色谱峰问题解答

色谱分析复习题及答案色谱分析复习题及答案色谱分析是一种常用的分离和分析技术，它可以在不破坏样品的情况下，将样品中的各组分分离并进行定性和定量分析。

以下是几个常见的色谱分析复习题及答案，帮助大家巩固和加深对色谱分析的理解。

问题一：什么是色谱分析？答案：色谱分析是一种常用的分离和分析技术，它利用不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡，将样品中的各组分分离并进行定性和定量分析。

问题二：色谱分析的基本原理是什么？答案：色谱分析的基本原理是利用不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡，实现对样品的分离和分析。

当样品进入色谱柱时，各组分在固定相和移动相之间进行吸附和解吸，由于分配平衡的不同，各组分会在色谱柱中形成不同的色带。

通过检测器的检测，可以得到各组分的峰形和峰高，进而进行定性和定量分析。

问题三：什么是色谱图的峰高和峰面积？答案：色谱图的峰高是指色谱峰的最高点与基线之间的垂直距离，而峰面积则是指色谱峰与基线之间的面积。

峰高和峰面积是色谱分析中常用的定性和定量分析指标。

问题四：什么是保留时间和相对保留时间？答案：保留时间是指色谱峰的起点到峰顶的时间，而相对保留时间则是指同一组分在不同色谱柱上的保留时间之比。

它们都是用于表征物质在色谱柱上的分离效果和分析速度的重要参数。

问题五：什么是色谱分离的最佳条件？答案：色谱分离的最佳条件是指在特定条件下，能够实现最佳分离效果的条件。

这些条件包括：选择合适的固定相和移动相、确定最佳的进样量和柱温、调节移动相的流速和组成等。

在实际应用中，需要根据具体的样品和实验要求选择合适的条件。

问题六：如何进行色谱分析的数据处理？答案：色谱分析的数据处理主要包括峰识别、定量分析和定性分析。

峰识别是指根据峰形和峰高识别出各个组分；定量分析是指根据峰高或峰面积计算出各个组分的含量；定性分析则是指根据保留时间和光谱等信息，确定各个组分的具体性质。

通过对数据的处理和分析，可以得到样品中各组分的定性和定量信息。

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。

下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。

色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。

我将这种情况分为四种原因。

1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。

如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。

当然不反冲，正冲有时也会正常的。

如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

2 溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。

目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。

样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。

最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。

当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。

这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。

色谱常见问题解答问题1:为什么有些峰出现拖尾答:①这可能是由于进样口或色谱柱不干净,或色谱柱切割不正确.冷却进样口,关闭气流并更换或清洁进样口部件,包括进样口衬管和金密封垫.取出色谱柱.切掉一段色谱柱以清除不挥发性残留物,隔垫碎屑和密封圈碎片.这段色谱柱的长度可以是 1 英寸到 1 米,如果需要的话,可以更长.使用正确的切割工具来切割色谱柱.如果切割不好,则可能导致样品吸收.使用黄铜刷子或氧化铝粉末等软质研磨剂擦洗进样口钢质内壁.在重新安装其他部件前,要确保已将进样口清洗干净.对于5890,卸下分流出口管路并用溶剂清洗是比较好的方式.②在不分流方式下进行分析时,不分流时间过长可能导致拖尾.通常时间应在0.5 至 1 分钟范围内.③未吹扫(死)体积也可能导致拖尾.确保在进样器和检测器中色谱柱安装正确.④如果考虑色谱柱部分流失,则可以使用色谱柱前的保留间隙(制备色谱柱).如果没有降低色谱柱效率,则可以将其切割掉或更换掉,并可延长色谱柱的寿命.但要注意保留间隙和分析色谱柱的连接可能引起泄漏和样品吸收.问题2:如何改善峰形(前伸峰,拖尾峰)答:前伸峰是由于色谱柱过载.当一种或多种化合物的进样量超过色谱柱固定相容量时,可能发生这种情况.液相膜越薄,色谱柱中保留的每种化合物就越少. 这涉及到进样体积和进样中每个峰的化合物浓度.通过减少进样量,分流样品或进样浓度较低的样品,可减小进样体积.问题3:什么原因导致峰比原来大,而且出现的早答:过快,过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少,而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力,可降低分流比.