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Ｄ　１　０　１大孔树脂纯化大黄蒽醌组分的工艺研究　孙艳平汪兴军闰平鱼霞（西安医学院，陕西西安７１００２１）　摘要：目的研究Ｄ１０１大孔树脂对大黄蒽醌类组分的吸附性　能和纯化工艺。方法以大黄总蒽醌中的代表成分大黄素为考　察指标，采用ＨＰＬＣ法测定大黄素的含量，考察Ｄ１０１大孔树脂　对大黄蒽醌类组分的纯化工艺及参数。结果Ｄ１０１大孔吸附树　脂对大黄蒽醌的适宜交换吸附条件为：上样液浓度为Ｏ．０６５８ｇ／　ｍＬ，上样液的最大量为３倍树脂体积，４倍量树脂体积的７０％乙　醇为洗脱剂。结论通过树脂的富集纯化，测得总蒽醌浸膏收　率为１３．２１％，表明该树脂纯化大黄总蒽醌的工艺可行。　关键词：Ｄ１０１大孔吸附树脂；大黄；大黄素；ＨＰＬＣ；分离纯化　大黄具有泻下攻积、清热泻火、活血化瘀等功效，现代研究　表明，大黄中含有蒽醌衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸、挥　发油、多糖等化学成分，同时具有抗菌抗病毒、抗炎祛痰、泻下、　保护胃黏膜、保肝利胆、利尿改善肾功能、降血压、降脂减肥、抗　肿瘤等药理作用”　。　目前，对大黄的活性组分离提取纯化的研究较多，如明胶沉　淀法、聚酰胺法、葡聚糖凝胶法等，但这些方法操作过程复杂，　处理能力有限、成本高。近年来，大孔吸附树脂技术由于操作　简单、成本低等特点，在中药的提取、分离纯化方面得到了广泛　的应用，不断的受到研究学者的重点关注。本实验通过研究　ＤＩＯ１树脂对大黄蒽醌类组分的吸附性能和纯化工艺，而获得较　高纯度的组分，从而为大黄蒽醌类组分的分离纯化提供参考。　１仪器、试剂与试药　１．１仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２２０型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），　ＫＱ－２５０Ｂ型超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司），电子天　平（北京科学仪器有限公司），旋转蒸发器ＲＥ－２０００Ａ（巩义市予　华仪器有限公司），ＳＨＺ－Ｄ循环水式真空泵（巩义市予华仪器有　限公司），电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）。　１．２试剂与试药　大黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；Ｄ１０１大孔吸附　树脂；磷酸、乙醇、甲醇、盐酸、三氯甲烷（均为分析纯），色谱甲　醇；水为娃哈哈纯净水；大黄药材购自西安市万寿路药材市场，　经鉴定为蓼科植物唐古特大黄Ｐｈｅｕｍ　ｔａｎｇｕｔｉｃｕｍ　Ｍａｘｉｍ．ｅｘ　Ｂａｌｆ．　的干燥根及根茎。　２方法与结果　２．１溶液的制备　２．１．１大黄提取液的制备　称取５０ｇ大黄粗粉，加入１０倍量８０％的乙醇回流提取３次，　每次０．５ｈ，滤过，合并滤液，滤液减压回收乙醇，最终得１８０ｍＬ　浓缩液，相当于０．２７８ｇ／ｍＬ的生药材。　２．１．２供试品溶液的制备　精密量取大黄提取液０．６ｍＬ，加入８％盐酸液１０ｍＬ，超声　２ｒａｉｎ，再加入三氯甲烷ｌＯｍＬ￣ｌｌ热回流１ｈ，放冷，置分液漏斗中，　分取三氯甲烷层，酸液层用三氯甲烷萃取３次，每次ｌＯｍＬ，合并　三氯甲烷液，减压回收溶剂，残渣加甲醇溶解定容至１ＯｒａＬ容量　瓶中，即得　。　２．１．３对照品溶液的制备　精密称取０．