离体快繁

4、褐变现象
概念 褐变：指在组织培养过程中，由培养材料 向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐 渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而 死亡的现象。
褐变原因
由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，将酚 类化合物氧化成醌类物质，会抑制其它酶 的活性，从而影响所接种外植体的培养。
减轻褐变现象发生的方法：
三个选择：
在培养基中表现的症状
外植体接触培养基部位长菌 外植体损伤部位长菌 外植体生长不良或表现出缺绿
防治措施
接种前的工作： 1、 接种室的灭菌 2、超净工作台的灭菌 3、 接种器皿、用具的灭菌 4、工作人员接种前应做的准备工作 5、 材料的灭菌
1、接种室的灭菌
• 接种室的地面，墙壁要擦洗干净灯灭菌
3、玻璃化现象
定义：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些 培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这 种现象通常称为玻璃化。 特点：外观形态有明显异常；体内含水量、矿质 元素、糖类、纤维、蛋白质等基本成分含量有变 化，一些酶活和内源激素含量有变化。
影响玻璃化苗发生的因素
1.培养材料：材料种类和外植体不同都有影响。
兰花的萌发
兰花的启动
兰花的增殖
兰花的分化
培养的兰花
五种器官发生方式优点、缺点比较：
（1）不定芽型：容易成苗，对培养基要求不 高，后代遗传性较为稳定，但取材受到一 定限制，仅限于具有明显顶端分生组织和 次生分生组织的物种。
（2）器官型和类胚体发生型：对培养基要求 高，器官发生条件苛刻。繁殖数量不如不 定芽型和器官发生型多，但遗传性稳定。
错
误
2、遗传稳定性
影响遗传稳定性的因素有： 1、基因型 2、继代次数 3、发生方式 4、激素浓度

植物离体快繁中的常见问题及防止
措施
植物离体快繁技术是生物技术发展过程中的一项重要方法，它能有效地提高植物的繁殖速度，为后续应用提供必要的材料。

但是，由于植物离体快繁技术的复杂性，它也会面临许多问题，其中包括低延时、低再生率、发育不良、营养成分失衡、细菌污染等问题。

因此，为了使植物离体快繁技术取得成功，需要采取有效的预防措施和管理措施。

首先，应当重视植物原代细胞的采集和储存，以保证原始细胞的质量和准确性。

其次，在植物离体快繁过程中，应当严格控制培养基的成分和pH值，以保证培养基的有效性和安全性。

此外，还应当避免细菌污染，如果发生细菌污染，应及时采取措施消毒，以保证植物离体快繁技术的成功。

另外，在植物离体快繁过程中，应当注意避免光照过强或过弱，以及温度过低或过高，以保证细胞的正常发育。

此外，还应当加强对植物的营养成分的管理，以确保植物能够获得充足的营养，从而提高再生率。

此外，还应
当及时进行精心管理，以确保培养基的高效性，并注意及时更换培养基，以防止培养基过时。

最后，应当加强植物离体快繁技术的研究，以提高技术水平，提高成功率。

此外，应当重视人员培训，以保证操作者能够熟练掌握植物离体快繁技术，为植物离体快繁技术的顺利实施创造良好的条件。

总之，植物离体快繁技术的成功实施，需要从植物原代细胞的采集和储存，到培养基的有效性，再到光照、温度、营养成分等方面都给予足够的重视，以及及时的精心管理，才能最大限度地提高植物离体快繁技术的成功率。

