各种培养基配置
- 格式:doc
- 大小:60.50 KB
- 文档页数:7
马铃薯晚疫病菌培养基葡萄糖:20克苹果酸(用NaOH中和):2克(NH4)2SO4:2克KH2PO4:0.67克MgSO4·7H2O:0.5克K2HPO4:0.33克CaCL2:1克蒸馏水:1000ml 1%FeCL3:10滴盐酸硫胺素:1mlHV培养基PDA马铃薯200克、蔗糖(葡萄糖)20克、自来水100克、琼脂18克、燕麦片琼脂培养基:燕麦片30克、琼脂17克、水1000克、燕麦片加水煮1小时,过滤。
水生4号培养液硫酸铵0.200克过磷酸钙0.030克硫酸镁0.080克碳酸氢钠0.100克氯化钾0.025克蒸馏水1000毫升氯化铁(1%)0.450毫升soil extract0.500毫升土壤浸出液用园田土,水:土为2:1,搅匀沉清后取上清液,如果培养液使用量较大,上述药品可分别先配制成贮备液,然后按所需量稀释而成,但要注意每加一种贮备液时应摇匀后再加下一个贮备液。
Gause′s Synthetic Agar (高氏合成一号琼脂)KNO3 1g Soluble starch(可溶性淀粉)20gK2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gNaCl 0.5g FeSO4 0.01gAgar (琼脂)20g water (水)1000mlpH 7.2-7.4适用范围:刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌(绛红小单孢菌)、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌疫霉菌常用培养基1、胡萝卜培养基将200g新鲜胡萝卜切成小片,加去离子水500ml,用组织捣碎机捣碎约40秒,用4层纱布过滤去渣,实践水至1000ml,加入琼脂20g,在121℃下高压蒸汽灭菌15-20分钟。
培养基培养基是植物组织培养的重要基质。
在离体培养条件下,不同种植物的组织对营养有不同的要求,甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求,它们才能很好地生长。
因此,没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官,在建立一项新的培养系统时,首先必须找到一合适的培养基,培养才有可能成功。
一主要培养基配方:1.CC培养基(mg/L)2.NB培养基3.N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。
其特点是成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高。
在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。
4.MS培养基是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。
特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。
其养分的数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要。
它的硝酸盐含量较其他培养基为高,广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养,效果良好。
有些培养基是由它演变而来的。
5.MSM培养基6.改良怀特培养基是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。
1963年又作了改良,称作White改良培养基,提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。
其特点是无机机盐数量较低,适于生根培养。
二培养基的配置在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。
为简便起见,通常先配制一系列母液,即贮备液。
所谓母液是欲配制液的浓缩液,这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取,而且还便于低温保藏。
一般母液配成比所需浓度高10-100倍。
母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。
配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和S042+,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。
配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。
药品的称量及定容都要准确。
1.牛心脑浸汁-辅助琼脂:(BHI-S)BHI 琼脂100mL氯化血红素-维生素K1 1mL脱纤维蛋白血(兔血)5-10mL 2.胰蛋白水解物-大豆琼脂(TS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 1.5g大豆胨0.5gNacl 0.5g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸液0.4mL琼脂 2.0g蒸馏水加至100mL 3.Gifu厌氧培养基:(GAM)胰蛋白胨 1.0g大豆胨0.3g多价蛋白胨 1.0g酵母提取物0.5g肝浸汁10mL VPI盐溶液0.2g牛肉浸膏5mL盐酸半胱氨酸0.4mL 旈基乙醇酸钠0.03g 葡萄糖 1.0g 琼脂 1.8-2.0g 刃天青(0.1%)0.5g 蒸馏水加至100mL 4.Rogosa 乳杆菌选择培养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 2.0g酵母提取物 1.0g琼脂4g葡萄糖 4.0g (储存液)磷酸二氢钾 1.2g 12g枸橼酸三铵0.4g 4g硫酸镁(MgSo4 7H2O) 1.0g 10g硫酸锰(MnSo4 4H2O)0.4g 4g硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)0.08g 0.8g醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠) 5g 50g冰乙酸(99.5%)0.264mL 2.64mL聚山梨酯-80 0.2g 2gDH2O 200mL 200mL(每100mL培养基加10mL)5.TPY培养基胰蛋白胨 3.0g酵母提取物0.8g葡萄糖 2.0g磷酸二氢钾 1.2gK2HPO4 3H2O 0.4gNaCO30.4gNaCl 0.4gDH2O 200mL琼脂 2.5g /200mL6.