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爱思进胶回收说明书
爱思进胶回收试剂盒的使用说明书如下：
1. 制备琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据Marker 判断PCR产物的大小是否符合要求。
2. 切胶：切下包含目的片段的凝胶，尽量切去上下两端的凝胶，以减少非特异性产物的影响。
3. 胶的融化：将切下的凝胶放入一个离心管中，加入适量的胶融化液，使凝胶完全溶解。
4. 洗涤：将凝胶溶液加入一个离心柱中，离心柱的管底会有一个膜，可以吸附凝胶中的DNA片段。
然后加入洗涤液，将离心柱离心，去除残留的胶融化液。
5. 洗脱：加入适量的洗脱液，离心柱离心，将DNA从膜上洗脱下来。
6. 检测：取洗脱液进行电泳检测，观察电泳结果是否包含目的片段。
以上是爱思进胶回收试剂盒的使用说明书的大致步骤，由于不同版本的产品可能存在差异，因此建议在使用前仔细阅读说明书或咨询专业人士。
除了选择合适的方法外,实验中还要注意以下几点:(1)防止抽提过程中污染DNA酶与回收片段接触的试剂与器皿等都应进行灭菌(酶)处理,即使是不能用干热或湿热法灭菌的器皿也要用乙醇浸泡以灭杀活菌与DNA酶,不然可能发生回收片段部分降解的现象,有时甚至一无所获.即使是轻微的降解反应——当发生在粘性末端时也会导致严重的连接困难.(2)紫外照射选择长波段回收过程往往需在紫外等监测下进行,与一般观察电泳结果不同的是这时应用长波紫外灯.因为短波紫外线(254nm)会引起DNA的断裂或是形成TT二聚体,前者会使以后的连接与转化等实验失败,后者可能造成基因突变,给克隆工作带来麻烦.即使是使用了长波紫外照射,回收DNA时也要尽量短时照射,避免连续长时间照射.(3)实验操作要轻柔特别在处理较大片段时应防止机械剪切作用DNA对的破坏,如吸取液体,转动离心管等操作均应缓慢,轻柔.综上所述,只有在合适的回收方法基础上注意具体操作步骤是才能有效回收所需片段,为以后的酶切,连接,标记等工作打下良好基础.3 实验步骤一、试剂盒法(Kit回收法,以上海申能博彩生物科技有限公司生产的试剂盒为例)(1)从电泳板上切割含目的DNA片段的凝胶块(割胶尽可能的小,提供后续回收效率)(2)凝胶称重后并将其放入1.5ml管中,将其适当切小,加速溶解.每100mg凝胶加入400μl solution SN.(若称重省略,一般加入400μl SN)(3)凝胶溶解:55-60℃,保温5-10分钟,每2分钟混匀一下,使凝胶溶解,胶完全融化后每400μl solution SN中加入solution B 100μl,混匀.(4)将3S柱装入2ml洗管,将上述混合液转移至3S柱,室温放置2min.室温10 000 rpm离心1分钟,稳定45秒.(5)取下3S柱,倒掉收集管中的废液,将3S柱放入同一收集管中,加入600μl Wash Solution,室温10 000 rpm离心1分钟.(6)重复步骤5一次.(7)取下3S柱,倒掉收集管中废液,将3S柱放入同一收集管中,室温10 000 rpm离心2分钟.(8)将3S柱放入新的离心管中,在3S柱子膜中央加30μl ddH2O,不加盖室温放置2分钟.(9)盖上离心管,室温10 000 rpm离心1分钟,离心管中的液体即为回收的DNA片段.胶回收一. 提高胶回收量的办法：1) 增加电泳时的上样量。
《分子生物学实验技术实验操作指南》目录1 植物基因序列分析 (3)2 引物设计的原则 (4)3 试剂的配置和灭菌 (5)4 植物基因组DNA的提取 (6)5 DNA的定量 (8)6 DNA的电泳 (9)8 PCR产物的回收 (12)9 PCR产物连接T载体和感受态细胞的转化 (14)10 菌落（液）PCR (17)11 质粒DNA的提取 (19)12 质粒DNA的酶切 (21)1 植物基因序列分析1.基因组DNA（genomic DNA, gDNA）：功能基因包括三个基本序列：5’上游区，转录区和3’下游区。
2.5’上游区和3’下游区：转录起始位点上游和转录终止位点下游的序列，主要起到基因表达调控作用。
3.转录区：转录起始位点和转录终止位点之间的序列，经核不均一RNA最终被加工为成熟的mRNA。