（四）、马铃薯无病毒株的繁殖
（１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
2010312
（二）茎芽增殖的途径：
1.茎芽增殖的途径
（1）侧芽增殖途径：指利用茎尖及侧芽培养直接获得芽 苗或丛生芽的方法。通过添加细胞分裂素促进侧芽萌发而 形成丛生芽。 （2）不定芽途径：除了利用顶芽和侧芽等固定芽之外， 由根、茎、叶等外植体直接或经脱分化形成愈伤组织后再 分化不定芽的过程进行增殖。
（3）体细胞胚途径：由外植体直接或间接（先形成愈伤 组织）形成胚状体的途径进行快速繁殖。如百合鳞片可 直接形成胚状体；胡萝卜、芹菜先形成愈伤组织，然后 形成胚状体。
（三）玻璃化 1. 玻璃化苗发生的原因： （1）琼脂和蔗糖浓度与玻璃化呈负相关； （2）培养温度过高；（3）生长调节剂浓度过高，如细胞 分裂素过高；（4）培养瓶乙烯浓度过高；（5）光照过 强或与高温同时作用；（6）培养基含氮量高，尤其是 銨态氮。 2. 防治玻璃化的措施： （1）提高培养基硬度；（2）提高培养基蔗糖含量或加入 渗透剂；（3）选用透气瓶盖改善通气状况；（4）降低 生长调节剂和含氮化合物的浓度；（5）适当降低温度； （6）一些添加物或抗生素可降低玻璃化，如马铃薯汁、 活性炭、PP333，CCC等。
马铃薯的脱毒与快繁
马铃薯
微型薯
马铃薯病毒的种类
危害有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、 M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少5万公顷， 每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿 公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。
马铃薯继代培养基：
MS+2. 0 mg/L6BA+0. 2 mg/L NAA+3%蔗糖；

目录绪论 (1)1. 离体快繁过程中的问题、原因及防治措施 (1)1.1 污染问题 (2)1.1.1 污染的来源 (2)2.1.2 污染的防治措施 (2)1.2 褐变问题 (3)1.2.1 褐变的原因 (4)1.2.2 克服外植体褐变的措施 (4)1.3 玻璃化问题 (4)1.3.1 玻璃化发生的原因 (4)1.3.2控制组培苗玻璃化的措施 (5)1.4 遗传稳定性 (5)1.4.1 影响遗传稳定性的因素 (6)1.4.2 提高遗传稳定性，减少变异的措施 (5)1.5 黄化问题 (5)1.5.1 黄化原因 (6)2. 离体快繁的前景与探讨 (6)2.2适应现状的需求 (6)2.3存在问题 (6)参考文献 (6)致谢 (6)浅析植物离体快繁中常见的问题摘要植物组织培养是20世纪初发展起来的一项新技术，是现代农业生物技术的一个重要组成部分，已经日益广泛地应用于园艺植物的脱毒和快繁等方面。

本文针对植物组织培养中常出现的问题进行了分析，探讨了污染、褐变、玻璃化、遗传稳定性、黄化等发生的可能原因，并提出了相应的防治措施。

关键词离体快繁；污染；褐变；玻璃化；遗传稳定性；黄化Analysis of the Common Problems in Plant Vitro PropagationPick toPlant tissue culture is developed in the early 20th century, a new technology of modern agricultural biotechnology, is one of the important constituent, has increasingly widely applied in the enviroment of horticultural plants and rapid propagation, etc. Aiming at the plant tissue culture often appears the question were analyzed, pollution, Browning, vitrification, genetic stability, such as possible reasons Browning, and puts forward the corresponding prevention cuoKey wordsPropagation in vitro; contamination; browning; vitrification; genetic stability; etiolation绪论：植物组织培养是研究植物生长和分化规律的重要手段，是在人工控制条件下培养外植体再生器官或植株的技术，可以在不受植株体其它部分干扰下研究被培养部分生长和分化的规律，并可以利用各种培养条件影响它们的发育进程。

第六章 植物离体快繁殖
一、植物离体快繁的意义 二、离体快繁的方法 三、离体快繁中存在问题 四、几种植物的离体快繁技术
一、植物离体快繁的意义
1.植物繁殖类型
植物 繁殖
有性 繁殖
无性 繁殖
扦插
嫁接
常规无性繁殖
压条 分株
埋条
非试管快繁
在计算机控制环境条件下 的快繁技术（如扦插）
离体快繁 植物组织培养
一、植物离体快繁的意义
• 强度：光照弱，易产生玻璃化现象。
三、离体快繁中存在问题
• 4）琼脂浓度低：
• 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，
水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的 增加，玻璃化苗比例减少。 • 但过硬的培养基影响了养分的吸收，试管 苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的 浓度一定要适当。
三、离体快繁中存在问题
三、离体快繁中存在问题
•2.褐化：外植体接种到培养基中后，外植体 或与培养基接触部位出现变褐色的现象。
•褐化后果：不加以控制，外植体会死亡。 •引起原因：切割后，使液泡中的多酚物质与细胞质 中多酚氧化酶接触发生反应，产生有毒的醌类物质。 •在自然界中，褐化（多酚物质与多酚氧化酶反应） 是主动防御机制，防止病原菌感染的自卫措施。
• 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大 量无根试管苗。
•
侧芽增殖途径
• 途径有：不定芽增殖途径
•
体细胞胚增殖途径
• （增加 P105图8-1）
二、离体快繁的方法
• 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大 量无根试管苗。
•
侧芽增殖途径
• 途径有：不定芽增殖途径
•
体细胞胚增殖途径
• （增加 P105图8-1）

