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人巨噬细胞集落刺激因子受体（M—CSFR）ELISA试剂盒应用方法人巨噬细胞集落刺激因子受体（MCSFR）ELISA试剂盒试验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被该指标抗体的微孔中,依次加入标本,标准品、HRP标记的检测抗体。
经过洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过气化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）,计算样品浓度。
试剂盒构成名称 96孔配置 48孔配置备注微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条无标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管无样本稀释液 6mL 3mL 无检测抗体HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无停止液 6mL 3mL 无封板膜 2张 2张无说明书 1份 1份无自封袋 1个 1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1. 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2. 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头:0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3. 37℃恒温箱操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
湖南省郴州市高一年级上册期末非选择题专项质量检测生物试题及答案一、多选题1．{下图为真核细胞蛋白质合成和转运的示意图。
下列叙述正确的是A．图中由双层膜包被的结构有①⑤⑥B．图中与胰岛素合成有关的结构有①②③④⑤C．若②合成的是丙酮酸脱氢酶，则该酶在⑥中发挥作用D．若②合成的是染色体蛋白，则该蛋白会运送到①⑤⑥中2．{某研究小组利用检测气压变化的密闭装置来探究微生物的呼吸，实验设计如下。
关闭活栓后，U形管右管液面高度变化反映瓶中气体体积变化。
实验开始时将右管液面高度调至参考点，实验中定时记录右管液面高度相对于参考点的变化(忽略其他原因引起的容积变化)。
下列有关说法正确的是A．甲组右管液面不变，乙组下降，说明微生物进行乳酸发酵B．乙组右管液面变化，表示的是微生物呼吸CO2的释放量和O2消耗量之间的差值C．甲组右管液面升高，乙组不变，说明微生物只进行有氧呼吸D．甲组右管液面变化，表示的是微生物呼吸氧气的消耗量3．{下列有关化合物的生理功能或应用的叙述，正确的是（）A．动物乳汁、大豆等所含的蛋白质中不含人体必需的氨基酸B．纤维素很难被人体消化，但能促进胃肠的蠕动和排空C．脂肪不仅是储能物质，还具有缓冲、减压等作用D．壳多糖可用于去除废水中的某些重金属离子4．{若“淀粉→麦芽糖→葡萄糖→糖原”表示某生物体内糖类的某些转化过程，则下列说法不正确的是（）A．此生物一定是植物，因为它含有淀粉和麦芽糖B．上述关于糖的转化不可能发生在同一生物体内，因为淀粉和麦芽糖是植物特有的糖，而糖原是动物特有的糖C．此生物是动物，因为其能将淀粉转化为糖原D．淀粉和糖原都是储存能量的多糖，麦芽糖是二糖5．{细胞是生命系统的最基本层次，其原因包括（）A．只有细胞内才有遗传物质DNAB．其他层次都是建立在细胞这一层次基础之上的C．生物体中的每一个细胞都具有相对独立性，能完成一系列生命活动D．比细胞更小的结构层次，不能独立完成生命活动6．{下列有关脂质的叙述，正确的是（）A．所有细胞都含有磷脂B．脂肪中只含有C、H、O三种元素C．固醇类物质在细胞的营养、调节和代谢中具有重要功能D．性激素、维生素D都属于胆固醇7．{下列关于实验的操作步骤的叙述中，不正确的是（）A．脂肪的鉴定实验中可在显微镜下看到被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色的脂肪颗粒B．西瓜汁中含有丰富的葡萄糖和果糖，是鉴定还原糖的理想材料C．用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定D．鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中8．{爱尔兰研究人员认定，人体消化系统内“隐藏有新器官-肠系膜”。
重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子说明书产品名称通用名称：重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子英文名称：Recombinant Human GM-CSF（rhGM-CSF）适用范围用于DC细胞体外培养，适用于直肠癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、恶性黑色GM-CSF是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的?功能。
GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。
GM-CSF在DC培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面MHC II类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。
此外，GM-CSF还可促进DC的存活。
使用说明推荐使用浓度为1000IU/ml。
如需分装，可用注射用水、生理盐水、培养基或PBS稀释，稀释后浓度保持在100ug/mL以上。
稀释后置于-20℃保存期6个月，-80℃保存期12个月。
参考文献1、Banchereau J1, Briere F, Caux C, Davoust J, Lebecque S, Liu YJ, Pulendran B, Palucka K.Immunobiology ofdendritic cells.《Annual Review of Immunology》, 2000, 18(1):767-8112、J, Banchereau，RM Steinman，Dendritic cells and the control of immunity. 《Nature》, 1998, 392(6673):245-2523、G Schuler Dendritic cells in cancer immunotherapy 《European Journal of Immunology》, 2010, 40(8):2123-30。
