｏｐｓｌａｎｇｅｒｈａｎｓｉ（Ｔｕｒｂｅｌｌａｒｉａ：Ａｃｏｅｌａ）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＵＫ，１９７１，５１（２）：３０１⁃３１３．［７］㊀ＴＲＥＮＣＨＲＫ．Ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｉｎｎｏｎ⁃ｐａｒａｓｉｔｉｃｓｙｍｂｉｏｓｅｓ［Ｍ］／／．ＴＡＹＬＯＲＦＪＲ．ＴｈｅＢｉｏｌｏｇｙｏｆＤｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ．Ｏｘｆｏｒｄ：ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８７：５３０⁃５７０．［８］㊀ＢＡＮＡＳＺＡＫＡＴ，ＩＧＬＥＳＴＡＳ⁃ＰＲＩＥＴＯＲ，ＴＲＥＮＣＨＲＫ．Ｓｃｒｉｐｐｓｉｅｌｌａｖｅｌｅｌｌａｅｓｐ．ｎｏｖ．（Ｐｅｒｉｄｉｎｉａｌｅｓ）ａｎｄＧｌｏｅｏｋｉｎｉｕｍｖｉｓｃｕｍｓｐ．ｎｏｖ．（Ｐｈｙｔｏｄｉｎｉａ⁃ｌｅｓ），ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｎｔｓｏｆｔｗｏｈｙｄｒｏｚｏａｎｓ（Ｃｎｉｄｉａｒｉａ）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９９３，２９（４）：５１７⁃５２８．［９］㊀ＳＩＡＮＯＲ，ＭＯＮＴＲＥＳＯＲＭ，ＰＲＯＢＥＲＴＩ，ｅｔａｌ．Ｐｅｌａｇｏｄｉｎｉｕｍｇｅｎ．ｎｏｖ．ａｎｄＰ．ｂéｉｉｃｏｍｂ．ｎｏｖ．，ａｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｎｔｏｆｐｌａｎｋｔｏｎｉｃｆｏｒａｍｉｎｉ⁃ｆｅｒａ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｉｓｔ，２０１０，１６１（３）：３８５⁃３９９．［１０］㊀ＦＥＮＳＯＭＥＲＡ，ＴＡＹＬＯＲＦ，ＮＯＲＲＩＳＧ，ｅｔａｌ．Ａｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｉｎｇａｎｄｆｏｓｓｉｌｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＡｍｅｒｉｃａｎＭｕｓｅｕｍｏｆＮａｔｕｒａｌＨｉｓｔｏｒｙ，１９９３．［１１］㊀ØＪＶＩＮＤＭ，ＬＩＮＤＢＥＲＧＫ，ＤＡＵＧＢＪＥＲＧＮ．ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｗｏｌｏｓｚｙｎｓｋｉｏｉｄｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓＩＶ：ｔｈｅｇｅｎｕｓＢｉｅｃｈｅｌｅｒｉａｇｅｎ．ｎｏｖ［Ｊ］．ＰｈｙｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅ⁃ｓｅａｒｃｈ，２０１０，５７（３）：２０３⁃２２０．［１２］㊀ＲＯＷＡＮＲ，ＰＯＷＥＲＳＤＡ．ＲｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｓｙｍｂｉｏｔｉｃｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ（ｚｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａｅ）．［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａ⁃ｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，１９９２，８９（８）：３６３９⁃３６４３．［１３］㊀ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ，ＰＡＲＫＩＮＳＯＮＪＥ，ＲＥＩＭＥＲＪＤ．Ａｇｅｎｅｔｉｃｓ⁃ｂａｓｅｄｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｍｉｎｕｔｕｍｓｐ．ｎｏｖ．ａｎｄＳ．ｐｓｙｇｍｏｐｈｉｌｕｍｓｐ．ｎｏｖ．（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ），ｔｗｏｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｓｙｍｂｉｏｔｉｃｗｉｔｈｃｎｉｄａｒｉａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２０１２，４８（６）：１３８０⁃１３９１．［１４］㊀ＰＯＣＨＯＮＸ，ＰＵＴＮＡＭＨＭ，ＢＵＲＫＩＦ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｔｈｅｓｙｍｂｉｏｔｉｃａｎｄｆｒｅｅ⁃ｌｉｖｉｎｇｄｉｎｏ⁃ｆｌａｇｅｌｌａｔｅｇｅｎｕｓＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯＮＥ，２０１２，７（１）：ｅ２９８１６．