4.信使RNA（messenger RNA, mRNA）：由DNA的一条链作为模板转录而来的，携带遗传信息的能指导蛋白合成的一类单链核糖核酸。
由编码区、上游的5’非编码区和下游3’非编码区组成，5’端带有7-甲基鸟苷-三磷酸帽子结构，3’端有多腺苷酸尾巴。
5.互补DNA（complementary DNA, cDNA）：具有与某mRNA链呈互补的碱基序列的单链DNA。
6.蛋白质编码区（sequence coding for amino acids in protein, CDS）：与蛋白质序列一一对应的DNA序列，且该序列中间不含其它非该蛋白质对应的序列。
只有外显子，不含内含子。
7.5’非翻译区（5’-untranslated region, 5’UTR）：mRNA位于基因转录起始位点至编码区翻译起始密码子之间顺序。
8.3’非翻译区（3’-untranslated region, 3’UTR）：mRNA位于编码区翻译终止密码子下游一段不被翻译的序列。
2 引物设计的原则1.引物长度：一般为20-25bp。
若产物长度等于或小于500bp，可选用16-18bp的引物；若产物长达5kb，则需要用更长的引物。
凝胶dna回收实验报告1. 理解DNA凝胶电泳的原理和方法；2. 学习DNA凝胶回收的方法和步骤。
实验材料：1. DNA凝胶电泳仪；2. DNA样品；3. DNA凝胶；4. DNA染料。
实验步骤：1. 准备DNA样品：从细菌或真核生物中提取DNA并纯化。
2. 制备DNA凝胶：根据DNA样品大小选择合适的琼脂糖浓度和电泳缓冲液，将琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，加热溶解后，在凝固前加入DNA样品，并将其转移到电泳槽中。
3. 进行DNA凝胶电泳：将DNA凝胶置于电泳仪中，接通电源，设定适当的电流和电压，进行电泳分离。
根据不同的目的和需求，可以选择不同的电泳方法，如平行电泳或垂直电泳。
4. 理解DNA凝胶图谱：观察DNA在凝胶中的迁移情况，根据分离程度和片段大小推断DNA的特性和组成。
5. 染色：使用DNA染料将凝胶中的DNA染色，以便观察和记录。
6. 回收DNA：使用切割刀将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，转移到离心管中。
7. 纯化和测定：使用DNA纯化试剂盒或其他方法纯化回收的DNA，并通过测序或其他技术确认其准确性和纯度。
实验结果：1. DNA凝胶图谱：根据分离情况和染色结果，可以观察到DNA片段的迁移情况和大小分布。
2. 回收的DNA样品：经过回收和纯化后，获得从凝胶中割下的DNA片段。
实验讨论：1. 实验中电泳条件的选择对于DNA凝胶分离的效果和准确性至关重要。
2. 切割凝胶时需要注意避免外源性DNA污染和片段交叉污染。
3. 回收的DNA样品需要经过纯化和测定，以确保其准确性和纯度。
实验结论：1. 通过凝胶DNA回收实验，我们可以将感兴趣的DNA片段从凝胶中割下，并进行后续的纯化和分析。
2. DNA凝胶电泳是一种常用的DNA分离和分析方法，可以用于研究DNA的大小、构成和数量。
3. 正确选择电泳条件，合理操作和纯化步骤，能够获得准确和高质量的回收DNA样品。
实验改进：1. 优化电泳条件，提高凝胶分离效果。
一、实验目的本实验旨在通过快速凝胶回收方法，从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段，为后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验提供高质量的模板DNA。
二、实验原理凝胶回收是分子生物学实验中常用的技术之一，主要用于从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段。
本实验采用的方法是利用琼脂糖凝胶中的DNA片段在低盐、高pH值条件下，可被特定的吸附剂（如硅胶膜、磁珠等）特异性吸附的特性，通过简单的操作步骤，将目的DNA片段从凝胶中分离、纯化。