普通血琼脂培养基(BA)牛肉浸膏(0.5-1.0)g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5gK2HPO4 2.0g酵母提取物0.5g葡萄糖 1.0g琼脂 1.8g蒸馏水加至100mL7.轻唾培养基(MS)胰蛋白胨 1.0g示胨0.5g蔗糖3-5g(可根据需要将蔗糖量增至20g)葡萄糖0.1gK2HPO4 3H2O 0.53g琼脂 2.0g0.1%曲利本蓝7.5mL0.1%结晶紫0.8mL蒸馏水加至100mL8.轻唾-杆菌肽琼脂(MSB)MS琼脂(蔗糖含量为20%)100mL杆菌肽溶液(200U/mL)0.1mL灭菌MS琼脂50℃左右时加入杆菌肽溶液,混匀倒板9.轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂(MS磺胺琼脂)MS琼脂100mL*磺胺二甲嘧啶(5%) 1.0mL*1%的亚碲酸钾溶液0.28mL灭菌MS琼脂冷却至25℃时加入*10.TYCSB琼脂胰蛋白酶水解物 1.0g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸溶液0.4gK2HPO4 3H2O 0.53g蔗糖20g琼脂2gDH2O 100mL灭菌后冷却至50-55℃时加入杆菌肽溶液(200U/mL)0.1mL,混匀倒板11.Rogosa 乳杆菌选择培养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 1.0g酵母提取物0.5g磷酸二氢钾0.6g枸橼酸三铵0.2g葡萄糖 2.0g硫酸镁(MgSo4 7H2O)0.5g硫酸锰(MnSo4 4H2O)0.2g硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)0.04g醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠) 2.5g冰乙酸(99.5%)0.132mL聚山梨酯-80 0.1g琼脂 1.8gDH2O 100mLLS盐溶液的组成:MgSo4 7H2O 5.57gMnSo4 2H2O 1.20gFeSo4 7H2O 0.34gDH2O 50 mL混合上述成分并加热使之溶解。
培养基的配置1、学生用活动器材:材料:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、NaOH、清水用具:天平、牛角勺、量筒、滴管、玻璃棒、250ml烧杯、50ml烧杯、三角架、石棉网、酒精灯、火柴、PH试纸、锥形瓶、平板培养皿、试管、棉塞、线绳、报纸、电炉子、高压灭菌锅2、牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏0.3g 蛋白胨1g NaCL0.5g 琼脂2g pH7.0~7.5 水100ml3、配制培养基的过程称量→溶化→调节pH值→过滤→分装→塞棉塞和包扎→灭菌。
①称量:按照培养基配方,准确称取各成分放入大烧杯中。
技能:a.天平的使用:左物右码b.一般药品的称量:各垫一张大小相同的纸c.腐蚀性、粘稠药品的称量:用烧杯等玻璃器皿称量,先称空容器的质量②溶化:将培养基各种成分按配方称量好后,分别放入烧杯中,加入100ml水,在酒精灯上加热搅拌至完全溶化后再放琼脂。
技能:a.搅拌:玻璃棒按一个方向顺序搅拌,不能碰触烧杯内壁。
b.有些原料不易溶解,如牛肉膏等,可先在小烧杯中加水少许,加热溶解后倒入大烧杯中,但总水量要控制在100ml。
c.琼脂的溶化:其余成分全部溶化后再放琼脂。
在琼脂溶化过程中要不断搅拌,并控制火力,防止培养基溢出或烧焦。
d.培养基完全溶化后要补足水分。
③调酸碱度(pH值):先用pH试纸进行测量。
如果偏酸或偏碱,可用10%HCI和10%NaOH调整pH值至所需范围。
技能:a.PH值的测定:用洁净干燥的玻璃棒蘸取少量,在试纸一端点一下既可。
b.调PH值时,要逐滴滴入NaOH溶液,边滴边搅拌,并随时用PH试纸测量。
④过滤:培养基中如有些成分没完全溶解,常需过滤。
常用滤纸、纱布(叠成6层)或纱布间加脱脂棉花过滤。
加琼脂的培养基要趁热过滤。
⑤分装:固体培养基都要趁热分装,各容器的量如下:锥形瓶:一般不超过1/2;试管:一般装管高的1/5或1/4;倒平板一般是用时再倒。
技能:分装时应避免培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞而引起污染。
常用培养基配方范文培养基(Culture medium)是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基(Luria-Bertani medium)成分:-牛肉提取物:10克-酵母提取物:5克-热可溶性淀粉:10克-氯化钠:10克-水:1升2. NB培养基(Nutrient broth)成分:-牛肉提取物或肉蔻精:8克-酵母提取物:4克-葡萄糖:4克-水:1升3. MacConkey培养基成分:-水解动物蛋白:17克-中和胆盐:1.5克-中性红:0.03克-水:1升4. TSB培养基(Tryptic soy broth)成分:-大豆胨:17克-酵母提取物:3克-水:1升5. BHIA培养基(Brain Heart Infusion Agar)成分:-脑心汤固体:37克-水:1升6.R2A培养基成分:-水解酵母提取物:0.5克-蛋白胨:0.5克-葡萄糖:0.5克-脱脂乳粉:0.5克-黄豆粉:0.5克-高氯酸钠:0.3克-多聚体1466:0.05克-水:1000毫升7.比尔斯氏培养基(BHI培养基)成分:-大豆胨:37克-脑心汤固体:2克-水:1升8. 培养基199(Medium 199)成分:-高锰酸钾:0.015克-硫酸:1.55克-磷酸一氢钠:0.184克-高氯酸钠:8.0克-溴酚蓝:0.4克-d-葡萄糖:5.55克-l-谷氨酸:40.525克-苏打粉:0.84克-水:1升9. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)成分:-苔藓胶原酸:1克-乳糖:1克- 谷氨酸:584mg- 水:1000ml这只是一小部分常见的培养基配方,实际上有很多种不同的培养基,它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