００１ｇ大黄素，用甲醇溶解后定容至ｌＯｍＬ，制成　１００ｕｇ／ｍＬ的大黄素对照品溶液。　２．２含量测定方法　２．２．１色谱条件色谱柱：Ｕｈｉｓｌｌ　ＸＢ—Ｃ。　（１０Ｘ２５０ｒａｍ，　５ｕｒｎ）；流动相：甲醇一０．１％磷酸水溶液（８０：２０）；检测波长：　２５４ｎｍ；流速：ｌｍＬ／ｍｉｎ；柱温：室温。在此条件下，大黄素的分离　良好。　２．２．２标准曲线的制备及线性范围的考察分别精密吸取混　合对照品溶液４．０ｕＬ、８．０ｕＬ、１０．０ｕＬ、１２．ＯｕＬ、１６．０ｕＬ、２０ｕＬ，按　“２．２．１”项下色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱峰面积，以　进样量Ｘ（ｕｇ）为横坐标，相应的峰面积Ａ为纵坐标，绘制标准曲　线，结果如下：　表一１大黄素线性关系的实验结果　进样量　０．４　０．８　１．０　１．２　１．６　２．Ｏ　（ｕｇ）　２０４．８６　峰面积（Ａ）　３９５．６２５　５１０．２７０　６１３．２５４　８１１．６３７　１０１２．２０８　０　得标准曲线Ａ＝５０７．２４Ｘ－０．４６９９，Ｒ＝０．９９９８（ｎ＝６），表明大黄　素在０．２ｕｇ－２．０ｕｇ范围内，线性关系良好。　２．３大黄总蒽醌的分离与纯化工艺　２－３．１大孔吸附树脂的预处理用适量蒸馏水漂洗，再用　９５％乙醇浸泡２４小时，然后用蒸馏水将树脂冲洗至无醇味，用　２倍于树脂体积的５％盐酸浸泡２小时，用蒸馏水冲洗至中性；　再用２倍树脂体积的５％氢氧化钠浸泡２小时后用水洗至中性，　备用。　２．３．２测定静态的吸附量　取５ｍＬ预处理过的Ｄ１０１树　脂，置１００ｍＬ具塞锥形瓶中，量取１０ｍＬ大黄提取液，加入锥形　瓶中，每间隔３０　ｒａｉｎ振荡３　ｒａｉｎ（６次），放置过夜，过滤，吸取滤　液少量，对滤液和上样液进行ＨＰＬＣ测定大黄素含量，计算吸附　量为０．４０４８ｍｇ／ｍＬ吸附率为８０－３　１％。　

１７４　Ｉ化，　鳕２０１５年８月　２３＿３测定动态的吸附量　取５ｍＬ预处理过的ＤＩＯ１树脂，　湿法装柱（２０ｃｍＸ１．５ｅｒａ），量取ｌＯｍＬ大黄提取液上柱，流速ｌｍＬ／　ｍｉｎ，收集流出液，用ＨＰＬＣ法测流出液中大黄素的含量，计算吸　附量为０．３８１６ｍｇ／ｍＬ吸附率为７２．２６％。　２．３．４上样液浓度对吸附量的影响　取４份５ｍＬ预处理过　的Ｄ１０１树脂分别装柱（２０ｃｍｘ１．５ｃｍ），分别加入含生药量为　０．１３１５、０．０６５８、０．０４４、０．０３２９ｇ／ｍＬ大黄提取液各２０ｍＬ，调节流　速为ｌｍＬ／ｍｉｎ，分别收集流出液，用ＨＰＬＣ法测流出液大黄素有　含量，计算吸附量和吸附率。结果见表２。　表２上样液浓度对吸附量的影响　上样液浓度（ｇ／　０．１３１５　０．０６５８　０．０４４　０．０３２９　ｍＬ）　吸附量（ｍｇ／ｍＬ）　０．３７５７　０．３８９５　０．３５４３　０．３１２７　吸附率（％）　７１．６５　７３．３５　７０．２３　６６．７２　结果表明，在大黄提取液浓度较低时，树脂的吸附能力随　着提取液浓度的降低而降低。当提取液浓度为Ｏ．０６５８￣ｍＬ时，　吸附率最高，所以选择此浓度。　２．３．５泄露曲线的考察”　取２０ｍＬ预处理过的Ｄ１０１树脂吸　附装柱（２０ｃｒｕＸ１．５ｃｍ），以浓度为０．０６５８ｍｇ／ｍＬ大黄溶液进行动　态吸附，分段收集流出液，每份１５ｍＬ，共收集１５份，取样测定流　出液中大黄素的含量。从第５份大黄素开始明显泄露，所以确　定大黄提取液最大上柱体积为６０ｍＬ，即３倍的树脂体积。　２．３．