实验一 植物叶绿素含量的测定

实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。

这就是吸光度的加和性。

今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。

在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。

二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。

把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。

四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W 按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。

测定叶绿素含量实验报告测定叶绿素含量实验报告引言：叶绿素是植物中最重要的色素之一，它在光合作用中起着至关重要的作用。

测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的生理状态和光合效率。

本实验旨在通过分光光度法测定叶绿素含量，并探讨影响叶绿素含量的因素。

材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片、乙醇、丙酮、二氯甲烷、石英比色皿、量筒、离心机、紫外可见分光光度计等。

2. 实验步骤：a. 将适量的新鲜叶片切碎，并加入适量的乙醇中，用离心机离心10分钟，使叶绿素溶解于乙醇中。

b. 取适量的叶绿素提取液，加入丙酮和二氯甲烷，混合均匀。

c. 用量筒将混合液转移到石英比色皿中，放入紫外可见分光光度计，设置波长为665nm和649nm，测定吸光度。

d. 计算叶绿素含量。

结果与讨论：通过实验测定，我们可以得到不同植物叶片的叶绿素含量。

在实验中，我们发现不同植物叶片的叶绿素含量有所差异。

这是因为不同植物对光合作用的需求和适应能力不同，导致叶绿素合成的数量和比例不同。

此外，我们还发现在同一植物的不同部位，叶绿素含量也存在差异。

例如，在一棵树上，树叶的叶绿素含量可能比树干或树枝的含量高。

这是因为树叶是进行光合作用的主要部位，需要更多的叶绿素来吸收光能。

除了植物本身的因素外，环境条件也会对叶绿素含量产生影响。

光照强度、温度、水分等因素都会对叶绿素合成和降解产生影响。

例如，充足的光照和适宜的温度可以促进叶绿素的合成，而干旱和寒冷的环境则可能导致叶绿素的降解。

在实验中，我们使用了分光光度法来测定叶绿素含量。

这种方法基于叶绿素对特定波长光的吸收特性，通过测量吸光度来间接测定叶绿素的含量。

分光光度法具有操作简便、结果准确等优点，因此被广泛应用于叶绿素含量的测定。

然而，分光光度法也存在一些局限性。

首先，该方法只能测定总叶绿素含量，无法区分不同类型的叶绿素。

其次，该方法对样品的处理要求较高，需要保证样品中的叶绿素完全释放并溶解于提取液中。

因此，在实际应用中，我们需要根据具体情况选择适合的方法来测定叶绿素含量。

一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。

2. 掌握利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。

3. 了解不同植物叶绿素含量的差异。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的生长和发育。

本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，基于叶绿素在不同波长下对光的吸收特性，通过测定其最大吸收峰处的吸光度值，计算出叶绿素的含量。

三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜菠菜、小麦、水稻等植物叶片。

2. 95%乙醇、无水乙醇、碳酸钙、石英砂等试剂。

实验仪器：1. 分光光度计2. 研钵3. 移液管4. 量筒5. 滤纸6. 比色皿7. 电子天平四、实验步骤1. 样品制备：- 称取新鲜植物叶片0.1g（准确至0.0001g），放入研钵中。

- 加入少量石英砂和碳酸钙，用研杵研磨成匀浆。

- 加入5ml 95%乙醇，继续研磨至叶片组织变白。

2. 叶绿素提取：- 将提取液转移至10ml试管中，用少量95%乙醇冲洗研钵、研杵及残渣，合并于试管中。

- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。

3. 叶绿素分离：- 将滤液转移至比色皿中，以无水乙醇为空白，在波长663nm、645nm和652nm处测定吸光度值。

4. 叶绿素含量计算：- 根据吸光度值和标准曲线，计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。

- 叶绿素总含量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量。

五、实验结果与分析以菠菜叶片为例，实验结果如下：| 植物种类 | 叶绿素a含量（mg/g） | 叶绿素b含量（mg/g） | 类胡萝卜素含量（mg/g） | 叶绿素总含量（mg/g） || -------- | ------------------- | ------------------- | --------------------- | ------------------- || 菠菜 | 1.23 | 0.78 | 0.45 | 2.46 |通过比较不同植物叶片的叶绿素含量，可以分析其光合作用能力和生长发育状况。

实验报告植物体叶绿素含量的测定摘要：本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取菠菜叶片中和番茄叶片中叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。

根据分光光度计测定的吸光度值，从而计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。

实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a ，叶绿素b 和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm 、649nm 和470nm 。

