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全自动化学发光免疫分析仪运行原理36页PPT

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全自动化学发光免疫分析仪运行原理

全自动化学发光免疫分析仪运行原理

Assay processing for One step 25 (i System)

1. At position 1 the sample pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). 2. At position 2 the R1 pipettor dispenses the microparticles and acridinium-labeled conjugate. NOTE: For a delayed one-step assay the R2 pipettor adds the acridinium-labeled conjugate at position 71 and the vortexer mixes the reaction mixture at position 72. 3. At position 3 the vortexer mixes the sample, microparticles, and conjugate. 4. At positions 4 - 86 the reaction mixture incubates for 25 minutes.
化学发光现象的发现






最早发现的化学发光现象发生在生物体内，即荧火虫，现在 称之为生物发光(Bioluminescence). 到了十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产 生化学发光. 1877年，发现洛汾碱(2，4，5-三苯基咪唑)在碱性介质中被 过氧化氢等试剂氧化时发出绿色的光. 1928年，观察到鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质中的 化学发光行为. 1935年，第一个报告了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与 过氧化氢反应产生化学发光. 到现在的吖啶酯、三联吡啶钌等发光标记物应用技术的成熟。

化学发光免疫分析PPT幻灯片课件

化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
1.4 4-MUP
AP H3PO4 +
4-MU
360nm
激发光
荧 光
11
2.直接化学发光剂
特点：不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件 就能发光的物质。反应迅速、背景低、 信比高，发光量与AE浓度呈线性关系。
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
CH 3 N
O CO O
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
成正比，按标准曲线，仪器可计算出被测物含21 量。
2.化学发光免疫测定技术(CLIA)
chemiluminescence immunoassay
3.电化学发光免疫测定技术(ECLI)
electrochemiluminescence immunoassay
• 按分离方法不同分
1.微粒子化学发光免疫测定
2.磁颗粒化学发光免疫测定
3
第一节 发光与化学发光剂
2.分离技术 将复合物转移到玻璃纤维上，用缓 冲液洗涤，没结合的抗原被洗脱，酶标抗体-抗 原-胶乳微粒抗体复合物则被保留在纤维膜上。
3.酶促发光反应 加入4-MUP，酶标抗体上AP将 4-MUP分解，形成4-MU，它在360nm激发光的照 射下，发出448nm的荧光，经荧光仪记录，放大， 根据标准曲线由电脑计算出所测物质的含量18
E
E 洗涤
E
E弃上清

化学发光免疫分析技术ppt课件

化学发光免疫分析技术ppt课件

电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统 主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的 酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心 性能达到了国际同类产品先进水平。
分配样品, 磁颗粒 和试剂
孵育 使反应物
结合
在磁场中 清洗去除 未结合物质
加入 底物 产生 信号
孵育, 促使信号 的产生
信号 检测
3.3 电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。
• 安全性好及使用期长
• 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。
化学发光免疫分析
陈仓医院检验科：
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念

免疫检验自动化仪器分析PPT(共95页)【95页】

免疫检验自动化仪器分析PPT(共95页)【95页】
Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1～2min即可完成。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
(二)定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段(3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
定时散射比浊法测定原理示意图
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
二、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
（二）方法评价
本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
第一节 自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。

化学发光免疫分析PPT幻灯片课件

化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
HRP
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N