注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子【药品名称】通用名称：注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子英文名称：Propranolol Hydrochloride T ablets【成份】本品主要组成成分：活性成分为重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）。
非活性成分包括甘露醇，磷酸钠，柠檬酸，聚乙二醇4000和人血白蛋白。
【适应症】适用于治疗和预防骨髓抑制性治疗引起的白细胞减少症。
可预防白细胞减少症伴发的潜在的感染的发生，使患者能更好地耐受化学药物的治疗。
【用法用量】剂量视具体病情而定，应调节剂量使白细胞维持在正常水平。
癌症化疗或放疗后24小时，按3-10μg/kg，皮下注射，每日一次，持续5-10天（注意：本药不应与抗癌药物同时使用，化疗停止24小时后方可使用）。
用1毫升注射用水溶解（切勿剧烈振荡），可在腹部、大腿外侧或上臂三角肌皮肤处进行皮下注射（要求：注射后局部皮肤隆起约1cm2以便药物缓慢吸收）。
【不良反应】大部分不良反应多属轻度中度。
严重的或危及生命的反应罕见，并且一般是当剂量大于推荐剂量范围时才发生。
最常见的不良反应为发热、皮疹，发热可用扑热息痛控制，胸痛、骨痛和腹泻等不良反应较少见。
据国外报道，低血压和低氧综合症在首次给药时可能出现，但以后给药则无此现象，本品在临床研究中，尚未发现，但在使用本品过程中建议医生参考。
另外，据国外研究表明，对肺癌病人使用本药治疗时应特别仔细加以观察。
【禁忌】本药禁用于对rhGM-CSF或该制剂中其它成份有过敏史的病人，同样禁用于自身免疫性血小板减少性紫癜的病人。
【注意事项】1 本药应在专科医生指导下使用，剂量视病人情况而定，病人对rhGM-CSF的治疗反应和耐受性个体差异较大，应调节剂量使病人白细胞数量维持在所期望的水平。
病人在治疗前及开始治疗后定期观察外周血白细胞或中性粒细胞、血小板数据的变化。
血象恢复正常后立即停药或采用维持剂量。
2 接受本药的病人偶而会产生急性过敏反应，应立即停药，并给予适当治疗。
大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒产品规格：96T/48T供应商：上海樊克生物有限公司本产品只用于科研实验大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒实验过程（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50μL；（2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干；（5）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；（6）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；（7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec后弃去，如此重复5次，拍干；（8）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min；（9）终止：每孔加终止液50μL，终止反应；（10）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15min以内进行。
国产/进口Elisa试剂盒，96T/48TElisa试剂盒， 96T/48Telisakit价格大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒Sample collection, processing and storage method1, serum - the operation of the process to avoid any cell stimulation. Pyrogen and endotoxin free tube. After collecting blood, 1000The serum and red blood cells were separated by G centrifugation for 10 minutes.2, plasma -----EDTA, citrate, heparin plasma can be used to detect. 1000 * g centrifugal 30 minutes to remove particles.3, cell supernatant ---1000 * g centrifugation 10 minutes to remove particles and polymers.4, save - if the sample is not immediately used, it should be divided into a small part of -70 degrees C to avoid repeated freezing. As far as possible, do not use the blood of hemolysis or high blood fat. If a large number of particles in the serum, before the detection of centrifugal or filtration. Do not heat the thaw at 124 or higher. Should be thawed at room temperature and to ensure that the samples are uniformly charged and frozen.