HPLC测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质(1)
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药分实验（吉林大学）硫酸阿托品注射液的含量测定
硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.熟悉注射剂分析的基本操作技术。
3.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、基本原理在适当pH (5.6)溶液中，有机碱（B）可以与氢离子结合生成阳离子（BH+），酸性染料（HIn）在此pH值下可解离成阴离子（In-），阴离子可与上述阳离子（BH+）定量地结合成有色离子对。
定量的用有机溶剂提取，在420 nm处测定该溶液中有色离子对的吸收度，并与对照品比较，即可计算出有机碱药物的含量。
实验内容1.对照品溶液的制备取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25 mg，精密称定，置25ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液。
每1 ml溶液中含无水硫酸阿托品50 μg。
2. 供试品溶液的制备精密量取硫酸阿托品适量（约相当于硫酸阿托品2.5 mg），至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3. 硫酸阿托品的含量测定精密量取对照品溶液与供试品溶液各2 ml，分别置预先精密加入氯仿10 ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2 ml，振摇提取2 min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水2 ml同法平行操作所得的氯仿液为空白）于420 nm的波长处分别测定吸收度，并将结果与1.027相乘，即得。
本品含硫酸阿托品应为标示量的90.0%~110.0%。
四、说明1. 溴甲酚绿溶液的制备：取溴甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g，加氢氧化钠液（0.2mol/L）5 ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过。
2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇。
比色法测定硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品的含量
硫 酸 阿托 品滴 眼液 是我 市第 三人 民医 院常用 的医 院制 ２ ． ５线性关 系考察 ： 精 密称取硫 酸阿托品对照 品适量 ， 加 水制 剂， 处方成分 为硫酸 阿托 品 、 氯化钠 、 羟苯乙酯 ， 常用于检查 眼 成 浓度分 别约 为 １ ０ 、 ２ ０ 、 ５ ０ 、 ８ Ｏ 、 １ ０ ０ ￣ ｇ ・ ｍ ｌ 。的溶 液 ，摇 匀 ， 按 底及角膜炎等 的治疗 。 原 制剂标准采用 中和法测定其含量 ， 也 “ ２ ． １ ” 项 下方法处理 ， 作为 系列 、 标 准溶液 ， 在４ １ ６ ｎ ｍ波长 处分 曾有 系数倍率 法【 １ ＿ 、 高效液相色谱法［ ２ １ 等报道。本文采用快捷 、 别测定吸光度 。 以标准溶液浓度 ｘ为横 坐标 、 吸光度 Ｙ为纵坐 准确 的比色法对其质量标准进行改 进。 标， 绘制标 准曲线 ， 得回归方程 ： Ｙ硫 ＝ Ｏ ． ０ １ ９ ４ Ｘ ＋ ０ ． ０ ０ ７ ４ ， ｒ ＝ １仪器与试 药 ０ ． ９ ９ ９ ９ （ ｎ ＝ ５ ） 。结果表明 ： 硫酸阿托品在 １ ０ ． ４ ３ ～ １ ４． ０ ３ １ ． ｚ ｇ ・ ｍ ｌ 范 岛津 Ｕ ｖ 一 ２ ４ ０ １ Ｐ Ｃ紫外 一 可见 分光光 度计 ； Ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ａ ９ ２ Ｓ Ｍ一 围内与吸光度线性关系 良好 。 ２ ０ ２ Ａ — Ｄ Ｒ电子分析 天平 。 ２ ． ６精密度试验 ： 取对 照品溶液 ， 在４ １ ６ ｎ ｍ波长 处测 定吸光度 硫酸阿托品对照品（ 批号 ： ０ ０ ４ ０ － ９ １ ０ ９ ， 供含量测定用 ） ， 购自 ５次 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ８ ７ ％。 中国药 品生物制 品检定所 ；硫酸阿托品滴 眼液 （ 批号 ： １ ２ ０ ８ ２ ６ 、 ２ ． ７ 稳定性试验 ： 取 同一供试 品溶液 ， 阴凉密闭放置 ， 在０ 、 ４ 、 ８ 、 １ ２ １ ０ ０ ５ 、 １ ２ １ ２ ２ ４ ） ， 硫酸阿托品含量 ： １ ０ ｍ ｇ ・ ｍ ｌ ， 由洛阳市第 三人 １ ０ 、 １ ２ ｈ测定吸光度 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ０ ３ ％。 表明供试品溶液在阴凉处 民医院制剂室提供 。水为娃 哈哈纯净水 ； 其他试剂为分析纯。 密闭放置 １ ２ ｈ内稳定 。 ２方法与结果 ２ ＿ ８重复性试验 ： 取 同一供试 品 ６份 ， 按“ ２ ． ２ ” 项下方 法制备并 ２ ． １ 对 照品溶液的制备 ：精密称取硫酸阿托 品对 照品适量 ， 加 测定吸光度 ， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ １ ％。 水制成每 ｌ ｍ ｌ 中约含硫酸 阿托 品 ５ ０ ｇ的溶液 ， 置 于预先精 密 ２ ． ９回收率 试验 ：精密 量取供试 品 ６份 ，每份 ５ ｍ ｌ ，分 别置 加入 １ ０ ｍ ｌ 三氯 甲烷 的分液漏斗 ，加 １ ％溴 甲酚绿溶 液 ２ ｍｌ 振 １ ０ ０ ｍｌ 量瓶 中 ，再分别精 密加入相 当于供试 品量 ８ ０ ％、 １ ０ ０ ％、 摇， 静置使分层 ， 取三氯甲烷液 ， 即得 。 １ ２ ０ ％的对照品 ， 加水溶解并稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 滤过。 精密量取 ２ ． ２供试 品溶液 的制备 ： 精 密量取本 品 ５ ｍｌ ， 置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量 瓶 中， 续滤液 ５ ｍ ｌ ， 置 １ ０ ０ ｍ ｌ 量 瓶 中， 用水稀 释至 刻度摇匀 ， 按“ ２ ． １ ” 加 水溶解并稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 滤过 ， 精 密量取续 滤液 ５ ｍ ｌ ， 置 项下 方法处理 ， 在４ １ ６ ｎ ｍ处测定 吸光度 ， 计算含量。平均加样 ５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中， 摇匀 ， 按“ ２ ． １ ” 项下方法处理 ， 即得。 回收率为 ９ ７ ． ８ ３ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 １ ． ０ ２ ％。 ２ ． ３阴性样 品溶液 ：制备不 含硫 酸阿托品的阴性样 品溶 液 ， 按 ２ ． １ ０ 样 品测定 ： 分别取 三批不 同批号 的供试 品各 ２份 ， 按“ ２ ． ２ ” “ ２ ． ２ ” 项下方法 制备 ， 即得。 项 下方法制备 供试 品溶 液 ， 照紫外一 可见 分光光度法 ， 以三氯 ２ ． ４测定波长 的选择 ： 取对照 品溶液 、 供试品溶液 、 阴性样 品溶 甲烷 为空 白， 在４ １ ６ ｎ ｍ波长处分别测定吸光度 ， 计算含量 。结 液， 按紫 外一 可见分光光 度法 ， 分别 在 ３ ０ ０ ～ ５ ５ ０ ｎ ｍ波 长范 围内 果 ， 批号 为 １ ２ ０ ８ ２ ６ 、 １ ２ １ ０ ０ ５ 、 １ ２ １ ２ ２ ４的三批 样品 中硫酸 阿托品 扫描 ， 测得对 照品溶液 、 供试 品溶 液在 ４ １ ６ ｉ ｒ ｍ处有 最大 吸收 ， 的含量分别为 １ ０ ． １ ２ 、 ９ ． ９ ８ 、 １ ０ ． ０ ９ ａ ｒ ｇ ・ ｍｌ ～ 。 而 阴性 样 品溶 液 无 吸 收 。 （ 见图 １ ） ３讨 论
高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量
高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量高武;吴勇【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2016(020)007【摘要】目的：建立一种用 HPLC 法测定硫酸阿托品含量的方法。
方法色谱柱：Agilent Eclipse X DB-C18（250 mm ×4．6 mm，5μm）；流动相：0．05 mol·L －1 KH2 PO4溶液（含庚烷磺酸钠0．0025 mol·L －1）－乙腈（84∶16）（用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至5．0）；检测波长：225 nm；柱温30℃；流速1．0 mL·min－1。
结果硫酸阿托品在2．6425～42．48 mg·L －1范围内与峰面积呈良好的线性关系。
回归方程为 A ＝11938C －13488，r ＝0．9999（n ＝3），回收率为：100．19％，RSD 为1．33％。
结论HPLC 法操作简单，可靠，准确性及重现性好。
【总页数】3页(P1279-1281)【作者】高武;吴勇【作者单位】国药集团精方安徽药业股份有限公司，安徽宣城 242000;马鞍山市食品药品检验中心，安徽马鞍山 243000【正文语种】中文【相关文献】1.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量与含量均匀度 [J], 郑笠2.高效液相色谱法测定神农镇痛膏中硫酸阿托品的含量 [J], 陈晓颙;徐玲;甘曙光;周锐3.高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量 [J], 邓晓玲4.高效液相色谱法测定胃乐胶囊中硫酸阿托品含量 [J], 李德潮5.反高效液相色谱法测定硫酸阿托品注射液的含量 [J], 李启彬;李树立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量
