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实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！食品论坛昨天消毒和灭菌是微生物实验技术中最基本的操作技术，因此从事药品生产、检验的人员均应了解消毒和灭菌的基本概念、两者的关系，各自的应用方法及其意义，操作时应严格执行相关的操作规程，一方面确保生产与检验工作的效果，另一方面也是对自身安全的保护。
消毒和灭菌的概念：1、消毒：指对病原微生物的繁殖体的致死作用，但不能杀死芽孢等全部微生物，因此消毒是不彻底的，不能代替灭菌。
凡用于消毒的化学药品称为消毒剂，因此人们也常称消毒剂为化学消毒剂。
2、灭菌：杀灭物体中所有活的微生物（含芽孢）的作用，灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
通常用物理方法来达到灭菌的目的。
二、消毒和灭菌的关系1、共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传播。
2、区别：消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1.干热灭菌法干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC~150ºC的高热，并保持90~120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一。
在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。
微生物检测中常用的灭菌和消毒方法消毒和灭菌两个词在实际使用中常被混用，其实它们的含义是有所不同的。
消毒是指应用消毒剂等方法杀灭物体表面和内部的病原菌营养体的方法，而灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物，使之呈无菌状态。
物理方法一、温度利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。
高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。
1.干热灭菌法a.灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。
此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。
b.干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。
此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。
2.湿热灭菌法在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。
另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。
a.巴氏消毒法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。
该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。
此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。
b.煮沸消毒法：直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。
若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。
此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。
c.间歇灭菌法：上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。
若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。
具体做法是：将待灭菌的物品加热至100℃，15~30分钟，杀死其中的营养体。
然后冷却，放入37℃恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。
微生物实验室消毒灭菌要求和流程及注意事项微生物实验室是一个高度严谨和敏感的环境，对实验室的消毒灭菌要求十分严格。
这是因为微生物实验室是进行微生物研究和实验的地方，如果实验室内存在细菌或其他微生物的污染，将会对实验结果产生严重的影响。
因此，消毒灭菌是微生物实验室必不可少的环节。
本文将详细介绍微生物实验室消毒灭菌的要求、流程和注意事项。
一、要求1.彻底灭菌：微生物实验室内的所有物品、设备和工作台面都必须进行彻底的灭菌，以杀灭所有可能存在的细菌和其他微生物。
2.防止交叉污染：实验室内的不同区域和工作台面之间要做到完全隔离，以防止不同区域之间的交叉污染。
3.定期检测：实验室内的灭菌设备和方法需要定期检测和验证，以确保其灭菌效果符合要求。
4.合理使用消毒剂：选择合适的消毒剂，并严格按照说明书使用，不得随意更换或混用消毒剂。
5.严格遵守操作规程：所有实验室工作人员都必须严格遵守消毒灭菌的操作规程，不得有任何疏漏和违规行为。
二、流程1.清洁表面：先用清水和洗涤剂对工作台面、器皿和设备进行清洁，将表面的杂质和细菌清除干净。
2.消毒涂布：使用合适的消毒涂布剂对清洁后的表面进行喷洒，确保表面被均匀覆盖。
3.静置时间：让消毒涂布剂在表面停留一定时间，让其发挥充分的杀菌作用。
4.擦拭干净：用纯净水或消毒液擦拭表面，将残留的消毒剂和死菌彻底清除，确保表面干净无菌。
