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生物工程中的动物细胞培养技术动物细胞培养技术是生物工程中的一项重要技术，它不仅可以为医学、农业、食品工业等领域提供高质量的动物细胞，还可以被用于生物制药、基因治疗等方面。
下面，我们来一起了解一下生物工程中的动物细胞培养技术。
1. 动物细胞培养的定义动物细胞培养是指从动物的体内或组织中取出细胞，然后放入无菌的培养基中，通过控制培养基的成分、温度、pH 值、气体等条件，使其在体外继续生长和繁殖的过程。
而动物细胞培养技术，就是在动物细胞培养的基础上，为了达到所需的目标而进行的各种技术操作，如转染、筛选、鉴定、优化等。
2. 动物细胞培养技术的应用（1）制药行业动物细胞培养技术被广泛应用于生物制药领域。
通过转染等技术，可以将需要的蛋白质等生物物质在动物细胞中进行生产，制成具有治疗效果的药物。
（2）基因治疗动物细胞培养技术也可以应用于基因治疗这一领域。
通过将治疗药物的基因导入到动物细胞中，使其进行蛋白质等生物物质的生产，从而达到治疗疾病的目的。
（3）食品加工动物细胞培养技术还可以被应用于食品工业。
如利用鸡卵清或鸭卵清中的卵清蛋白，进行细胞培养后，得到大量的卵清蛋白，生产成为食品添加剂。
（4）疾病模型在医学研究领域中，动物细胞培养技术可以用来建立一些特定疾病模型。
比如，利用培养的白血病细胞系，可以用于研究白血病的发病机制和治疗方案等。
（5）毒理学研究动物细胞培养技术也可以用于毒理学研究。
通过将毒素等物质加入到细胞培养基中，观察它们对细胞的影响，可以判断毒素等物质的危害程度，并为制定相应的安全措施提供依据。
3. 动物细胞培养技术的步骤（1）细胞分离分离是动物细胞培养的首要步骤。
分离可采用酶消化法、机械分离法、溶解分离法等方法将细胞从体内分离出来。
（2）培养基的制备培养基的成分是影响细胞生长、形态和代谢的关键因素。
常见的细胞培养基有 DMEM、MEM、RPMI 1640 等。
根据不同细胞类型需求的营养成分不同，因此所使用的培养基也有所不同。
![[整理].动物细胞培养技术](https://img.taocdn.com/s1/m/ab808c68a36925c52cc58bd63186bceb19e8ed04.png)
[整理].动物细胞培养技术动物细胞培养技术绪论部分1）细胞的基本概念：细胞（包括单个个体）在体外条件下的⽣长，成为细胞培养。
2）组织培养：其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内⽣理环境，在⽆菌，适当温度和⼀定营养条件下使之⽣存和⽣长并维持其结构和功能的⽅法。
（组织培养从⼴义上说分为动物组织营养和植物组织营养两⼤类。
）组织培养常⽤术语贴壁依赖性：为细胞需贴附于第五或⽀撑物上才能⽣长的性质。
细胞⼀代时间：单个细胞连续两次分裂的时间相隔，可借助显微电影照相术来精确确定。
群体倍增时间：在对数⽣长期进⾏计算的细胞增加⼀倍所需时间。
克隆;单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，他们的遗传特性相同。
原代培养：从体内取出细胞或组织的第⼀次培养。
传代或传代培养：不论是否稀释，将细胞从⼀个培养瓶转移或移植到另⼀个培养瓶。
细胞杂交：两个或多个不同的细胞融合导致⼀个含核体的形成。
细胞培养：其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内⽣理环境，在⽆菌、适当温度和⼀定营养条件下，使之⽣存和⽣长并维持其结构和功能的⽅法。
细胞培养的作⽤：在病毒学上的作⽤（病毒的分离细胞培养在药物学上的作⽤（新药的制备、药效的鉴别、病毒疫苗的⽣产、单抗的制备）；细胞培养在肿瘤学研究上的作⽤（例如化疗中的药物使⽤剂量、癌症研究等）细胞培养在细胞功能与分化研究中的应⽤；细胞培养在免疫学中的应⽤1)Harrison⾸先解剖出蛙胚原始脊髓节段进⾏培养。
哈⾥森悬滴培养法。
建⽴起⼀套合理的⽆菌操作技术。
（淋巴）⼀般皆公认Harrison为“组织培养之⽗”，凹玻⽚悬滴制备培养技术，对⽣物学知识的研究做出⼗分重要贡献。
2) Carrel 反复传代的⽅法使细胞系存活34年。
他采⽤的⽆菌技术，以及后来设计的培养瓶(卡⽒瓶，Carrel flask)等都是对组织培养的重要贡献。
特别是他的连续培养，为后来的传代培养奠定了基础。
30年代传⼊我国，50年代逐渐发展细胞培养设施和基本条件（⼀）细胞实验室基本原则：防⽌微⽣物污染和有害物的影响。
动物细胞大规模培养的方法《动物细胞大规模培养的方法》一、综述动物细胞在医学、生物制药和科学研究中发挥着重要作用，但其大规模培养至今仍是一个挑战。
近年来，随着生物技术的发展，细胞可以通过人工方法大规模培植，从而获得较高纯度的大规模细胞所需要的成本降低，从而实现药物研发、检测疾病等基础研究的进一步深入和拓展。
本文就大规模培养动物细胞的方法进行综述。
二、培养基1.细胞培养基细胞培养基是支持细胞增殖和生长所必需的基础，可以提供必要的营养和生长因子。
常见的细胞培养基有Eagle's minimal essential medium（E的最小必需培养基）、RPMI-1640培养基、DMEM-F12-K Medium （F-12）、MCDB-153培养基等。
2.表面活性剂表面活性剂是指在水溶液（或其他溶剂）中构成有机分子表面的有机化合物，有良好的乳化和表面活性，能有效地改善细胞在培养基和细胞外液中的分布和添加，可以改善细胞的生长和健康状态。
三、培养方法1.平板培养法平板培养是一种简单的培养方法，它是将细胞悬浮液分散均匀的滴在平面上，使细胞生长形成单层。
