浅析实验动物房转基因小鼠微生物污染原因及对策

基因工程技术实验设置中常见问题的排查与解决在基因工程技术实验中，为了保证实验结果的准确性和可靠性，必须仔细排查和解决常见问题。

本文将介绍几个常见问题，并提供解决方法。

1. 污染问题污染是基因工程实验中的常见问题，可能影响实验结果。

常见的污染包括外源DNA污染和细菌能力传递污染。

为了排查和解决这些问题，实验室应采取以下措施：a) 设立样品对照和阴性对照，确保实验结果的可靠性。

b) 加强个人卫生意识，使用一次性手套、口罩和实验室服装，定期清洁工作空间和实验器材。

c) 定期检测实验室环境和耗材污染情况。

2. 实验方法问题实验方法的选择和操作正确与否直接关系到实验结果的准确性。

为了避免实验方法问题，需要做到以下几点：a) 熟悉和掌握所使用的实验方法，包括试剂的正确使用和操作步骤的严格遵守。

b) 阅读并理解实验方法的相关文献，尤其是注意已经遇到的问题以及对应的解决方法。

c) 在实验过程中，及时记录实验操作过程、结果和观察情况，以备后续分析。

3. 设备问题实验设备的故障或不正常工作也会对实验结果产生影响。

为了避免这些问题，需要采取以下措施：a) 定期检修设备，保证其正常运行。

如果发现设备故障，及时联系维修人员进行修复。

b) 在实验开始前，对关键设备进行功能性测试，确保其正常工作。

c) 储备备用设备，以备紧急情况使用。

4. 数据处理问题在基因工程实验中，数据处理是非常重要的环节。

为了保证实验结果的可靠性和准确性，需要注意以下几点：a) 严格按照实验设计和数据处理方案进行数据采集和处理。

b) 重复实验，并进行数据统计和分析，以减少随机误差。

c) 对实验结果进行合理解释，并结合相关文献进行结果比对和验证。

5. 生物安全问题基因工程技术涉及对遗传物质的操作，因此需要进行严格的生物安全控制。

为了排查和解决生物安全问题，应采取以下措施：a) 制定并执行严格的实验室安全操作规程，包括废液处理、标识和管理等。

b) 建立并定期更新生物安全操作手册，确保实验人员理解和遵守相关规定。

转基因动物是指通过基因工程技术对动物进行基因的修改和调整，使其具有特定的性状或功能。

转基因动物研究与发展是近年来生物技术领域的热点之一，然而在其发展过程中也存在着一些问题和挑战。

一、伦理道德问题转基因动物的研究和应用涉及到伦理道德问题。

对动物进行基因编辑和调整可能会影响其生理和行为特征，引发动物权益和福利方面的争议。

一些人认为，对动物进行基因改造和实验可能损害动物的生理健康和自然属性，违反了动物的权益和福利。

另一些研究人员和机构则认为，通过转基因技术可以提高动物的生长速度、抗病能力等，有利于改善动物的生存环境和条件。

二、生态环境风险转基因动物的研究和应用可能会对生态环境产生风险。

转基因动物一旦逃逸到自然环境中，可能会影响野生动物的基因结构、种裙数量和分布范围，引发生态平衡和物种多样性方面的问题。

转基因动物的排泄物和尸体也可能对土壤和水源等生态环境产生影响，导致环境污染和生态失衡。

三、安全风险和食品安全问题转基因动物研究和应用存在着一定的安全风险和食品安全问题。

转基因动物的基因编辑和调整可能会产生未知的副作用和风险，对人类健康造成潜在威胁。

另转基因动物的肉制品和副产品可能会影响食品安全，引发公众对农产品安全和食品安全的担忧和抵制。

四、法律监管和规范缺失转基因动物研究和应用在法律监管和规范方面存在着一定的缺失和不足。

目前，我国对转基因动物的相关法律法规尚不完备，对动物基因编辑和调整的监管和管理相对滞后。

转基因动物研究和应用的发展过程中存在一定的法律风险和法律纠纷，需要加强法律监管和规范。

五、公众态度和接受度公众对转基因动物的态度和接受度也是转基因动物研究和发展中的问题之一。

一些公众对转基因动物持怀疑和拒绝态度，担心转基因动物会对环境和人类健康产生负面影响。

科研机构和企业在开展转基因动物研究和应用时需要充分考虑公众意见和需求，加强科普和宣传，提高公众对转基因技术的理解和接受度。

转基因动物研究与发展中存在着一系列的问题和挑战，涉及到伦理道德、生态环境、安全风险、法律规范和公众态度等多个方面。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策摘要：PCR技术已经成为动物疾病检测的重要方法之一，然而，由于试剂、设备以及实验操作等因素的原因，PCR实验室中常常会存在污染现象，这会对PCR检测结果产生重大的影响。