根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。

实验目的：掌握分光光度计法对叶绿素a 、叶绿素b 、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。

实验材料：生物材料：菠菜叶片0.25g ，自己培养的全素番茄苗叶片0.2g ，缺磷番茄苗叶片0.2g ；试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙；仪器：分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、玻璃棒、小烧杯、10ml量筒、50ml 容量瓶、剪刀、滤纸、滴管。

实验步骤：1.叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片0.25g ，擦干，去中脉，剪碎放入研钵，加入少许石英砂和CaCO 3，再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆，再加95%乙醇10ml ，静置10min ，用漏斗滤去残渣，用乙醇反复冲洗研钵、残渣至无色；用容量瓶定容至50ml 。

2.吸光度的测定取光径1cm 比色杯，注入上述叶绿素提取液，以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照，在波长665、649、和470nm 下测定吸光度。

3.结果计算依据下列计算公式，分别计算出叶绿素a 、B 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。

C a （叶绿素a ）=13.95A 665 – 6.8A 649C b （叶绿素b ）=24.96A 649 – 7.32A 665C T （叶绿素）=C a +C b =18.16A 649 + 6.63A 665C x.c （类胡萝卜素）=(1000A 470 – 2.05C a -114.8C b )/248叶绿体色素含量 = ）样品鲜重（稀释倍数）提取液体积（）色素浓度（g /mg ⨯⨯L L实验结果：菠菜叶片提取液吸光值：1、测定叶绿素ab为什么选用红光波长？叶绿素吸收红光和蓝紫光，故有两个吸收峰，光合色素还有类胡萝卜素，只吸收蓝紫光，所以不能选蓝紫光区测定，否则被类胡萝卜素干扰，只能用红光。

植物叶绿素含量的测定
植物叶绿素含量的测定
一、实验目的
1. 了解叶绿素的含量对植物生长发育的影响。

2. 使用叶绿素测定仪器，熟练掌握叶绿素测定的操作方法。

二、实验原理
叶绿素的含量是植物生长发育的重要参数，它主要受到植物品种、生长环境等因素的影响，叶绿素的测定能了解植物发育及分析植物选择性。

叶绿素测定仪器以叶绿素的吸收波长在670nm处，测定叶绿素的吸收值，从而计算出叶绿素的含量。

三、实验材料
1. 叶绿素测定仪器；
2. 分装标准液；
3. 各种植物叶片；
4. 纸巾；
5. 光学玻璃管（空管，分装标准液管）；
6. 吸管；
7. 水桶；
8. 烧杯；
9. 烧瓶；
四、实验步骤
1. 将叶片裁切为小块，放入烧杯中；
2. 把六个光学玻璃管清洗干净；
3. 用纸巾擦干玻璃管，将空管和标准液管装入叶绿素测定仪中；
4. 在烧杯中加入适量水，把叶片浸泡；
5. 将烧杯中的叶片倒入叶绿素测定仪中，盖上盖子；
6. 按照设备的操作指南，进行实验操作；
7. 记录实验数据；
8. 计算叶绿素含量；
9. 将实验数据做出结果表格。

五、实验结果
植物叶绿素含量（μg/g）
植物 | 叶绿素含量
---- | ----
植物1 | 10.2
植物2 | 15.3
植物3 | 8.1
植物4 | 12.6
植物5 | 13.2
植物6 | 11.4
六、结论
通过实验，可以得出不同植物叶绿素含量的不同，从而了解叶绿素含量对植物生长发育的影响。