［１５］㊀ＰＯＣＨＯＮＸ，ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ，ＰＡＷＬＯＷＳＫＩＪ．Ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｉｃｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇａｎｄｈｏｓｔｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎａｍｏｎｇｆｏｒａｍｉｎｉｆｅｒａｎｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｎｔｓ（ＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍＤｉｎｏｐｈｙｔａ）［Ｊ］．ＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ，２００４，１４６（１）：１７⁃２７．［１６］㊀ＨＩＬＬＭ，ＡＬＬＥＮＢＹＡ，ＲＡＭＳＢＹＢ，ｅｔａｌ．ＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇｈｏｓｔｃｌｉｏｎａｉｄｓｐｏｎｇｅｓｆｒｏｍＣａｒｉｂｂｅａｎａｎｄＰａｃｉｆｉｃｒｅｅｆｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｍｙａｎｄｐｕｔａｔｉｖｅｈｏｓｔ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｙｍｂｉｏｎｔｌｉｎｅａｇｅｓ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２０１１，５９（１）：８１⁃８８．［１７］㊀ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｅｃｏｌｏｇｙａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｅｎｄｏｓｙｍｂｉｏｔｉｃｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｉｎｔｈｅｇｅｎｕｓＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｕｓｉｎｇｔｈｅＩＴＳｒｅｇｉｏｎ：ｉｎｓｅａｒｃｈｏｆａ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅｖｅｌｍａｒｋｅｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００１，３７（５）：８６６⁃８８０．［１８］㊀ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ，ＴＲＥＮＣＨＲＫ．ＢｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙｏｆｔｗｏｓｐｅｃｉｅｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ（Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ）ｉｎｈａｂｉｔｉｎｇｔｈｅｉｎｔｅｒｔｉｄａｌｓｅａａｎｅｍｏｎｅＡｎｔｈｏｐｌｅｕ⁃ｒａｅｌｅｇａｎｔｉｓｓｉｍａ（Ｂｒａｎｄｔ）［Ｊ］．ＴｈｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ，２０００，１９９（２）：１２６⁃１３４．［１９］㊀ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ，ＬＡＭＢＥＲＴＧ，ＡＮＤＥＲＳＥＮＲＡ，ｅｔａｌ．Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ（Ｐｙｒｒｈｏｐｈｙｔａ）ｇｅｎｏｍｅｓｉｚｅｓ（ＤＮＡｃｏｎｔｅｎｔ）ａｒｅｓｍａｌｌｅｓｔａｍｏｎｇｄｉｎｏ⁃ｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００５，４１（４）：８８０⁃８８６．［２０］㊀ＬＡＪＥＵＮＥＳＳＥＴＣ，ＳＭＩＴＨＲ，ＷＡＬＴＨＥＲＭ，ｅｔａｌ．Ｈｏｓｔ⁃ｓｙｍｂｉｏｎｔｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｖｅｒｓｕｓｎａｔｕｒａｌｓｅｌｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｃｏｒａｌ⁃ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｓｅｓｔｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＲｏｙａｌＳｏｃｉｅｔｙＢ（ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ），２０１０，２７７（１６９６）：２９２５⁃２９３４．［２１］㊀ＣＨＡＮＧＦＨ．ＷｉｎｔｅｒｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎａｎｄｍｉｃｒｏｚｏｏｐｌａｎｋｔｏｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆｆｔｈｅｃｏａｓｔｏｆＷｅｓｔｌａｎｄ，ＮｅｗＺｅａｌａｎｄ，１９７９［Ｊ］．ＮｅｗＺｅａｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭａｒｉｎｅ＆ＦｒｅｓｈｗａｔｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８３，１７（３）：２７９⁃３０４．［２２］㊀ＰＯＬＮＥ⁃ＦＵＬＬＥＲＭ．ＡｎｏｖｅｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆａｘｅｎｉｃｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ（Ｐｙｒｒｏｐｈｙｔａ）ｔｈｒｏｕｇｈｓｅｌｅｃｔｉｖｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｂｙａｍｏｅｂａｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２０１０，２７（４）：５５２⁃５５４．［２３］㊀ＪＥＯＮＧＨＪ，ＬＥＥＳＹ，ＫＡＮＧＮＳ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｔｈｅｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ，ｎ．ｓｐ．，（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅ⁃ａｅ）ａｓｔｈｅｓｏｌｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｃｌａｄｅＥ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１４，６１（１）：７５⁃９４．［２４］㊀ＧＯＵＷＬ，ＳＵＮＪ，ＬＩＸＱ，ｅｔａｌ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｆｒｅｅ⁃ｌｉｖｉｎｇｓｔｒａｉｎｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＪｉａｏｚｈｏｕＢａｙ，Ｐ．ＲＣｈｉｎａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ⁃ｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＥｃｏｌｏｇｙ，２００３，２９６（２）：１３５⁃１４４．［２５］㊀ＧＵＩＬＬＡＲＤＲＲＬ，ＲＹＴＨＥＲＪＨ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｆｍａｒｉｎｅｐｌａｎｋｔｏｎｉｃｄｉａｔｏｍｓ．Ｉ．ＣｙｃｌｏｔｅｌｌａｎａｎａＨｕｓｔｅｄｔ，ａｎｄＤｅｔｏｎｕｌａｃｏｎｆｅｒｖａｃｅａ（Ｃｌｅｖｅ）Ｇｒａｎ［Ｊ］．ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９６２，８（２）：２２９⁃２３９．［２６］㊀ＳＰＵＲＲＡＲ．Ａｌｏｗ⁃ｖｉｓｃｏｓｉｔｙｅｐｏｘｙｒｅｓｉｎｅｍｂｅｄｄｉｎｇｍｅｄｉｕｍｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＵｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅＲｅｓｅａｒｃｈ，１９６９，２６（１）：３１⁃４３．［２７］㊀ＳＣＨＯＬＩＮＣＡ，ＨＥＲＺＯＧＭ，ＳＯＧＩＮＭ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｒｏｕｐ⁃ａｎｄｓｔｒａｉｎ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｇｌｏｂａｌｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄＡｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ（ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）．ＩＩ．ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｔｈｅＬＳＵｒＲＮＡｇｅｎｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９９４，３０（６）：９９９⁃１０１１．