5.验证结果：使用生物指示物或其他灭菌效果验证方法对表面进行检测，确保其灭菌效果符合要求。
6.记录和归档：将每次的消毒灭菌操作记录在案，并进行归档保存，以备日后查阅和追溯。
三、注意事项1.选择合适的消毒剂：不同的表面和设备可能需要使用不同的消毒剂，要选择合适的消毒剂进行消毒处理。
2.避免混用消毒剂：不得将不同种类的消毒剂混合使用，以免产生反应或影响消毒效果。
3.注意消毒涂布剂的浓度和使用方法：严格按照说明书中的浓度和使用方法进行操作，不得随意添加或更改浓度。
4.物品的储存和保存：已经消毒灭菌过的物品要储存到干净无菌的环境中，以免受到二次污染。
微生物的消毒和灭菌技术一、微生物消毒和灭菌的概念消毒:是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。
通常用化学的方法来达到消毒的作用。
用于用于消毒的化学药物叫做消毒剂。
灭菌:是指把物体上所有的微生物(包括细菌芽孢在内全部杀死的方法, 通常用物理方法来达到灭菌的目的。
灭菌方法分为物理灭菌法和化学灭菌法。
防腐:是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
用于防腐的化学药物叫做防腐剂。
无菌:不含活菌的意思,是灭菌的结果。
防止微生物进入机体或物体的操作技术称为无菌操作二、微生物的消毒方法常用的消毒方法有物理法和化学法。
物理法就是用物理方法杀灭或清除病原微生物和其他有害生物,主要有热消毒法、紫外线消毒法、电离辐射法、微波法等。
最常用的物理消毒方法是热消毒法和紫外线消毒法。
热消毒法(煮沸法 :是最简单有效的消毒方法,不需要特殊设备即可进行。
杀灭繁殖型细菌与病毒效果好, 对芽胞作用较小。
煮沸时间一般为 10~30分钟。
金属器械、棉织品、食具、玻璃制品等可用煮沸消毒。
但毛皮、呢绒和塑料制品等不能煮沸消毒。
热消毒法不适用于芽胞污染的消毒紫外线消毒法就是利用紫外线照射使微生物诱变致死, 达到将被服中的有害微生物除掉的目的。
消毒用紫外线灯管有 15W 、 20W 、 30W 等规则。
瓦数代表灯管在 25~40℃时紫外线输出能量。
灯管寿命一般为 3000~4000小时, 超过此时限效果不可靠。
紫外线对一般细菌、病毒均有杀灭作用。
革兰阴性菌最敏感, 其次为革兰阳生菌。
但结核杆菌却有较强抵抗力。
一般紫外线消毒对细菌芽胞无效。
紫外线广泛用于室内空气消毒, 如手术室、烧伤病房、传染病房、实验室等。
灯管距地面约 2.0~2.5m 高。
每 10~15cm 2面积可设 30W 灯管一个,最好每照射 2小时后,间歇 1小时后再照,以免臭氧浓度过高。
灯管用铝制灯罩作反向或侧向照射,可用于有人在的条件下消毒空气。
对污染表面消毒时, 灯管距表面不超过 1m , 灯管周围 1.5~2cm 处为消毒有效范围。
实训二微生物实验常用灭菌和消毒方法一、实验目的1、学习微生物实验常用灭菌消毒方法；2、掌握高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法等常用灭菌方法；3、熟悉灭菌消毒过程中的注意事项。
二、实验原理消毒是指杀灭或清除传播媒介上病原微生物，但不一定杀灭芽孢，使其达到无害化的处理。
灭菌是指杀灭或清除传播媒介上所有微生物，包括芽孢。
灭菌方法通常分为：（1）加热灭菌；（2）过滤除菌；（3）射线灭菌和消毒；（4）化学药剂灭菌和消毒。
以下介绍几种微生物实验常用灭菌消毒方法。
（一）干热灭菌干热灭菌是指利用干热空气杀灭微生物，一般在电烘箱中进行。
由于蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固，干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。
一般须在140℃左右保持恒温3-4h，方能达到灭菌的目的。
干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。
烘箱内装入物品应留有空隙，以利于空气流动，否则箱内受热不均，部分物品灭菌不彻底。
（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是一种湿热灭菌方法，是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热。
由于此时水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌的效果。
一般在121℃灭菌15-30min，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。
在同一温度下，湿热杀菌效果比干热好，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下更易凝固。
高压蒸汽灭菌锅有立式和卧式两种。
各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死，而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。
间歇灭菌就是根据这一原理进行的。
间歇灭菌是保持100℃，30min杀死培养基内杂菌的营养体，然后将含有芽胞和孢子的培养基在温箱内或室温放置24h，使芽孢和孢子萌发为营养体，再用100℃处理30min，再放置24h。
灭菌与消毒的原理与方法随着现代医学与生物科技的发展，灭菌与消毒的重要性越来越被人们所重视。
在医院、实验室、食品生产等领域，必须采取有效的灭菌与消毒措施，以杀死细菌、病毒和真菌等微生物，保障人们的健康与安全。
本文将简要介绍灭菌与消毒的原理、分类及常用方法。
一、灭菌与消毒的原理灭菌和消毒都是为了杀死细菌、病毒和真菌等微生物，防止传染病的发生。
灭菌是彻底杀灭所有微生物的过程，而消毒则是将病原菌的数量降低到安全水平的过程。