叶绿素含量的测定实验报告叶绿素含量的测定实验报告引言：叶绿素是植物中一种重要的生物色素，它在光合作用中起着至关重要的作用。

叶绿素能够吸收光能，并将其转化为化学能，促进光合作用的进行。

因此，测定叶绿素含量对于研究植物的光合作用和生长发育具有重要意义。

本实验旨在通过不同方法测定叶绿素含量，并比较其准确性和适用性。

材料与方法：1. 实验材料：新鲜的植物叶片、酒精、乙醚、石油醚、丙酮、叶绿素提取液、比色皿、分光光度计等。

2. 实验步骤：a. 将新鲜的植物叶片取下，并用酒精擦拭叶片表面，以去除表面的叶蜡和杂质。

b. 将擦干的叶片放入离心管中，加入适量的酒精，用研钵捣碎叶片，使叶绿素溶于酒精中。

c. 将离心管放入冰箱中静置一段时间，使叶绿素充分溶解。

d. 将离心管取出，用滤纸过滤叶绿素提取液，收集滤液。

e. 取一定量的叶绿素提取液，分别加入不同溶剂（乙醚、石油醚、丙酮）中，使叶绿素溶于溶剂中。

f. 将溶液转移到比色皿中，并使用分光光度计测定其吸光度。

g. 根据标准曲线，计算叶绿素的含量。

结果与讨论：在本实验中，我们使用了不同的溶剂对叶绿素进行提取，并通过测定吸光度来计算叶绿素的含量。

实验结果显示，使用乙醚提取的叶绿素含量最高，丙酮次之，而使用石油醚提取的叶绿素含量最低。

这是因为不同的溶剂对叶绿素的溶解能力不同，乙醚具有较强的溶解能力，可以更好地提取叶绿素。

而石油醚的溶解能力较弱，因此提取效果较差。

此外，我们还发现在同一种溶剂中，叶绿素的吸光度与其浓度呈正相关关系。

也就是说，叶绿素浓度越高，吸光度也越高。

这为我们测定叶绿素含量提供了依据。

通过制作标准曲线，我们可以根据吸光度值来计算叶绿素的含量。

这种方法简单、快速，并且具有较高的准确性。

然而，需要注意的是，叶绿素的测定结果受到多种因素的影响。

例如，叶片的新鲜程度、叶片的厚度、溶剂的选择等都会对测定结果产生影响。

因此，在进行叶绿素含量测定时，应尽量保持实验条件的一致性，以提高测定结果的准确性和可比性。

叶绿素含量的测定实验报告一、实验目的1、掌握叶绿素含量测定的原理和方法。

2、学会使用分光光度计测定叶绿素的含量。

3、了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，包括叶绿素 a 和叶绿素 b 两种类型。

叶绿素在特定波长的光下有吸收峰，利用分光光度计分别测定叶绿素提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，根据朗伯比尔定律，可以计算出叶绿素 a 和叶绿素 b 的含量，进而得出叶绿素的总含量。

叶绿素 a 和叶绿素 b 在 665nm 和 649nm 波长下的吸光系数分别为8331 和 1675，在 649nm 波长下的吸光系数分别为 2454 和 4466。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的菠菜叶片。

2、实验仪器分光光度计、电子天平、研钵、漏斗、容量瓶、移液管、剪刀等。

3、实验试剂95%乙醇、石英砂、碳酸钙。

四、实验步骤1、材料准备选取新鲜的菠菜叶片，用剪刀剪碎，称取 05g 左右，放入研钵中。

2、研磨提取在研钵中加入少量石英砂和碳酸钙，以及 10ml 95%乙醇，充分研磨成匀浆。

3、过滤将研磨好的匀浆用漏斗过滤到 25ml 容量瓶中，用少量 95%乙醇冲洗研钵和漏斗，将滤液收集到容量瓶中，直至刻度线，摇匀。

4、吸光度测定以 95%乙醇作为空白对照，用分光光度计分别测定提取液在 665nm 和 649nm 波长下的吸光度，每个波长重复测定 3 次，取平均值。

五、实验结果与计算1、记录吸光度值665nm 波长下的吸光度平均值记为 A665，649nm 波长下的吸光度平均值记为 A649。

2、计算叶绿素含量叶绿素 a 的浓度（Ca，mg/L）＝ 1395×A665 688×A649叶绿素 b 的浓度（Cb，mg/L）＝ 2496×A649 732×A665叶绿素的总浓度（C，mg/L）＝ Ca ＋ Cb叶绿素含量（mg/g）＝（C×V）／（W×1000）其中，V 为提取液总体积（ml），W 为叶片鲜重（g）。

叶绿素含量的测定Revised at 16:25 am on June 10, 2019植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定姓名班级学号一、实验原理和目的根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 ; 叶绿素丙酮在652nm混合、663nm、645nm有最大吸收峰;叶绿素95%乙醇在665nm、649nm,类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰,根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素的含量二、实验器具和步骤植物材料：女贞实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀试剂： 95％乙醇或80％丙酮；石英砂；碳酸钙粉步骤：1.称取剪碎的新鲜样品左右,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白;静置3～5min2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中;3.用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中;直至滤纸和残渣中无绿色为止;最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内;以95％乙醇为空白,在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度5. 计算公式：叶绿素的含量mg/g= 浓度×提取液体积×稀释倍数/样品鲜重;Ca=－；Cb=－C类=单位：mg/L三、实验数据和作业2、计算叶绿素含量计算公式：叶绿素的含量mg/g= 浓度×提取液体积×稀释倍数/样品鲜重;Ca=－；Cb=－C类=单位：mg/L由上面的公式进行代入计算,有：Ca= Cb= C类=1000/245=则：叶绿素含量=101/=四、数据分析实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差五、思考题为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80％的丙酮,而新鲜的材料可以用无水丙酮提取答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体,要分离叶绿素和蛋白质必须有水,叶绿素的头部为极性的,有亲水性。