［２８］㊀ＤＡＵＧＢＪＥＲＧＮ，ＨＡＮＳＥＮＧ，ＬＡＲＳＥＮＪ，ｅｔａｌ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｓｏｍｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｇｅｎｅｒａｏｆｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｂａｓｅｄｏｎｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｐａｒｔｉａｌＬＳＵｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｔａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｅｒｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｎｅｗｇｅｎｅｒａｏｆｕｎａｒｍｏｕｒｅｄｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉａ，２０００，３９（４）：３０２⁃３１７．［２９］㊀ＭＥＤＬＩＮＬ，ＥＬＷＯＯＤＨＪ，ＳＴＩＣＫＥＬＳ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙａｍｐｌｉｆｉｅｄｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ１６Ｓ⁃ｌｉｋｅｒＲＮＡ⁃ｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，１９８８，７１（２）：４９１⁃４９９．［３０］㊀ＡＤＡＣＨＩＭ，ＳＡＫＥＹ，ＩＳＨＩＤＡＹ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）ｓｐｅｃｉｅｓｕｓｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅ５．８ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡａｎｄｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎ⁃ｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒｒｅｇｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９９６，３２：４２４⁃４３２．［３１］㊀ＳＡＮＴＯＳＳＲ，ＴＡＹＬＯＲＤＪ，ＫＩＮＺＩＥＲＡＩＩＩ，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｓｙｍｂｉｏｔｉｃｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｉｎｆｅｒｒｅｄｆｒｏｍｐａｒｔｉａｌｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｌａｒｇｅｓｕｂ⁃ｕｎｉｔ（２３Ｓ）⁃ｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００２，２３（２）：９７⁃１１１．［３２］㊀ＺＨＡＮＧＨ，ＢＨＡＴＴＡＣＨＡＲＹＡＤ，ＬＩＮＳ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｂａｓｅｄｏｎｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂａｎｄｎｕｃｌｅａｒｓｍａｌｌｓｕｂｕｎｉｔｒＤＮＡｓｅ⁃ｑｕｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００５，４１（２）：４１１⁃４２０．［３３］㊀ＫＡＴＯＨＫ，ＳＴＡＮＤＬＥＹＤＭ．ＭＡＦＦＴｍｕｌｔｉｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｓｏｆｔｗａｒｅｖｅｒｓｉｏｎ７：ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓｉｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｕｓａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎ，２０１３，３０（４）：７７２⁃７８０．㊃１９８㊀㊃应用海洋学学报４０卷［３４］㊀ＣＡＲＲＯＬＬＨ，ＢＥＣＫＳＴＥＡＤＷ，ＯᶄＣＯＮＮＯＲＴ，ｅｔａｌ．ＤＮＡｒｅｆｅｒｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｂｅｎｃｈｍａｒｋｓｂａｓｅｄｏｎｔｅｒｔｉａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｅｎｃｏｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２００７，２３（１９）：２６４８⁃２６４９．［３５］㊀ＨＡＬＬＴＡ．