高效液相色谱法测定硫酸阿托品滴眼液的含量作者：袁菊萍范义凤来源：《中国医药导报》2008年第22期[摘要] 目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定硫酸阿托品滴眼液含量的方法。
方法：采用瑞士SPHERIGEL C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)为分析柱，甲醇-0.5%磷酸二氢钾(35∶65)为流动相，检测波长为217 nm，流速为1.0 ml/min。
结果：回归方程为 H=0.916 4C-4.840 (r=0.999 9)，硫酸阿托品在40.0~160.0 μg/m l范围内，浓度与峰高呈良好线性关系，回收率为100.3%，RSD为0.93%。
结论：本方法操作简便，专属性强，结果准确，能有效地控制硫酸阿托品滴眼液的质量。
[关键词] 硫酸阿托品；滴眼液；高效液相色谱法；含量测定[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（a）-033-02Content determination of Atropine Sulfate Eye Drops by HPLCYUAN Ju-ping, FAN Yi-feng(The Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 226001, China)[Abstract] Objective: To determine the content of atropine sulfate in Atropine Sulfate Eye Drops by HPLC. Methods: SPHERIGEL C18(150 mm×4.6 mm,5 μm) was used as column with the detective wavelength of 217 nm,the mobile phase was methanol-0.5%KH2PO4(35∶65) ,and the flow rate was 1.0 ml/min. Results: Caliation curve was linear over the rang of 40.0~160.0 μg/ml ,the regression quation was H=0.916 4C-4.840(r=0.999 9), for potency assay the mean recovery was 100.3%,RSD was 0.93%. Conclusion: The proposed method is simple, selective and accurate. It can be used for quality control of Atropine Sulfate Eye Drops.[Key words] Atropine sulfate; Eye drops; HPLC; Content determination硫酸阿托品滴眼液为我院常用眼科制剂，主要检查眼底及用于治疗角膜溃疡、角膜炎、虹膜睫状体炎。
硫酸阿托品滴眼液的稳定性考察
硫酸阿托品滴眼液的稳定性考察摘要】目的：考察硫酸阿托品滴眼液的稳定性，预测其有效期。
方法：采用HPLC法测定硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品的含量，以初匀速法预测其稳定性。
结果：硫酸阿托品在40.0μg.ml-1-160.0μg.ml-1范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为100.1%，RSD为1.1%。
同时硫酸阿托品滴眼液随温度的升高以及存放时间延长其含量将下降，pH也下降明显，测得25℃时其有效期为8-9个月。
结论：本品室温下存放即可。
【关键词】初匀速法硫酸阿托品滴眼液稳定性【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）07-0123-02Study on Stability of Atropine Sulfate eye Drops【Abstract】objective: To detect stabilization of Atropine Sulfate eye Drops and divine the effective period. Methods：The HPLC was used to detect the content of Atropine Sulfate in Atropine Sulfate eye Drops. Initial average rate method was used in predicting the expiry term. Results：The dimension of Atropine Sulfate for 40.0μg.ml-1-160.0μg.ml-1，the average recovery rate is 100.1%，RSD is 1.10%. The content of Atropine Sulfate and the alteration of pH were linearly reduced with temperature rising. The expiration of Atropine Sulfate was found to be 8-9 month at 25℃. Conclusion：Initial average rate is rapid，convenient and precise ，so it is suitable for stability study of hospital preparations.