第三章植物离体快速无性繁殖技术和脱毒培养技术第一节、植物离体快速繁殖技术一、植物离体快速无性繁殖的概念及其意义1 概念离体无性繁殖：指利用组织培养的方法进行植物离体培养，在短时间内获得大量遗传性一致的个体的方法，又称“离体繁殖，快速无性繁殖、微型繁殖”。

试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。

无性系：指有同一个体通过无性繁殖产生的一个群体，它们的遗传背景基本一致。

2 应用（1）用来加速难繁殖和繁殖速度慢的植物的繁殖。

（2）无病毒苗木的繁殖。

（3）用于某些杂合园艺植物的繁殖。

（4）用于需要加速繁殖的特殊基因型。

二、植物离体快速无性繁殖的特点1 优点（1）首先体现在一个“快”字上。

（2）可人为控制条件，不受大自然的干扰（3）快速培养脱毒苗。

2局限性（1）一些植物快速无性繁殖技术的某些环节还没有突破。

（2）要对其成本、技术等进行估算。

（3）随继代次数增多，培养材料的分化能力下降。

三、离体无性繁殖中器官的发生形式1 不定芽型２器官型３器官发生型４类胚体发生型５原球茎型四、离体无性繁殖的程序•无菌母株的制备•茎芽的增殖•诱导生根•炼苗•再生植株的鉴定五、植物组织培养中应注意的问题１褐变（１）褐变褐变：指在组织培养过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。

（２）克服褐变的方法选择适宜的外植体（幼嫩材料、春季取材）改善营养条件（连续培养）在培养基中加入一些附加物２污染（１）特点：细菌污染的特点在培养材料附近出现黏液状菌斑，一般接种1-2天一5可发现。

特别应注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌，外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死，可随培养材料、用具传播，可出现在培养基表面，也可呈滴形云雾状存在于培养基内，发现及时淘汰，并对用过的器具严格高温灭菌。

真菌污染的特点培养基上长霉，一般接种3-5天就可先，霉的颜色有黑、白、黄等，真菌污染的特点是污染部分有不同颜色的霉菌，接种3天，有时多达10天才能表现。

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植物离体快繁技术
第三节 离体无性繁殖的商业化 生产的范围和应用
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五四 三二一 、、 、、、 用濒及雌用用 于危基雄于于 种植因异脱稀 质物工株毒缺 的的程植苗或 试拯植物的急 管救株、快需 保 的三速良 存 快倍繁种 及 速体殖植 交 繁、 物 换 殖单 的
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植物离体快繁技术
• 7. 原球茎是兰花的种子发芽过程中特有的一种形 态学结构。 （判断正误）
• 8.玻璃化苗与正常苗相比生长速度下降，甚至最 后死亡（判断正误）
• 9.不定芽可 直接从植物器官、组织发生也可先形 成愈伤组织；然后形成不定芽。 （判断正误）
• 10.利用体细胞胚状体来进行无性系的大量繁殖其 特点是：A繁殖系数高、B成苗快、C结构完整、D 不存在嵌合现象（选择）
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一般, 植物离体培养的温度低于15 ℃或高于35℃， 对分化和生长都不利。大多数植物最适的培养温度 在23-32 ℃之间，一般控制在(25±2) ℃条件下培养， 热带园艺植物培养温度稍高。
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离体培养中环境的湿度主要指培养容器内的湿度， 相对湿度常达100％，但液体培养与固体培养时湿 度可能有变化，固体培养时琼脂的用量与质量对培 养环境的湿度有影响。
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②外植体的生理状态对茎芽的反应能力有明 显的影响 选取相对较为幼嫩、生长能力较强的部位 的材料 生长季节 > 休眠季节 幼嫩部分 > 成熟组织
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根据外植体的特点选择适宜的消毒剂种类、浓 度和消毒时间进行外植体的表面消毒。参考第一章外植