大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒Elisa kit test rules:1, to ensure the accuracy of the gun, the error can not be more than 2%. Available water and electronic balances are determined. But it's better to have professional personnel to correct it.2, to be equipped with 20ul, 50ul, 100ul, 1000ul and a volley. Draw different liquids, to replace the gun head. When the standard is drawn.1, 3 hours before the experiment to remove the kit from the refrigerator, so that a variety of reagents are restored to room temperature, in order to make the results more stable.4, the experiment, to make the substrate to avoid light storage.5, with the gun to draw the liquid speed can not be too fast, so as not to produce bubbles and to absorb the amount is not accurate.6, when the liquid, to use the range and the need to close the gun to suck, reduce the error.7, when the liquid is added to the enzyme standard hole, the liquid contact of the liquid drop and the hole wall of the gun head can be avoided by avoiding the contact of the liquid drop and the hole wall in the gun head.8, after all the liquid added, the enzyme labeled plate on the table in parallel to gently shake 30 seconds, mixed with liquid. Can also use the shaking function of the enzyme standard instrument.9, should try to do two experiments, so as to ensure the accuracy of the data. 10, the results have questions about the sample to be confirmed by other methods.大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子ELISA酶联免疫试剂盒试剂盒性能1. 灵敏度：最小的浓度小于1号标准品。
注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子说明书注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子用于防治肿瘤病人因化疗、放疗引起的白细胞减少。
下面是店铺整理的注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子说明书，欢迎阅读。
注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子商品介绍通用名：注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子生产厂家: 哈尔滨里亚哈尔生物制品有限公司批准文号：国药准字S1*******药品规格：150μg,冻干粉药品价格：￥159元注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子说明书【通用名】注射用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(γhGM-CSF)【商品名】里亚尔【英文名】LEUBENE【汉语拼音】Liyaer【主要成分】活性成份：重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(γhGM-CSF)。
非活性成份：甘露醇、氨化钠、磷酸氯二钠、磷酸二氯钾、聚乙二醇(4000)、人血白蛋白。
【性状】白色无菌冻干粉针，易溶于水、pH6.9-7.1。
【适应症】用于防治肿瘤病人因化疗、放疗引起的白细胞减少。
【用法用量】癌症化疗或放疗后。
3-10µg/kg/d，皮下注射持续5-7天(注意：本药不应与抗癌化疗药同时使用，应在化疗停止24小时后可使用)，根据白细胞回升速度和水平，确定维持量。
用1ml的无菌生理盐水溶解(切勿剧烈振荡)，可在腹部、大腿外侧或上臀三角肌处进行皮下注射(要求：注射后局部皮肤隆起约1cm2，以便药物慢慢吸收)。
【药理作用】里亚尔作用于造血祖细胞，促进其增殖和分化，其很重要作用是刺激粒、单核巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放，并能促进巨噬细胞及嗜酸性细胞的多种功能。
吸收、分布、消除，自愿者皮下注射3、10或20µg/kg和静注3至30µg/kg可观察到血浓峰值和曲线下面积(AUC)随剂量的增大而增高。
皮下注射里亚尔，在3-4小时血浓达到峰值，静注里亚尔的消除半衰期为1-2小时，皮下注射则为2-3小时。
单核－巨噬细胞集落刺激因子
（一）粒细胞集落刺激因子
粒细胞集落刺激因子（G-CSF）是由单核－巨噬细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞全成的多肽，分子量为19kD。
G-CSF能刺激骨髓粒细胞前体，使之分化增殖为成熟粒细胞的集落。
G-CSF还能作用于完全成熟的终末粒细胞，提高中性粒细胞的吞噬能力，促进超氧化物的产生。
临床上G-CSF可用于各种中性粒细胞减少症的治疗。
G-CSF作为肿瘤化疗的辅助制剂，在化疗前的适当时机给予，可使髓性白细胞进入细胞周期，对大剂量化疗药物的治疗更敏感；在化疗中或化疗结束后给予，可以缩短骨髓抑制期。
（二）单核－巨噬细胞集落刺激因子
