微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序

●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。

●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。

●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。

⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。

⏹ 5.3 恒温培养箱。

⏹ 5.4 高压灭菌器。

⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。

⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。

加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。

●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。

方法。

二、范围：本规程适用于车间洁净区悬浮粒子和沉降菌检查项的检测操作。

三、职责：化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程微生物室检验员：负责对本规程的实施。

四、内容：1、悬浮粒子1.1、测定目标车间洁净区悬浮粒子1.1.1悬浮粒子可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001～1000um之间的固态和液态或两者的混合物质1.1.2洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。

1.2、测定方式：静态测试洁净区(室)净化空气调节系统已处于正常运行状态，洁净区(室)内没有工作人员的情况下进行的测试。

1.3、测试方法：本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净区(室)的悬浮粒子洁净度等级。

1.3.1仪器：悬浮粒子计数器1.3.2工作原理本仪器根据悬浮粒子的光散射原理，即空气中的尘埃粒子在一定强度的光束照射下，向其周围空间散射出与其粒径成一定比例关系的光通量的原理而设计的。

1.3.3使用要点：使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。

1.3.3.1仪器开机，预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行校正。

1.3.3.2采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。

1.3.3.3采样管必须干净，严禁渗漏。

1.3.3.4采样管的长度应根据仪器的允许长度。

1.3.3.5计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。

1.3.3.6必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作校准，以保证测试数据的可靠性。

1.3.4测试条件1.3.4.1温度和相对湿度洁净区(室)的温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45％～65％之间为宜。

空气洁净度不同的洁净区(室)之间的压差为≥10Pa，空气洁净度级别要求高的洁净区(室)对相邻的空气洁净度级别低的洁净区(室)一般要求呈相对正压。

1.3.5测试状态1.3.5.1静态测试时，室内测试人员不得多于2人，其设备设施处于静止状态。

1.目的建立微生物限度检查法的标准操作规程，规范微生物限度检验操作。

2.范围适用于QC生测室微生物限度检查的操作。

3.责任人微生物限度检验员、QC部负责人对本规程的实施负责。

4.依据《中国药典》2010版二部附录5.程序5.1.微生物限度检查法定义微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。

检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

5.2.微生物限度检查室环境要求微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5.3.抽样5.3.1.供试品一般按批号随机抽样。

5.3.2.抽样量为一般检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。

5.3.3.抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应选有疑问的样品，但因机械损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需再抽样检验。

5.4.供试品保存5.4.1.供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件而引起致死、损伤或繁殖。

5.4.2.供试品在检验之前，应保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。

5.5.检查前的准备5.5.1.用具的洗涤与灭菌5.5.1.1.试管：使用过的试管经消毒后，将培养基倒出，用清洁液洗刷，用水冲洗4-5次，倒立，晾干备用。

灭菌前，用棉塞塞上管口，牛皮纸包紧，扎紧。

5.5.1.2.吸管：使用过的吸管用清洁液浸泡数分钟后，用水冲洗4-5次，晾干，备用。

灭菌前，在吸管上端距0.5cm处塞入约2cm左右的适当疏松棉花，用牛皮纸裹紧。

5.5.1.3.研钵：使用过的研钵用清洁液洗刷后，用水冲洗数次，晾干备用。

沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。

2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。

3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。

4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。

5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。

6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。

二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。

将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。

2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。

3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。

确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。

4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。

5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。

三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。

正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。

2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。

3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。

四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。

2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。

3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。

4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。

5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。

微生物限度检查室沉降菌检查标准操作程序一、目的：为规定微生物限度检查室沉降菌测试方法和要求，特制定本操作规程。

二、适用范围：适用于公司微生物限度检查室沉降菌测试。

三、责任者：质量监督员、质量检验人员。

四、正文：2 仪器和设备：a、高压消毒锅b、恒温培养箱c、培养皿（φ90mm×15mm）d、培养基（营养琼脂培养基）3 测试方法：3.1 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。

3.2 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中 30~35℃培养 48h。

3.3 每批培养基可选定 3 只培养皿作对照试验，检验培养基本身是否污染。

3.4 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 5~10 放大镜检查，有否遗漏，若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时，仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。