本文主要介绍PCR实验室常见的污染问题及其对策，以期提高PCR检测的准确性和可靠性。

关键词：PCR；实验室；污染；对策一、PCR实验室常见的污染问题1.叉板污染。

在PCR实验的初级放大反应中，管盖内部会被热化，空气会从管盖缝隙中进入反应体系，从而引入外源DNA分子，使PCR反应体系中出现不必要的“叉板”污染。

2.辅助设备污染。

如离心机、手持式均质器、移液器、试剂瓶和移液器架等都会存在洁净度和污染问题。

特别是存在抗生素残留的试剂盒容易产生细菌污染，影响PCR检测结果。

3.PCR产物污染。

PCR产物污染主要是指PCR反应体系中存在外源DNA，如试剂、PCR产物以及PCR操作过程中的污染。

一旦外源DNA进入PCR反应体系中，会扰乱PCR放大反应，导致false positive或false negative结果。

因此，一般情况下，实验室流程分离是非常重要的。

1.建立完善的实验室管理制度。

要求从实验室建设、操作规程、用品消毒等方面入手，从细节把控污染源。

2.请专业的清洁事务公司进入实验室定期清洁和卫生消毒，保持实验室的清洁和洁净度。

3.实验过程中采用无菌技术。

如在采样、制备PCR反应混合液等步骤中要保证使用无菌物品，并在干燥灭菌下操作，百分百排除污染问题。

4.建立实验操作流程分离制度，将不同阶段的实验操作由不同工作人员完成，避免在同一实验室内同时进行制备源DNA和PCR反应等操作，降低交叉感染发生的可能性。

5.配置优质耗材。

实验用器具、管盖、移液器等耗材来源要可靠，使用前要经过充分的消毒，并且尽量使用纯净物品，避免使用重复已知污染的器具和耗材。

6.严格控制DNA扩增过程的负性对照，在PCR反应前和PCR反应后提取DNA进行扩增负性对照，诊断异常污染。

1.饲养环境：小鼠对环境的适应性的自体调节能力和疾病抗御能力较其他实验动物差，而小鼠的品种和品系繁多，各个品种和品系都有自己的特殊要求，因此必须根据实际情况给予一个清洁舒适的生活环境，不同等级的小鼠应生活在相应的设施中。

2.饲料和饮水：小鼠应喂食全价营养颗粒饮料，饮料中应含一定比例的粗纤维，使饲料具有一定硬度以便小鼠磨牙，同时应维持营养万分相对稳定，不同小鼠有不同的营养标准，纯系小鼠和种鼠的饮料所含有的蛋白质万分高于一般小鼠。

小鼠水代谢相当快，应保证足够的饮水，一级动物饮水标准应不低于城市生活饮水的卫生标准，二级动物的饮水必须经过灭菌处理，也可用盐酸将水酸化处理，饮用酸化水，可一定程度上抑制细菌生长。

3.应在鼠笼内添加足够量的新鲜干燥饲料，用饮水瓶给水，保证饮水连续不断，换水里时应清洗水瓶和吸水管。

每周应更换垫料，保证饲养室内外整洁，无尘。

实验动物必须饲喂质量合格的全价饲料。

霉烂、变质、虫蛀、污染的饲料，不得用于饲喂实验动物。

直接用作饲料的蔬菜、水果等，要经过清洗消毒，并保持新鲜。

4.疾病预防：作为实验动物，实验前就健康无病，所以应积极进行疾病预防工作，而一旦发病则失去了作为实验动物的意义。

5.实验动物患病死亡的，应当及时查明原因，妥善处理，并记录在案。

实验动物患有传染性疾病的，必须立即视情况分别予以销毁或者隔离治疗。

对可能被传染的实验动物，进行紧急预防接种，对饲育室内外可能被污染的区域采取严格消毒措施，并报告上级实验动物管理部门和当地动物检疫、卫生防疫单位，采取紧急预防措施，防止疫病蔓延。

6.从事实验动物饲育工作的单位，必须根据遗传学、微生物学、营养学和饲育环境方面的标准，定期对实验动物进行质量监测。

各项作业过程和监测数据应有完整、准确的记录，并建立统计报告制度。

7.用鼠周龄和用鼠性别的严格性：转基因实验要求的供受体都有严格的周龄限制，为了满足实验的要求和有效预防外界病原微生物的感染，最好由本实验室采取自行繁育的供应方式。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病PCR检测实验室是一个非常重要的环节，它可以有效地对动物疫病进行快速准确地检测和诊断。