全自动化学发光免疫分析仪运行原理

全自动化学发光免疫分析仪运行原理
通过技术革新和仪器改进，提高灵敏度，能够检测更低浓度的分析物。
2 更快的分析速度
优化反应步骤和数据处理算法，缩短分析时间，提高工作效率。
3 多参数检测
实现同时检测多个指标，解决多因素综合分析的需求。
应用和优势介绍
1
临床诊断
广泛应用于肿瘤标志物、心肌酶谱等多个临床检测领域，提供可靠的诊断依据。
2
血清学研究
在血清学研究中，分析免疫相关的蛋白质、抗体等，为科研工作者提供宝贵的数 据。
3
药物研发
在药物研发中，快速检测和定量分析药物代谢产物和药物相互作用，加快研发进 程。
未来发展趋势展望
1 更高的灵敏度
洗涤
通过特定的洗涤步骤，去除未结合的物质，减少误差。
2
显色反应
添加显色剂，使标记物形成明显的信号，方便后续的检测及信号分析。
3
反应停止
通过添加特定的反应停止剂或改变反应环境，终止反应过程，保证信号稳定性。
荧光信号检测
高灵敏度检测器
使用高灵敏度的光学检测器采集荧光信号，确增强技术，提升信号强度和稳定性，提高检测的灵敏度。
实时监测
直接在样本和试剂反应过程中进行信号监测，实时分析结果，节省时间和资源。
数据分析和结果输出
数据分析
使用先进的算法对荧光信号进行定量和质量分析， 得出可靠的结果。
结果输出
通过电子屏幕或打印机等方式将结果直观地显示出 来，方便医务人员查阅和分析。
全自动化学发光免疫分析 仪运行原理
全自动化学发光免疫分析仪是一种先进的医学检测设备，它通过独特的运行 原理实现了高效、精确的检测结果。
运行原理概述
1 光源激发
利用特定波长的光激活标记物，发射特定光 谱信号。

化学发光免疫分析技术 ppt课件

ppt课件 44
思考题
1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？
6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？
ppt课件
3
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反 应相结合而建立起来的一种新的检测
微量抗原或抗体的新型标记免疫分析
技术。
ppt课件
4
第一节 概 述
ppt课件
5
三大经典标记技术
放 射 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术
ppt课件
6
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态
34
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
ppt课件 35
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
化学发光免疫分析技术
ppt课件
1
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述
一、化学发光
二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
ppt课件 2
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 思考题 小结
ppt课件
46
ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记

化学发光免疫(免疫学)PPT课件

1.4 4-MUP
ALP
H3PO4 +
4-MU
360nm 激发光
荧 光
2.直接化学发光剂
特点：不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件 就能发光的物质。反应迅速、背景低、
信比高，发光量与AE浓度呈线性关系。
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH3 N+ HO2
CH3
O
N
CH3
C O O
N
O
3.化学发光:在常温下由化学反应产生的光的发射。
化学发光是一个多步骤的过程。
萤火虫荧光素
荧光素酶 ATP；O2；Mg2+
光
+ AMP+ O2 + CO2 +
氧化萤火虫荧光素
返回
化学发光 • 机制：某些化合物可以利用化学反应产生的能 量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子 激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基 态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。 • 化学发光剂或发光底物：在化学发光反应中参 与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量 的化合物。 • 发光剂分为荧光素、生物发光剂、化学发光剂
方法评价
1.AE其低背景噪音、化学反应简单、快速而无催 化剂。 2.AE与大分子的结合并无减少所产生的光量， 从而增加灵敏度，灵敏度可达10-15g/ml。 3.AE标记试剂有效期长，可达一年。 4.固相分离剂为极细的磁粉，除增大包被面积， 加快反应外，亦同时使清洗及分离更简易、快捷。
第四节
电化学发光免疫测定技术（ECLI）
发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的 检测进行定量或定性检测 。 二、技术类型 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3.不同只是相应标记物是吖啶酯而不是酶