各种培养基的配置及注意事项6-BA配置:配置时要加入少量稀酸或97%酒精,再加入蒸馏水,可适当加热。
IBA配置:配置时要加入少量稀碱,再加入蒸馏水。
注意:配这两种溶液时,若直接加蒸馏水,则不溶。
(注:溶解生长素时,可用少量0.5~1N 的NaOH或95%酒精溶解;溶解分裂素类用0.5~1N的HCl加热溶解,如再加蒸馏水,易产生白色沉淀,此时再加热水。
)MS固体培养基:以配1LMS固体培养基为准:MS固体干粉41.5g蒸馏水1L2g/l的6-BA 2.5ml2g/l的IBA 0.25ml注意:待溶液配好后,用pH计将溶液的pH值调到5.8~ 6.0,煮沸至均匀无沉淀后,分装20小瓶(即50mL/瓶),灭菌之前盖子不要拧太紧,出锅后再拧紧盖子。
MS液体培养基:以配1LMS液体培养基为准:母液1①5ml母液1② 10ml母液1③ 5ml母液2 1ml母液3 5ml母液4 1ml2g/l的6-BA 0.5ml2g/l的IBA 0.1ml蔗糖30g注意:待溶液在烧杯中混匀之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。
LB液体培养基:以配1LLB液体培养基为准:蛋白胨(TRYPTONE)10g酵母提取液(YEASTExTrACT)5gNaCl 10g注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。
待灭菌结束后,温度降至55℃左右(不烫手)时,加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。
LB固体培养基:以配1LLB固体培养基为准:蛋白胨(TRYPTONE)10g酵母提取液(YEASTExTrACT)5gNaCl 10g琼脂粉15g注意:粉末在烧杯中溶解完全之后,转移到1000ml的容量瓶中定容。
待灭菌结束后,温度降至55℃左右(不烫手)时,加入Kana(50mg/L)1000Ul(在超净台内进行)。
在进行到平板。
组织培养体系的建立外植体获得具体操作:1.将外植体(用镊子)夹到其中一个空培养罐中2.倒入75%的酒精消毒30S,重复三次。
培养基配方及配置
一般来说,培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分,包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分,如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分,如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置:
1.基础培养基成分:
- 水:900ml
-蛋白胨:10g
-酵母提取物:5g
-NaCl:5g
2.添加剂:(可根据实验需求进行必要的添加)
- 抗生素(如氨苄青霉素):100μg/ml
- 抗菌剂(如氯霉素):25μg/ml
3.配制方法:
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中,并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中,加水至1000ml,并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2(一般使用缓冲液进行调节)。
-用自制滤纸过滤器滤过,将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂,将相应的药物加入培养基中,并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌,或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程,不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时,需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度,并注意配制和保管过程中的无菌操作,以确保培养基的质量和有效性。
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
常用培养基和抗生素的配制方法1.LB培养基:材料:10g蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠、水至1000mL。
方法:将蛋白胨、酵母提取物和氯化钠加入水中,调整pH值至7.0,用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
2.M9盐基培养基:材料:64gNa2HPO4•7H2O、15gKH2PO4、2.5gNaCl、5gNH4Cl、水至1000mL。
方法:将Na2HPO4•7H2O、KH2PO4、NaCl和NH4Cl加入水中,调整pH值至7.0,用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
3.TSB培养基:材料:17g磷酸二氢钾、20g蛋白胨、5g氯化钠、水至1000mL。
方法:将磷酸二氢钾、蛋白胨和氯化钠加入水中,调整pH值至7.3,用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
4.青霉素琼脂培养基:材料:5g酵母提取物、1g酪蛋白、10gD-葡萄糖、2gK2HPO4、2gKH2PO4、20g琼脂、水至1000mL。
方法:将酵母提取物、酪蛋白、D-葡萄糖、K2HPO4和KH2PO4加入水中,调整pH值至7.0,加入琼脂,用自动出厂级水蒸馏水冲洗到1000mL。
抗生素的配制方法:1.青霉素盐酸盐溶液:材料:10g青霉素盐酸盐、水至100mL。
方法:将青霉素盐酸盐加入水中,搅拌至溶解。
2.氨苄青霉素钠盐溶液:材料:10g氨苄青霉素钠盐、水至100mL。
方法:将氨苄青霉素钠盐加入水中,搅拌至溶解。
3.克拉霉素溶液:材料:10g克拉霉素、水至100mL。
方法:将克拉霉素加入水中,搅拌至溶解。
4.挠敏霉素溶液:材料:10g挠敏霉素、水至100mL。
方法:将挠敏霉素加入水中,搅拌至溶解。
5.氯霉素溶液:材料:10g氯霉素、水至100mL。
方法:将氯霉素加入水中,搅拌至溶解。
以上是常用培养基和抗生素的基本配制方法,具体使用时还需要根据实验的需求和文献资料进行相应的优化和调整。