检查分流出品的气体流量,如需调整分流比则对调整此流量.如果问题依然存在,可卸下并清洁分流口.这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起.问题4:何时需更换隔垫或衬管答:通常比较好的隔垫至少能保证100 次进样不发生问题. 当色谱特征说明衬管有问题时,需要更换衬管.影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸,进样口温度和压力,当然受压力影响的程度比较小.影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度.应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序.问题5:随着进样室温度升高,对分析物分解有影响吗答:如果化合物热稳定性差,分析物分解可能会带来一些问题.这在制药工业中比较常见.如果药物或中间体热分解温度低于进样口温度,则分析结果中将出现特殊的峰或与目标分析物发生反应.问题6:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题7:如何得知分流/不分流进样口的进样体积不超过进样口衬管反应室的容积答:如果不是多次重复进样引起精度问题,则不会经常发生这个问题.精度问题经常是由于不合适的进样体积引起.因为分流进样的进样口流速比较高,样品进出进样口比不分流快得多.同样地,由于溶剂没有时间扩散到衬管外,因此分流模式进样体积要求没有那么严格.实际上,1 微升是比较合适的,由于降低分流比对增大峰面积比增加进样量更有效.然而,不分流进样要求要严格的多,建议使用蒸汽体积计算器估算最终的扩散体积.问题8:排除色谱柱流失问题的最佳方法是什么答:诊断色谱柱是否存在流失问题的最佳方法是第一次在方法条件下安装色谱柱时,做一次空白色谱图,然后将最近的运行和空白运行色谱图对比.如果在空白运行中产生了很多峰,则色谱柱性能改变,这可能是由于载气中含有氧气,也可能是由于样品残留.如果有GC-MS,则低极性色谱柱的典型流失离子(例如DB/HP-1 或5)质/荷比m/z 将为207,73,281,355 等,大多数为环硅氧烷.问题9:色谱分析运行时,标样和样品的峰均随时间加宽,这正常吗答:如果保留时间没有很大区别,只是加宽的峰拖尾,可能表明有活化点.如果加宽的峰是对称的,可能是由于正常的色谱柱"损耗和流失".如果峰前伸,说明色谱柱过载.问题10:为什么在空白运行中出现了我的样品组分峰答:有可能是由于样品制备或系统清洁问题.尝试在样品和空白样品制备中使用新溶剂,并在样品清洗瓶中装上新溶剂.尝试使用新的注射器和隔垫.取出并清洗分流出口管路.在未进样情况下运行以观察仅加热色谱柱有无峰出现.问题11:什么原因导致基线不稳和干扰答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.检测器一般需要24h才能得到平衡.4. 在程序升温的时候改变载气流速(在很多情况下为正常现象).问题12:什么原因导致过多的基线噪音答:1. 进样针受污染.清洗进样针;做一浓缩试验,载气线路可能也要清洗.2. 色谱柱受污染.烘焙色谱柱,限定时间1-2h.3. 检测器不平衡.清洗检测器,通常噪音不是突然增大而是逐渐产生.4. 污染或载气质量降低.使用高质量的载气或检查气体是否泄露.一般在换载气钢瓶的时候会突然发生.5. 柱子安装太过.可重新安装.6. 载气流速不合适.重新设定流速.7. 与MS,ECD,TCD联用时发生漏洞,查找并消除漏洞即可.8. 检测器的灯或电子倍增管老化.问题13:什么原因导致峰形改变答:1.检测器响应改变.检查气体流速,温度和设置.2.样品的浓度改变.检查并检验样品的浓度,样品的蒸发或成分的改变都可能引起.3. 色谱柱受污染.问题14:如果分离度下降,如何处理1.柱温不同.检查柱温.2.不同的色谱柱的维数和相位.核实色谱柱的特性.3.改变载气流速.4.色谱柱受污染,应用溶媒清洗柱子.5.进样器的改变.检查进样器的设置.6.样品的浓度或溶解能力的改变.试用一个不同的浓度.问题15:如果出现分裂峰,如何处理1.试着改变一下进样方法.2.改变溶媒,使其成为单一的溶媒.3.重新安装色谱柱.4.减小进样温度.问题16:如果怀疑进样器或载气被污染了,应采用何种检测1. GC在40-50℃保持8小时或8小时以上.2. 运行一个空白分析(开启GC,但不进样).3. 收集空白分析的色谱图.4. 第一个空白分析完成以后立即开始第二次,二者间隔时间不要超过5min.5. 收集第二次空白分析的色谱图,并与第一次的图谱进行比较.6. 假如在第一次时,峰图包含了大量的色谱峰,而且基线不稳定,那就暗示了毛细管柱被污染了(进样器或载气被污染).7. 假如两次色谱峰图都包含少数的峰或基线的微小漂移,那就可以假定进样器或载气是比较干净的.假如8. 假如两次色谱峰图都包含重大数量的噪音和(或)基线漂移,那通常也就表明了进样器或载气被污染了.问题17:保护柱应为多长比较有代表性的保护柱柱长为0.5-10m.虽然没有确定的长度适合所有的样品,但是以下一些建议也可以参考.假如样品相对来说比较纯净,溶质为极性,保护柱应该在0.5-1.0m之间;若样品相对来说不纯净,保护柱应该适当长些.5-10m长的主要是为了维护单一系统.长保护柱允许使用者减去大约1m而代替整个保护柱安装.问题18.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