灭菌和消毒的原理是相似的，就是通过杀灭或去除微生物的细胞壁、膜、核酸或蛋白质等结构，破坏微生物的生命活动，从而防止其繁殖和传播。
常用的灭菌与消毒方法包括物理方法和化学方法。
二、灭菌与消毒的分类1. 物理消毒方法物理消毒方法主要是利用物理因素如高温、过滤、辐射和低温等，来杀灭或去除微生物。
高温消毒：通常采用干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌通常在160-180°下，使细菌死亡，但较耗时；而湿热灭菌则在蒸汽压力灭菌器中，在121°下灭菌。
这一方法较快，但不适用于某些材料。
过滤消毒：利用特定孔径的过滤膜过滤掉细菌、病毒和真菌。
这种方式可以过滤掉直径大于0.22微米的大部分微生物。
紫外线消毒：利用特定波长的紫外线光线杀灭细菌、病毒和真菌等微生物，是一种比较温和的消毒方法。
2. 化学消毒方法常用的化学消毒剂有氯化物、过氧化物、大环内酯和醇等。
这些化学消毒剂可以杀灭微生物，有效防止病菌的传播，但存在使用安全性和副作用的问题，需要根据实际情况谨慎选择。
三、灭菌与消毒的方法1. 食品灭菌与消毒食品灭菌与消毒主要是为了杀灭或去除食品中的致病微生物，以保证食品的安全和卫生。
高温消毒是常用的灭菌方法。
对于具有抗热性的细菌和孢子，需要高温灭菌。
而利用紫外线消毒和化学消毒剂消毒并不常用于食品。
2. 医疗器械消毒医疗器械的灭菌和消毒具有重要意义，不仅可以防止交叉感染，同时还能保护医护人员和患者的健康。
微生物灭菌方法有哪些
微生物灭菌方法包括以下几种：
1. 高温灭菌：包括煮沸法、蒸汽灭菌法和干热灭菌法。
煮沸法将物体浸入沸水中煮沸一段时间来杀灭微生物。
蒸汽灭菌法使用高压蒸汽来灭菌，常见的蒸汽灭菌设备是压力锅和蒸汽灭菌器。
干热灭菌法通过高温烘烤来灭菌，常用于灭菌器械或耐高温的材料。
2. 化学灭菌：使用化学物质来消灭微生物。
常见的化学灭菌方法包括酒精消毒、酚消毒、氯消毒、过氧化氢（双氧水）消毒等。
不同的化学物质具有不同的杀菌能力和适用范围。
3. 紫外线灭菌：利用紫外线照射来灭菌。
紫外线具有较强的杀菌能力，常用于清洁室、空气净化器等场所的微生物灭菌。
4. 离子辐射灭菌：如γ射线、X射线和电子束辐照，能够穿透物体并破坏细菌和其他微生物的细胞结构，达到灭菌的效果。
常用于灭菌医疗用品、食品等。
5. 过滤灭菌：通过过滤器将微生物从液体或气体中格外，常见的过滤器有微孔膜过滤器和深层过滤器。
过滤灭菌对于瓶装水、药水等液体以及空气中微生物的去除效果较好。
病原微生物实验室的消毒与灭菌消毒和灭菌是保护人员和环境不被病原微生物感染和污染的重要环节。
含有病原微生物的废物必须经过灭菌才能作为普通废物处理；对操作中可能产生的迸溅或泄漏，必须通过消毒达到对病原微生物的杀灭，对操作人员进行保护，对环境保护。
消毒和灭菌的基本常识对于实验室生物安全是至关重要的。
消毒是通过物理或化学手段杀灭或清除病原微生物，但不一定能杀死所有细菌芽孢的方法。
灭菌是杀灭物体上的所有微生物，包括病原性和非病原性微生物、细菌繁殖体和芽孢的一切方法[1]。
消毒与灭菌的方法可分为物理方法和化学方法两大类：①物理消毒灭菌法：包括热力法、射线法和过滤法三种。
超声波、干燥、冷冻也能杀菌抑菌。
热力灭菌法是利用热能去变性蛋白质或核酸、破坏细胞膜或胞膜来实现杀死微生物。
分干热灭菌和湿热灭菌两大类。
②化学消毒灭菌法：消毒剂在常用的浓度下，只对细胞的繁殖体有效，对其芽孢则需要提高消毒剂的浓度和延长作用时间[2]。
1 物理消毒灭菌法1.1热力灭菌法1.1.1干热灭菌法常用的干热灭菌法有：干烤、烧灼、焚烧。
焚烧常用于可废弃的污染物及人或动物的尸体的灭菌；烧灼用于微生物实验室内接种微生物所用器材的灭菌，也可用于外科手术器材的应急处理。
干烤灭菌可用于耐高温的玻璃制品、金属制品、糖瓷制品、油劑等的灭菌。
干烤灭菌是在干烤箱内进行的。
使用烤箱灭菌时，要求器械和用品应洗净、凉干或擦干，物品包装不易过大，粉剂和油剂厚度不宜超过1.3cm，箱内装载物品不宜超过烤箱高度的2/3，物品间应留有空隙。
灭菌时间应从温度升高到要求时算起，一般170℃时需60 min，160℃时需120 min。
1.1.2常用的湿热灭菌方法煮沸、流通蒸汽、低热消毒（巴氏消毒）、间歇灭菌（廷德氏灭菌）、高压蒸汽灭菌等方法。
高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽孢在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。
本实验室使用的是全自动立式高压灭菌器，在103.4KPa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20 min。
微生物检测中常用灭菌和消毒方法
物理方法
温度：
利用温度进行灭菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。
高温可使微生物细胞内的蛋白质和酶类发生变性而失活，从而起灭菌作用，低温通常起抑菌作用。
1.干热灭菌法：
a.灼烧灭菌法：
利用火焰直接把微生物烧死。
此法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品或实验动物的尸体等的灭菌。
b.干热空气灭菌法：
这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。
此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。
2.湿热灭菌法：
在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。
另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而，加速蛋白质变性而迅速死亡。