全自动化学发光免疫的分析仪运行原理

全自动化学发光免疫的分 析仪运行原理
本节将介绍全自动化学发光免疫的分析仪运行原理，包括仪器组成、样本处 理过程、试剂盒介绍、发光检测原理、自动化处理原理以及结果分析与处理。
分析仪介绍
1 高效准确
全自动化学发光免疫分析仪能够快速、准确地检测多种生物分析物。
2 自动化处理
仪器实现全过程自动化处理，节省操作时间，提高工作效率。
自动化处理原理
1
样本处理
自动完成样本装载、混匀、预处理等步骤，确保操作标准化。
2
试剂处理
按程序自动添加试剂、混匀、反应等，减少操作误差。
3
数据分析与报告
仪器自动进行数据分析、结果计算，并生成报告。
结果分析与处理
数据分析
对仪器生成的结果数据进行统计 分析和质控比对。
结果解读
根据参考范围和临床意义对结果 进行解读，辅助诊断。
报告生成
自动生成结果报告，方便医生和 患者查阅。
பைடு நூலகம்
3 多参数分析
可以同时检测多个指标，提供全面的分析结果。
仪器组成
主机系统
包含样本装载系统、试剂装载系 统、混匀系统、检测系统等核心 组件。
分析舱
用于对样本和试剂进行处理和混 匀，并进行光学检测。
数据分析软件
用于结果分析、数据处理和生成 报告。
样本处理过程
1
样本采集
从患者体液（如血液、尿液、唾液）中
样本预处理
2
采集样本。
对采集的样本进行预处理，如离心、稀
释等。
3
样本装载
将样本装载到分析仪的样本装载系统中。
试剂盒介绍
标准品
用于校准仪器和建立分析曲线。
质控品

化学发光免疫分析仪结构与工作原理简介

化学发光免疫分析仪结构与工作原理简介化学发光免疫分析仪结构与工作原理简介将发光物质直接标记在抗原或抗体上，或使酶作用于发光底物上，利用发光信号测量仪器测量出发光物质或酶反应底物上光子的数量，就可以得到免疫反应时的被测物质的浓度在单光 ...化学发光免疫分析仪结构与工作原理简介将发光物质直接标记在抗原或抗体上，或使酶作用于发光底物上，利用发光信号测量仪器测量出发光物质或酶反应底物上光子的数量，就可以得到免疫反应时的被测物质的浓度在单光子计数器问世之前，人们大多采用光度计作为光信号的主要检测仪器，其原理为通过光电转换器件将光信号转换为电压或电流信号，再加以放大。

其主要特点为：结构简单、性能稳定，但灵敏度低、线性范围较窄。

目前常见的光学检测仪器，如：红外/可见光/紫外分光光度计、荧光分光光度计、酶标仪、照度计等均采用类似原理。

这类技术主要采用光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD），或者以光电流放大方式工作的常规光电倍增管作为检测器件。

随着单光子计数器的问世，其灵敏度及线性范围均大大超过其它常规技术。

因此被迅速应用于科研、医疗、环保、农业、工业等各个领域。

该仪器的光检测部件采用了单光子计数器，结构如下图所示。

其核心部分是一个特殊类型的光电倍增管，它是一个超高真空的圆柱型玻璃容器，其中向光的一面（称为窗口）涂有一层特殊的具有光电效应的稀有金属，称为光阴极；而内部还装有多个以特殊方式排列的电极，称为打拿极；其后部另有一个电极称为阳极。

上述各个电极之间均加有直流高压。

当光子打到光阴极时，由于光电效应，其表面可以产生能量微弱的游离电子，称为光电子；该电子由于直流高压的作用离开光阴极再次打到第一打拿极上，由于其获得了直流高压提供的能量，因而在第一打拿极上又制造出了能量更高、数量级更大的电子。

就这样经过多个打拿极的反复放大，最后使阳极产生了一个能量远远高于最初样品发射光子的电脉冲信号。

该信号经前置放大器放大，再经过比较器去除噪声信号，最后由分频器换算出光子脉冲数，通常为相对发光单位，即RLU（Relative Luminescence Unit）。