在配制过程中,需要注意配制环境的无菌操作、避免污染和准确称量材料的重量等。
培养基配置技术.液体培养基贮存于4c冰箱,防止光照,实验进行前放在37c水槽中温热。
1.液体培养基(加血清)存放期为六个月,期间glutamine可能会分解,假设细胞生长不佳,可以再添加适量glulamine。
2.粉末培养基配制(以1升为例):2.1.细胞培养基通常须添加10%血清,因此粉末培养基之配制体积为900 ml, pH 为7.2-7.4。
NaHCO3为另外添加,假设将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差,或局部过碱。
因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合, 然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HC1)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH易发生改变。
2.2.材料:纯水(milli-Q水或二次至三次蒸镭水,水品质非常重要),粉末培养基,NaHCO3 , 电磁搅拌器无菌血清瓶,().1或0.2 mm无菌过滤膜,pH计,真空泵,CO2气体步骤:2.2.1.取粉末培养基溶于700 mlmilli・Q水中,搅拌使其溶解°称取适量之NaHCO3粉末溶于200ml milli-Q水中,搅拌使其溶解,然后通入CO2气体至饱和,约3-5分钟。
2.2.2.将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。
混后溶液之pH应为7.2-74除非pH值偏差太大,否那么不需用酸碱再调整之。
假设为太碱,可再通入CO2气体调整pHo培养基以真空帮浦通过过滤膜时,pH会升高以0.1或0.2 mm 无菌过滤膜过滤灭菌,同时分装至无菌容器中,标示培养基种类、日期、瓶号等,贮存于4℃。
(血清亦可加入培养基中一起过滤)2.2.3.配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。
附-配制培养基之生长测试材料:MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)6-weil TC plate (or 35 mm TC dish)methanolglacial acetic acid10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)步骤:1.以待测试培养基培养MDCK cell,接种MDCK细胞于6-well plate (或35mm TC dish)中,每个well接种1 X 102活细胞,同时作对照组实验。
培养基配方及配置培养基是一种提供养分和条件给细胞、组织或微生物生长和繁殖的人工环境。
不同种类的细胞或微生物,需要不同的培养基来满足其生长和繁殖的需求。
下面将介绍细胞和微生物培养基的配方及配置方法。
1.培养基配方:不同细胞或微生物的培养基配方各有不同,下面是常用的细胞培养基的配方示例:-DMEM培养基配方:Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是一种广泛应用于动物细胞培养的基础培养基。
其主要成分包括:- 无铁媒介物(Iron Medium):DMEM中通常包含高浓度的铁盐,例如铁氯化物。
- 糖类(Glucose):DMEM中通常包含葡萄糖,用于提供能量供细胞代谢。
- 氨基酸(Amino acids):DMEM中包含多种氨基酸,用于蛋白质的合成。
- 维生素(Vitamins):DMEM中通常添加B族维生素和其他必需维生素。
- 盐类(Salts):DMEM中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):DMEM中的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 补充物(Supplements):DMEM中可添加血清、激素和生长因子等提供细胞生长所需的物质。
-LB培养基配方:大肠杆菌(Escherichia coli)的最常用培养基是Luria-Bertani (LB)培养基。
其主要成分包括:- 蛋白质源(Protein source):LB培养基中通常添加琼脂和酵母提取物作为蛋白质源。
- 碳源(Carbon source):LB培养基中添加葡萄糖等碳源供菌落生长所需。
- 盐类(Salts):LB培养基中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):LB培养基的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 抗生素(Antibiotics):LB培养基中添加抗生素,用于选择性培养目标菌株。
- 补充物(Supplements):在LB培养基中还可以添加亲水胶体、氧化还原剂等。
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1。
1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15—20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用. 1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次.取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5—10ml (视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用.2基菌落总数检测2。
1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0。
5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1。
5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。
3。
2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0。
4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板.注1:此培养基不能高温灭菌。