简述离体快速繁殖技术基本流程离体快速繁殖技术（TissueCulture，简称TC）是一项利用手术、培养技术、营养物质来繁殖植物的技术。

它可以实现特定的植物的快速、稳定的繁殖，以及加快植物品种的改良，给植物育种工作带来极大的方便。

TC技术可以有效地消除植物的遗传变异，并且能够保护植物的健康生长，从而有助于植物的保护和繁殖。

TC技术的基本流程包括植物组织切片、培养盘预处理、营养物质处理、培养子实验、移植、细胞分离培养以及繁殖育种等。

1.物组织切片：首先，研究人员需要从植物根、茎、叶或者果实等部分中获取一定数量的植物组织。

接着，将植物组织切成小片，使用玻璃刀片进行刮取或者用来冰冻然后解冻进行切片，再用细胞分离液进行培养，以期达到萌发的目的。

2.养盘预处理：将培养皿清洗干净，然后用消毒剂对其进行消毒，以防止细菌污染。

接着，在培养盘中放入适当数量的营养物质，包括氮素、磷质、碳源和微量元素，并均匀混合，以确保植物的发芽和增殖。

3.养物质处理：营养物质是促进植物活力、健康发芽的关键，也是TC技术的重要组成部分，因此对营养物质的合理添加和使用是非常重要的。

通常，研究人员会将植物分化细胞饲养培养在特殊的营养液中形成可繁殖的植物，以产生新的植物品种。

4.养子实验：在培养盘中放入植物组织切片，将它们放在干燥后的培养子实验中，然后均匀混合营养物质和消毒剂，以防止细菌污染。

5.植：当植物细胞长大之后，可以将它们移植至新的培养皿中，移植时可以选择不同的种类或者种类混合，以此来加快植物品种的改良和繁殖。

6.胞分离培养：将植物细胞分离并培养，可以实现植物品种的多样化，并加快植物的增殖和繁殖。

7.殖育种：将分离培养出来的离体植物种子作为种子，进行育种和繁殖，通过育种来实现植物的新品种的选择。

TC技术的基本流程比较复杂，需要研究人员掌握丰富的知识和经验，并耗费较长的时间才能达到理想的繁殖效果。

但是，从长远来看，TC技术可以为植物育种工作带来极大的便利，可以实现植物的快速和稳定繁殖，从而提高植物的品质，为人们的日常生活提供更多的食物来源。

植物离体快繁技术
6、移栽
• 炼苗后，将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化 苗圃中驯化，每天定期给幼苗喷施驯化培 养液和清水，大约15-20d后，视幼苗长势， 即可移栽到苗圃中。
植物离体快繁技术
注意事项
• 芦荟的虫害主要是红蜘蛛和蚜虫，可喷施 40%的氧化乐果乳油1200倍液防治。
• 芦荟的病害主要是黑斑病，可喷施50%多菌 灵可湿性粉剂1000倍液防治。
伤组织诱导培养基的三角瓶中，在相同的 培养条件下继续培养。 • 通过继代培养，可繁殖出大量愈伤组织来， 用于分化培养。
植物离体快繁技术
3、分化培养
• 将愈伤组织用无菌水洗净，切成小块，接 种到分化培养基中。
• 30-50d后，愈伤组织就可分化出芽，并继 续长出小叶片。
植物离体快繁技术
4、生根培养
植物离体快繁技术
植物离体快繁技术
3、离体快繁的程序和技术关键
• 培养物的建立 • 茎芽的增殖 • 完整植株的形成 • 再生植株的锻炼和移植
植物离体快繁技术
（1）无菌外植体的制备方法
• 概念：在无菌条件下，用于试管内继代增殖的植 物材料，称为无菌外植体或繁殖外植体。
• 制备方法：田间取回嫩枝、消毒、接种、形成丛 芽
• 芦荟不能自花授粉结实，用种子繁殖非常 困难。
• 繁殖方法主要是分株和分蘖，难以快速、 大量地繁殖种苗
• 对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗， 可在短期内繁殖上百万株的种苗，成本低， 效益高
植物离体快繁技术
材料和培养基
• l0-l5cm高的芦荟幼苗 • 愈伤组织诱导培养基为MS+(1-
6mg/ )BA+(0.1一0.5mg/L)NAA • 分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-