单核－巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）是一种40kD的多肽，主要来源于单核－巨噬细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞。
其功能主要是刺激骨髓单核－巨噬细胞的前体细胞，使之分化成熟，形成单核细胞集落。
M-CSF可刺激骨髓内单核－巨噬细胞集落的形成，后者又能分泌G-CSF和GM-CSF等，形成一个逐渐放大的细胞因子网络；同时可促进骨髓生成中性粒细胞，使细胞数量增加的同时，细胞功能也增强。
M-CSF 亦能作用于终末细胞，增强厉熟单核－巨噬细胞的功能。
M-CSF具有较强的造血作用，已试用于肿瘤化疗后多种血细胞减少症，可以加速化疗所致的中性粒和血小板减少的恢复，而且副作用减轻。
M-CSF还能增加单核细胞对多中白血病细胞株的反应性，因此已试用于治疗前白血病状态的骨髓异型性征候群。
大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E04570r检测范围： 1.56 pg/ml- 100 pg/ml最低检测限：0.39 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠GM-CSF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期： 6 个月预期应用：ELISA 法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中GM-CSF 含量。
说明试剂盒保存：-20 C（较长时间不用时）；2-8 C（频繁使用时）。
浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗GM-CSF 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗GM-CSF 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的GM-CSF 呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96 孔）。
2.标准品（Standard ）：2瓶（冻干品）。
样品稀释液(Sample Diluent )： 1 20ml/瓶。
x3.4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent ) : 1 10ml/瓶5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent ) : 1为Oml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody ) : 1 x 120 湖/ (1: 100)。
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin ) : 1x 120喷(1：100)。
【核准日期】【修改日期】重组人粒细胞刺激因子注射液使用说明书〔欣粒生®使用说明书〕请仔细阅读说明书并在医生指导下使用[药品名称]通用名称：重组人粒细胞刺激因子注射液商品名称：欣粒生®英文名称:Recombinant Human Granulocyte Colony Stimulating Factor Injection汉语拼音：Chongzu Ren Lixibao Cijiyinzi Zhusheye[成分]重组人粒细胞刺激因子，辅料为醋酸钠、冰醋酸、甘露醇、聚梨酸酯-80[性状] 无色透明液体，p。
[适应症]1.促进骨髓移植后中性粒细胞计数增加。
2.癌症化疗引起的中性粒细胞减少。
包括恶性淋巴瘤、小细胞肺癌、胚胎细胞瘤〔睾丸肿瘤、卵巢肿瘤等〕、神经母细胞瘤等。
3.骨髓异常增生综合征伴发的中性粒细胞减少症。
4.再生障碍性贫血伴发的中性粒细胞减少症。
5.先天性、特发性中性粒细胞减少症。
[规格]75µg/0.3ml/支、150µg/0.6ml/支、300µg/0.9ml/支[用法用量]1.促进骨髓移植后中性粒细胞数增加。
成人及儿童的推荐剂量为300µg/m2, 通常自骨髓移植后次日至第五日给予静脉滴注，每日一次。
当中性粒细胞计数上升超过5000/mm3 时,停药,观察病情。
在紧急情况下，无法确定本药的停药指标中性粒细胞数时，可用白细胞的半数来估算中性粒细胞数。
2.癌症化疗后引起的中性粒细胞减少症。
A.恶性淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、睾丸癌和神经母细胞瘤化疗后次日开始给药,成人及儿童推荐剂量为50µg/m2,皮下注射,每日一次。
化疗后中性粒细胞数降低到1000/mm3(白细胞计数2000/mm3)以下的成人患者和化疗后中性粒细胞数减少到500/mm3(白细胞计数1000/mm3)以下的儿童患者应给予本品。
经用药后，如果中性粒细胞计数经过最低值时期后增加到5000/mm3(白细胞计数10000/mm3)以上时，应观察病情，同时停用本品。
注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子英文名称: Recombinant Human Granuclocyte/Macrophage Colony-stimulating Factor for Injection【成分】本品主要成份为注射剂辅料:活性成分为重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF）。
非活性成分包括甘露醇，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，聚乙二醇4000和人血白蛋白。
【性状】本品为白色疏松体。
加入灭菌注射用水1ml后迅速复溶为澄明液体。
【适应症】适用于治疗和预防骨髓抑制性治疗引起的白细胞减少症。
可预防白细胞减少症伴发的潜在感染的发生，使患者能更好地耐受化学药物的治疗。
【规格】每瓶含有效成份为100μg。
【用法用量】剂量视具体病情而定，应调节剂量使白细胞维持在正常水平。
癌症化疗或放疗后24小时，按3-10μg/kg，皮下注射，每日一次，维持5-10天（注意：本药不应与抗癌药物同时使用，化疗停止24小时后方可使用）。
用灭菌注射用水1ml溶解（切勿剧烈振荡），可在腹部、大腿外侧或上臂三角肌皮肤处进行皮下注射（要求：注射后局部皮肤隆起约1cm2以便药物缓慢吸收）。
【不良反应】大部分不良反应多属轻度中度。
