波纹面方便面微生物检验样品处理程序

微生物样品前处理作业指导书1.目的：为保证微生物样品检测的有效性，必须有合理的方法指导。

2.适用范围：食品（微生物检测）样品的前处理。

3.职责：由微生物操作人员进行微生物检测前的样品前处理。

4.操作步骤：1实验室接到送检样品后应认真核对登记,确保样品的相关信息完整并符合检验要求。

1.1.2实验室应按要求尽快检验。

若不能及时检验，应采取必要的措施保持样品的原有状态，防止样品中目标微生物因客观条件的干扰而发生变化。

1.1.3冷冻食品应在45℃以下不超过15min，或2℃～5℃不超过18h解冻后进行检验。

1.2检验方法的选择1.2.1应选择现行有效的国家标准方法。

1.2.2食品微生物检验方法标准中对同一检验项目有两个及两个以上定性检验方法时，应以常规培养方法为基准方法。

1.2.3食品微生物检验方法标准中对同一检验项目有两个及两个以上定量检验方法时，应以平板计数法为基准方法。

2前处理步骤2.1肉与肉制品检验按GB/T 4789.17-2003执行蛋与蛋制品检验按GB/T 4789.19-2003执行水产食品检验按GB/T 4789.20-2003执行冷冻饮品、饮料检验按GB/T 4789.21-2003执行调味品检验按GB/T 4789.22-2003执行冷食菜、豆制品检验按GB/T 4789.23-2003执行糖果、糕点、蜜饯检验按GB/T 4789.24-2003执行酒类产品前处理按GB 4789.25-2003执行2.2其他产品按GB 4789.1-2016及GB 4789.2-2016中步骤进行样品的稀释2.2.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

2.2.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

食品接触面微生物检验规程1、标准要求●直接接触食品的生产设备设施：菌落总数≤100个/cm2，大肠菌群（MPN /50cm2）：阴性；●员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；菌落总数≤100个/cm2；大肠菌群（MPN/50cm2）：阴性；●生产车间空气落菌：清洁区：≤30cfu/平皿；次清洁区：≤50cfu/平皿；非清洁区：≤100cfu/平皿；●包装卷膜、饼托、吸氧机等内包材；菌落总数≤100个/cm2，大肠菌群（MPN /50cm2）：阴性2、检验方法2.1菌落总数2.1.1：涂抹法适用于直接接触食品的生产设备设施；员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；包装卷膜、饼托、吸氧机等内包材；2.1.2 仪器设备：高压灭菌器、恒温培养箱、天平、试管。

2.1.3试剂及培养基：营养琼脂培养基；生理盐水。

2.1.4操作2.1.4.1样品采集2.1.4.1.1将生理盐水以10ml分装入试管中连同包好的棉签用高压灭菌器灭菌。

2.1.4.1.2将灭菌棉签浸沾生理盐水反复在内包装材料（塑料瓶内壁、复合薄膜袋内表面）、生产器具和人员手部的表面檫拭，面积约为100c㎡，然后将带菌棉签放入有10ml生理盐水的试管中，充分振荡后作原液备用。

2.1.4.2测定：将原液取1ml于平板中，再将灭菌营养琼脂倒入平板内并转动平皿，使混合均匀，待凝固后倒转放入生化培养箱中（36+1）℃培养（48+ 2）h。

2.1.4.3 计数：以菌落计数法计菌落数。

2.1.5 结果计算生产器具和生产人员手部每100 c㎡表面的细菌总数=平皿上菌落的平均数（经过测量，其中成年人的手掌内侧和外测加起来大约刚好为100 c㎡，所以其中生产员手部也可以表示为：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数。