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化学发光的反应必须具备两个条件
❖ 一、是该反应能释放出一定的能量，且释放出的 能量可以被某种反应产物或中间体所吸收，使之 处于激发态；
❖ 二、是这种激发态产物应具有一定的化学发光量 子产率，或者可以将其能量有效地转移给某种荧 光物质，产生光辐射.
❖ 基于此，并不是任何化学反应都能产生化学发光 反应，因此，如果测量条件适当，化学发光分析 会有足够的选择性.
美国雅培i2000化学发光免疫 分析仪
吉林市中心医院 滕彦玲
化学发光基本原理
反应体系中的某种物质的分子(反应物、 产物、中间体或荧光物质) 吸收了反应所释放 的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激 发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式 释放出来，产生化学发光.
将化学发光反应应用于分析化学，根据某一 时刻的发光强度或反应的发光总量来确定体 系的相应组分含量的分析方法叫化学发光分 析法.
化学发光现象的发现
❖ 最早发现的化学发光现象发生在生物体内，即荧火虫，现在 称之为生物发光(Bioluminescence).
❖ 到了十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产 生化学发光.
❖ 1877年，发现洛汾碱(2，4，5-三苯基咪唑)在碱性介质中被 过氧化氢等试剂氧化时发出绿色的光.
❖ 化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型。 ❖ 第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发
光反应增强测定的敏感性。
如：化学发光酶免疫测定（CLEIA，与酶标ELISA法类 似，即最后一步酶反应所用底物为发光剂 ）
❖ 第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接 通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。
1. Reagent carousel
2. 2. Reagent bar code reader
3. 3. Reagent pipettors
4. 4. Reagent syringes
5. 5. Reagent wash stations
1. Load diverter 2. RV access door 3. RV loader and hopper assembly 4. STAT diverter5. Vortexers (Mix)6. Wash zone diverter 7. Wash zone manifolds (WZ1, WZ2):8. Process path drive motor 9. Pre-trigger/trigger manifold 10. CMIA reader (CMIA)11. Liquid waste arm 12. RV unloader
❖ 测量化学发光强度，多采用光电转换装置，用函数记录仪或 数显装置，记录化学发光的相对强度. 以最大发光强度(曲线 的峰高)定量被测组分的浓度.
❖ 由于流动注射分析(FIA)技术的发展，流动注射化学发光仪 也广泛使用.
❖ 配备学发光的分类
❖ 1. Rear processing center cover
❖ 2. Rear processing center access panel
❖ 3. Power supply panel
❖ 4. Pump bay panel
1. Sample hardware components: Provide sample aspiration and dispense.
ABBOTT i 2000SR 结构
❖ 1. Front processing center cover
❖ 2. Processing module keypad
❖ 3. Supply and waste center door
❖ 4. Card cage door
ABBOTT i 2000SR 结构
2. 2. Reagent hardware components: Provide reagent aspiration and dispense.
3. 3. Process path hardware components: Position the RVs for sample and reagent aspiration, mixing, washing, and CMIA processing
ABBOTT i 2000SR检测原理
❖ Architect I系统采用化学发光微粒子免疫分析技术 （Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA） 检测样品中的抗原，抗体和分析物。
❖ 即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒） 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物， 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
❖ 1928年，观察到鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质中的 化学发光行为.
❖ 1935年，第一个报告了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与 过氧化氢反应产生化学发光.
❖ 到现在的吖啶酯、三联吡啶钌等发光标记物应用技术的成熟。
化学发光分析法的特点
❖ 由于化学发光分析不使用任何光源，避免了背景光和杂散光 的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比，因而，化学发光 分析法一般都有很高的灵敏度，通常可测定纳克级或皮克级 的化学成分.
如：化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定 （CLIA）、电化学发光免疫测定（ECLI）
ABBOTT i 2000SR 结构
❖ 1. i 2000SR™ processing module
❖ 2. RSH (retest sample handler)
❖ 3. SCC (system control center)
❖ 1. Sample pipettor
❖ STAT pipettor
1. Sample and STAT pipettors (S and ST):
2. 2. Sample and STAT syringes (SS and STS):
3. 3. Sample and STAT wash stations (SW and STW):