严重的或危及生命的反应罕见，并且一般是当剂量远远大于推荐剂量范围时才发生。
最常见的不良反应为发热、皮疹，发热可用扑热息痛控制，胸痛、骨痛和腹泻等不良反应较少见。
据国外报道，低血压和低氧综合征在首次给药时可能出现，但以后给药则无此现象，本品在临床研究中，尚未发现，但在使用本品过程中建议医生参考。
另外，据国外研究表明，对肺癌病人使用本药治疗时应特别仔细加以观察。
【禁忌】本药禁用于对rhGM-CSF或该制剂中其他成分有过敏史的病人，同样禁用于自身免疫性血小板减少性紫癜的病人。
【注意事项】1.本药应在专科医生指导下使用，剂量视病人情况而定，病人对rhGM-CSF的治疗反应和耐受性个体差异较大，应调节剂量使病人白细胞数量维持在所期望的水平。
人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人M-CSF，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中M-CSF 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）又称为集落刺激因子-1（CSF-1），是造血系统重要的细胞因子。
M-CSF主要调节单核-巨噬细胞系细胞的生长、增殖和分化。
多种细胞均可产生M-CSF，包括成纤维细胞、子宫内膜中分泌型上皮细胞、骨髓基质细胞、脑星状细胞、成骨细胞；LPS等激活的巨噬细胞、B细胞、T细胞和内皮细胞等；此外，多种肿瘤细胞如原粒细胞性白血病、淋巴母细胞性白血病、肺腺癌细胞、乳腺癌和卵巢癌等。
人和小鼠天然M-CSF为糖蛋白，由二硫键连接的同源双体，分子量40～90kDa。
人M-CSF前体长度554～256个氨基酸不等，均有32个氨基酸的信号肽和23个氨基酸的穿膜部分。
膜结合型M-CSF表达在单层培养的成纤维细胞，可刺激表达M-CSF受体的巨噬细胞的粘附和增殖。
成熟M-CSF分子靠近N端150氨基酸在与M-CSF受体结合中起关键作用，人和小鼠M-CSF分子这个区域结构高度保守，其同源性达80％。
人和小鼠M-CSF基因定位于5对染色体，与GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-13和酸性FGF基因密切连锁。
M-CSF受体为高亲和力，表达于循环的单核细胞和组织巨噬细胞以及胎盘滋养层细胞。
流式细胞术整体解决方案Attune流式细胞仪|16,000+种流式抗体|60+种荧光染料|明星样品制备试剂|细胞功能试验|PrimeFlow 流式RNA分析2流式细胞术能够从单细胞水平同时分析细胞样本中的基因表达和蛋白表达，还可以检测细胞活性、细胞周期、细胞凋亡、细胞增殖和细胞氧化等细胞功能。
该技术不仅能获得在单个细胞水平上具有统计学意义的海量数据，还可以更加深入地了解异质性细胞群的详细信息。
无论进行细胞亚群鉴定还是细胞功能研究，流式细胞术都发挥着重要作用，大大推动了科学研究的发展。
前言图1. 流式细胞术实验流程。
合理进行实验设计是保证流式实验成功的关键。
• 免疫学• 炎症• 肿瘤免疫• 实体肿瘤• 神经炎症• 基因编辑• 微生物学了解更多多色流式实验相关信息，请访问 thermofi/flowcytometry完成流式实验通常需要将多种抗体搭配成多色流式实验方案。
这本流式细胞术整体解决方案手册不仅介绍了Invitrogen ™ eBioscience ™ 流式抗体和Invitrogen ™ 流式细胞功能检测试剂，还展示了Invitrogen ™ Attune ™ 流式细胞仪在以下不同研究领域中的应用：流式细胞术整体解决方案实验流程样品制备确定免疫分型抗体选择缓冲液细胞功能检测活细胞死细胞实验对照上机检测3免疫细胞通常需要刺激活化后才能快速增殖或分化为成熟细胞（图2）。
处于活化状态的细胞经常高表达转录因子、细胞因子、趋化因子以及其他调节因子，这些指标均可通过流式细胞术进行检测。
选择合适的激活剂/刺激剂需要根据细胞类型、目的蛋白的表达水平和表达动力学以及具体实验条件而定。
样品制备：免疫细胞刺激试剂图2. 各种免疫细胞刺激试剂。
(A) 功能级抗体（如CD3抗体和CD28抗体）可用于T 细胞的活化和扩增。
(B) eBioscience 细胞刺激剂（Cell stimulation cocktail ），包括PMA 和离子霉素（ionomycin ），可刺激T 细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-2（IL -2）和白介素-4（IL -4）。
犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)ELISA代测试剂盒检测方法：ELISA酶联免疫待检样本：体液，血清，血浆，细胞培养上清液，尿液，组织匀浆,心房水标本等等。
保存条件：2-8℃犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)ELISA代测试剂盒elisa试剂盒种类齐全的完整elisa试剂盒、酶联免疫试剂盒、elisa试剂盒公司、elisa试剂盒品牌，ELISA实验代测,Elisa试剂盒说明书,酶联免疫试剂盒,价格优惠，实验结果明显。
另外还有抗体、培养基、ATCC细胞等，基本上各种科研所需产品在我司都能找到！粒细胞巨噬细胞集落刺激因子古朵生物专业供应：人ELISA试剂盒、人酶联免疫试剂盒、大鼠ELISA 试剂盒、大鼠酶联免疫试剂盒、小鼠ELISA试剂盒、小鼠酶联免疫试剂盒、牛ELISA试剂盒、牛酶联免疫试剂盒、兔ELISA试剂盒、兔子酶联免疫试剂盒、山羊ELISA试剂盒、山羊酶联免疫试剂盒、绵羊ELISA试剂盒、绵羊酶联免疫试剂盒、猪ELISA试剂盒、猪酶联免疫试剂盒、猴子ELISA试剂盒、猴子酶联免疫试剂盒、植物类ELISA试剂盒、植物类酶联免疫试剂盒等。
虽然一个抗原分子上可以有多个表位，但在诱导宿主免疫应答时可能有一种或一个表位起主要作用，使宿主产生以该特异性为主的免疫应答；这种现象称为免疫显性或免疫优势（immunodominance）；起关键作用的表位称为显性表位。
这个原则也适用于一个表位中不同的氨基酸残基，在表位中也有所谓的显性基团存在，如被置换会明显改变表位特异性。
这种现象可能与表位在抗原分子中的位置或显性基团在表位中的位置有关。
上述半抗原就是在表位中起到显性基团的作用。
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗原的构成及表达，实验证明，表位只有位于抗原分子的表面才能与淋巴细胞和抗体分子接触而发挥免疫效应。