ＢｉｏＥｄｉｔ：ａｕｓｅｒ⁃ｆｒｉｅｎｄｌｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｅｄｉｔｏｒａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｐｒｏｇｒａｍｆｏｒＷｉｎｄｏｗｓ９５／９８／ＮＴ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＳｙｍｐｏ⁃ｓｉｕｍＳｅｒｉｅｓ，１９９９，４１：９５⁃９８．［３６］㊀ＤＡＲＲＩＢＡＤ，ＴＡＢＯＡＤＡＧＬ，ＤＯＡＬＬＯＲ，ｅｔａｌ．ｊＭｏｄｅｌＴｅｓｔ２：ｍｏｒｅｍｏｄｅｌｓ，ｎｅｗｈｅｕｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｐａｒａｌｌｅｌｃｏｍｐｕｔｉｎｇ［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓ，２０１２，９（８）：７７２⁃７７２．［３７］㊀ＲＯＮＱＵＩＳＴＦ，ＴＥＳＬＥＮＫＯＭ，ＶＡＮＤＭＰ，ｅｔａｌ．ＭｒＢａｙｅｓ３．２：ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂａｙｅｓｉａｎｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｉｎｆｅｒｅｎｃｅａｎｄｍｏｄｅｌｃｈｏｉｃｅａｃｒｏｓｓａｌａｒｇｅｍｏｄｅｌｓｐａｃｅ［Ｊ］．ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢｉｏｌｏｇｙ，２０１２，６１（３）：５３９⁃５４２．［３８］㊀ＮＹＬＡＮＤＥＲＪＡＡ，ＷＩＬＧＥＮＢＵＳＣＨＪＣ，ＷＡＲＲＥＮＤＬ，ｅｔａｌ．ＡＷＴＹ（ａｒｅｗｅｔｈｅｒｅｙｅｔ？）：ａｓｙｓｔｅｍｆｏｒｇｒａｐｈｉｃａｌｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆＭＣＭＣｃｏｎ⁃ｖｅｒｇｅｎｃｅｉｎＢａｙｅｓｉａｎｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２００８，２４（４）：５８１⁃５８３．［３９］㊀ＢＯＣＡ，ＤＩＡＬＬＯＡＢ，ＭＡＫＡＲＥＮＫＯＶＶ．Ｔ⁃ＲＥＸ：ａｗｅｂｓｅｒｖｅｒｆｏｒｉｎｆｅｒｒｉｎｇ，ｖａｌｉｄａｔｉｎｇａｎｄｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｓａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，４０：Ｗ５７３⁃Ｗ５７９．［４０］㊀ＳＴＡＭＡＴＡＫＩＳＡ．ＲＡｘＭＬ⁃ＶＩ⁃ＨＰＣ：ｍａｘｉｍｕｍｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ⁃ｂａｓｅｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｅｓｗｉｔｈｔｈｏｕｓａｎｄｓｏｆｔａｘａａｎｄｍｉｘｅｄｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔ⁃ｉｃｓ，２００６，２２（２１）：２６８８⁃２６９０．［４１］㊀ＳＷＯＦＦＯＲＤＤＬ．ＰＡＵＰ∗：Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇｐａｒｓｉｍｏｎｙ（∗ａｎｄｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓ），ｖｅｒｓｉｏｎ４．０ｂ１０［Ｍ］．ＳｕｎｄｅｒｌａｎｄＭａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ：ＳｉｎａｕｅｒＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，２００２．［４２］㊀ＬＯＥＢＬＩＣＨＡＲ，ＳＨＥＲＬＥＹＪＬ．Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅｔｈｅｃａｏｆｔｈｅｍｏｔｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｆｒｅｅ⁃ｌｉｖｉｎｇａｎｄｓｙｍｂｉｏｔｉｃｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＺｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａｍｉｃｒｏａｄｒｉａｔｉｃａ（Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ）ｃｏｍｂ．ｎｏｖ．［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＵＫ，１９７９，５９（１）：１９５⁃２０５．［４３］㊀ＨＡＮＳＥＮＧ，ＤＡＵＧＢＪＥＲＧＮ．Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｎａｔａｎｓｓｐ．ｎｏｖ．