色谱双峰产生的可能及判断和处理HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，高频红外碳硫分析仪会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。

下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。

色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。

我将这种情况分为四种原因。

1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。

如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。

当然不反冲，正冲有时也会正常的。

如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，高频红外碳硫分析仪这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

2 溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。

目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。

样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。

最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。

当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。

35个HPLC色谱常见问题解答1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。

2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载，减少进样量。

3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。

调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。

解决办法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。

调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；②比例阀失效，更换比例阀即可；③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。

高效液相色谱（HPLC）使用中常见故障及解决方法（三）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

1、色谱图中未出峰。

解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。

2、一个峰或几个峰是负峰。

解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。

3、所有峰均为负峰。

解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。

4、所有峰均为宽峰。

解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。

、5、所出峰比预想的小。

解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。

6、出现双峰或肩峰。

解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。

7、前伸峰。

解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。

8、拖尾峰。

解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。

9、出现平头峰。

解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。

10、出现鬼峰。

解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。

气相色谱分析中异常峰出现的原因及解决办法概述基线是气相色谱仪运行中，性能的综合表现，组成仪器的各部分发生故障、操作条件和外界条件的变化等因素都会反映到基线上，因此可以根据基线(色谱图)判断故障的原因和部位。

应当指出，用此方法分析排除故障，还应注意以下几点：⑴基线状态是否准说明仪器有故障是相对而不是绝对的，如基线在高灵敏度时呈现噪声很大，而在低灵敏度时比较好，若分析要求在低灵敏度下可以完成，就可以认为仪器是正常的，反之不正常。

⑵再此讨论的基线（色谱峰）异变，是指按已知色谱分析方法操作时，得到的色谱图与没有问题的已知色谱图比较，出现某些组分峰畸变、“鬼峰”或基线不正常。

或者说，对于一个正在使用的色谱分析方法，由于不要求或出于无奈时，有些峰分不开、拖尾或峰型不对称等并不影响方法的实施，就不属于仪器有故障，否则应重新修改、审定原来的色谱分析方法；⑶由于使用了来路不明的样品、不能确保纯净的气源或没有经过充分老化或评价过的色谱柱等等而造成的仪器被污染、基线不稳、峰分不开和峰拖尾等，纯属误操作，也不适合使用此方法所列实例来分析排除故障。

⑷另外在使用整机基线（色谱图）异常，分析排除故障前最好先做以下三点工作：第一，仔细核查操作条件，是否与分析方法要求一致；第二，怀疑有了故障色谱图和所存的标准色谱图对照，判断是否真出了问题，千万不要盲目检修仪器；第三，逐项仔细观察仪器或设备工作状态，看是否存在误操作。

⑵仪器基线漂移大⑸基线呈波浪状变化⑾圆平顶峰在程序升温时增加终温温度或时间，是减小或消除上述鬼峰的有效方法；也可以每天或定时设置温度程序进行仪器烘烤，可有效地把保留性强的物质赶出进样口和色⒄峰拖尾e. 其他原因⒆前沿峰(舌头峰)虽然气相色谱仪汽化室设计不合理也是一种出现“前沿峰”的主要原因。

