反相高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪片的含量

反相高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪片的含量

吴春美;林伟萍;吴明东

【摘 要】Objective To set up an RP- HPLC method for the content

determination of Ligustrazine Phosphate Tablets. Methods The XDB-C18

column(150. 0mm ×4. 6 mm, 6 μm) was used as the separation column.

The mobile phase was methanol- 1％ acetic acid (35:65).The flow rate was

1.0 mL/min, and the detection wavelength was 295 mn. The comparison

test was carried out with ultra-violet spectrophotometry. Results The

retention time of ligustrazine phosphate was 6. 82 min. The good linear

relationship was shown within the range of 5-40 μg/mL( r=0. 999 8, n=6)

for the concentrations of ligustrazine phosphate. The average recovery

rate was 99.02％, RSD =0. 46％ (n=6). Conclusion The method is

convenient, rapid, accurate and well reproducible, which may be used for

the content determination of Ligustrazine Phosphate Tablets.%目的 建立测定磷酸川芎嗪片含量的反相高效液相色谱法.方法 采用XDB-C18分析柱(150.0

mm×4.6 mm,6μm),流动相为甲醇-1%醋酸溶液(35:65),流速1.0 mL/min,检测波长295 nm;并用紫外分光光度法做对比试验.结果 磷酸川芎嗪的保留时间为6.82

min,其质量浓度在5～40 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8,n=6),平均回收率为99.02%,RSD为0.46%(n=6).结论 所用方法简单、准确,重复性好,可作为磷酸川芎嗪片的含量测定方法.

【期刊名称】《中国药业》

【年(卷),期】2011(020)003 【总页数】2页(P25-26)

【关键词】磷酸川芎嗪片;反相高效液相色谱法;含量测定

【作 者】吴春美;林伟萍;吴明东

【作者单位】浙江省丽水市人民医院,浙江,丽水,323000;浙江省丽水市人民医院,浙江,丽水,323000;浙江省丽水市人民医院,浙江,丽水,323000

【正文语种】中 文

【中图分类】R284.1;R286.0

川芎嗪是从伞形科植物川芎中提取的一种生物碱单体，具有抑制自由基产生、清除氧自由基、抑制血小板聚集等药理活性，临床用于高血压、胰腺炎等的治疗[1]。在2005年版《中华人民共和国药典(二部)》中，磷酸川芎嗪片的含量测定方法为紫外分光光度法[2]，笔者采用反相高效液相色谱法，取得较好效果，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;紫外检测器。磷酸川芎嗪对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110817－200305);磷酸川芎嗪片(北京燕京制药公司，批号分别为070401，070608，080104);甲醇、乙腈均为色谱纯，水为二次重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:XDB－C18分析柱(150.0 mm×4.6 mm，6μm);流动相:甲醇－1%醋酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL/min;检测波长:295 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。在此色谱条件下，磷酸川芎嗪的理论板数为2 600，保留时间为6.82 min，供试品溶液色谱中川芎嗪峰与其他各峰分离度大于1.5，分离度良好，符合规定。磷酸川芎嗪对照品溶液、空白对照品溶液和供试品溶液的色谱见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液配制

精密称取磷酸川芎嗪对照品12.5 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.5 g/L的对照品贮备液;取对照品贮备液0.4 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取磷酸川芎嗪片20片，精密称定，研细，精密称取适量(相当于磷酸川芎嗪片50 mg)，置100

mL容量瓶中，用甲醇适量超声处理30 min使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取0.4 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方组成量取除磷酸川芎嗪外的其余辅料，按工艺要求制备缺磷酸川芎嗪的空白对照样品，并按供试品溶液制备方法制成空白对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:精密吸取对照品溶液、空白对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液同一位置有相同的峰，空白对照品溶液在同一位置无峰出现，表明空白对照品对试验无干扰。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8 mL，分别置

10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下分别进样10 μL测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、对照品质量浓度(C)为横坐标进行线性回归，得回归方程 A=0.046 C+0.051 4，r=0.999 8(n=6)。结果表明，磷酸川芎嗪质量浓度在5～40 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL进样，重复5次。结果峰面积值的 RSD为1.12%(n=5)，表明方法精密度良好。

重复性试验:精密称取同一批(批号为070401)样品5份，按样品测定方法操作。结果的 RSD为0.98%(n=5)，表明方法重复性较好。

稳定性试验:取同一批(批号为070401)样品按供试品溶液制备方法制备溶液，分别于0，2，4，6，8 h时进样测定含量。结果的RSD为1.04%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密称取同一批(批号为070401)样品(含磷酸川芎嗪约45 mg)6份，置100 mL容量瓶中，稀释成20 μg/mL，取10 mL，分别加入 20 μg/mL 的磷酸川芎嗪对照品溶液 2.5，10，20 mL，测定含量，计算加样回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3个批号的磷酸川芎嗪片，按供试品溶液配制方法制备溶液，分别进样10 μL，测定峰面积，计算磷酸川芎嗪片标示量的百分含量，同时按2005年版《中国药典(二部)》方法测定，结果见表2。

表1 磷酸川芎嗪加样回收试验结果(n=6)8.00 8.00 8.00 8.00 8.00 8.002.00 2.00

8.00 8.00 16.00 16.00 9.968 9.982 15.912 15.920 23.824 23.968 98.40 99.10

98.90 99.00 98.90 99.80 99.020.46

表2 样品含量测定结果101.08 103.37 100.16070401 070608 080104 102.16

101.22 98.69 0.540 1.075 0.735

3 讨论

配制溶液时，加入适量甲醇并超声处理30 min，可加速磷酸川芎嗪片溶解完全。在选定的色谱条件下，参照文献[3－4]，考察了甲醇和1%醋酸溶液的比例，当比例为35∶65时，磷酸川芎嗪片与溶剂杂质峰分离好、柱压低，对照品溶液与供试品溶液峰形好，理论板数超过所要求的1 500。用选定的波长295 nm测定，磷酸川芎嗪回收率、精密度和线性关系都令人满意，且无其他干扰峰。

药典收载的紫外分光光度法操作具有简单、省时、快捷的优点，而高效液相色谱法则可有效分离多组分、排除杂质或辅料干扰。比较了两种测定方法测定磷酸川芎嗪含量的准确性，3批样品的测定精密度相对偏差均小于1.1%，表明反相高效液相色谱法同样可作为磷酸川芎嗪片的含量测定方法。

参考文献:

[1]张廷伟.盐酸川芎嗪的药理作用及其临床应用[J].医药导报，2006，25(11):1

179－1 180.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:869.

[3]张 伟，林 凯.HPLC测定舒胸胶囊中盐酸川芎嗪的含量[J].中成药，2006，28(6):920－921.

[4]李 雅，郭建生.高效液相色谱法测定川麻颗粒中川芎嗪的含量[J].湖南中医药导报，2004，10(1):51－52.