三、实验材料1. 琼脂糖凝胶2. 目的DNA片段3. DNA回收试剂盒（含吸附剂、缓冲液等）4. 1.5 mL离心管5. 离心机6. 电泳仪7. 凝胶成像系统四、实验方法1. 准备琼脂糖凝胶电泳，将目的DNA片段与载体DNA混合，加入琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。
2. 将电泳后的凝胶在紫外灯下观察，确定目的DNA片段的位置。
3. 使用DNA回收试剂盒中的吸头，将目的DNA片段从凝胶中剪下。
4. 将剪下的凝胶片段放入1.5 mL离心管中，加入适量的缓冲液，用吸头充分混匀。
5. 将混匀后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心5分钟，使DNA片段吸附在吸附剂上。
6. 弃去上清液，用缓冲液洗涤吸附剂，重复洗涤步骤2次。
7. 将洗涤后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心3分钟，使DNA片段充分沉淀。
8. 弃去上清液，加入适量的TE缓冲液，用吸头充分混匀，使DNA片段溶解。
9. 使用凝胶成像系统观察DNA片段的回收情况。
五、实验结果与分析1. 电泳结果显示，目的DNA片段成功从琼脂糖凝胶中回收。
2. 凝胶成像系统显示，回收的DNA片段大小与预期相符。
3. 回收的DNA片段纯度较高，可用于后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验。
六、实验讨论1. 本实验采用快速凝胶回收方法，操作简便，节省时间，适用于大量样品的回收。
2. 实验过程中，应注意以下几点：a. 凝胶回收时，应确保目的DNA片段在凝胶中的位置准确。
实验六 PCR产物胶回收实验（一）一、实验目的1. 掌握胶回收的常规操作2. 了解胶回收PCR产物的目的二、实验原理利用胶回收试剂盒纯化PCR产物。
本试剂盒提供一个从TBE或TAE电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶中提取高质量DNA的简单、快速、有效的技术，适合从浓度≤3%，高，低熔点琼脂糖凝胶中，回收长度为60bp~23Kb的DNA片段，小于100bpDNA片段回收率为10%~55%，0.1~10kbDNA片段回收率最大为99%，大于10kbDNA片段回收率为20~70%。
回收的基因组DNA可以应用到克隆，测序，限制性酶切等各类下游分子生物学实验。
三、试剂及配套设备和材料3.1 试剂Extraction buffer Wash buffer Elution buffer3.2 配套设备和材料无菌1.5ml离心管各种规格移液器和无菌移液器吸头无水乙醇异丙醇可能需要3M KAc (pH 5.0) 离心机四、基本技术参数1. 用干净、锋利的手术刀，将含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶切下，并放入1.5或2.0 ml离心管中。
请尽量切去不包含DNA片段的凝胶。
一般情况下，电泳的DNA上样量≥50 ul（50ul为最终洗脱体积）。
2. 按1：3的比例（凝胶质量毫克数：融胶液体积微升数）加入Extraction buffer。
例如：100mg凝胶应加入300ul Extraction Buffer。
对于每人份试剂用量，凝胶质量不能超过400mg。
3. 于恒温水浴或金属浴中50℃温育，直到凝胶融化。
一般温育时间为10分钟，温育过程中没隔23分钟混匀一次。
如果温育后，混合液体颜色变紫，请加入10 ul 3M KAc （pH 5.0），使混合液颜色变回黄色。
4. 可选：按1：1的比例（凝胶质量毫克数：异丙醇体积微升数）加入异丙醇，并混合均匀。
如DNA片段大于500bp/小于4kb，不需要加异丙醇。
5. 将混合液全部转移到Spin column内，于6,000g离心1分钟，并弃去接液管内液体。
Code No. 9762 研究用TaKaRa MiniBEST AgaroseGel DNA Extraction Kit Ver.4.0说明书v201306Da目录内容页码●制品说明1 ●制品内容1 ●保存与运输1 ●使用前的准备事项1 ●操作方法1 ●使用例3 ●注意事项3 ●Q&A 4●制品说明本试剂盒是从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA片段的试剂盒。