）2.2 自然沉降法适用于生产车间空气落菌2.2.1 仪器与设备：高压灭菌器、恒温培养箱、器皿、天平。

2.2.3 试剂及培养基：营养琼脂培养基、生理盐水。

微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。

本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。

二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。

三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。

2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。

3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。

4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。

5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。

6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。

7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。

四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。

2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。

3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。

4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。

5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。

以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。

微生物检验的基本操作技术一、样品的制备与处理1.样品的选择与采集：根据检验目的和要求，选择适当的样品，并根据采样规范进行取样。

比如，对食品的微生物检验，可以选择不同部位的样品，如表面、内部等；对饮用水的微生物检验，可以选择源头水、管网水等；对环境的微生物检验，可以选择空气、地表水等。

2.样品的保存与运输：为了避免样品中微生物的生长和变化，需要将样品保存在适当的条件下（如低温、暗处等）。

同时，在运输过程中，需要避免样品的污染和损坏。

3.样品的处理：样品处理过程通常包括样品的搅拌、过滤、稀释等。

搅拌可以均匀样品中的微生物分布；过滤可以去除样品中的固体颗粒；稀释可以将样品中微生物的浓度调整到适宜的浓度范围，以便后续的检测操作。

二、微生物的分离与纯化1.微生物培养基的选择：根据待检微生物的特性和对检测结果的要求，选择适当的培养基。

常用的培养基有通用培养基、选择性培养基和特殊培养基。

2.菌落计数：将经过处理的样品按照一定的稀释倍数进行均匀悬浮，并于培养基平板上进行接种。

经过一段时间的培养，可通过菌落的外观、形状、大小、颜色等来初步判断微生物的种类和数量。

3.纯化子菌株：从菌落中选取代表性菌落，通过反复传代培养，最终得到纯种菌株。

三、微生物的鉴定与鉴别1.形态学观察：通过显微镜观察微生物的形态特征，如细胞形状、大小、结构等，可以初步鉴定微生物的类别。

2.生理生化试验：通过微生物的代谢特性进行鉴定。

常用的生理生化试验包括氧需求性试验、酸碱反应试验、温度试验、营养需求试验、代谢产物试验等。

3.分子生物学手段：通过分子生物学技术，如聚合酶链反应（PCR）、DNA序列比对等，对微生物进行进一步的鉴定和鉴别。

例如，利用16SrRNA基因作为分子标志物，可以快速、准确地识别微生物种类。

四、微生物的计数与统计1.液体中微生物的计数：通过在培养基中逐级稀释样品，最后将稀释液接种于平板上，培养一段时间后，根据培养基中菌落的数量进行计数，以反推样品中微生物的浓度。