3.5 注意事项：3.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

3.5.2 采取一切措施防止人为对样品的污染。

3.5.3 对培养基培养条件及其他参数作详细的记录。

3.5.4 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

4测试规则：4.1 测试状态：4.1.1 沉降菌测试前，微生物限度检查室的温湿度须达到规定的要求；换气次数，空气流速必须控制在规定值内。

4.1.2 测试前，微生物限度检查室应已经消毒过。

4.1.3 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。

4.2 测试人员：4.2.1 测试人员必须穿戴符合洁净室级别的工作服。

4.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

4.3 测试时间：对单向流，如 100 级净化工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开始。

采样点布置见“质检微生物限度检查室悬浮粒子测试操作规程”。

4.4.1 采样点的布置：采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。

4.4.1.1 工作区采样点的位置离地 0.8m~1.5m 左右（略高于工作面）。

微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。

本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。

二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。

三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。

2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。

3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。

4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。

5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。

6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。

7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。

四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。

2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。

3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。

4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。

5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。

以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。

沉降菌操作规程
《沉降菌操作规程》
一、目的
为了保证实验室中沉降菌的安全操作，防止交叉污染和实验材料受到污染，特制定本规程。

二、适用范围
本规程适用于实验室中进行沉降菌相关实验操作的人员。

三、操作规程
1. 实验室通风通风设备应保持良好，并且实验室中应保持整洁。

2. 操作前应洗手，并穿戴好实验服、手套、口罩和护目镜。

3. 实验材料应在消毒柜中进行高温消毒处理。

4. 操作过程中，严禁食品、饮料进入实验室，严禁吸烟。

5. 实验后，实验台面、仪器设备等应进行彻底清洁消毒。

6. 任何实验室内的废弃物均应按照相关规定进行处理。

7. 操作结束后，要将实验台面、仪器设备等进行彻底清洁消毒。

四、注意事项
1. 在操作实验室中时，严禁搔抓头发、脸部等地方，以免对实验材料造成污染。

2. 如果在操作过程中发生污染，应立即停止操作，通知相关人员进行处理。

3. 如果发生意外或者突发情况，应及时向实验室负责人汇报并进行处理。

通过严格遵守《沉降菌操作规程》，可以确保实验室中的沉降菌实验得以安全进行，保障操作人员的健康安全，有效防止实验材料的污染和交叉感染。

沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。

在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。

本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。

2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。

•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。

•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。

•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。

•取样器：用于抽取待检测样品。

•生物安全柜：用于操作中的生物安全。

试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。

•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。

•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。

3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。

2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。

步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。

2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。

3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。

步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。

2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。

步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。

2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。

步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。

2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。

4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。

根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。

5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。

5.1.3.2.动态测试洁净区已处于正常生产状态下进行的测试。

5.2.试准备5.2.1.仪器与设备5.2.1.1.培养皿：φ90mm×15mm，121℃20分钟湿执灭菌。

5.2.1.2.高压灭菌器、恒温培养箱处于完好状态。

5.2.1.3.制备采样皿：取已配制好的普通营养琼脂培养基，检查品名及使用期是否在规定期限内，外观性状是否有异常，确认无误后，将培养基放入水浴中熔化，冷却到约45℃时，在规定条件下高压蒸气灭菌，在超净工作台以无菌操作技术注入培养皿中，每皿约15ml，冷凝后倒置于30-35℃恒温培养箱培养48小时，无菌生长方可供采样用。

5.2.1.4.编号对培养皿按测定区域及个数进行编号。

编号前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现有质量问题的应以剔除。

5.2.1.5.根据洁净室房间多少及面积，计算所需的培养皿数。

5.3.测试5.4.采样将培养皿在各个测试洁净区域按附表1和附表2的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖好。

5.5.培养全部采样结束后，取样员将培养皿和放置记录一并交化验室主任，化验室主任将培养皿交于检验员检测、检验员将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。

5.5.1.1.计数取出用肉眼计数，然后用5-10倍放大镜检查有否遗漏。

5.6.记录按《沉降菌测试记录》填写。

5.7.结果计算计数各个培养皿的菌落数并求其平均值。

计算公式：M—平均菌落数M 1……Mi—分别为1号至I号培养皿菌落数6.2.3.可在关键设备或关键工作范围内增加采样点。

6.3.检测结束后，质量部发检测报告，将所有记录一并归档。

6.4.测定频次车间洁净（区）每3个月测一次；微生物限度检查室每周期测一次，其超净化工作台每次实验时同时测定；有净化要求的取样间或取样车每3个月测一次。

6.5.空气净化系统连续停运1周以上，经对房间进行消毒后测沉降菌。

附表3 ：平均菌落数标准洁净级别100级10000级100000级30000级平均标准1个/皿3个/皿10个/皿15个/皿。