由于实验室环境的特殊性，存在很多污染因素可能对实验结果产生不良影响。

所以，我们要重视实验室的污染问题，并采取对策，确保动物疫病PCR检测的准确性和可靠性。

一、实验室污染因素分析实验室污染因素是指影响实验结果的一切可能的有害物质或条件。

在动物疫病PCR检测实验室中，主要存在以下几种污染因素：1. 空气污染：实验室中的空气中常常存在尘埃、细菌和病毒等微生物，这些微生物可能会影响PCR检测的结果。

2. 器皿污染：实验器皿和设备的清洁不彻底或反复使用造成的细菌和DNA残留等可能成为污染源。

3. 人员污染：实验人员身上可能携带细菌和病毒，如果不严格执行洗手等卫生措施，将会成为污染源。

4. 样本污染：在采集和处理动物样本时，如果不采取严格的防护措施，可能会出现样本受到外界污染的情况，导致PCR检测的准确性受到影响。

二、实验室污染对实验结果的影响实验室污染可能会对动物疫病PCR检测的结果产生以下几种影响：1. 导致假阳性或假阴性结果的出现，给疾病的诊断带来困难。

2. 降低PCR检测的灵敏度和特异性，使得实验结果不准确。

3. 使得实验的重复性和可重复性降低，影响结果的可靠性。

实验室的污染问题对动物疫病PCR检测的准确性和可靠性产生了严重的影响，因此我们必须采取一系列的对策，减少污染对实验结果的影响。

1. 空气净化和消毒：实验室内应该安装空气净化器，定期对实验室进行空气消毒处理，保持实验室内的空气清洁。

2. 器皿和设备的清洁：实验器皿和设备应该定期清洗、消毒和烘干，确保它们的清洁和无菌。

3. 人员管理：实验室人员应该进行严格的健康监测，确保身体健康才能进行实验操作，实验室人员应该严格执行洗手和穿戴实验服等卫生规定。

5. 实验室环境监测：定期对实验室环境进行监测，包括空气监测、器皿和设备的清洁度检测，以及实验员的卫生状态检测等，确保实验室环境的清洁和无菌。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病PCR检测实验室在进行病原体检测过程中容易出现污染，这可能会导致检测结果不准确，进而影响动物疫情的判断与控制。