食品微生物检验操作流程一、样品采集。

咱要做微生物检验，第一步当然是把样品弄到手啦。

这采集样品可是有讲究的。

比如说采集食品的时候，得注意代表性。

不能光挑看起来好的或者坏的，要随机从不同部位采集。

像一整箱苹果，那就得从上面、下面、中间，各个角落都挑几个。

如果是液体的食品，像牛奶之类的，得充分混匀了再取样。

而且采集的工具也要干净无菌的哦，不然就会影响检验结果啦。

要是用个脏兮兮的工具，那结果肯定不准，就像穿了双沾满泥巴的鞋子去参加舞会，格格不入还把场地搞脏啦。

二、样品运输和保存。

采好样品之后，怎么把它送到实验室也是个问题呢。

要尽快送过去，就像送个紧急的包裹一样。

如果不能马上检验，那就要好好保存。

有些微生物在不同的温度和环境下会死掉或者疯狂生长，这可不行。

比如一些需要低温保存的样品，就得赶紧放在冰盒里。

要是没保存好，就好比你精心照顾的小宠物，因为你没给它合适的居住环境，它就生病了，那咱这个检验也就白费功夫了。

三、实验室准备。

到了实验室，那得先把环境准备好。

实验室得干净整洁，各种仪器设备都要先检查检查，看看有没有问题。

比如说显微镜，得保证镜头是干净清晰的，不然就像你戴着一副脏眼镜看东西，模模糊糊啥也看不清。

还有培养箱，温度要调整好，要是温度不对，那些微生物在里面就像住在了一个不舒服的房子里，要么不生长，要么就长得乱七八糟的。

四、样品处理。

样品送到实验室了，可不能直接就检验，得先处理一下。

固体的食品可能要切碎、研磨之类的，把它变成均匀的状态。

这就像把一大块肉切成小块，这样才能让微生物均匀地分布在里面，方便我们检测。

要是处理不好，可能有些微生物就躲在角落里，我们就发现不了它们了。

五、微生物培养。

处理好样品之后，就到了培养微生物的环节啦。

根据不同的微生物种类，我们要选择合适的培养基。

这就像不同的小动物要吃不同的食物一样。

把样品接种到培养基上，然后放在合适的环境下培养。

有的微生物喜欢有氧的环境，那就放在有空气的地方培养；有的微生物喜欢无氧的环境，那就得创造无氧的条件。

1目的建立表面微生物监测标准操作程序，便于更准确的掌握洁净室微生物的负荷情况。

2范围适用于生产区域表面以及设备和与产品接触表面的微生物量的测试，包括人员表面微生物的监测。

3职责QA、QC及生产人员遵照执行。

4内容4.1测试仪器包括培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器，φ55mm培养皿。

4.2测试方法包括接触碟法、擦拭法以及表面冲洗法，每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。

4.2.1接触碟法：适用于平整的规则性表面取样。

培养基充满碟子，取样面积一般约为25cm2。

取样时打开碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，确保琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖。

取样后需用75%酒精擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

4.2.2擦拭法：用于不规则表面（尤其是设备表面）取样。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分，按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2。

在向前移动的同时将其从一边移到另一边。

擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭完后，将棉签在平皿上以取样相同的方式轻轻划过并放入平皿，进行培养。

擦拭方法如图：4.2.3表面冲洗法：适用于监测大面积区域内表面的微生物含菌量，包括设备轨道、储水罐等。

用定量的无菌水冲洗表面，收集淋洗水，用膜过滤法来计算微生物数量。

4.3表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：4.3.1洁净区（室）的大小；4.3.2设备、管路等的复杂程度；4.3.3生产活动的重要性；4.3.4易受污染的部位等。

应至少包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点）、公用介质的管路（不易被清洁/消毒的部位）、生产设备的关键性部位（如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞桶、传输带）等。

食品卫生微生物检验样品的采集和处理食品卫生微生物检验样品的采集和处理食品卫生微生物检验样品的采集和处理一、范围适用于各类食品样品的采样。

二、采样用品灭菌探子、铲子、匙、采样器、试管、吸管、广口瓶、剪子、开罐器等。

三、样品的采集在食品检验中，所采集的样品必须有代表性。

食品中因其加工批号、原料情况（来源、种类、地区、季节等）、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节（例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备）及销售人员的责任心和卫生认识水平等均可影响食品卫生质量，因此必须考虑周密。

1、采样数量每批样品要在容器的不同部位采取，一般定型包装食品采取一袋/瓶（不少于250g）及散装食品采取250g.2、采样方法(1) 采样必须在无菌操作下进行。

(2) 根据样品种类，袋装、瓶装和罐装食品，应采完整的未开封的样品。

如果样品很大，则需要无菌采样器取样；固体粉末样品，应边取边混合；液体样品通过振摇混匀；冷冻食品应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），非冷冻食品需在1℃～5℃中保存。

3、采样标签采样前或后应贴上标签，每件样品必须标记清楚(如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间等)。

四、送检样品送到微生物检验室应越快越好。

如果路途遥远，可将不需冷冻样品保持在1℃～5℃环境中(如冰壶)。

如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内（箱内有干冰可维持在0℃以下）。

送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。

五、检验微生物检验室接到送检申请单，应立即登记，填写实验序号，并按检验要求，立即将样品放在冰箱或冰盒中，积极准备条件进行检验。

各食品微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品。

一般阳性样品，发出报告后3d(特殊情况适当延长)，方能处理样品。

进口食品的阳性样品，需保存6个月，方能处理。

阴性样品可及时处理。

检验完后，检验人员应及时填写原始记录，签名后，送质控办出具检验报告。

方便面中苯并芘的检测解决方案方便面中苯并芘的检测1 适用范围适用于方便面中苯并芘的检测。

2. 方便面调料包2.1 样品提取称取0.4 g样品，精确到0.001 g，用5 mL正己烷溶解稀释，作为上样液待净化。

2.2 SPE柱净化——ProElut BaP 22 g/60 mL(Cat.#：65351)(1)活化：30 mL正己烷，流出液弃去;(2)上样：将待净化液加入小柱，收集流出液;(3)淋洗：50 mL正己烷淋洗，收集流出液，合并步骤(2)、(3)流出液;(4)重新溶解：在30 ℃下减压蒸馏* 将收集液蒸干，乙腈-四氢呋喃( 9 : 1 )溶液定容至1 mL后供HPLC分析。