a.巴氏消毒法：
有些食物会因高温破坏营养成分或影响质量，如，牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风味，又进行了消毒，保证了食品卫生。
该法一般在62℃，30分钟即可达到消毒目的。
此法为法国微生物学家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。
b.煮沸消毒法：
直接将要消毒的物品放入清水中，煮沸15分钟，即可杀死细菌的全部营养和部分芽孢。
若在清水中加入1%碳酸钠或2%的石炭酸，则效果更好。
此法适用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。
c.间歇灭菌法：
上述两种方法在常压下，只能起到消毒作用，而很难做到完全无菌。
若采用间歇灭菌的方法，就能杀灭物品中所有的微生物。
具体做法是：将待灭菌的物品加热至100℃，15～30分钟，杀死其中的营养体。
然后冷却，放入37℃恒温箱中过夜，让残留的芽孢萌发成营养体。
第2天再重复上述步骤，三次左右，就可达到灭菌的目的。
此法不需加压灭菌锅，适于推广，但操作麻烦，所需时间长。
d.加压蒸汽灭菌法：
这是发酵工业、医疗保健、食品检测和微生物学实验室中最常用的一种灭菌方法。
它适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服等物品的灭菌。
加压蒸汽灭菌是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的，以大量蒸汽使其中压力升高。
由于蒸汽压的上升，水的沸点也随之提高。
在蒸汽压达到1.055公斤/厘米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121℃。
在这种情况下，微生物（包括：芽孢）在15～20分钟便会被杀死，而达到灭菌目的，如，灭菌的对象是砂土、石蜡油等面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时间。
在加压蒸汽灭菌中，要引起注意的一个问题是，在恒压之前，一定要排尽灭菌锅中的冷空气，否则表上的蒸汽压与蒸汽温度之间不具对应关系，这样会大大降低灭菌效果。
3.影响灭菌的因素：
a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同。
多数微生物的营养体和病毒在50～65℃，10分钟就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121℃，12分钟才被杀死。
对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。
b.微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。
c.培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。
一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，pH在7附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。
4.灭菌对培养基成分的影响：
a.pH值普遍下降。
b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。
例如,Ca2+与PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。
c.不少培养基颜色加深。
d.体积和浓度有所变化。
e.营养成分有时受到破坏。
辐射
利用辐射进行灭菌消毒，可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点，所以应用越来越广，目前主要应用在以下几个方面：
1）接种室、手术室、食品、药物包装室常应用紫外线杀菌。
2）应用β射线作食品表面杀菌，γ射线用于食品内部杀菌。
经辐射后的食品，因大量微生物被杀灭，再用冷冻保藏，可使保存期延长。
过滤
采用机械方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器。
通过过滤，只让液体培养基从筛子中流下，而把各种微生物菌体留在筛子上面，从而达到除菌的目的。
这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌。
它的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。
但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内，有时会给实验带来一定的麻烦。
化学方法
一般化学药剂无法杀死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以，是起消毒剂的作用，而不是灭菌剂。
能迅速杀灭病原微生物的药物，称为消毒剂。
能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物，称为防腐剂。
但是一种化学药物是杀菌还是抑菌，常不易严格区分。
消毒剂在低浓度时也能杀菌（如，
1：1000硫柳汞）。
由于消毒防腐剂没有选择性，因此，对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以只能用于体表、器械、排泄物和周围环境的消毒。
常用的化学消毒剂有：石碳酸、来苏水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。
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