【Key words】 initial average rate method atropine sulfate eye drops stabilization 硫酸阿托品滴眼液[1]为眼科常用制剂，它是以硫酸阿托品，氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯、注射用水等配制而成。
硫酸阿托品注射液的含量测定
硫酸阿托品注射液的含量测定 (酸性染料比色法)
一、实验目的
掌握酸性染料比色法的基本原理 和操作方法。
二、基本原理： (1）在一定的PH=6.0的介质中，生物阿托品（B）可 与氢离子结合成盐（BH+）。 （2）BH+和酸性染料溴甲酚绿（磺酸酞类指示剂） In-可以定量结合成有色络合物（BH+．In-）又称为 离子对。 （3）此离子对能定量地被有机溶剂提取，提取后的 有色溶液可进行比色测定。
品溶液。
（三）测定法 精密取对照品溶液与供试品溶液各2.0ml， 分别置分液漏斗中，各加溴钾酚绿溶液（取 溴钾酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g， 加0.2mol/L NaOH液6ml使溶解。再加水稀 释至100ml）2ml，摇匀。分别精密加氯仿 10ml，振摇提取后，静置分层，氯仿液用无 水硫酸钠脱水后，移置1cm吸收池中，以水 2ml按同法操作所得的氯仿液作为空白，在 420nm波长处分别测定吸收度。计算，即得。
三、实验内容
（一）对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对 照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀。精密量取l中含硫酸
阿托品50μg）。
（二）供试品溶液的制备
精密取本品适量（约相当于硫酸 阿托品2.5mg），置50ml量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀，作为供试
供试品的百分浓度（μg/ml），
本品应含硫酸阿托品占标示量的百分数为：
本品为硫酸阿托品的灭菌水溶液，含硫酸阿托品 【（C17H23NO3）2H2SO4·H2O】：应为标示量的90.0％～ 110.0％。
一、实验目的
掌握酸性染料比色法的基本原理 和操作方法。
二、基本原理： (1）在一定的PH=6.0的介质中，生物阿托品（B）可 与氢离子结合成盐（BH+）。 （2）BH+和酸性染料溴甲酚绿（磺酸酞类指示剂） In-可以定量结合成有色络合物（BH+．In-）又称为 离子对。 （3）此离子对能定量地被有机溶剂提取，提取后的 有色溶液可进行比色测定。
品溶液。
（三）测定法 精密取对照品溶液与供试品溶液各2.0ml， 分别置分液漏斗中，各加溴钾酚绿溶液（取 溴钾酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g， 加0.2mol/L NaOH液6ml使溶解。再加水稀 释至100ml）2ml，摇匀。分别精密加氯仿 10ml，振摇提取后，静置分层，氯仿液用无 水硫酸钠脱水后，移置1cm吸收池中，以水 2ml按同法操作所得的氯仿液作为空白，在 420nm波长处分别测定吸收度。计算，即得。
三、实验内容
（一）对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对 照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀。精密量取l中含硫酸
阿托品50μg）。
（二）供试品溶液的制备
精密取本品适量（约相当于硫酸 阿托品2.5mg），置50ml量瓶中， 加水稀释至刻度，摇匀，作为供试
供试品的百分浓度（μg/ml），
本品应含硫酸阿托品占标示量的百分数为：
本品为硫酸阿托品的灭菌水溶液，含硫酸阿托品 【（C17H23NO3）2H2SO4·H2O】：应为标示量的90.0％～ 110.0％。
实验六 硫酸阿托品注射液的鉴别与含量测定 实验七 阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
二、实验内容
（一）鉴别 1．原理：
COOH OCOCH3
+
COOH H2O OH
+
CH3COOH
COOH
COO OH +
6
4 Fe 3+
Fe(
O
)2
3
Fe + 12H
紫堇色 2、方法： 数mL 煮沸 （绿豆般大小， 水 △ 本品少许
片粉)
放冷
1d 紫堇色 FeCl3
二、实验内容
（二）含量测定
COOH OCOCH3
实验六 硫酸阿托品注射液的鉴别 与含量测定 一、实验目的
掌握托烷生物碱类的一般鉴别反应的实验 原理。 掌握酸性染料比色法的基本原理和操作方 法。 了解管制药品的实验注意事项。
二、实验内容