为了保证实验室的环境和操作符合规范，降低PCR检测的污染风险，需要采取一系列的对策。

实验室的环境卫生应保持良好。

实验室应该定期进行清洁消毒，确保实验台面、设备、试剂和容器都处于干净的状态。

尤其是PCR试剂和消耗品等易受污染的物品，应妥善保存并定期更换。

空气质量也应受到关注，使用合适的空气过滤系统来减少病原体传播的风险。

实验人员应该接受专业的培训，熟悉PCR检测技术的操作规范。

操作人员应该穿戴适当的防护装备，如实验服、手套和口罩，以减少人员对样品的污染。

实验操作应该遵循严格的无菌操作原则，尽量减少无关的操作步骤，避免引入外源性污染。

样品处理应当细心。

在样品分离和提取过程中，应避免样品的交叉污染，使用单次性的组织研磨器和离心管以减少样品污染的风险。

对于已经提取的核酸样品，要避免反复冻融，以免引入附加的污染。

第四，引物和探针的设计应当合理。

应选择特异性高、不易产生引物二聚体和无特异扩增的引物和探针，以减少PCR反应中的非特异性信号。

引物和探针的制备和使用应遵循规范操作，避免交叉污染。

第五，实验室应建立正样品和负样品的对照系统。

每批样品包括正样品和负样品，正样品是已知含有病原体的样品，负样品是无病原体的样品。

严格控制对照样品，包括引物和探针的批次，可有效减少实验操作带来的污染。

第六，实验室应定期进行质量控制和验证。

包括针对实验室的空白对照、使用纯水作为模板的对照以及正样品的复核等。

这将有助于检测潜在的污染源并排除错误结果。

实验室应建立污染事件的记录和处理制度。

一旦发现实验室的污染事件，应立即采取措施进行清理、消毒，并对受影响的样品进行重测。

同时对涉事人员进行追踪和教育，防止类似事件再次发生。

动物疫病PCR检测实验室的污染是需要高度关注的问题。

通过加强实验室环境卫生、提高实验操作的规范性和设计合理的引物探针，采取全面的质控和验证措施，可以有效降低PCR检测的污染风险，提高检测结果的准确性和可靠性。

培养转基因小鼠的原理转基因小鼠是通过基因工程技术将外源基因导入小鼠体内，使其获得新的遗传特性。

培养转基因小鼠的原理主要包括以下几个步骤：选择目标基因、构建转基因载体、基因转导与定位、筛选转基因小鼠、鉴定转基因小鼠。

首先，在培养转基因小鼠之前要选择目标基因。

目标基因可以是与某种疾病相关的基因、某个特定细胞或组织中的基因、或是其他科学研究中感兴趣的基因。

根据不同的目标基因，可以确定不同的转基因策略。

然后，需要构建转基因载体。

转基因载体是将目标基因插入小鼠的基因组中的工具。

通常使用的载体是质粒或病毒。

在构建转基因载体时，将目标基因与适当的启动子、选择标记基因（如荧光蛋白基因）等组合在一起，形成一个完整的转基因载体。

接下来，进行基因转导与定位。

将构建好的转基因载体导入目标细胞或小鼠胚胎干细胞中。

有多种方法可以实现基因导入，如电穿孔、基因枪、病毒载体介导等。

在导入转基因载体后，通过细胞培养或小鼠胚胎植入等手段，让细胞或胚胎继续生长发育。

然后，需要筛选转基因小鼠。

通常会在小鼠体内引入一个选择标记基因，例如使小鼠表达荧光蛋白。

这样，在鼠标中选定了荧光基因以后，通过观察鼠标的组织片能够很方便的看到转基因的细胞和组织。

同时，通过PCR等技术方法进行基因型鉴定，以确保转基因小鼠具备目标基因的插入。

最后，对转基因小鼠进行进一步鉴定。

通过深入的分子生物学研究技术，如Northern blot、Western blot、RT-PCR等，可以确定转基因小鼠的目标基因是否表达、表达水平以及转基因是否稳定遗传到后代等方面的问题。

此外，还可以通过观察转基因小鼠的生理特征和行为特征，进一步验证转基因小鼠的特性是否符合预期。

在以上步骤中，科学家们需要仔细设计实验、合理选择策略，并利用丰富的分子生物学技术手段进行实验操作和数据分析，以确保培养出的转基因小鼠能够稳定并准确地表达目标基因。

转基因小鼠的培养不仅是基础科学研究的重要手段，还能够在医学研究、药物研发等领域中发挥重要作用。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病是指对动物群体产生致命影响的疾病，如禽流感、猪瘟、口蹄疫等。

为了及时检测和控制动物疫病的传播，动物疫病PCR检测实验室在动物疫病监测和防控工作中扮演着重要的角色。

实验室中的污染问题对检测结果的准确性有着重要影响，因此实验室污染的解决和对策工作至关重要。

一、实验室污染的来源分析1. 实验人员实验人员是实验室内污染的主要来源之一。

由于实验人员在实验室工作时，会接触到样品和试剂等，因此可能会将外部的微生物和污染物带入实验室。

而且在实验过程中可能会存在操作失误导致的污染。

2. 试剂和设备试剂和设备在实验室中使用频繁，而且很多试剂和设备都是开放式的，容易受到外部环境的影响。

试剂和设备本身的质量问题也可能导致实验室的污染。

3. 实验室环境实验室的环境卫生是影响实验室污染的重要因素。

如果实验室的通风不良或者清洁不到位，就容易导致实验室的污染。

二、实验室污染对PCR检测的影响PCR技术是一种高度灵敏的技术，可以在短时间内快速检测出被检测物的存在。

实验室污染会对PCR检测的结果产生干扰，影响检测结果的准确性。

实验室污染会导致样品污染，从而影响PCR检测的准确性。

实验室污染会对试剂和设备产生影响，导致试剂和设备的质量下降，从而影响PCR检测的灵敏度和准确性。

三、解决实验室污染的对策1. 实验室人员管控实验室管理者应加强对实验人员的管控，建立严格的实验室操作规程和规范操作流程，加强实验人员的培训和管理，提高实验人员的工作技能和责任意识，减少操作失误和污染的发生。

2. 试剂和设备的质量管控实验室管理者在采购试剂和设备时应选择正规渠道的供应商，对采购的试剂和设备进行严格的质量检验和管理，确保试剂和设备的质量合格。

3. 实验室环境卫生管理实验室管理者应加强对实验室的环境卫生管理，定期进行实验室的清洁和消毒，保持实验室的通风良好，确保实验室的环境卫生符合要求。

在实验室污染对策的落实过程中，需要实验室管理者和实验人员的共同努力。

关于转基因生物对其他生物及环境的威胁的论文关于转基因生物对其他生物及环境的威胁的论文转基因生物是指应用现代生物技术通过对生物体本身的基因进行修饰, 而获得特异性状的生物。

与许多新技术所面临的情况相同，以转基因生物为代表的基因工程技术也是既有支持者亦有反对者。

就转基因生物对其他生物以及环境的威胁这一问题，支持者认为：①作物育种，改善植物抗逆性，增产并减少杀虫剂和除草剂使用，减少化学药剂对环境的破坏;②用于生物治理，降解环境中的废弃物。