植物离体快繁技术的综述-标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII植物离体快繁技术的综述黄新（生物科学技术学院2009级生物技术一班）摘要：植物快繁技术是一种全新的育苗技术，是现代计算机智能控制技术与生物技术有机结合的高新农业技术。

运用植物生长模拟计算机为植物创造最为适宜的温、光、气、热、营养、激素环境，使植物的生理潜能得到最大的发挥，植物的生根基因尽快表达，从而实现植物的快速生根。

它的推广应用将会带来一次全新的育苗革命。

本文简要介绍植物快繁技术程序、相关培养技术以及植物快繁相关问题的讨论。

同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。

关键词：植物离体快繁、愈伤组织、不定芽增殖、腋芽增殖、愈伤组织增殖、体细胞胚增殖、玻璃化问题、褐化问题、应用前景1 植物离体快繁概况1.1研究简史离体微繁殖技术的应用，首先应归功于Morel，他在1960年首先建立了兰花离体繁殖的方法（原球茎繁殖）。

目前已有近400种植物的离体繁殖已获得成功，其中许多具有重要经济价值的花卉(如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。

我国快速繁殖植物的种类达443种之多荷兰是试管苗的生产王国1.2植物离体快繁的定义快速繁殖（rapid clone propagation）：也叫离体繁殖（in vitro propagation）、微体繁殖（Micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。

追究植物组织培养脱毒快繁技术的发展简史，在11世纪就出现的热处理脱毒法，最早解决一些作物的病毒病害问题[1]。

本世纪50年代发展的植物组织培养技术为脱毒提供了一条有效途径。

现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。

鉴定方法
1、直观测定法 2、指示植物法
利用病毒在其他植物上 出现症状的特征，作为 鉴别病毒种类的标准， 这种专门用以生产症状 的寄主植物即为指示植 物，又称鉴别寄主。
3、抗血清鉴定法
4、酶联免疫吸附法（ELISA） 5、电子显微镜检查法
6、免疫吸附电镜法
• 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织的上部，直接起源于中柱 鞘细胞，由于发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源 于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
原球茎形成
3、试管苗的增殖与继代培养
• 1）、试管繁殖速率及计算
• 理论计算：
接种一个芽或一块增殖的培养物，经一段时间的培养后看能 得到多少个芽或苗，从而推算理论上一年能繁殖出多少苗。
第一节 植物的离体快繁
植物离体快繁（Micropropagation） 又叫微型繁殖或试管繁殖，它是把植物 材料放在试管内，给予人工培养基和合 适培养条件，达到高速增殖，属离体无 性繁殖。
其特点是快速，每年能以千百万倍
一 .离体快繁的应用
良种快繁 脱毒良种苗快繁和无病毒苗大量快繁； 特殊育种材料快繁； 制种材料快速繁殖； 自然和人工诱变有用突变体的快繁； 基因工程植株的快繁；
四、离体快繁中的有关问题
• 培养物的增殖方式 • 外源生长调节物质对品种典 型性的影响 • 继代次数与变异

第二节 术
• 怎样脱毒？
植物的组培脱毒技
• 为什么要脱毒？
• 怎样鉴定无病毒植株？
病毒不仅使人患病，同样也侵害植物，使植物出现皱叶、黄 叶、落叶，以致品质变劣、花色变淡、花数减少、产量降低。 多数农作物，特别是无性繁殖作物，都易受到一种或多种病原 菌的周身浸染。病原菌的浸染不一定都会造成植物的死亡，很多病 毒甚至可能不表现任何可见症状。但在植物中病毒的存在会减少作 物的产量和降低作物的品质。

离体快速繁殖的特点及应用
离体快速繁殖（in vitro propagation）是利用植物细胞和组织培养技术，通过人工控制环境生长条件，在体外培养和繁殖植物的方法。

离体快速繁殖的特点在于可以通过细胞融合、愈伤组织、单细胞分裂、愈伤芽分化等方式，快速地繁殖大量的植株，同时可以保证植株的基因相同，茎、叶、根、花等各种组织可以繁殖，繁殖的速度快，品种稳定性高，是目前现代化生产种苗的主要手段之一。

离体快速繁殖的应用广泛，首先在园艺领域中，大量利用离体快速繁殖技术进行日光花、菊花、农村快速繁殖优良的品种；在林业和农业中，离体快速繁殖技术大量应用于快速繁殖经济作物如水稻、小麦等；其次在对抗病毒方面，离体快速繁殖技术被广泛应用于病毒抗性工程防治。