（一）鉴别 1、原理: 阿托品为托烷类生物碱，结构中含有酯键 水解→莨菪酸→ 在加热条件下与发烟硝酸 反应→三硝基衍生物（黄色）→ 再与氢氧 化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用→ 醌型产 物（深紫色）。 2、方法： 一支针剂5mg/mL 本品
两步滴定法 Ka= 3.27×10-4 阿司匹林
阿司匹林片组成
稳定剂——酒石酸、枸橼酸 水解产物——水杨酸、醋酸
二、实验内容
（二）含量测定 1．原理（两步滴定）： （1）中和共存酸 （2）水解和滴定
COOH OCOCH3 COONa OCOCH3
COONa OCOCH3 + NaOH
COONa OH + CH3COONa
2NaOH (剩余） H2 SO4 Na2 SO4 2H2O
n阿 =nNaOH n总 nCO n剩余
2
空白试验
4
180.2
高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量与含量均匀度
高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量与含量均匀度
郑笠
【期刊名称】《福建医药杂志》
【年(卷),期】2004(026)005
【摘要】目的采用高效液相色谱法测定硫酸阿托品片中硫酸阿托品的含量.方法采Agilent Hypersil ODS C18(5 μm,150 mm×4.6 mm),磷酸盐缓冲液-乙晴,检测波长210 nm,流动相1 ml/min.结果硫酸阿托品的进样量在0.15～1.5 μg范围内线性良好.回归方程为Y＝3.63958+1180.196X,r＝0.99996.精密度实验(n＝6)的RSD＝0.9%.平均回收率为98.9%(RSD＝0.5%,n＝9).结论本方法简单、快速,结果准确,重现性好.
【总页数】2页(P123-124)
【作者】郑笠
【作者单位】福州市药品检验所,350009
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R975+.7
【相关文献】
1.GC法测定硫酸阿托品片的含量均匀度 [J], 高海;沙振方
2.HPLC法测定硫酸阿托品片的含量及含量均匀度 [J], 吴韶铭;施芬
3.反相高效液相色谱法测定愈创维林那敏片的含量和含量均匀度 [J], 刘慧颖;陈默;孙宽
4.高效液相色谱法测定舒必利片的含量及含量均匀度 [J], 李万平;万莉;钟潇骁
5.高效液相色谱法测定乙酰乌头碱片含量及含量均匀度 [J], 解瑞辉;郭社民;申利平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
0.01%硫酸阿托品滴眼液质量标准研究
0.01%硫酸阿托品滴眼液质量标准研究作者：刘剑闫建坤来源：《中国当代医药》2016年第27期[摘要]目的建立0.01%硫酸阿托品滴眼液的质量标准。
方法采用高效液相色谱法测定处方中硫酸阿托品的含量。
结果硫酸阿托品检测浓度线性范围为10～60 μg/ml（r=0.9999），平均回收率为100.4%（RSD=0.3%，n=9）。
结论采用高效液相色谱法，操作简单、准确可靠、重复性好，可作为0.01%硫酸阿托品滴眼液的质量控制方法。
[关键词]硫酸阿托品；滴眼液；质量标准；高效液相色谱法[中图分类号] R927.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）09（c）-0126-03Quality standard of 0.01% atropine sulfate eye dropsLIU Jian1 YAN Jian-kun21.Drug and Equipment Section，Baotou Chaoju Ophthalmic Hospital of Inner Mongolia Red Cross，Baotou 014060，China；2.Basic section，Medical Insititute of Technology in Baotou City，Baotou 014030，China[Abstract]Objective To establish the quality standard for 0.01% atropine sulfate eyedrops.Methods Atropine sulfate content in the formulation was quantitatively determined by HPLC to metry.Results The linear range of atropine sulfate was l0 to 60 μg/ml（r=0.9999）.The average recovery rate was l00.4%（RSD=0.3%，n=9）.Conclusion By HPLC to metry，this is a easy，precise and repeatable method.It can be used as a quality control for the 0.01% atropine sulfate eye drops.[Key words]Atropine sulfate；Eye drops；Quality standard；HPLC我院在包头市昆都仑区、青山区、东河区开展了青少年眼健康筛查工作，为期80余天，筛查人数共计137 680人。
HPLC法检测膏药中硫酸阿托品含量方法的建立