3方便面面饼3.1 样品提取称取1 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL正己烷。

涡旋混合2 min，超声提取5 min，6000 rpm下离心3 min，收集上清液;残渣再用15 mL正己烷提取，每次涡旋混合2 min，超声提取5 min ，5000 rpm下离心3 min;合并两次提取液;在30 ℃下用减压蒸馏* 将提取液蒸干，然后用5 mL正己烷溶解，待净化。

3.2 SPE柱净化——ProElut BaP 22 g/60 mL(Cat.#：65351)(1)活化：30 mL正己烷，流出液弃去;(2)上样：将待净化液加入小柱，收集流出液;(3)淋洗：70 mL正己烷淋洗，收集流出液，合并步骤(2)、(3)流出液;(4)重新溶解：在40 ℃下减压蒸馏* 将收集的流出液蒸干，然后用乙腈-四氢呋喃( 9 : 1 )溶液定容至1 mL后供HPLC分析。

4 分析条件色谱柱：Diamonsil C18(2) 250 × 4.6 mm，5 μm(Cat.#：99603)流速：1.0 mL/min检测器：*激发波长：370 nm 发射波长：406 nm柱温：30 ℃进样量：10 μL流动相：乙腈：水 = 97：35 添加回收结果5.1食品中苯并(a)芘添加回收结果目标化合物基质添加水平(μg/kg)回收率(%)苯并(α)芘调料包2.592.52方便面1.094.055.2 调料包中苯并(a)芘(添加水平2.5 ng/g)的液相色谱图5.3方便面中苯并（a）芘（添加水平1.0 ng/g）的液相色谱图方便面中苯并芘的测定相关产品信息。

微生物食品检验的一般步骤食品检验的基本步骤为：样品的采集；样品的处理；样品的分析检测；分析结果的记录与处理四个阶段。

⑴样品的采集样品的采集又称采样、样品的制备，是指抽取有一定代表性的样品，供分析化验用。

样品的采集一般包括三个内容：即抽样、取样和制样。

采样时必须注意样品的生产日期、批号、代表性和均匀性。

采样数量应能满足检验项目对试样量的需要，采样容器根据检验项目，选用硬质玻璃瓶或聚乙烯制品。

采样一般步骤为：①原始样的采集；②原始样的混合；③缩分原始样至需要的量。

对于不同的样品应采用不同的方法进行样品的采集。

液体样品的采集：对于大型桶装、罐装的样品，可采用虹吸法分别吸取上、中、下层样品各0.5L，混匀后取0.5~1.0L。

对于大池装样品可在池的四角、中心各上、中、下三层分别采样0.5L，充分混匀后取0.5~1.0L。

固体样品的采集：应充分均匀各部位样品的原始样，以使样品具有均匀性和代表性。

对于大块的样品，应切割成小块或粉碎、过筛、粉碎，过筛时不能有物料的损失和飞溅，并全部过筛，然后将原始样品充分混匀后，采用四分法进行缩分，一直至需要的样品量，一般为0.5~1.0kg。

四分法的操作步骤为：先将样品充分混合后堆积成圆锥形，然后从圆锥的顶部向下压，使样品被压成3cm以内的厚度，然后从样品顶部中心按“十”字型均匀地划分成四部分，取对角的两部分样品混匀，如样品的量达到需要的量即可作为分析用样品。

如样品的量仍大于需要的量，则继续按上述方法进行缩分，一直缩分到样品需要量。

采样后要立即密塞、贴上标签，并认真填写采样记录。

采样记录须写明样品的名称、采样单位、地址、日期、样品批号或编号、采样条件、包装情况、采样数量、检验项目及采样人。

样品应按不同的检验项目妥善包装、保管。

一般样品在检验结束后，应保留一个月，以备需要时复检。

易变质食品不予保留。

保存时应加封并尽量保持原状。

为防止样品在保存中受潮、风干、变质，保证样品的外观和化学组成不发生变化，一般需要冷藏、避光保存。