平板培养的优点是简单易行和细胞分散均匀，但缺点是细胞的生长速度较慢。
2.悬浮培养悬浮培养是利用细胞的自我复制和细胞的浮力来保持细胞在溶液中的悬浮状态，悬浮培养有利于细胞的大量增殖，并且因为总容积的增加，细胞的吸收和新陈代谢作用也能够得到很好地利用。
3.体外培养体外培养是指把细胞从原位割取，将其培养在人工条件下的培养基中，以促进其增殖、发育和分化。
体外培养的优点是可以满足细胞增殖和要求，但缺点是需要大量的实验空间和费用，而且容易受到室温和湿度等条件的影响。
四、细胞增殖1.细胞再分化细胞再分化是指在细胞培养基中添加适当的分化因子来实现细胞功能的再分化，以达到大规模细胞增殖的目的。
常见的分化因子包括细胞因子、生长因子、激素和其他物质，如蛋白质、碳水化合物等，这些物质都能够影响细胞的增殖和发育。
动物细胞培养
动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，广泛应用于医药、生物学研究、食
品工业等领域。
通过细胞培养，可以获取大量同质的细胞群体，为疾病治疗、新药研发提供重要的支持。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养是将动物组织或细胞在人工培养基中进行维持、增殖、传代等过程。
培养基通常包括营养物质、生长因子、激素等成分，提供细胞生长所需的营养和环境。
动物细胞培养的步骤
1.细胞来源：从动物体内收集组织样本，获得原代细胞。
2.细胞分离：通过消化酶等手段将组织分离成单个细胞。
3.传代培养：将分离的细胞在培养基中培养，定期传代以增殖细胞数
量。
4.检测与分析：对培养的细胞进行检测、分析，确保其健康状态。
动物细胞培养的应用
1.生物医学研究：细胞培养在癌症、遗传疾病等方面的研究中发挥重
要作用。
2.药物研发：通过细胞培养可以进行药物筛选、毒性测试等工作。
3.食品工业：利用细胞培养技术可以生产细胞培养肉等食品。
动物细胞培养的发展
随着生物技术的不断发展，动物细胞培养技术也在不断创新和提升。
新的培养
基配方、生长因子的发现以及工程技术的应用，使得动物细胞培养在医学和生物学领域有着广阔的应用前景。
动物细胞培养作为一种重要的生物技术手段，将继续在各个领域发挥重要作用，为人类健康和科学研究进步做出贡献。
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
•一、半连续式培养1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。
采用机械搅拌式生物反应器系统，悬浮培养形式。
在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。
这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。
或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。
剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。
在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。
2.半连续式特点：·培养物的体积逐步增加；·可进行多次收获；·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。
该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。
在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。
二、连续式培养1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。
该模式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。
理论上讲，该过程可无限延续下去。
2.连续培养的优点是反应器的培养状态可以达到恒定，细胞在稳定状态下生长。
稳定状态可有效的延长分批培养中的对数生长期。
在稳定状态下细胞所处的环境条件如营养物质浓度、产物浓度、pH值可保持恒定，细胞浓度以及细胞比生长速率可维持不变。
一.细胞增殖周期（cell proliferatinal cycle）概念细胞周期是描述细胞增殖和分化交替发生变化的概念。
而细胞增殖周期主要是从细胞增殖角度赋予细胞活动的概念，两者不应混为一谈。
细胞增殖周期是指细胞从一次分裂结束开始生长，到下一次分裂结束所经历的过程。
根据细胞增殖周期不同时期的生化特点，划分为四个连续的时期，即G1期（DNA合成前期），S期（DNA合成期），G2期（DNA合成后期），M期（有丝分裂期）。
如以G1期为起点，那么细胞增殖周期的各时期应循着G1-S-G2-M的顺序进行，G1、S、G2三期合称为细胞间期，此期完成细胞生长过程。
M期完成遗传物质的分配。
因此，细胞增殖周期=间期（G1期+S期+G2期）+分裂期（M期）。
二.培养细胞生命期（life span of culture cells）很多细胞特别是正常细胞，在体外的生存不是无限的，而是具有一个生命期。
索维培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。
培养细胞的生命期与细胞的种类、性状和原供体的年龄、健康等情况有关。
人胚二倍体成纤维细胞，在不冻存和反复传代条件下，科传30~50代，相当于150~300个细胞增殖周期，能维持1年左右的生存时间，最后衰老凋亡。
如供体为成体或衰老个体，则生存时间较短；其他细胞如肝细胞或肾细胞，生存时间更短，仅能传几代或十几代。