在植物繁殖中，常常会出现病毒感染的情况，病毒繁殖会导致植株凋萎甚至死亡，利用离体快速繁殖技术，可以利用无病毒的组织进行繁殖，达到防治病毒的效果。

另外，离体快速繁殖技术还可用于植株性状改良，利用组织培养技术，可以实现植株的性状改良，如增加果实的产量、改善气味等；同时可以加速育种进程，节约时间成本，提高育种效率。

与此同时，离体快速繁殖技术在药物防治中也有应用，通过人工培养，可以繁殖了大量植物，可大大减轻其在野外的开采成本，同时，还可达到禁止毒品和保护生态环境的效果。

总而言之，离体快速繁殖技术具有灵活性和高效性，是未来增加农业种植、加速育种进程、防治病毒、规模化草药养殖等诸多方面的重要手段。

植物离体快繁技术的综述黄新（生物科学技术学院2021级生物技术一班）全文：植物快繁技术就是一种全新的耕作技术，就是现代计算机智能控制技术与生物技术有机结合的高新农业技术。

运用植物生长模拟计算机为植物创造最为适宜的温、光、气、热、营养、激素环境，使植物的生理潜能得到最大的发挥，植物的生根基因尽快表达，从而实现植物的快速生根。

它的推广应用将会带来一次全新的育苗革命。

本文简要介绍植物快繁技术程序、相关培养技术以及植物快繁相关问题的讨论。

同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。

关键词：植物离体快繁、愈受伤非政府、不定芽细胞分裂、腋芽细胞分裂、愈伤组与织增殖、体细胞胚增殖、玻璃化问题、褐化问题、应用前景1植物离体快繁概况1.1研究简史离体微产卵技术的应用领域，首先应当归因于morel，他在1960年首先创建了兰花离体产卵的方法（原球茎产卵）。

目前总计有400种植物的离体产卵已获得成功，其中许多具备关键经济价值的花卉(例如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，获得了非常大的经济和社会效益。

我国快速产卵植物的种类超过443种之多荷兰就是试管苗的生产王国1.2植物离体快繁的定义快速产卵（rapidclonepropagation）：也叫做离体产卵（invitropropagation）、微体繁殖（micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。

追责植物组织培养郡新得町快繁技术的发展简史，在11世纪就发生的热处理郡新得町法，最早化解一些作物的病毒病害问题[1]。

本世纪50年代发展的植物组织培养技术为郡新得町提供更多了一条有效途径。

现在植物的郡新得町技术存有多种，其中应用领域最广为的存有三种：热处理法、茎细长培育郡新得町法、抗病毒药剂法，将相同的方法结合出来应用领域效果更好。

9 植物离体快繁
9.1 植物离体快繁的方法
• 无菌培养的建立 • 茎芽增殖的途径 侧芽增殖途径 不定芽增殖途径 体细胞胚增殖途径
9.2离体快繁中存在的问题及解决途径
1、培养物污染 污染原因及预防措施
2、褐化
外植体褐变是指在接种后，其表面开始变褐， 有时甚至会使整个培养基变褐的现象。 由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使 细胞的代谢发生变化所致。 在褐变过程中，会产生醌类物质，它们多呈 棕褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他 酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。
• （4）培养条件不当：
光照过强、温度过高、培养时间过长等
（使多酚氧化酶的活性提高）。
减轻褐变现象的发生：
（1）选择合适的外植体：
最好选择生长处于旺盛的外植体 （2）合适的培养条件： 无机盐成分、植物生长调节物质水平、适 宜温度、及时继代培养
（3）使用抗氧化剂： 半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂； 使用0.1％～0.5％的活性炭 （4）连续转移： 可间隔12～24小时的培养后，再转移到 新的培养基上，经过连续处理7～10天后， 褐变现象便会得到控制或大为减轻。
• 褐变的主要原因： • （1）花卉品种： 多酚氧化酶活性上的差异；不同品种分别 处理。 • （2）生理状态： 处于幼龄期的褐变程度较浅； 老熟组织含醌类物质较多
• （3）培养基成分：浓度过高的无机盐会
使某些植物的褐变程度增加；此外，细胞
分裂素的水平过高也会刺激某些花卉外植
体的多酚氧化酶的活性。
3、玻璃化：
• 当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些 培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明状， 呈水迹状，这种现象通常称为玻璃化。它 的出现会使试管苗生长缓慢、繁殖系数有 所下降。玻璃化为试管苗的生理失调症。 • 症状：茎、叶表面无蜡质，体内的极性化 合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾 作用强，无法进行正常移栽。