化学实验测定某种植物中叶绿素含量一、实验目的本实验旨在通过化学方法准确测定某种植物中叶绿素的含量，探究不同环境条件对叶绿素含量的影响，并加深对叶绿素的了解。

二、实验原理叶绿素是一种重要的生物色素，可以吸收光能转化为化学能参与光合作用，因此对于一种植物来说，叶绿素的含量直接关系到其对光合作用的效率。

此次实验使用乙醇提取法测定某种植物中叶绿素的含量。

实验步骤如下：1. 将新鲜的某种植物叶片取出，并用解剖刀切成细碎的碎片。

2. 将叶片碎片放入研钵中，加入适量的乙醇，使其完全浸泡。

3. 使用研钵和捣棒将叶片碎片充分研磨，使叶绿素充分溶解到乙醇中。

4. 将研磨后的混合液倒入离心管中，离心10分钟，使悬浮在乙醇中的固体碎片沉淀到离心管底部。

5. 取出上清液，用吸管移至比色皿中。

6. 使用分光光度计以470nm为波长进行读数，记录吸光度A1。

7. 在比色皿中加入一定体积的乙醇，作为空白处理。

8. 再次使用分光光度计以470nm为波长进行读数，记录吸光度A2。

根据比色法的原理，通过计算吸光度的差异可以得到叶绿素的含量。

三、结果分析根据实验数据，我们可以通过以下公式计算叶绿素的含量：叶绿素含量(mg/g) = (A1 - A2) × V / M其中，A1为样品的吸光度，A2为空白的吸光度，V为乙醇的体积，M为样品的质量。

根据实验步骤和原理，我们可以得到结果如下：1. 样品的吸光度A1为0.6。

2. 空白的吸光度A2为0.1。

3. 乙醇的体积V为1mL。

4. 样品的质量M为0.1g。

代入公式计算，可得：叶绿素含量 = (0.6 - 0.1) × 1 / 0.1 = 5 mg/g根据计算结果，某种植物中的叶绿素含量为5 mg/g。

四、误差分析在实际操作过程中，可能会存在一些误差，主要包括以下几个方面：1. 植物样品的选择：不同部位和不同植物对叶绿素含量的影响不同，因此样品的选择可能会产生误差。

2. 实验操作：实验操作的不精确或不规范可能导致实验结果的偏差。

实验一鱼类回避胁迫实验一、实验目的1. 了解污染物胁迫下鱼类的回避行为。

2. 学会用鱼类回避实验监测水体污染物的方法。

3. 了解回避反应的生理效应。

二、实验原理回避行为，是指水生动物，特别是游泳能力强的水生动物，能主动避开受污染的水区，游向未受污染的清洁水区的行为。

有些化学物质甚至利用化学分析仪器都难以检测到，但通过回避试验，便能反映出水体的混合污染状况的实际毒性。

人们利用鱼类的这种回避特性，设计控制不同浓度的污染区、非污染区(清水区)及污染混合区(污水与清水混合区)的模拟设施，借以检定鱼类的回避能力，对判定水污染状况和工业废水的处理程度，都有一定的实用价值。

鱼类回避反应，是通过嗅觉、味觉、视觉，侧线及其他感受器而实现的。

嗅觉器官可感受水中化学成分、食物及其他鱼类皮肤分泌物等所引起的化学刺激，是引起鱼类行为反应的重要器官之一。

味蕾是感觉器，广泛分布于鱼类的口腔、触须及表皮等部位，对水中有些重金属离子(如汞、铜、锌等)，具有很高的敏感性。

当环境中的污染物达到回避阈值时，就会引起鱼类对外界环境刺激的行为反应而出现的短期的逃避行为。

因此，通过鱼类这种短期的转移与逃避可直观地反应环境中理化性质的恶化、水的变质等。

三、试剂与材料1. 试剂：0.2~2.0 mg/L NH3水溶液2. 材料：非洲鲫鱼(Tilapiamossambica)为26.9克最宜。

试验前先经室内驯养七天以上。

驯养期间每天投喂豆饼粉。

3. 仪器与器皿：自制的鱼类回避槽。

其结构如图所示。

四、实验步骤1. 在回避槽中装入适量的清水，槽一端的污染区和对照区各放供试鱼20条。

2. 在污染区中投加NH 3，打开阀门，观察鱼类是否逃避到回避槽另一端的混合区。

如果没有鱼游走，继续增加NH 3的投加量，直到有第一条鱼游到混合区。

记录此时NH 3的投加量，即为最小效应量。

3. 继续增加NH 3的投加量，并同时计算游到回避槽另一端混合区鱼的数量。

4. 当供试鱼一半数量游到的回避槽另一端混合区时，记录此时NH 3的投加量，即为半数效应量。