转基因生物的反对者则对以上观点提出以下质疑：①抗虫和抗病转基因植物, 除对害虫和病菌致毒外对环境中的许多有益生物也将产生直接或间接的影响和危害。

②增加目标虫害的抗性。

研究表明, 第三代、第四代害虫已对转基因抗虫作物产生抗性。

因此, 转基因抗虫作物规模种植, 有可能需要喷洒更多的农药, 将会对农田和自然生态环境造成更大的危害。

③杂草化。

转基因植物通过传粉进行基因转移, 可能将一些抗虫、抗病、抗除草剂或对环境胁迫具有耐性的基因转移给野生近缘种或杂草。

如果杂草获得的转基因生物体的抗逆性状, 将会变成超级杂草, 从而严重威胁其他的正常生长和生存。

④用于讲解环境废弃物的微生物流放入环境后，通过基因漂移，容易对其他微生物产生直接或间接的影响，可能会产生人类意想不到的严重后果。

本人觉得转基因生物技术对其他生物以及环境的影响还是不容忽视的，稍不小心犯下错误，就可能带来对我们人类，其他生物乃至地球都无法承受的噩梦，所以我们应该严肃对待！正如核技术一样, 转基因技术既可以造福人类也可以危害人类, 转基因生物作为一个新物种的出现, 一旦释放到自然环境中, 也可能给生物多样性、生态环境和人体健康等带来极大的潜在或现实危害。

比如著名的英国Pusztai事件、美国康奈尔大学斑蝶事件、加拿大超级杂草事件、墨西哥玉米事件和中国B t抗虫棉事件等。

尽管这些事件科学依据不够充分, 存在臆测成分, 但无一不为人类今后在转基因生物的研究和应用中敲响了警钟。

中华商务网讯:中商网讯随着现代生物技术向兽医科学领域的渗透和发展，与疫病防治等有关的转基因技术，进入90年代后更成为发展最为迅速、应用前景最好的前沿之一。

动物用微生物与动物和人类的健康以及生态环境密切相关。

因此，动物用转基因微生物在其研究、开发和尖用中存在的安全性问题，尤其是对人类、动物健康和生态环境的潜在危险性就引起了科学家和公众的高度重视和关心。

搞清禁这些问题，认识到可能存在的风险及其程度，并采取相应的安全管理、防范和控制措施，将有助于兽医生物技术更好地发展。

动物用转基因微生物主要包括动物用转基因活疫苗和动物用转基因活微生物饲料添加剂，其安全性问题主要表现在对人类、动物健康和对生态环境的潜在危害两个方面。

对人类和动物健康的潜在危害动物用转基因微生物对人类、动物健康可能造成何种危害？其严重程度（如症状经重、愈后情况、人群或动物群体免疫力、是否引起流行等）如何？目前的科学水平还难以给予准确的回答。

但是，根据国内外对常规弱毒活疫苗长期应用的经验，结合近年来在转基因微生物安全性方面已经积累的一些试验研究数据，可以将动物用转基因微生物对人类、动物健康的潜在危害性分为以下三个主要方面：致病性动物用转基因微生物对人、动物的致病性主要是指其感染并致人和动物发病的能力，包括毒性、致癌、致畸、致突变、过敏性等。

在转基因工作中，人们对受体微生物、外源基因和标记基因等可以进行有意识和有目的的选择和控制，但基因的多效性和次生效应则有时产生不可预知的变化，使得重组体与供体和受体微生物相比较，可能增加新的致病性，或使原有的致病性增强。

抗药性病原菌对药物的抗性是治疗疾病时经常会遇到的一个问题。

对抗生素类药物的抗性问题尤其突出。

因此，转基因工作所涉及到的微生物、基因及其产品对抗生素和其他主要药物的抗性自然倍受关注。

人们对转基因微生物的抗药性基因可能导致人和动物对抗生素等药物产生抗药性表示担忧，不仅因为相关的转基因微生物可能直接与人和动物接触，还因为转基因微生物或其质粒上携带的抗药性基因有可能通过基因转移而使其它与人类和动物关系更密切的致病性微生物获得该基因，从而引发更大的麻烦。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病PCR检测实验室是用于检测动物疫病的重要场所，它的存在对于动物疾病的检测和预防具有非常重要的意义。