1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]:When cultivation of Bacillus,5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation .适用范围:产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1gNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围:固氮菌、胶质芽孢杆菌4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃ for 1 hr. distribute the medium into 18?18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃ for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18?18毫米试管,每管深度达6厘米。
(1)高氏一号培养基:可溶性淀粉20g,琼脂20g,硝酸钾1.0g,磷酸氢二钾0.5g,氯化钠0.5g,七水硫酸亚铁0.01g,七水硫酸镁0.5g,水1000毫升,Ph7.2-7.4,使用蒸水配置,灭菌条件为121℃,20 min。
(2)高氏一号液体培养基:可溶性淀粉20g,磷酸氢二钾0.5g,氯化钠0.5g,七水硫酸亚铁0.01g,七水硫酸镁0.5g,水1000毫升,Ph7.2-7.4,使用蒸水配置,灭菌条件为 121 ℃,20 min。
(3)牛肉膏固体培养基:牛肉膏3g,蛋白胨 10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,ph7.0,使用蒸水配置,灭菌条件为 121 ℃,20 min。
牛肉膏液体培养基:牛肉膏3g,蛋白胨 10g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml,ph7.0,使用蒸水配置,灭菌条件为 121 ℃,20 min。
(4)察氏培养基:硝酸钠3g,磷酸氢二钾1g,硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g,氯化钾0.5g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,Ph7.2-7.4,使用蒸水配置,灭菌条件为 121 ℃,20 min。
(5)黑色素产生培养基: L-络氨酸1g,酵母浸汁1g,NaCL8.5g,琼脂16g,加热溶解于水后,以蒸馏水定容至1000mL,PH7.2,灭菌条件为 121 ℃,20 min。
(6)硫化氢产生培养基:蛋白胨10g,柠檬酸铁0.5g,琼脂15g,加热溶解于水后以蒸馏水定容至1000ml,PH7.2,121℃灭菌20min,备用。
(7)明胶液化培养基:蛋白胨5g,葡萄糖20g,明胶200g,以蒸馏水定容至1000ml,ph7.2-7.4,121度灭菌20min,备用。
(8)纤维素水解培养基:七水硫酸镁 0.5g,Nacl 0.5g,磷酸氢二钾0.5g,硝酸钾1g,加热溶解于水后以蒸馏水定容至1000ml,ph7.2-7.4,滤纸条(长5cm,宽0.8cm),121度灭菌20min,备用。
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同,因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基(Nutrient Agar)营养琼脂培养基是一种通用的培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基(Nutrient Broth)营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,高压灭菌,分装,即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基(MacConkey Agar)大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基,用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为:蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基(Sabouraud Dextrose Agar)Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为:脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基(Vogel-Johnson Agar)VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属(如克雷伯菌)的培养基。
其配方为:葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸,冷却至55-60°C,加入胆盐酯高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础,它们提供了养分和条件,促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种,以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦-鲍德尔培养基(Luria-Bertani agar)配方:成分:1.蛋白胨:10克2.酵母提取物:5克3.食盐:10克4.琼脂:15克5.蒸馏水:1000毫升6.高氯酸钠(0.1M):2毫升(pH7.2)制备方法:1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中,加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀,再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基(Nutrient agar)配方:成分:1.蛋白胨:5克2.细胞色素:1克3.维生素B1:0.1克4.卵黄:10克5.食盐:5克6.琼脂:15克7.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长,但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基(MacConkey agar)配方:成分:1.蛋白胨:17克2.硼砂:1.5克3.细胞色素:2.5克4.氯化钠:5克5.水合甲基红:0.03克6.钴绿:0.015克7.红绿二色砂:0.15克8.琼脂:13.5克9.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文,供参考使用。