HPLC法检测膏药中硫酸阿托品含量方法的建立作者：吴春燕张立军张新玥张转平来源：《中国民族民间医药·下半月》2021年第11期【摘要】目的：建立高效液相色譜法检测膏药中硫酸阿托品的含量测定方法，用于市售止痛膏药的药品质量控制。
方法：采用萃取技术处理不同膏药样品，得含量测定分析提取物。
采用HPLC技术，以ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-磷酸盐缓冲液（取6.8 g磷酸二氢钾溶于1000 mL水中，加入10 mL三乙胺，用磷酸调节pH值至2.8）（7∶93）为流动相，流速为1 mL·min-1，检测波长为210 nm，进样体积10 μL，测定不同厂家止痛膏药中硫酸阿托品含量。
结果：建立了止痛膏药中硫酸阿托品含量测定方法，其在0.088 2～0.882 0 μg具有良好的线性，平均回收率为95.73%，不同厂家止痛膏药中硫酸阿托品含量范围为0.06～0.39 mg/100cm2，含量差异很大。
结论：该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，可以用于止痛膏药中硫酸阿托品含量测定及质量控制。
【关键词】止痛膏药;质量控制;硫酸阿托品;高效液相色谱法;含量测定【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）22-0029-05Establishment for Methods of Atropine Sulfate in Acesodyne Plaster by HPLCWU Chunyan1 ZHANG Lijun1 ZHANG Xinyue2 ZHANG Zhuanping1*1. Ankang Inspection and Detection Center of Food and Drug Control， Ankang 725000，China;2.Beijing University of Traditional Chinese Medicine， Beijing 100029，ChinaAbstract：Objective To establish a method for the determination of atropine sulfate in acesodyne plaster by high performance liquid chromatography （HPLC）. Used for quality control of acesodyne plaster.Method Extraction technology was used to extract the atropine sulfate in acesodyne plaster from different production enterprises， HPLC method was developed to determination of atropine sulfate in acesodyne plaster from different production enterprises， and the contents were determined by Phenomenex ODS C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）， with acetonitrile-phosphate buffered salt solution as the mobile phase for isocratic elution （7∶93）， the flow rate was 1 mL.min-1， the detection wavelength was 210 nm，injection volume was 10 μL. Result The common mode for the determination of atropine sulfate in acesodyne plaster was established. A linear range of 0.088 2～0.882 0 μg， the mean recovery 95.73%. The content of atropine sulfate in analgesic plasters from different production enterprises varies greatly， the range of 0.06～0.39 mg/100cm2. Conclusion The method showed to be simple， quick， sensitive， accurate， reproducible and can be used to content determination and control quality of acesodyne plaster from different production enterprises.Keywords：Acesodyne Plaster; Quality Control; Atropine Sulfate; HPLC; Content Determination止痛膏为《中华人民共和国药典》2010、2015、2020年版收载的制剂，主要以止痛流浸膏、水杨酸甲酯、薄荷脑、冰片、芸香浸膏、颠茄浸膏等七味药为原料，另加基质制成膏药。
