培养基配制和灭菌方法验证解读

实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。

二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。

培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。

为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。

基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。

在配制母液时应注意防止沉淀产生。

绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。

各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。

通常使用的浓度单位是mg/L。

配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。

灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。

培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。

培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。

灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。

（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。

二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。

配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。

2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。

由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。

NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。

2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。

细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。

赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。

3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。

用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。

4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。

培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。

2、培养基配制时的注意事项。

四、提交实验报告附：MS培养基配方。

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）n源：包括无机氮和有机氮。

（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。

2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。

3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。

二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。

不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。

培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。

在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。

（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。

在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。

高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。

一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。

三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。

2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。

四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。

例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。

2、称量用电子天平准确称量各种成分。

先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。

3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。

将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。

4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。

实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时）一、目的要求1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。

2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。

二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。

由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。

三、实验材料1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。

2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。

3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。

四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。

（二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制（1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。

注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。

称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。

（2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。

（3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl 溶液进行调节。

调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。

边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。

注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

2、制备液体培养基（1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。

培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。

培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。

本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。

二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。

2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。

注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。

2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。

使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。

2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。

过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。

加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。

冷却后的培养基可以用于微生物的培养。

三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。

将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。

设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。

高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。

3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。

将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。

设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。

压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。

3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。

常用的方法包括接种试验和平板计数法。

接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。

培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1.掌握培养基的配制方法；2.掌握培养基的灭菌方法；3.了解常用的培养基配方和用途。

二、实验仪器和试剂仪器：称量器、自动调pH计、恒温培养箱、高压灭菌器等。

试剂：各种常用的培养基配方、蒸馏水、紫外灯、酒精等。

三、实验步骤1.准备工作首先准备好需要的试剂和仪器，经过试剂和仪器的消毒处理后，将其放置在试验台上，以备使用。

2.培养基的配制培养基的配制是实验的关键步骤之一。

在实验过程中，我们使用锥形试管来制备试验的培养基。

首先需要称量出所需的重量并将其加到试管中，之后按照规定的比例加入蒸馏水、糖和其他的试剂，搅拌均匀。

最后使用自动调pH计来调节培养基的pH，确保在制备培养基过程中能够准确地保持pH值在标准范围内。

3.培养基的灭菌在实验中，我们使用高压灭菌器对制备好的培养基进行灭菌处理，以确保在培养试验过程中，培养基中不会出现杂菌和异物的干扰。

在灭菌过程中，我们需要将培养基放入高压灭菌器中，通过高压和高温来杀死细菌和其他微生物。

同时，也需要不断监测培养基的温度和压力，确保灭菌过程的正常进行。

四、实验结果根据实验的结果可以发现，在正确地配制和灭菌培养基的情况下，我们可以得到符合规定标准的培养基样品。

通过实验，我们也可以更加深入地理解常见的培养基配方和用途，为今后的实验研究提供更加可靠和高质量的实验基础。

五、实验思考在实验过程中，我们还需要注意以下几个问题：1.实验时需要仔细操作，避免粗心大意和疏忽带来的不好的影响。

2.在配制和灭菌时，需要严格遵守规定的操作流程和步骤，以免影响前后实验结果的统一性和准确性。

3.值得注意的是，在配制和灭菌过程中，需要注意卫生和消毒处理，以避免细菌和其他微生物的污染和繁殖。

4.在实验过程中，还需要对实验结果进行仔细的分析和讲解，以便更好的理解和掌握实验原理和方法。

综上所述，在实验培养基的配制和灭菌实验中，需要做好多方面的考虑和准备，以确保实验能够顺利进行，并能获得稳定、高质量和高准确度的结果。

培养基的配制与灭菌的实验原理1. 培养基的配制1.1 配制的基本概念好啦，各位小伙伴，今天我们要聊聊培养基的配制，听上去是不是有点小复杂，但别急，让我们一起来简单搞懂这玩意儿。

培养基呢，就是我们用来培养微生物的“餐桌”，给它们提供一切所需的营养，好让它们在实验室里像“锅里煮的饺子”一样，茁壮成长。

要想培养基配制得恰到好处，就得搞清楚它的成分，这些成分一般包括碳源、氮源、矿物质、维生素等等，基本上就是“食材”的大合集。

我们会根据不同的微生物选择不同的“食谱”，这样才能让它们在我们的“餐桌”上大快朵颐。

比如，细菌特别喜欢在“营养琼脂”这个大餐上打滚，而真菌则偏爱“马铃薯葡萄糖培养基”，就像你喜欢披萨，他喜欢汉堡一样。

1.2 配制步骤说到配制过程，可得细细说说。

这可不是随便往一盆里搅几下就完事儿的事儿。

首先，我们得准备好各种原料，按照规定的比例把它们混合在一起。

像是“调味料”，我们也得精确计算，比如要加多少克的氨基酸，多少克的糖类，精确得就像给蛋糕配方量糖一样。

混合好了之后，还得将它们溶解在水里，搅拌的时候可别急，慢慢搅拌，避免出现“结块”的情况。

然后，接下来就要将混合液加热，通常是用高温高压的方式来杀死液体中的所有微生物，这一步就像是在做“清汤”，得彻底干净。

2. 灭菌的必要性2.1 为什么要灭菌那么，为啥培养基在配制好后还得做一轮灭菌呢？这就好比是咱们在吃饭前，要把手洗干净一样。

灭菌的目的是为了杀死所有可能的细菌、真菌和其他微生物，确保它们不会在咱们的培养基里横行霸道，影响实验结果。

试想一下，如果咱们的培养基里还有其他微生物，那就像是餐桌上多了几个“讨厌的客人”，它们不仅抢走了微生物的“食物”，还可能把“餐厅”弄得一团糟。

灭菌的过程，就是通过高温、高压或化学药品，把所有可能的干扰因素一网打尽，确保微生物的培养环境是“干净整洁”的。

2.2 常用的灭菌方法谈到灭菌，常用的方法有几种。

最常见的就是高压蒸汽灭菌，这种方法就像是给培养基做“深层清洁”，通过高温高压杀死所有微生物。

培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。

实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。

2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。

实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。

实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。

将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。

2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。

灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。

实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。

实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。

培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。

培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。

1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。

固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。

配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。

常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。

步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。

然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。

步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。

温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。

待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。

1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。

液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。

为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。

2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。

常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。

2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。

3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。

2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。

1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。

例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。

2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。