在制备培养基时,需要注意消毒操作,以防止污染。
另外,不同微生物对培养基的要求也有所不同,可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
各种培养基的配方在微生物学中,培养基是为微生物提供营养和生长所必需的营养物质的混合物,可以根据微生物的特性和需求来设计不同成分的培养基。
不同种类的微生物需要不同的培养基来生长和繁殖,为了获得最佳的生长效果,需根据微生物的特性制备相应的培养基。
下面介绍几种常用的培养基及其配方。
1. 加尔沙基培养基(Luria-Bertani,LB培养基)LB培养基是一种常用的细菌培养基,适用于大多数细菌的培养。
其成分包括牛肉浸出物、酵母提取物和氯化钠,PH为7.0。
配方:- 水:1000ml-氯化钠:10g-酵母提取物:5g-牛肉浸出物:10gLB培养基的主要特点是富含氨基酸和碳源,适合于细菌的快速生长。
2. PDA培养基(Potato Dextrose Agar)PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基,成分简单易得。
它主要包括马铃薯提取物、葡萄糖和琼脂。
PDA培养基是一种半固体培养基,适合于真菌的产孢。
配方:-马铃薯提取物:200g-葡萄糖:20g-琼脂:20g-静置180s后,灭菌PDA培养基适合于真菌和霉菌的生长,常用于菌落计数和生长的研究中。
3.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种通用的培养基,适用于多种微生物的培养。
它主要包括蛋白水解物、酵母提取物、氯化钠和琼脂。
配方:-蛋白水解物:5g-酵母提取物:1g-氯化钠:5g-琼脂:15g- 水:1000ml-蒸馏后灭菌营养琼脂培养基适合于大多数微生物的生长,是最常用的培养基之一4. 马尼特尔-梅尔特培养基(Mannitol-Salt Agar,MSA)MSA培养基是一种选择性培养基,主要用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的分离和鉴定。
它的成分包括马尼托尔、氯化钠、酵母提取物和琼脂。
配方:-马尼托尔:5g-氯化钠:75g-酵母提取物:1g-琼脂:15g- 水:1000ml-蒸馏后灭菌MSA培养基在金黄色葡萄球菌的生长过程中,可以通过红色菌落的形成来进行识别。
培养基培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。
有的培养基还含有抗菌素和色素。
按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。
化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。
由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。
培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。
一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6。
C的冰箱内。
常见培养基有:1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂 1.5克,水100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。
待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。
等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二马铃薯培养基取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。
在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。
过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。
每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。
2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。
在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。
调整pH值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。
配方二面粉琼脂培养基面粉60克琼脂20克水1000毫升把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。
另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。
3、真菌培养基配方一萨市(Sabouraud’s)培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二马铃薯糖琼脂培养基把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。
在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
配方三黄豆芽汁培养基黄豆芽100克琼脂15克葡萄糖20克水1000毫升洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。
用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。
把这培养基的pH值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。