但在日常操作中“前沿峰”的主要原因还还可能有以下两种：①进样量太大引起色谱柱过载，通常认为：当样品在固定相浓度增加速率高于它在气相浓度的增加速率，会使吸附等控温线为凹形时，在色谱图上会产生伸舌头峰。

液相常见6种问题色谱峰解决方法（有图），你都见过几个？食品实验室服务对于每一个身经百柱的分离纯化研究员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。

小编在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。

1.拖尾峰1. 筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。

需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。

2. 色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。

需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。

3. 有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。

更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。

4. 流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。

调节pH 值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。

2.前沿峰1. 样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。

降低样品含量。

2. 样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。

选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

3. 色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。

更换色谱柱。

4. 在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。

调整流动相洗脱梯度。

3.基线漂移1. 柱温波动：即使是很小的温度变化都会引起基线的波动，通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

色谱常见问题回答?问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?答：关于漂移问题：1温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题??1流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?答：1柱效要高2热稳定好3化学惰强具体选择应注意??1柱极。

根据分析样品选择不同极的柱子进行分析2柱子内径。

内径大小决定柱容量3液膜厚度。

分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄4柱长度。

柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度5外涂层(柱体)的选择6另外还有仪器型号、分析对象等因素问：液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?答：1筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择好的柱子问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定好坏?答：1分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定不好。

2理论塔板数n，热稳定好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定3柱子的极。

热稳定好的柱子，高温前后极变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。

4噪声。

热稳定好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加.5柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活试剂去活以增加惰。

质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极样品或酸碱样品的吸附不能增加。

问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：??1提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。

1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？拖尾：1 干扰峰，优化条件分离2 色谱柱塌陷，更换色谱柱 3 流动相pH不合适，调节pH值 4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂 2 样品过载，降低进样量 3 柱温太低，升高柱温4 色谱柱损坏，更换色谱柱5 干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。

拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。

柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。

图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。

一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。

柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。

液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。

解决办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部。

2.柱上样品超载。

解决办法：使用更高负载量的固定相。

增加色谱柱内径、减少样品量。

3.单峰- 存在干扰性组分。

解决办法：净化样品；预分离。

4.存在未扫的死体积。

解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定。

5.碱性化合物- 硅醇相互作用。

解决办法：换成聚合物固定相。

6.碱性基质- 硅醇相互作用。

解决办法：使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺）。

7.硅胶基- 柱降解。

解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻。

8.溶剂相极性不匹配。

较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾，解决办法：改变样品溶剂。

色谱峰峰形异常是指在色谱分析过程中，色谱峰的形状出现了异常现象，与正常情况不同。

这种异常现象可能会引起色谱分析的误差或无法得到准确的分析结果。

以下是几种常见的色谱峰峰形异常及其可能的原因和解决方法的相关参考内容。

1.峰形不对称峰形不对称通常可以分为左偏和右偏两种情况。

可能的原因包括以下几点：•流速不稳定：流速的突然变化或波动可能导致峰形不对称。

•过载样品：样品浓度过高，超过了柱子的容量，会导致峰形拖尾。

•样品溶剂选择不当：某些溶剂可能与样品发生副反应，导致峰形不对称。

解决方法： - 检查流速是否稳定，确保恒定。

- 使用适当稀释的样品。

- 调整样品溶剂的pH值或选择合适的溶剂。

2.峰形前移或后移峰形前移或后移是指峰形在色谱图上位置出现偏移。

可能的原因包括以下几点：•流动相成分问题：流动相中的溶剂成分可能发生变化，导致峰形位置偏移。

•柱子老化：柱子的性能随时间推移而下降，可能导致峰形位置改变。

•温度变化：柱温的变化可能引起峰形位置的偏移。

解决方法： - 检查流动相的成分是否正确并重新调整。

- 更换新的柱子。

- 控制柱子温度在恒定的范围内。

3.峰形畸变或分裂峰形畸变或分裂是指峰形不呈现单一对称峰的形状，而呈现多个小峰或不规则形状。

可能的原因包括以下几点：•柱子问题：柱子可能存在堵塞、磨损或其他损坏，导致峰形畸变。

•样品含有杂质：样品中的杂质可能与分离柱发生相互作用，引起峰形分裂或畸变。

解决方法：- 检查柱子是否正常，如果有问题需要更换。

- 对样品进行预处理，去除杂质。

4.峰形消失或变窄峰形消失或变窄是指峰形在色谱图上减弱或变得更窄。

可能的原因包括以下几点：•柱子堵塞：分离柱可能由于样品残留或杂质堵塞导致峰形消失。

•流速过快：流速过快可能导致分离不完全，出现峰形消失或变窄。

解决方法： - 检查柱子是否堵塞，如有需要清洗柱子。

- 调整流速以确保分离充分。

综上所述，色谱峰峰形异常可能由多种原因引起，包括流速不稳定、溶剂选择不当、样品浓度过高、柱子老化、温度变化、柱子堵塞、样品中的杂质等。

色谱峰容量（peak capacity）是描述色谱分离能力的参数，它表示在给定的时间或距离范围内，一个色谱系统可以分离的最大化合物数量。

然而，色谱峰容量受到一些限制：
1.色谱柱效应：色谱柱的长度、直径和填料特性等因素会影响色谱峰容量。

较短的柱或填
料颗粒较大的柱可能具有较低的峰容量。

2.分析条件：分析条件的选择也对色谱峰容量产生影响。

例如，流速过高、温度不适宜以
及溶剂选择不当等都可能限制峰容量。

3.混合物复杂性：样品中的化合物数量和复杂性会对色谱峰容量造成限制。

当混合物中的
组分数量增加时，色谱系统可能无法有效地将所有化合物完全分离开来。

4.选择性差异：如果分析目标化合物之间的选择性差异较小，那么色谱系统可能无法提供
足够的分离程度，导致较低的峰容量。

5.检测器分辨率和灵敏度：检测器的分辨率和灵敏度也会对色谱峰容量产生影响。

如果检
测器无法准确地识别和定量低浓度的化合物，那么高峰容量的分离可能无法实现。

为了提高色谱峰容量，可以通过选择适当的柱、优化分析条件、增加分离步骤或使用更先进的仪器设备等方式来改善分离性能。

同时，根据具体应用需求，也可以采用其他高效的分离技术来替代传统色谱方法，以获得更高的峰容量。

10个数据点,色谱峰-回复什么是色谱峰？在分析化学领域，色谱峰是一种特殊的信号，用于表示样品中各种化学物质的相对浓度和分布。

通过运用色谱技术，可以将复杂的混合物分离为单独的化合物，并通过检测得到它们的峰状图谱。

首先，色谱峰是如何产生的？这涉及到色谱技术的原理。

色谱技术的核心是通过选择性吸附和洗脱来实现化合物的分离。

在色谱柱中，沿着固定相（通常是具有高表面积的材料）的孔隙中移动的样品分子以不同的速率通过。

根据它们与固定相之间的相互作用，不同的化合物在柱上停留时间和运移速度上会有所差异。

对于给定的化合物，它的停留时间通常是固定的，而具体的数值则取决于多种因素，如样品溶剂性质、柱的类型和温度等。

当用检测器探测柱流过的化合物时，会生成一个峰状信号。

这个信号的高度表示了该化合物的浓度，而峰的形状则代表了其在柱上的分布。

下面是一个由10个数据点组成的示例数据集，我们将使用这些数据来说明如何解读色谱峰。

数据点1: 柱流到达检测器的初始时间为1.5分钟，峰高度为0.02。

数据点2: 到达时间为2.0分钟，峰高度为0.04。

数据点3: 到达时间为2.5分钟，峰高度为0.08。

数据点4: 到达时间为3.0分钟，峰高度为0.1。

数据点5: 到达时间为3.5分钟，峰高度为0.2。

数据点6: 到达时间为4.0分钟，峰高度为0.5。

数据点7: 到达时间为4.5分钟，峰高度为1.0。

数据点8: 到达时间为5.0分钟，峰高度为0.8。

数据点9: 到达时间为5.5分钟，峰高度为0.6。

数据点10: 到达时间为6.0分钟，峰高度为0.4。

根据这些数据点，我们可以将它们绘制成一个色谱峰的图谱。

横轴表示时间，纵轴表示峰高度。

通过观察这个图谱，我们可以获取一些有关于样品的信息。

首先，我们可以看到峰的高度在不同的时间点上有所变化。

这可能表示在样品中含有多个化合物，它们在柱上以不同的速率运动，从而在时刻上产生了不同的峰。

比如，数据点7显示了一个高峰，暗示着这个时间点上可能存在着浓度较高的某个化合物。

所有色谱峰均展宽的可能原因及解决方法所有色谱峰均展宽的故障小排查，如果实验中碰到先洗脱出来色谱峰展宽时该如何解决呢？下面将为大家介绍所有色谱峰均展宽的可能原因及解决方法。