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取2.2.1项下供试品溶液10 µL进样，测定颗粒中绿 原酸含量。结果表明，咽清颗粒供试液中所含绿原酸 浓度为35.46 µg•mL-1，折合每1 g咽清颗粒中含有绿原 酸0.89 mg。 4 小结
中国药典2005版一部“金银花和山银花”中绿 原酸含量测定项下分别规定“以乙腈-0.4 %磷酸溶 液（13∶87）为流动相”和“以乙腈-0.4 %磷酸溶液 （12∶88）为流动相”。经我们实验发现，使用乙 腈-0.4 %磷酸溶液（13∶87）为流动相时，绿原酸主
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食品与药品 Food and Drug 2009 年第 11 卷第 09期
HPLC测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质
白若琬，朱建东，潘继飞，韩文芳，武利芬
（山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东 济南 250101）
摘 要：目的 建立HPLC测定硫酸阿托品滴眼液的含量和有关物质的方法。方法 采用C18柱，磷酸缓冲液-甲醇（85:15） 为流动相，检测波长206nm。结果 硫酸阿托品浓度在25.98~519.5 µg•mL-1之间与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 99），最低检出限8.25 ng，平均回收率99.71 ％，RSD 0.30 ％。结论 此法准确度、精密度好，可用于测定硫酸阿托品滴 眼液的含量和有关物质。 关键词：HPLC；硫酸阿托品；含量；有关物质 中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2009)09-0028-03
精密称取硫酸阿托品对照品适量，加水溶解并稀 释制成每1 mL中约含100 μg的溶液，摇匀，即得。 2.2 供试品溶液的制备
取硫酸阿托品滴眼液适量，加水稀释制成每1 mL 中约含硫酸阿托品100 μg的溶液，摇匀，即得。 2.3 色谱条件
色谱柱：X-Terra C18，5 μm，3.9 mm×150 mm不 锈钢柱；柱温35 ℃；流速1.0 mL•min-1；流动相：磷酸 缓冲液-甲醇（85:15）为流动相；检测波长：206 nm； 进样量20 µL。
参考文献
[1] 万玉琼，田理. 慢性咽炎的中西医结合治疗进展[J]. 现代中西医 结合杂志，2007，16（8）：1155.
[2] 王天志，李永梅. 金银花的研究进展[J]. 华西药学杂志，2000， 15（4）：292-298.
[3] 刘文英. 药物分析（第5版）[M]. 北京：人民卫生出版社， 2003：80-84.
硫酸阿托品是一种历史较久的抗胆碱药，能阻断 乙酰胆碱对虹膜扩约肌和睫状肌上M受体的作用，从 而使瞳孔散大和睫状肌麻痹。散瞳药和睫状肌麻痹药 是眼科门诊眼底检查和视觉器官屈光功能检查的常规 药物。对调节性内斜视、假性近视及隐性远视患者， 验光时如果不用睫状肌麻痹药，验光结果则不能反应 其真实的屈光状态，常伴有明显误差。用睫状肌麻痹 剂散瞳验光，是正确诊断屈光不正的根本保证，尤其 对不能与医生交流、合作的患者以及屈光参差、屈光 间质混浊的患者更为重要。国内上市制剂为硫酸阿托 品眼膏，收载于中国药典1963年版，含量测定方法为 滴定法。进口产品有硫酸阿托品滴眼液。通过维普数 据库检索，发现几篇HPLC测定硫酸阿托品滴眼液含量 的文章[1-3]，本文所用的色谱条件与文献报道不同，不 仅可以测定硫酸阿托品的含量，还可测定有关物质， 进而全面控制产品质量。 1 仪器、试药及试剂 1.1 仪器
在上述条件下，照高效液相色谱法[4]测定，硫酸阿 托品与杂质获得基线分离，保留时间约为4.5 min。对照 品、供试品及样品高温破坏后测定的HPLC图谱见图1。 2.4 线性关系考察
图1 硫酸阿托品对照品（A）、硫酸阿托品滴眼液（B） 及硫酸阿托品滴眼液高温破坏后样品（C）的HPLC图
精密称取硫酸阿托品对照品103.9 mg，置10 mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量 取0.25，0.50 mL置100 mL量瓶中，0.50，1.0，1.5， 2.0，2.5 mL于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇 匀，备用。分别取上述溶液各20 μL注入液相色谱 仪，记录色谱图及峰面积，得线性回归方程为A = -11856.75+27234.391C，r = 0.999 99，n = 7。硫酸阿托 品浓度在25.98~519.5 µg•mL-1范围内与峰面积呈良好的
2695液相色谱仪、2996PDA检测器、X-Terra C18 5 µm， 3.9 mm×150 mm不锈钢柱（美国Waters公司）。 1.2 试药及试剂
硫酸阿托品对照品、硫酸阿托品滴眼液，由山东 博士伦福瑞达制药有限公司提供。
甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备