时期长短受植物种类影响，从数个月到 数年不等。
技术关键
• 顺利通过灭菌关，将植物材料、灭菌 药剂及浓度、灭菌时间三者统一考虑。
• 筛选出合适的培养基。
二、稳定培养系的增殖、生长和增壮时期
使已经达到稳定状态的培养物，通过不断的继 代培养进行增殖，从而达到所要求的数量；增殖 后的培养物生长和壮大到生根所需要的大小和壮 实程度。
本时期是商品化组培的主要时期。划分为三个 阶段：培养物保存阶段、大量增殖阶段及生长和 增壮阶段。
技术关键
• 缩短继代培养周期 • 扩大芽和嫩梢繁殖系数 • 细胞分裂素与生长素的比例是影响繁殖系数和不
定芽质量的主要因素。 • 继代培养的芽增殖途径对繁殖效果影响最大。商
品化培养的树木，多采用腋芽增殖。
3） 大幅度减少了植物微繁殖生产过程中的微生物污染率。
4） 消除了小植株生理和形态方面的紊乱，种苗质量显著提高。
植物无糖组培快繁技术的优势
5） 提高了植株的生根率和生根质量，特别是对于木本植物 来说，极大地植株的生根率和生根质量，试管苗移栽成活 率显著提高。
6） 节省投资，降低生产成本。与传统的微繁殖技术相比， 种苗生产综合成本平均降低30％。
而无糖组织培养技术是建立在对培养容器内环 境控制的基础上，根据容器中植株生长所需的最 佳环境条件（如光照强度、CO2浓度、环境湿度、 温度、培养基质等）来对植株生长的微环境进行 控制，最大限度地提高小植株的光合速率，促进 植株的生长。
植物无糖培养微繁殖技术的技术特点
3 使用多功能大型培养容器
在传统的组织培养中，由于培养基中糖的存 在，为了防止污染，一般使用或者说只能使用小 的培养容器。
而无糖培养主要是采用多孔的无机物质，如蛭 石、珍珠岩、纤维、砂、塑料泡沫、石棉等作为 培养基质，可以极大地提高小植株的生根率和生 根质量。而且多空气的无机材料代替价格昂贵的 琼脂，生产成本低。

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提高小苗移栽成活率的方法
1、将小苗进行分级。 2、要进行炼苗。 3、选好定植场所。 4、要严格掌握移栽技术，科学确定合适的移
栽时间。 5、重视移栽后的管理。
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四、植物离体快繁的常见问题
1、污染 2、遗传稳定性 3、玻璃化现象 4、褐变的发生
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1、污染
污染
细菌污染
真菌污染
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细菌污染的特点
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２器官型
器官型：从器官外植体诱导不定芽，再 生成植株的方式。
特点：直接从器官上诱导不定芽，遗传 性比较稳定，但繁殖速度慢。
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３器官发生型
器官发生型：从器官外植体诱导愈伤组 织，经愈伤组织细胞的分化再生成植 株的方式。
特点：繁殖速度快，由于经愈伤组织而 再生成植株，遗传性不稳定。
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本时期可划分3个阶段：
培养物保存阶段、培养物大量增值阶段、培 养物生长和增壮阶段。
本时期的目标： 1、维持培养物的稳定状态 2、不断增值茎丛达到需要数量。
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3、诱导茎芽生根形成小苗时期
本时期是使上一时期培养出来的微枝发出不 定芽，形成完整的小苗，以便经过训化， 培养成商品苗。
其功能是：
污染原因：
培养室湿度过大 瓶口积落有灰尘和孢子。
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材料内部带菌
在培养基中表现的症状
外植体接触培养基部位长菌 外植体损伤部位长菌 外植体生长不良或表现出缺绿
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防治措施
接种前的工作： 1、 接种室的灭菌 2、超净工作台的灭菌 3、 接种器皿、用具的灭菌 4、工作人员接种前应做的准备工作 5、 材料的灭菌