只有当细胞发生遗传性改变，如获永生性或恶性转化时，细胞的生存期才可能发生改变。
正常细胞培养时，不论细胞的种类和供体的年龄如何，在细胞生命的全过程中，大致都经历以下三个阶段：原代培养期、传代期、衰退期。
三.培养细胞一代生存期培养细胞的生存空间和营养是有限的，当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代（Passage或Subculture）。
每次传代以后，细胞的生长和增殖过程都会受一定的影响。
传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞的数量和细胞增殖的速度等有关。
接种细胞数量大，细胞基数大。
相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快（实际上细胞接种数量大时细胞增殖速度比稀少时要快）；连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增值快；；培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。
以上情况都会缩短传代时间。
所谓细胞“一代”一词，仅指从细胞接种到分离培养时的一段时间，这已成为培养工作中的一种习惯说法，它与细胞时代或倍增非同意含义。
如某一细胞系为第20代细胞，即指该细胞系已传代20次。
在细胞一代中，细胞能倍增3~6次。
细胞传一代后，一般要经过以下六个阶段：游离期、贴壁期、潜伏期、指数增长期、停滞期、衰退期。
四.无菌操作要求（一）实验前培养室和超净台的消毒。
在工作台面消毒时，切勿将培养细胞和培养用液用紫外线照射；工作台面上的用品不要过多或重叠放置，否则会遮挡射线，降低消毒效果；一些操作用具，如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦拭后置台内同时紫外线照射消毒。
（二）无菌操作工作区域应保持清洁与宽敞，必要物品，如试管架、移液器或吸管头等可以暂时放置，其他实验用品用完后应及时移出，以利气体流通。
试剂瓶口和外壁要用75％酒精擦拭后才能带人无菌操作台内。
超净台上的物品布局要合理，污物废液缸、酒精棉球缸在右侧位，酒精灯在中央区，试剂瓶在左侧位。
实验操作应在操作台中央无菌区域内进行，勿在边缘非无菌区域操作。
（三）洗手和着装：严格按照外科手术要求消毒着装，双手用肥皂洗净后，浸泡于消毒液中，并用75％的酒精擦拭。
（四）操作中，小心取出无菌实验用品，避免造成污染。
尽量减少手与器材的接触面，学会手指操作。
手指不能触及器材使用端及容器瓶口，如触及，需要更换或烧灼后再使用。
组织、细胞及培养板在未做处理和使用前，不要过早暴露于空气中。
（五）一切操作，如打开或封闭瓶口，安装吸管、注射器等，都要在酒精灯火焰前方进行。
瓶口、吸管、注射器等使用前要经过火焰烧灼后使用。
但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火c另外，胶塞、橡皮乳头及塑料制品等细胞培养用品过火焰时也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害细胞。
（六）试剂瓶顺风斜放在支架上，培养瓶、培养液瓶不要过早打开。
容器打开后，用手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量避免垂直放置以防止下落细菌的污染。
吸取液体前，瓶口和吸管应行火焰消毒，吸取液体时避免瓶口和吸管碰撞。
吸管不能混用，吸过培养液的吸管不能再烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养基中。
不要在打开的容器正上方操作。
瓶口液滴不能倒回瓶内，液滴用于酒精棉球擦拭，瓶口再经火焰消毒。
（七）不同的细胞同时操作时，要专管专用，并要勤换吸管，防止扩大污染和细胞交叉污染。
（八）操作者动作要准确敏捷，尽量避免空气流动。
不要面向操作台讲话或咳嗽，避免唾沫将微生物带人超净台内，污染空气。
同时应注意自身的安全，对于来自人源性或病毒感染的细胞株应特别小心，并选择适当等级的无菌操作台(至少两级)。
操作过程中小心有毒性试剂，例如DMSO及TPA等。
实验者离开超净台时，立即用肘关节关闭侧窗口，避免无茵室内细菌随空气流人净化操作区。
五.高压蒸汽灭菌装置（一）使用方法1.首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。
2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4.通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
5.到达灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降而发生意外事故。
（二）注意事项1.消毒过程中，操作者不能离开工作岗位，要定时检查压力及安全，防止意外事件发生。
消毒完毕后从压力蒸汽消毒器中取出的消毒好的物品(不包括液体)，应立即放到60℃~70℃烤箱内烘干，再贮存备用，否则，潮湿的包装物品表面容易被微生物污染。
但如果消毒物中有液体时，一定要待消毒器冷却后方可打开消毒器的盖，不能先打开阀门放气，否则液体会溢出。
2.不同压力蒸汽所达到的温度不同，不同消毒物品所需的有效消毒压力和时间不同。
平衡盐溶液及其他需要灭菌的液体：121℃，10磅(68.95kPa)，20min；布类、玻璃制品、金属器械等物品：121℃，15磅(103.42kPa)、20min。