实验室环境的污染问题一直存在着，如果不及时采取有效的对策，将会对实验室的工作产生严重的影响，而且还可能对实验室工作人员和动物健康造成威胁。

对动物疫病PCR检测实验室污染问题的认识和对策的制定至关重要。

1. 空气污染：实验室通常会产生大量的粉尘、细菌、病毒等微生物颗粒，这些颗粒会悬浮在空气中形成空气污染，对实验室的工作环境和动物健康造成威胁。

2. 地面污染：实验室地面可能会受到化学试剂的溅洒，或者动物排泄物的污染影响，导致地面污染的问题。

3. 设备污染：实验室中使用的设备和仪器可能会受到微生物污染，例如PCR仪、离心机等。

4. 人员污染：实验室工作人员长时间在实验室内工作，容易受到环境污染的影响，把外部的污染带入实验室。

以上污染问题如果不及时处理，将会对实验室的工作和动物健康带来严重影响。

1. 空气净化：通过安装空气净化器和通风系统，及时清除实验室内的空气污染，保持室内空气的清新。

2. 地面清洁：定期对实验室地面进行清洁和消毒，防止地面污染的问题。

4. 人员防护：实验室工作人员要做好个人防护，例如佩戴口罩、手套等，避免外部污染物进入实验室。

5. 室温控制：保持实验室的温度和湿度稳定，避免微生物的滋生和繁殖。

6. 定期检测：定期对实验室进行环境检测和微生物检测，及时发现和处理污染问题。

通过以上对策的制定和实施，可以有效解决动物疫病PCR检测实验室的污染问题，保障实验室的工作顺利进行，同时也保障实验室工作人员和动物的健康安全。

在实验室的日常管理中，还需要加强对环境污染的认识，加强实验室管理，加强人员的督导，提高实验员的素质水平，严格执行实验室卫生制度，及时排查隐患，加强清洁消毒，最大限度地减少外部环境对实验室的污染。

实验室还要加强对于环境消毒的技术研究，选择适合的消毒剂和技术，确保对于实验室内的环境进行有效的消毒，最大限度地减少污染对实验结果的影响。

编号：中国农业大学现代远程教育毕业论文（设计）浅析实验动物房转基因小鼠微生物污染原因及对策学生许杰指导教师田纪景专业动物医学层次专升本批次 121学号 W320209121020学习中心上海农林-闵行工作单位中科院神经科学研究所2014年 02 月中国农业大学网络教育学院制独创性声明本人声明所呈交的毕业论文（设计）是我个人进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在毕业论文（设计）中作了明确的说明并表示了谢意。

学生签名：许杰时间：2014年02月24日关于论文（设计）使用授权的说明本人完全了解《中国农业大学网络教育学院本、专科毕业论文（设计）工作条例（暂行规定）》对：“成绩为优秀毕业论文（设计），网络教育学院将有权选取部分论文（设计）全文汇编成集或者在网上公开发布。

如因著作权发生纠纷，由学生本人负责”完全认可，并同意中国农业大学网络教育学院可以以不同方式在不同媒体上发表、传播毕业论文（设计）的全部或部分内容。

中国农业大学网络教育学院有权保留送交论文（设计）的复印件和磁盘，允许论文（设计）被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编论文（设计）。

[保密的毕业论文（设计）在解密后应遵守此协议]学生签名：许杰时间：2014年02月24日密级：（请注明密级及保密期限）摘要本文通过对从业人员素质、动物微生物质量控制、物品传递控制、设施运行维护、饮水质量监测、饲料垫料质量控制等环节进行分析。

旨在研究造成实验动物房转基因小鼠出现微生物污染的可能原因及预防措施。

结果我们发现出现微生物污染的原因最有可能是物品传递、人员不遵守操作规范而导致的。

因此严格控制屏障设施的物品进出并强化从业人员的守规意识是影响设施长期稳定运行的重要因素，将给从事实验动物管理者带来十分重要的指导意义。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策引言PCR是一种常用的生物学技术，广泛应用于动物疫病诊断和监测中。