一、样品量过载稀释样品或减少进样体积使色谱柱恢复平衡。

注意：使用强度较弱（相对于流动相而言）的样品溶剂，进样体积可以达到色谱柱死体积的10%左右；而使用强度较强的溶剂，进样体积可能最高仅为柱死体积的1%。

二、室温变化过大需要使用色谱柱恒温箱，以保证色谱柱温度恒定。

三、系统没有达到平衡请保证色谱柱、检测器等有足够的时间平衡。

如果是梯度洗脱，两次进样间保证足够的时间使系统重新达到平衡。

色谱柱第一次使用离子对试剂时，要有充足体积的流动相和足够的冲洗时间确保色谱柱充分平衡。

四、色谱柱问题若色谱柱问题可能会导致多种谱图异常情况。

色谱柱被污染，如果是因为色谱柱被污染导致了问题的出现，则应按照相关方法冲洗色谱柱，如果这样做仍不能使问题得到解决，则需更换色谱柱；色谱柱柱效下降，如怀疑因色谱柱柱效降低导致，则要用一支柱效好的色谱柱更换当前色谱柱，然后用一系列标准样品进行测试，比较保留时间的重复性，如果保留时间是重复的，则表明原来的色谱柱柱效已经下降，需更换色谱柱，如果保留时间不稳定，则问题可能出在流动相混合不均匀、溶剂或保护柱、在线过滤器被污染等；如果系统中使用了保护柱，在测试柱效时应将其卸下，保护柱也可能是污染源，所以在更换色谱柱的时候有必要将保护柱一同更换。

五、色谱柱选择不当检查使用的色谱柱内径和填料是否正确。

六、保护柱问题更换被污染的或者柱效下降的保护柱后再测试色谱柱的柱效，正常情况下柱效应该是上升的。

如果不是，应按照前面讨论的方法检查色谱柱是否被污染或柱效是否下降。

迅速诊断提示：所有的色谱峰都展宽通常是由于仪器或色谱柱选择不当而造成的。

一般要先检查色谱柱和保护柱，因为它们是系统的核心组成部分，需要重点排查。

色谱平失峰
色谱平失峰通常指的是在色谱分析中出现的异常峰形，如无峰、负峰、宽峰、双峰、肩峰或峰形不对称等情况。

这些异常峰形会严重影响色谱分析的结果，使得定量精度下降，甚至导致分析工作无法进行。

解决色谱平失峰的问题通常需要从以下几个方面入手：
1. 减少进样量：过多的样品可能导致检测器过载，造成平头峰的出现。

适当减少进样量或对样品进行稀释可以解决这个问题。

2. 调整检测器信号衰减：如果检测器的灵敏度过高，也可能导致信号饱和，形成平头峰。

适当调节检测器的信号衰减或改变记录仪的量程可以改善这种情况。

3. 检查气路系统：如果气路系统被污染，如气源纯度低或过滤器失效，也可能导致色谱峰异常。

检查和清洁气路系统，确保气体纯度，可以有效避免此类问题。

4. 检查注射系统：注射垫漏气或注射针密封性差也会影响色谱峰的形成。

检查注射系统并更换损坏的部件是解决问题的关键步骤。

5. 色谱柱老化或污染：色谱柱如果使用时间过长或者被样品污染，会导致其分离效能下降，出现平失峰的现象。

老化或清洗色谱柱，必要时更换新柱，可以恢复色谱分析的准确性。

6. 确认载气纯度：载气中的杂质也可能导致色谱峰异常。

确认
载气的纯度并进行必要的净化处理是保证分析质量的重要环节。

综上所述，在遇到色谱平失峰的问题时，应该系统地检查整个色谱系统，包括进样系统、检测器、气路系统、色谱柱等，以便找到问题的根源并采取相应的解决措施。

色谱双峰产生的可能及判断和处理HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。

下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。

色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。

我将这种情况分为四种原因。

1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。

如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。

当然不反冲，正冲有时也会正常的。

如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

2 溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。

目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。

样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。

最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。

当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。