６洗脱剂的选择”　取３份２０ｍＬ预处理过的Ｄ１０１树脂分　别装柱，按上述所确定的吸附条件上样，上样结束后，分别用　１００ｍＬ５０％、７０％、９０％的乙醇洗脱树脂柱，收集洗脱液，取样测　定流出液中大黄素的含量，计算洗脱率；另外将洗脱液回收乙　醇，干燥，称定重量，计算出膏率。　结果表明，在一定范围内，洗脱剂的浓度越高，对大黄素的　洗脱能力越好，出膏率也越大，综合各因素，选用７０％的乙醇为　洗脱剂。　２．３．７洗脱曲线的考察嘲取２０ｍＬ预处理过的ＤＩＯ１树脂装　柱，调节流速为ｌｍＬ／ｍｉｎ，量取６０ｍＬ大黄提取液上样，上样结束　后，用７０％的乙醇洗脱，分段收集流出液，每份２０ｍＬ，共收集ｌ４　份，分别取样测定流出液中大黄素的含量。前４份洗脱液中大　黄素的含量经计算８５％，故确定洗脱体积的用量为４倍的树脂　体积。　２．４验证试验　取３份２０ｍＬ预处理过的Ｄ１０１树脂分别装柱，调节流速为　ｌｍＬ／ｍｉｎ，分别加入６０ｍＬ大黄提取液进行动态吸附，然后用ｌ０　倍量的水洗至近澄清，最后各用８０ｍＬ７０％的乙醇以ｌｍＵｍｉｎ的　流速洗脱。计算Ｄ１０１树脂对大黄蒽醌的吸附量、吸附率、解析　率、浸膏收率。结果见表一３。　表一３验证试验结果　吸附量（ｍｇ／　ＮＯ．　吸附率（％）　洗脱率（％）　出膏率（％）　ｍＬ）　ｌ　０．３７２５　７２．３３　８５．６３　１２．８５　２　０．３８６３　７３．１４　８７．７５　１３．４６　３　０．３９２１　７４．２８　８６．２８　１３．３４　平均值　０．３８３５　７３．２５　８６．５５　ｌ３．２１　ＲＳＤ％　２．６２　１．３４　１．２５　２．４４　从表一３中可以看出，Ｄ１０１树脂分离纯化大黄蒽醌类组分　的方法稳定可行。　３结语　Ｄ－ＩＯ１型大孔吸附树脂是一类苯乙烯型非极性共聚体，适　用范围比较广，对于不带极性或弱极性的有机化合物，吸附能　力强。大黄蒽醌类组分极性较弱，适宜选用此种分离、纯化方　法。本研究中采用Ｄ１０１大孔吸附树脂对大黄蒽醌组分进行分　离与纯化，吸附条件为：上样液浓度为０．０６５８ｇ／ｍＬ，最大上样液　体积为３倍树脂体积，洗脱剂为４倍量树脂体积的７０％的乙　醇。通过树脂的富集纯化的验证性实验，测得总葸醌浸膏收率　为１３．２１％，表明该树脂纯化大黄总蒽醌的工艺可行。　参考文献：　［１］彭成．中药药理学［Ｍ］．北京：中国中医药出版社，２０１２：　１４１．　［２】国家药典委员会・中华人民共和国药典（一部）【Ｍ】．北京：　中国医药科技出版社，２０１０：２２．　【３】魏玉辉，武新安，陈岚等．大黄蒽醌类成分含量测定方法　实验研究［Ｊ］．兰Ｊ，Ｉ１大学报，２００５，３１（１）：１３—１５．　【４］许汉林，陈军，邵继征等．Ｄ３０１大孔吸附树脂分离纯化大　黄总蒽醌的研究【Ｊ】＿中国中药杂志，２００６，３１（１４）：１１６３—１１６５．　［５］朱文涛，徐超群，涂莉等．ｘ一５大孔吸附树脂分离纯化５　种大黄蒽醌的工艺研究『ＪＪ．华西药学杂志，２０１０，２５（６）：７３３—７３５．　【６１徐晶，于艳，王晓蓉等．大孔吸附树脂纯化大黄中５种游　离蒽醌及总葸醌的含量测定ｌＪ］．时珍国医国药，２０１３，２４（４）：　８６２—８６３．　［７】曹云丽，王莉，韩永军等．大孔吸附树脂分离纯化大黄蒽　醌类物质『ＪＪ．平顶山学院报，２０１１，２６（５）：７０—７３．　【８］刘峰群，易毛，刘丽萍等．大孔吸附树脂法纯化大黄中结　合型葸醌总提取物的研究［Ｊ］．中国现代医药杂志，２００６，８（４）：　１０４－１０５．　基金项目：国家自然科学基金青年基金（８１３０３２３１）：陕西省教　育厅２０１４￣－４ｓ４．学研究计划（１４ＪＫ１６２１）　２０１５￣８Ｎ化Ｊ　理１　

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