PCR实验室的污染会严重影响PCR结果的准确性和可靠性，因此对PCR实验室的污染进行管理非常重要。

本文将介绍动物疫病PCR检测实验室的常见污染源和相应的对策，以帮助实验室提高PCR结果的质量。

一、污染源及其对策1. 空气污染空气中的DNA和RNA会影响PCR反应的准确性，空气中的微生物也可能引入外源性DNA 污染。

必须对实验室的空气进行有效的控制。

对策：（1）实验室应设置良好的通风系统，保持空气流动，并定期更换实验室的空气。

（2）在实验室的入口设置尘埃过滤系统，有效过滤空气中的杂质。

（3）实验操作中应保持实验台面的干净，避免灰尘或杂质的落入。

2. 实验仪器和器皿污染实验仪器和器皿的污染可能导致PCR反应的失败和污染。

对策：（1）在使用实验仪器前，应先进行有效的清洁和灭菌处理，避免器皿的污染。

（2）实验结束后，应进行彻底的器皿清洗和清理，以防止污染的传播。

3. 操作人员污染操作人员本身的DNA和RNA会成为PCR反应的污染源，因此操作人员必须采取相应的措施避免和减少污染。

对策：（1）操作人员应戴上手套，避免直接接触样本和试剂，确保手部的干净。

（2）操作人员应定期更换手套，并在操作过程中避免手部的直接接触。

（3）操作人员应经常更换口罩，以防止口腔和鼻腔的微生物污染。

4. 试剂污染试剂的纯度和质量直接影响PCR反应的准确性和可靠性，不合适的试剂可能引入外源性DNA污染。

对策：（1）选用高纯度的试剂，确保试剂中没有外源性DNA污染。

（2）每次使用试剂前，应先进行验证和检测，确保试剂的质量符合要求。

（3）试剂的储存条件和有效期一定要注意，过期的试剂可能会引入污染。

二、实验室管理与监测除了对污染源进行管理之外，实验室管理和监测也是非常重要的环节，以确保实验室的整体环境干净和没有污染。

1. 实验室的清洁实验室的干净是预防和避免PCR污染的重要措施，实验室应定期进行彻底的整理和清洁。

一、Southern杂交问题1：电泳后发现凝胶中DNA扩散，导致结果难以确定，如何解决这一问题？解决方案：（1）在操作上：电泳时隔孔上样，电泳后要对凝胶及时处理使凝胶干燥；（2）琼脂糖的质量应该较好，尤其是不应含有内切酶，否则有时将使低拷贝数基因的杂交结果难以解释。

问题2：传统方法中转膜不完全的问题如何克服？解决方案：经典的向上转移法会使凝胶短时间内变薄,此时即使延长转移时间至24小时以上,也不能使大分子DNA良好地转移出去,因此,转膜不完全。

向下转膜法由于不需在吸水纸上增加重量,凝胶基本不变形；加之吸水纸的吸力与水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的转移,它不需要特殊的仪器,转移速度较快,转移效率高。

利用地高辛标记探针进行Southern 杂交时，对于大于15kb的DNA片断，转膜之前用盐酸进行脱嘌呤可以促进转膜效率, 但脱嘌呤过度可导致分子量相对较小的DNA 被打断成过小的片段而难以和尼龙膜结合。

如果实验转膜过程中同时含有大于15kb的DNA(通常为基因组)和小片段DNA(通常是基因组酶切产物)，那么在转移的过程中倾斜容器，仅使凝胶上半部分浸泡于盐酸，这样既可以提高大片断DNA 的转移效率，又不会打碎小片段DNA。

另外，等采用琼指糖凝胶直接杂交的方法，来解决这一难题：以转基因鼠的检测为例，实验步骤如下：1.转基因鼠的建立：以鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5’调控区指导人G-CSF基因为构件，建立转基因小鼠。

转基因小鼠的检测采用剪取鼠尾DNA做Southern进行鉴定。

2.琼脂糖凝胶直接杂交l)用BanHI(150U)对由假孕鼠产生的仔鼠剪尾提取基因组DNA10μg酶切过液，取少量电泳检查酶切完全后，上样电泳8小时，(2)将电泳槽板连同凝胶置50℃放置3小时，用镊子轻轻揭起凝胶，放于变性液(0.5MNaOH，0.5MNaCl)20分钟，转置中和液(0.5MTrisHCl，0.15MNaCl)20分钟，将胶放于玻璃板上沥干液体，室温放置30分钟。