用多聚赖氨酸为骨架，用丙氨酸（A）、谷氨酸（G）和酪氨酸（T）序列为支链进行的研究能清楚地证明这一点：将G和T连在骨架外部，使可诱导以针对G和T为优势的抗体产生；将连续的A连在骨架外部，便诱导以针对A为优势的抗体产生。
![【药品名】[重组]人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子【英文名】HUMA](https://img.taocdn.com/s1/m/d54033fd80c758f5f61fb7360b4c2e3f572725fd.png)
【药品名】[重组]人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子【英文名】Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor【别名】沙格司亭；吉姆欣；莫拉司亭；重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；生白能；先特能；重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子；GM-CSF；Leucomax；Recombinant Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor；Molgramostim【剂型】注射剂(冻干粉)：50μg，100μg，150μg，250μg，300μg，400μg，700μg。
【药理作用】沙格司亭为127个氨基酸组成的相对分子量14×10～35×10的蛋白质，其编码基因位于第5号染色体长壁的G21和G31带之间。
GM-CSF对髓系造血的作用主要为：1.对髓系干细胞到成熟粒细胞的增殖与分化过程均有刺激作用。
可促进髓系干细胞向粒系(包括中性粒细胞、嗜酸粒细胞系)、红素、巨核细胞系、粒单细胞系和单核细胞系的共同祖细胞分化，并促进以上各系造血定向干细胞的增殖与成熟，对嗜碱粒细胞的作用不明显，对红系晚期造血细胞的作用也较小。
2.对中性粒细胞、嗜酸粒细胞、单核细胞的功能有增强作用。
3.激活成熟粒细胞及单核巨噬细胞的功能，提高抗感染和免疫功能。
【药动学】皮下注射rhGM-CSF，剂量每天1μg/kg，30min血中可检测出rhGM-CSF；剂量每天3～20μg/kg，5～15min血中可检出rhGM-CSF。
在2～7h血药浓度持续增加，之后下降，24h内血中rhGM-CSF降至检测水平以下。
AUC则随剂量增加而增大，即：剂量每天1μg/kg，为每小时2.9ng/ml；每天30μg/kg，则为每小时266ng/ml。
剂量每天10～30μg/kg时，消除相t为3.16±1.33h；剂量每天0.3～3μg/kg静脉注射，可观察到分布相t为5min，消除相t为0.24～1.18h。
重组人粒巨噬细胞集落刺激因子【别名】人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ,生白能 ,重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,沙格莫丁,粒细胞-巨噬细胞集刺激因子,沙格司亭,莫拉司亭,重组人粒巨噬细胞集落刺激因子【外文名】Recombinat Human GM-CSF, GM-CSF, rhGM-CSF, Levcomax, Sargramostim,Molgrastim 【适应症】本品适用于癌症化疗和在用骨髓抑制疗法时所引起的白细胞减少症，亦适用于治疗骨髓衰竭患者的白细胞低下，也可预防白细胞减少时可能潜在的感染并发症，还能使感染引起的中性粒细胞减少的恢复加快。
【用量用法】本品为无菌干冻粉剂，用稀积液溶解后，静注或皮下注射。
剂量视具体病情而定，应调节剂量使白细胞计数维持在所期望的水平，通常为低于１０的９次方／Ｌ。
在骨髓增生异常综合征，再生障碍性贫血伴白细胞减少，使用剂量为每公斤体重３μｇ，皮下注射，每日１次。
癌症化疗所引起的白细胞减少症为每公斤体重５～１０μｇ，皮下注射，每日１次。
在化疗停止１日后方可使用，持续７－１０日。
骨髓移植，每日每公斤体重５～１０μｇ，静滴４～６ｈ，每日１次。
【注意事项】１．常见的不良反应是发热、皮疹。
较少见的为低血压、恶心、水肿、胸痛、骨痛和腹泻。
罕见的反应有变态反应、支气管痉挛、心力衰竭、室上性心律失常、脑血管疾病、精神错乱、惊厥、呼吸困难、肺水肿和晕厥等。
偶见血清白蛋白水平低下。
２．禁用于对本品有过敏史的患者和自身免疫性血小板减少性紫癫的患者。
３．孕妇不宜使用，哺乳妇女使用本品前应停止哺乳。
【规格】冻干粉针剂：１５０μｇ（１．６７×１０^６μ）瓶，３００μｇ（３．３×１０^６μ）／瓶，７００μg, 50μg,100μg,250μg,400μg.。
GMP级粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（冻干粉）Recombinant Human GM-CSF（rhGM-CSF）作用机理：GM-CSF 是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的?功能。
GM-CSF 是最早被鉴定出来对于 DC 有作用的细胞因子之一。
GM-CSF 在 DC 培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面 MHC II 类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。
此外，GM-CSF 还可促进 DC 的存活。
规格参数：货号：TL-302 规格：100ug产品信息：表达宿主：CHO细胞效价：≥1×107 IU/mg纯度：>98%内毒素：<2EU/mg纯化方式：层析纯化性状：白色疏松体保存温度：2-8℃有效期：24 个月生产厂家：同立海源生物使用说明：推荐使用浓度为 1000IU/ml。
如需分装，可用注射用水、生理盐水、培养基或 PBS 稀释，稀释后浓度保持在 100ug/mL 以上。
稀释后置于-20℃保存期 6 个月，-80℃保存期 12 个月。
适用范围：用于 DC 细胞体外培养，适用于直肠癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、卵巢癌等多种肿瘤的细胞免疫治疗临床研究。
相关产品推荐：Human IL-2、Human IL-15、Human IL-12、Human IL-6、Human IL-18、Human IL-21、Human IFN-γNK细胞培养试剂盒、Human GM-CSF、Human EGF等。
人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）水平。