试剂盒采用了独特的凝胶溶解Buffer,其具有较强的缓冲性能并含有pH指示剂,方便判断溶液的pH值是否适合与DNA制备膜结合,其溶胶能力很强,无需加热,在室温(15-25℃条件下即可快速溶解凝胶。
本试剂盒结合DNA制备膜技术,具有高效、快速、方便之特点,全套操作只需20分钟便可完成。
使用本试剂盒每次可纯化得到多至20 μg以上的DNA片段(50 bp~20 kb,回收率高达50~80%,20~50 kb的DNA片段回收率略低。
经本试剂盒回收纯化的DNA片段纯度高,完整性好,可直接用于连接反应、PCR扩增、DNA测序等各种分子生物学实验。
●制品内容(50次量每次处理的胶块量约为300 mg(1%凝胶浓度时,本试剂盒可使用50次。
本试剂盒分试剂Set与Column Set两部分。
■试剂SetBuffer GM*1 50 mlBuffer WB*2 24 mlElution Buffer 2 ml ×2*1含有强变性剂,应避免与皮肤、衣物等接触。
若不小心接触到眼睛或皮肤时,请立即到医院进行处理。
*2首次使用前,向Buffer WB中添加56 ml的100%乙醇。
■Column SetSpin Columns 50支Collection tubes 50支【试剂盒之外所需准备试剂】◆无水乙醇◆灭菌水或Tris-HCl(pH8.0◆ 3 M醋酸钠溶液(pH5.2●保存与运输1. 本试剂盒可以在室温下(15-25℃保存。
2. 本试剂盒于室温下(15-25℃运输。
中国海洋大学实验报告2010 年4月26日晚上第9组姓名赵钰专业年级07级生命基地班课程分子生物学实验题目DNA片段的回收同组者刘安王梓华学号040012007174一：【实验目的】1：学习DNA片段纯化的原理。
2掌握从凝胶中回收PCR产物的方法。
二：【实验原理】切胶回收的主要目的是得到纯的目的DNA片段，去除影响DNA连接酶活性的物质（蛋白质，有机化合物，无机盐离子）以及其它的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳后，切取目的片段凝胶并溶解，用盐溶液将DNA片段从凝胶中析出，沉淀后可得到较纯的目的片段。
三：【实验材料】器材：琼脂糖凝胶电泳系统、紫外反射透射分析仪、刀片、镊子、离心机、恒温水浴锅试剂：无水乙醇、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。
其中琼脂糖凝胶DNA 回收试剂盒包含：吸附柱CA2、收集管（2ml）、平衡液BL、溶胶液PN、漂洗液PW、洗脱缓冲液EB，由TIANGEN公司提供。
四.【实验步骤】（1）在漂洗液PW中加入无水乙醇60ml。
（2）使用TAE缓冲液制作1%的琼脂糖凝胶，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。
（3）将凝胶放入EB溶液中染色15分钟。
（4）取出凝胶，在紫外光下切取目的条带，装入干净的离心管中，称取重量。
计算胶的体积，以1mg=1ul进行计算。
（5）向胶块中加入3倍体积溶胶液PN（比如0.1g胶块对应300ul溶胶液），50℃水浴放置10min，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
（注意：胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱）（6）柱平衡步骤：向吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中）加入500ul平衡液BL，12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液，将吸附柱再放回收集管中。
（7）将第5步所得溶液加入一个吸附柱CA2中（吸附柱放入收集管中），室温放置3min，12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CA2放入收集管中。