动物疫病PCR检测实验室的污染与对策动物疫病PCR检测实验室是现代动物卫生监测工作中不可缺少的重要环节。

但是，由于PCR技术的高灵敏度和高特异性，一些微弱污染物质很容易影响PCR反应结果，从而导致误判或假阳性。

因此，保证PCR检测的准确性和可靠性，便需要高度重视实验室内的污染问题，并采取相应的对策。

一、实验室污染的种类实验室污染主要分为两种，一种是外源性污染，另一种是内源性污染。

外源性污染指的是来自实验室外部的细菌、真菌、病毒等微生物和气体、颗粒等污染物，例如操作人员、空气、水源等。

这些污染物质通过实验室的设备、人员、材料等途径进入实验室，容易污染PCR反应体系。

二、实验室污染对PCR结果的影响1、污染物质的DNA或RNA会干扰PCR反应，导致PCR扩增效率低下或PCR产物无法生成。

2、污染物质与目标DNA或RNA结合，产生假阳性反应。

3、在PCR反应过程中，污染物质可能会释放出PCR抑制物质，抑制PCR反应的进行。

为了减少实验室内的污染，需要采取一系列的措施，以下主要介绍一些常见的对策。

1、实验室环境的维护和管理。

要保证实验室的清洁卫生，经常进行空气过滤和通风换气，避免尘埃、细菌等微生物和污染物质的聚集和扩散。

2、实验操作人员的培训。

要求实验室操作人员掌握基本的操作技能、规范操作流程，强化操作规范和操作习惯。

3、实验室设备维护和保养。

定期对PCR设备、仪器、试剂盒、移液器等实验室设备进行维修、保养，确保设备和试剂的质量稳定。

4、实验室材料的消毒和清洁。

要求实验室材料（如移液管、手套、盒子等）进行高温消毒，或使用新的材料，避免交叉污染。

5、空间隔离。

对于特殊的检测项目，如检测高致病性动物病原微生物和配子调查等，应在实验室内建立风压控制、生物安全防护等空间隔离设施。

总结：动物疫病PCR检测实验室的污染问题是与PCR技术的应用策略、工作流程密切相关的一个问题。

通过科学的污染预防和控制，可以有效提高PCR检测的准确性和可靠性，保证检测结果的可靠性。

研究与探讨Y 1602019年3月·下动物疫病PCR检测实验室的污染与对策翟　伟　王秀东　曹凯捷（盘锦检验检测中心（盘锦市疾病预防控制中心），辽宁省 124000）摘 要 随着近年来大规模的集约化养殖，加强了动物之间疾病的传播率和扩散率，因此也受到广泛相关实验室科学家的关注，并发明了PCR检测诊断技术并为检验疫病提供了科学依据。

这种技术操作简单、容易掌握、有极高的灵敏度并且结果可靠，但该方法较强的扩增能力也带来了一些令人头疼的问题，也就是易污染，极其微量的污染可能造成假阳性的产生。

关键词 动物疫病；PCR检测；实验室；污染P CR检测也就是聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术；它可看作是生物体外的特殊DNA的复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。

这种技术被用在动物疫病的检测当中能够将动物的DNA片段无限放大，从而在动物疫病的防治过程中起到很好的效果，未来随着时代的进步实验室的环境会进一步得到改善。

1 引起 PCR污染的原因1.1 PCR试剂的污染引起PCR污染的主要原因之一是PCR 试剂的污染，做实验其基本的实验器材就是试剂，保护好相关的试剂器材，也就是直接减少了在实验中对污染物的接触。

具体表现在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

1.2 样本间的交叉污染引起PCR污染的主要原因之二是样本间的交叉污染，在实验的标本储存的过程中，由于密封方法不当或是密封不够严密导致样本之间进行交互交叉感染，这是其中的原因之一，属于人为存储不当而导致的样本感染。

还有比较重要的原因是来自于客观原因，或者也可以说是有人为所导致的，就是存储的容器被污染，主要是样本的容器外沾有标本而造成的相互交叉感染。

又或者样本核酸模板在人为提取的过程中，由于移液枪的污染而导致样本间的污染等等因素，这些在人为的实验过程中经常会出现，如果要避免的话建议做实验的时候要留心，多注意细节以防样本交叉污染带来的实验结果有误。

动物生产中的微生物污染与控制方法研究动物生产是人类获取食物和其他动物产品的重要方式之一，然而，随之而来的微生物污染问题也日益凸显。

微生物污染不仅对动物的健康和福祉构成威胁，还可能通过食物链传播到人类，对公共卫生造成严重风险。

因此，对动物生产中的微生物污染进行研究，并探索适合的控制方法，显得尤为重要。

一、微生物污染现状分析动物生产中的微生物污染包括细菌、病毒、寄生虫等形式，常常由污染的饲料、水源、环境以及动物自身携带等多种因素导致。

近年来的研究表明，这些微生物对动物的生产性能和健康状况都会产生严重影响，比如导致疾病发生、生长受阻、生产效益下降等。

而且，通过食物链传播到人类后，有些微生物还会引发消化道疾病、肠胃感染等问题。

二、微生物污染的危害1. 对动物的健康微生物污染对动物的健康状况构成直接威胁。

某些细菌和寄生虫可以通过感染或侵袭动物体内，引发各种疾病，甚至导致死亡。

此外，一些微生物通过产生毒素（如细菌产生的毒素），也能对动物的器官和系统造成损害，降低其生产性能。

2. 对公共卫生的威胁动物生产中的微生物污染，一旦通过食物链传播到人类，就会对公共卫生构成潜在的威胁。

比如，食用被污染的肉类和乳制品可能导致食物中毒或各类传染病的发生。

此外，一些微生物还具有耐药性，这会加剧抗生素滥用和耐药菌的扩散，对治疗效果造成严重影响。

三、微生物污染的控制方法为了减少动物生产中的微生物污染，需要综合运用多种控制方法，并根据具体情况进行选择和操作。

1. 饲料和水源的控制饲料和水源作为主要的微生物污染来源，需要采取严格的控制措施。

合理选用优质饲料和无污染的水源，保证其卫生状况，同时注意定期清洁和消毒饲料和水源设备。

此外，饲料加工过程中的卫生管理也需要重视，避免污染的产生和扩散。

2. 动物环境的管理动物生产场所的环境卫生对微生物污染的控制至关重要。

定期对动物圈舍、栏舍、饮水设施等进行清洁和消毒，减少微生物滋生的条件。

建立合理的通风和排污系统，保持适宜的温湿度，减少微生物繁殖和传播。