用纯化的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF），再与HRP 标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
SEA120Mu96T干细胞因子(SCF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：小鼠使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第12版（2016年05月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中SCF含量。
[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板（预包被）196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。
请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。
注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存]1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
SEA090Hu96T巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供体外研究使用，不用于临床诊断!第12版（2016年05月修订）[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、尿液、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中MCSF含量。
[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板（预包被）196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。
请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。
注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存]1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8o C1,000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
3、尿液：请收集清晨第一次尿液（中段尿），或24小时尿液，2,000×g离心15分钟后收集上清，并将标本保存于-20o C，且应避免反复冻融。
4、组织匀浆：不同类型的组织制备匀浆的方法会有所不同1）取适量组织块，在预冷PBS（0.01mol/L，pH=7.0-7.2）中清洗去除血液，匀浆前先称重。
2）将组织切成小块，均匀的放入放置在冰上的装有新鲜裂解缓冲液(货号IS007，应依据目标蛋白的亚细胞定位选择不同类型的缓冲液)的玻璃均质器中（微小的组织也要如此）。
（质量体积比=1:20-1:50，例如：1mL裂解缓冲液中加入20-50mg组织样本。
）3）将得到的悬浊液经过超声处理至澄清。
4）将制备好的匀浆液10,000×g离心5分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
5、细胞裂解液：在分析试验之前，细胞需利用以下方法处理：1）贴壁细胞应该用冷PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，于1,000×g离心5分钟后收集。
（悬浮细胞可通过离心直接收集）。
2）将收集到的细胞用冷PBS洗3次；3）将浓度为107个细胞/毫升的悬浮细胞加入新鲜裂解缓冲液中，如果需要，细胞可以进行超声波处理至溶液澄清。
4）将标本于2-8o C1,500×g离心10分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20o C下保存。
6、细胞培养上清或其它生物标本：请1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。
注意：1、以上标本均需密封保存，4o C保存小于1周，-20o C不超过1个月，-80o C不超过2个月。
2、标本出现溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
4、基于大量检测数据，我们推荐使用血清而不是血浆作为样本进行检测。
[试剂准备]1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温（18-25o C），如果该试剂盒在一段时间内不能使用，请仅取出本次试验所需的酶标条和试剂，并将剩余的酶标条及试剂按指定条件保存。
2、标准品（冻干品）：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时轻轻摇动（避免起泡），其浓度为2,000pg/mL(贮液)。
先将其稀释为500pg/mL(标准曲线最高浓度)后，再准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入500μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成500pg/mL，250pg/mL，125pg/mL，62.5pg/mL，31.2pg/mL，15.6pg/mL，7.8pg/mL，标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
Tube123456789pg/mL2,00050025012562.531.215.67.803、检测溶液A及检测溶液B：Detection A及Detection B在使用前请用手甩几下或短暂离心处理，以使黏附在管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如：10μL检测溶液A/990μL 检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μL/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2mL。