六.使用血清的注意事项血清的质量、种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长，而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同，尤其是对克隆细胞的牛长，某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。
因此，在购买大量血清之前，必须对血清支持细胞生长能力进行检测，包括接种率、生长曲线、维持细胞特性、无生物污染性等方面，然后再大量购买质量好的同一批号的血清，并注意以下几点：（一）需要长期保存的血清必须储存于-20℃或-70℃低温冰箱中，同时应避免反复冻融。
4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。
由于血清结冰时体积会增加约10％，因此，血清在冻入低温冰箱前必须预留一定的体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
（二）一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。
如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。
（三）瓶装血清解冻需采用逐步解冻法：-20℃或-70℃低温冰箱中的血清放人4℃冰箱中溶解1d，然后移入室温，待全部溶解后再分装。
在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。
切勿直接将血清从-20℃或-70℃直接放人37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
（四）热灭活是指56℃，30min加热已完全解冻的血清。
加热过程中需规律摇晃均匀。
此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。
除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会产生其他不明效应。
究竟灭活与否，以有利于实验为主。
切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，黏度增大，同时血清中的有效成分会被破坏而影响血清质量。
（五）血清中的絮状物主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中的纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量。
可3000r/min，离心5min去除，也可不用处理。
（六）采购血清时，最好先从供应商处索取样品进行试验，选定一批后就要保留足够使用6个月至1年的量，直至用到另一批经过预先试验的样品代替。
七.基本培养基的应用基本培养基只能维持细胞的生存，想要使细胞生长和增殖，还需补充部分天然培养基和一些补充成分，效果才更好。
主要是牛血清、谷氨酰胺等。
此外，为防止污染，还经常加一定的抗菌素。
补加了上述物质的培养基叫完全培养基。
按其血清量的多少又分为生长液和维持液。
由于培养液是细胞赖以生存的环境，制备过程要操作严格，避免混入杂质。
使用的成分应精心选择，必须用质量最优的试剂，容器要仔细清洗和消毒。
八.合成培养基的保存（一）液体培养基的保存：液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前放入37℃预热。
液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。
如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。
液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的PH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会对细胞生长不利。
故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月至一年。
（二）干粉培养基的保存：4℃冰箱避光保存，有效期36个月。
九.平衡盐溶液（Balanced Salt Solution，BSS）平衡盐溶液是细胞培养中常用的基本液体。
它主要是由无机盐、葡萄糖组成，其作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。
主要用于合成培养基的基础液、取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配置其他试剂等，最简单的BSS是Ringer。
平衡盐溶液的种类很多，常用的几种见表。
各种平衡盐溶液的主要区别在于氯化钠的浓度、离子的浓度及缓冲系统不同，可根据需要选用适当的个衡盐溶液。
最常用的BSS是D-Hank’s、Hank’s、Earle液。
D-Hank’s 和Hank’s的一个主要区别是前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。
Hank’s和Earle液的主要区别是缓冲能力个同，Earle液含会高浓度的NaHCO3（2.2g/L），缓冲能力较强，适合于5%C02的培养条件，在空气水平的C02中，，溶液会变碱，Hank’s液仅含有0.35g/L NaHCO3，缓冲能力较弱，不能用于5%C02的环境，若放入C02培养箱，溶液将迅速变酸．使用时应注意。
