【液相色谱】液相色谱柱的维护误区 液相色谱维护和修理保养

液相色谱仪的维护保养和注意事项

一、日常维护保养

1. 清洗和清理仪器内部定期清洗和清理液相色谱仪的内部，包括流动相管道、检测器、色谱柱等部分，以防止堵塞和污染。使用专用的清洗液清洗仪器，并根据仪器说明书进行正确的操作。

2. 检查泵密封和柱塞杆定期检查液相色谱仪的泵密封和柱塞杆，确保其正常运转。若发现密封圈磨损或柱塞杆有异物堵塞，应及时更换或清理。

3. 更换过期或损坏的零件随着使用时间的增长，液相色谱仪的一些零件可能会过期或损坏，如流动相过滤器、单向阀等。发现这些零件出现问题时，应及时更换，以保证仪器的正常运转。

4. 校准仪器为保证液相色谱仪的准确性和稳定性，应定期进行仪器校准。根据仪器说明书的要求，按照操作规程进行校准，并记录校准结果。

二、使用注意事项

1. 防止压力过高或过低液相色谱仪的正常运转需要稳定的压力。在使用过程中，应避免压力过高或过低，以免对仪器造成损害。若发现压力异常，应及时检查泵、流路和检测器等部分，并采取相应措施。

2. 避免使用不适当的流动相流动相是液相色谱仪的重要组成部分，使用不适当的流动相可能会影响分离效果和仪器寿命。在使用流动相时，应注意其纯度、极性和组成等参数，并根据实验要求选择合适的流动相。

3. 定期检查泵密封和柱塞杆液相色谱仪的泵密封和柱塞杆是仪器的重要部件，若出现故障可能会影响仪器的正常运行。在使用过程中，应定期检查泵密封和柱塞杆的状态，如有异常应及时更换或维修。

第 1 页 共 2 页 液相色谱柱的保存 液相色谱维护和修理保养

1.反相色谱柱每天试验后的保养：

使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

2.长期保存色谱柱：

如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度好是室温。

液相色谱柱的使用和维护

在液相色谱操作过程中，我们需要下面的问题，便利维护液相色谱柱。 A柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必需防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。 B.假如仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。 C.避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的蓦地变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。 D.应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然。 E.如使用柱温掌控装置时，应注意在通人流动相后才能升温。 F.一般说来液相色谱柱不 第 2 页 共 2 页 能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会快速降低柱效。 G.选择使用适合的流动相，以避开固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解。 H.避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相像固定相的短柱。保护柱可以而且应当常常更换。 I.常常用强溶剂冲洗液相色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50—75mL。 J.保存液相色谱柱时应将柱内充分乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。确定禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。 K.液相色谱柱使用过程中，假如压力上升，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染；假如柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头显现塌陷，死体积增大。 L.在完成分别分析工作之后，不能立刻就关机，需适时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去液相色谱柱内的杂质。

液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。

本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：

一、反相色谱柱的选择

1．柱子的PH值使用范围

反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。

2．填料的端基封尾（或称封口）

把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。

3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱

戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。

二、液相色谱柱的使用

色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。

第 1 页 共 5 页 液相色谱分析中保留时间更改的原因 液相色谱维护和修理保养

色谱分析是以假定给定组分的保留值在分别条件不变时保留值恒定为基础的。对标准的液相色谱程序而言，每个峰都对应于一个组分，以标准品与样品中组分的保留时间相对应进行辨别。恒定的保留时间对分析设计排列的样品很紧要。

在液相色谱仪分析中常涉及到组分的保留值。保留值发生更改可使已建立的方法不能连续进行下去，或引起分析周期太长，或者峰分不开。应当找出引起保留值变化的原因。

液相色谱分析中保留时间更改的原因

除上述条件之外，引起保留变化的原因紧要包括下列3种：

1 柱—柱之间；

2 日—日或日内：保留时间可能随时间而变化，如温度、柱温、pH值等对柱性能有影响，通常是全部的峰提前或延迟。

3 样品—样品间：偶然也有样品与标准品的保留时间不同，可能是样品介质的影响。

以下重点讨论造成日—日间和日内保留时间变化的影响因素，它们紧要是：

a 分别条件掌控差

除了色谱柱外，保留是温度、流动相构成和流速的综合体现，假如有一个条件变化，保留时间也会随之发生变化。

b 柱平衡慢

流动相构成或温度变化时，柱在新条件下再平衡需要确定的时 第 2 页 共 5 页 间，在柱达到完全平衡钱不应进样。

c 柱钝化

长时间进样，柱会退化，强保留组分被柱不可逆的保留，导致全部组分保留削减。键合相层从填料微粒上剥落下来，会导致某些组分的保留加添，而另一组分的保留削减。

d 柱过载和样品介质相互作用

过大的样品量超出柱的线性范围，使保留削减。也可能是样品本身过载，从其它方面影响保留。

液相色谱分析中引起保留变化的原因

色谱分析是以假定给定组分的保留值在分别条件不变时保留值恒定为基础的。对标准的液相色谱程序而言，每个峰都对应于一个组分，以标准品与样品中组分的保留时间相对应进行辨别。恒定的保留时间对分析设计排列的样品很紧要。

在液相色谱仪分析中常涉及到组分的保留值。保留值发生更改可使已建立的方法不能连续进行下去，或引起分析周期太长，或者峰分不开。应当找出引起保留值变化的原因。