配方四豌豆琼脂培养基豌豆80粒琼脂5克水200毫升取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。
4、食用菌菌种培养基配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基20%马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂18克把马铃薯洗净去皮后,切成小块。
称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。
在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。
在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。
使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。
配方二综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁 1.5克葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。
在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。
分装,灭菌,备用。
该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
5.烟草的培养基在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.C TK/IAA高时,愈伤组织分化芽CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化愈伤组织诱导培养基制备以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液1 0mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5m g·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.烟草叶片愈伤组织诱导取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.器官分化及植株再生培养将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.愈伤组织诱导的总体情况烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.培养基还有:1640培养基特殊培养基:一选择性培养基1酵母菌富集培养基葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%孟加拉红0.003% pH4.52 Ashby无氮培养基富集好养自生固氮菌甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%二鉴别培养基EMB培养基,常用于鉴别E.coli蛋白胨10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g蒸馏水1000g pH7.2分离海洋微生物的培养基配方2216E培养基配方(固体培养基)蛋白胨5克酵母膏1克磷酸高铁0.01克琼脂15-----20克陈海水1000毫升煮沸氢氧化纳(5%)的溶液调PH值7.6—7.8其他培养基:1.高氏一号培养基KNO3:1g,NaCl:0.5g,K2HPO4:0.5gMgSO4·7H2O:0.5gFeSO4·7H2O:0.01g可溶性淀粉20g琼脂20g蒸馏水1000mlpH调至7.2~7.4,121°C灭菌30min制法:先用少量水将淀粉调成糊状,再取700ml水在电炉上加热煮沸然后边搅拌便将淀粉糊倒入,同时保持沸腾。
然后再将其他成分加入,溶解后补足水分至1000ml肉汤蛋白胨斜面:蛋白胨10g牛肉膏5g蒸馏水1000mlNaCl:5gpH:7.0~7.2,121℃灭菌20min如配制固体培养基需加琼脂1.5%~2%,半固体培养基可加琼脂0.5%~0.8%不同的细胞培养基天然细胞培养基天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
组织培养技术建立早期,体外培养细胞都是利用天然培养基。
但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大,因此逐渐为合成培养基所替代。
目前广泛使用的天然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。
血清种类目前用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。
选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。
牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。
牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
血清的主要成分血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
血清主要作用1. 提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。
2. 提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(氢化可的松、地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。
生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
3. 提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。
结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
4. 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。
5. 对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。