表2 样品含量和有关物质测定结果
批号 R1104 R1105 R1106
含量/％ 99.95 99.89 99.82
有关物质/％ 0.63 0.63 0.61
4 讨论 本色谱条件所用色谱柱为常用柱，流动相价廉易
收稿日期：2009-03-25 作者简介：白若琬（1972-），女，山东济南人，高级工程师，从事药物制剂的研究和开发
E-mail：ruowan.bai@，Tel：0531-81213496
表4 回收率测定结果（n = 3）
加入量/mg
0.65 0.66 0.65 0.82 0.83 0.83 0.99 1.00 0.99
分别取对照品溶液和供试品溶液各20 µL注入液相 色谱仪，记录色谱图及峰面积，经计算，平均含量为 100.04 %，RSD=0.14 %，说明本法重复性好，适合作 为含量测定方法。
有关物质检查：配制有关物质测定用1 %对照溶 液（硫酸阿托品浓度为4.8 µg•mL-1），按照含量测定 的色谱条件，连续测定6次，重复性结果良好。 2.8 稳定性试验
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average recovery was 99.71% with RSD of 0.30%. Conclusion With good accuracy and precision, this method can be used for the determination of atropine sulfate and related substances in Atropine Sulfate Eye Drops. Key Words: HPLC; atropine sulfate; content; related substances
Determination of Atropine Sulfate and Related Substances in Atropine Sulfate Eye Drops by HPLC
BAI Ruo-wan, ZHU Jian-dong, PAN Ji-fei, HAN Wen-fang, WU Li-fen (Shandong Bausch & Lomb Freda Pharmaceutical Co., Ltd., Jinan 250101, China) Abstract: Objective To establish a HPLC method for the determination of atropine sulfate and related substances in Atropine Sulfate Eye Drops. Methods A C18 column was used and the mobile phase was phosphate buffer-methanol (85:15). The detection wavelength was 206 nm. Results A linear plot of peak area versus concentration of atropine sulfate was obtained in the range of 25.98~519.5 µg•mL-1 (r=0.999 99). The limit of detection was 8.25 ng. The
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线性关系。 2.5 精密度试验
精密量取酶解后的滴眼液1.0 mL，置100 mபைடு நூலகம்量 瓶中，用水稀释至刻度，取20 μL进样，连续6次， RSD=0.11%。 2.6 检出限的测定
取线性试验1号溶液（25.98 µg•mL-1）0.5 mL，置 10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取3 μL注入液 相色谱仪，记录色谱图，计算最低检出限为8.25 ng。 2.7 重复性试验
峰后出现一小峰，与主峰无法实现基线分离，干扰测 定。使用乙腈-0.4 %磷酸溶液（12∶88）为流动相测 试，绿原酸峰与后面的小峰可实现基线分离，主峰前 后均无干扰。
我们建立了测定咽清颗粒中绿原酸含量的方法， 日内精密度RSD值1.01 %、日间精密度RSD值1.22 %， 稳定性实验RSD值0.72 %，加样回收率97.17 %，均符 合含量测定要求。此方法准确度高，简便易行，可用 于咽清颗粒的质量控制。
测得量/mg
0.66 0.63 0.64 0.80 0.79 0.80 0.94 0.98 0.96
回收率/%
101.5 95.5 98.5 97.6 95.2 96.4 94.9 98.0 97.0
平均回收率/% 98.48±4.24 96.38±1.20 96.64±1.58
RSD/% 1.97
8 121.13
9 121.42
81.46 81.54 81.36 98.77 98.61 97.61 120.87 121.04 120.88
99.89 99.3 99.32 99.65 99.79 99.37 100.17 99.93 99.55
99.7 0.30
取3批样品，按2.2方法配制供试品溶液，精密量 取20 µL进样，按外标法计算含量，按1 %对照峰面积 法计算有关物质，结果见表2。