4、浓洗涤液：580mL蒸馏水或去离子水加入20mL洗涤液（30×）稀释至600mL至工作液浓度。
5、底物溶液：请用灭菌的移液器和吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃，不要倒回TMB瓶中。
注意：1、标准品的稀释不能直接在板中进行。
2、标准品请于临用前15分钟内配制。
该标准品只能使用一次。
3、标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请使用相应的稀释液配制，稀释液不能混用。
用移液枪轻轻吹打充分混匀，避免起泡。
为保证实验结果的准确性请使用微量吸管，并校准微量移液器。
请依据所需的量精确配制，尽量不要使用微量配制的方法（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μL），以避免造成浓度误差。
4、请勿重复使用已经稀释过的标准品、检测溶液A工作液和检测溶液B工作液。
5、洗涤液（30x）中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀，至到结晶完全溶解再进行配制。
6、试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用，在配置过程中可能因为纯净水质量差或水质污染，以及实验中所用耗材洁净度差，造成实验结果不准确，甚至完全错误。
请使用双蒸水配置。
[标本处理]1、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
2、实验前应先预测样本中待测物浓度。
当浓度不在标准曲线的范围内时，用户必须确定其特定实验的最佳样品稀释倍数。
如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
样本稀释需用PBS。
3、若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
4、使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5、若样本为细胞培养上清，因为该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
6、某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
7、建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会因蛋白降解或变性而导致实验结果偏差。
[操作步骤]1、加样：分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。
设标准孔7孔，依次加入100μL不同浓度的标准品（见试剂准备2）。
空白孔加100μL标准品稀释液（见试剂准备第二步最后一管），余孔加待测样品100μL，酶标板加上覆膜，37o C温育1小时。
2、弃去液体，甩干，不用洗涤。
3、每孔加检测溶液A工作液100μL（临用前配制），酶标板覆膜，37o C温育1小时。
4、弃去孔内液体，每孔用350μL的洗涤液洗涤，浸泡1-2分钟，在吸水纸上轻拍酶标板来移除孔内所有液体。
重复洗板3次。
最后一次洗涤后，吸取或倒出剩余的洗涤缓冲液，将酶标板倒扣在吸水纸上，将残留在孔内的液体全部吸干。
此过程也可采用喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
5、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100μL，酶标板覆膜，37o C温育30分钟。
6、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤4。
7、每孔加TMB底物溶液90μL，酶标板覆膜，37o C避光显色（反应时间控制在10-20分钟，不要超过30分钟。
当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。
8、每孔加终止溶液50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。
终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
如出现颜色不匀一，请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。
9、在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后，立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值（O.D.值）。
注意：1、试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。
2、加样：实验操作中请使用一次性的灭菌吸头，避免污染。
加样时注意不要有气泡产生，将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
与反应试剂加入一样，加样过程中第一个孔与最后一个孔加样时间间隔尽量小（一般控制在10分钟以内），如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
为了测值的准确性，推荐设置复孔进行实验。
3、温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4、洗涤：充分洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液完全甩干。
洗涤过程中反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，同时要轻轻擦除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。
如果使用自动洗板机，请在熟练使用后再用于正式实验过程中。
5、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟观察一次），如观察到颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强而影响酶标仪光密度读数。
6、底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
7、如果实验室内湿度低于60%，推荐使用加湿器提高湿度水平。