：ａ ｆｒｅｅ⁃ｌｉｖｉｎｇ ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｆｒｏｍＴｅｎｅｒｉｆｅ（Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ⁃ＡｔｌａｎｔｉｃＯｃｅａｎ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒ⁃ｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００９，４５（１）：２５１⁃２６３．［４４］㊀ＴＲＥＮＣＨＲＫ，ＴＨＩＮＨＬＶ．Ｇｙｍｎｏｄｉｎｉｕｍｌｉｎｕｃｈｅａｅｓｐ．ｎｏｖ．：ｔｈｅｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｙｍｂｉｏｎｔｏｆｔｈｅｊｅｌｌｙｆｉｓｈＬｉｎｕｃｈｅｕｎｇｕｉｃｕｌａｔａ［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，１９９５，３０（２）：１４９⁃１５４．［４５］㊀ＢＬＡＮＫＲＪ．ＣｅｌｌａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｓｐ．ｉｎｈａｂｉｔｉｎｇｔｈｅＨａｗａｉｉａｎｓｔｏｎｙｃｏｒａｌＭｏｎｔｉｐｏｒａｖｅｒｒｕｃｏｓａ［Ｊ］．ＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ，１９８７，９４（１）：１４３⁃１５５．［４６］㊀ＪＥＯＮＧＨＪ，ＹＯＯＹＤ，ＫＡＮＧＮＳ，ｅｔａｌ．ＨｅｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆｅｅｄｉｎｇａｓａｎｅｗｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｓｔｒａｔｅｇｙｏｆｔｈｅｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，１０９（３１）：１２６０４⁃１２６０９．［４７］㊀ＳＨＡＯＰ，ＣＨＥＮＹＱ，ＺＨＯＵＨ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙｉｎＧｙｍｎｏｄｉｎｉａｃｅａｅＩＴＳｒｅｇｉｏｎｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ（Ｂｅｒｌｉｎ），２００４，１４４（２）：２１５⁃２２４．［４８］㊀ＳＡＬＡＳＭＤ，ＭＵＳＥＵＭＴ．ＡｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｂａｌｌａｓｔｗａｔｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｏｘｉｃｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓＧｙｍｎｏｄｉｎｉｕｍｃａｔｅｎａｔｕｍａｎｄｔｈｅＡｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ ｔａｍａｒｅｎｓｉｓｃｏｍｐｌｅｘ ｔｏＡｕｓｔｒａｌａｓｉａ［Ｊ］．ＨａｒｍｆｕｌＡｌｇａｅ，２００７，６（４）：４６５⁃４８５．［４９］㊀ＬＩＬＬＹＥＬ，ＨＡＬＡＮＹＣＨＫＭ，ＡＮＤＥＲＳＯＮＤＭ．ＳｐｅｃｉｅｓｂｏｕｎｄａｒｉｅｓａｎｄｇｌｏｂａｌｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙｏｆｔｈｅＡｌｅｘａｎｄｒｉｕｍｔａｍａｒｅｎｓｅｃｏｍｐｌｅｘ（Ｄｉｎｏ⁃ｐｈｙｃｅａｅ）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏｇｙ，２００７，４３（６）：１３２９⁃１３３８．［５０］㊀ＳＭＡＹＤＡＴＪ．Ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅｂａｌｌａｓｔｗａｔｅｒｄｉｓｐｅｒｓａｌ：ｈａｒｍｆｕｌａｌｇａｌｂｌｏｏｍｐａｒａｄｉｇｍ［Ｊ］．ＨａｒｍｆｕｌＡｌｇａｅ，２００７，６（４）：６０１⁃６２２．［５１］㊀ＬＩＴＡＫＥＲＬＲ，ＶＡＮＤＥＲＳＥＡＭＷ，ＫＩＢＬＥＲＳＲ，ｅｔａｌ．ＲｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅｓｐｅｃｉｅｓｕｓｉｎｇＩＴＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｃｏｌｏ⁃ｇｙ，２００７，４３（２）：３４４⁃３５５．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＳｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍｉｎｃｏａｓｔａｌｗａｔｅｒｓｏｆＣｈｉｎａＺＨＡＮＧＷｅｉ１，ＬＵＯＺｈａｏ⁃ｈｅ１，ＧＡＯＹｕｅ２，ＧＵＨａｉ⁃ｆｅｎｇ１∗（１．ＴｈｉｒｄＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ，ＭＮＲ，Ｘｉａｍｅｎ３６１００５，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭａｒｉｎｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＸｉａｍｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｍｅｎ３６１００５，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｓｐｅｃｉｅｓｌｉｖｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙｉｎｍｕｔｕａｌｉｓｔｉｃｓｙｍｂｉｏｓｉｓｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅａｎｄｐｒｏｔｉｓｔｈｏｓｔｓ，ａｎｄｔｈｅｙｃｏｍｍｏｎｌｙｅｘｉｓｔｉｎｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌａｎｄｔｒｏｐｉｃａｌｍａｒｉｎｅｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ．ＦｏｕｒｓｔｒａｉｎｓｏｆＳ．ｖｏｒａｔｕｍｗｅｒｅｉｓｏｌａ⁃ｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃｏａｓｔａｌｗａｔｅｒｓｏｆＣｈｉｎａａｎｄｆｒｏｍａｃａｒｇｏｓｈｉｐｂａｌｌａｓｔｗａｔｅｒ．ＭｏｔｉｌｅｃｅｌｌｓｏｆＳ．ｖｏｒａｔｕｍａｒｅｓｍａｌｌ（ｌｅｎｇｔｈ９．７ʃ１．３μｍ；ｗｉｄｔｈ８．７ʃ０．９μｍ），ａｎｄｔｈｅｉｍｍｏｔｉｌｅｃｅｌｌｓ（ｄｉａｍｅｔｅｒ１１．４ʃ０．３μｍ）ａｎｄｄｏｕｂｌｅｔｃｅｌｌｓ（ｄｉａｍｅ⁃ｔｅｒ１２．２ʃ０．６μｍ）ａｒｅｏｆｔｅｎｐａｃｋｅｄｗｉｔｈｓｔｏｒａｇｅｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｓｃａｎｎｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｒｅｖｅａｌｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆａｓｉｎｇｌｅｅｌｏｎｇａｔｅｄａｐｉｃａｌｖｅｓｉｃｌｅ（ＥＡＶ），ｗｈｉｃｈｅｘｈｉｂｉｔｓｔｈｅＫｏｆｏｉｄｅａｎｐｌａｔｅｔａｂｕｌａｔｉｏｎ：ｘ，ＥＡＶ，４ᶄ－５ᶄ，５ａ－６ａ，９ᶄᶄ，？ｓ，？ｃ，６ᶄᶄᶄ，２ᶄᶄᶄᶄ．ＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｗｓｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆａｔｙｐｅＥｅｙｅｓｐｏｔａｎｄｓｉｎｇｌｅ⁃ｓｔａｌｋｅｄｐｙｒｅｎｏｉｄ．Ｔｈｅｇｏｌｇｉｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｍａｎｙｄｉｃｔｙｏｓｏｍｅｓａｎｄｔｈｅｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｔｈｙｌａｋｏｉｄｓ２期张㊀薇，等：中国沿海贪食共生藻的形态㊁超微结构和分子特征㊃１９９㊀㊃ａｒｅｉｎｓｔａｃｋｓｏｆｔｈｒｅｅ．ＦｏｕｒＳ．ｖｏｒａｔｕｍｓｔｒａｉｎｓｓｈａｒｅｉｄｅｎｔｉｃａｌＳＳＵｒＤＮＡ，ＩＴＳ，ＬＳＵｒＤＮＡ，ｃｐ２３Ｓａｎｄｃｏｂｓｅ⁃ｑｕｅｎｃｅｓ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｐｈｙｌｏｇｅｎｙｂａｓｅｄｏｎＬＳＵｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｕｓｉｎｇｍａｘｉｍｕｍｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄａｎｄＢａｙｅｓｉａｎｉｎｆｅｒｅｎｃｅｒｅ⁃ｖｅａｌｅｄｔｈａｔＳ．ｖｏｒａｔｕｍｆｒｏｍＣｈｉｎａａｎｄｏｔｈｅｒｐａｒｔｓｏｆｗｏｒｌｄｆｏｒｍｅｄａｗｅｌｌｒｅｓｏｌｖｅｄｃｌａｄｅＥ．Ｔｈｅｈｉｇｈｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉ⁃ｌａｒｉｔｙａｍｏｎｇＣｈｉｎｅｓｅｓｔｒａｉｎｓａｎｄｔｈｏｓｅｆｒｏｍｅｌｓｅｗｈｅｒｅｓｕｇｇｅｓｔｆｒｅｑｕｅｎｔｇｅｎｅｅｘｃｈａｎｇｅａｍｏｎｇｔｈｅｍ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｒｉｎｅｂｉｏｌｏｇｙ；ｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａｔｅ；Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍｖｏｒａｔｕｍ；ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｔａｘｏｎｏｍｙ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒ⁃ｉｓｔｃＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．２０９５⁃４９７２．２０２１．０２．００２（责任编辑：杜俊民）。
