青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答

青蒿琥酯下调人喉癌细胞所致 T 细胞免疫抑制的体外实验研究杨彦忠;崔澂;马有祥;唐坚;段乃超;任秀敏【摘要】目的：体外实验研究青蒿琥酯（ ART）对人喉癌细胞所致T细胞免疫抑制的影响。

方法制备经ART预处理的人喉癌Hep-2细胞培养上清（ART-S），收集连续2次再培养的上清（分别称为ART-S1、ART-S2），以不经ART作用的Hep-2及其上清作对照；分析对人外周血单个核细胞经光镜观察、噻唑蓝（MTT）法测定的植物血凝素（ PHA）诱导淋巴细胞转化增殖反应，以及流式细胞计数（FCM）法检测的T淋巴细胞表面CD3ε＋、CD3ε＋ζ＋、IL-2Rα＋表达的影响。

结果 Hep-2对5项免疫指标的抑制率分别为（52？．58±6．13）％、（50．34±7．26）％、（45．28±5．38）％、（39．74±5．27）％、（64．25±9．37）％。

ART作用后，可显著下调Hep-2所致T细胞免疫抑制（ P ＜0．01）；第1次再培养后，对淋巴细胞转化、诱导增殖、IL-2Rα表达抑制的逆转均明显降低，与ART-S比较差异有统计学意义（ P ＜0．01），对CD3ε＋及CD3ε＋ζ＋表达抑制的逆转持续增强，与ART-S比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）；第2次再培养后，对淋巴细胞转化、诱导增殖、IL-2Rα表达抑制的逆转继续保持，与ART-S1比较差异无统计学意义（ P＞0．05），对CD3ε＋、CD3ε＋ζ＋表达抑制的逆转明显下降回复至 ART-S水平，差异无统计学意义（ P ＞0．05）。

结论人喉癌Hep-2细胞可产生T细胞免疫抑制作用，ART可对其产生稳定的逆转作用。

下调肿瘤免疫抑制是ART的重要抗瘤机制之一。

%Objective To investigate the effects of Artesunate ( ART ) on T lymphocytes ’ immunosuppression in human laryngocarcinoma cells in vitro .Met hods The supernatants from Hep-2 ( human laryngocarcinomacell line ) were pretreated with ART ( ART-S) ,then the supernatants cultured for the first time and the second time were collected ( ART-S1 and ART-S2,respectively),and the corresponding supernatants and Hep-2 without ART treatment were served as control group.The effects of different supernatants on immune parameters in human peripheral blood mononuclear cells were analyzed , including the lymphocytes proliferation induced by phytohemagglutinin (PHA),which was detected by MTT and microscope observation,and expressions of CD3ε+,CD3ε+ζ+and IL-2Rα+were measured by flow cytometry (FCM).Results The inhibitory rates of five immune parameters caused by Hep -2 cellswere52.58%±6.13%,50.34%±7.26%,45.28%±5.38%,39.74%±5.27%,64.25%±9.37%,respectively.After pretreated with ART,the inhibition effects caused by Hep-2 were significantly decreased ( P <0.01 ).After the first culture, the reversing effect on the inhibition of lymphocytes transformation,induced proliferation and the expression of IL-2Rα+were significantly decreased in ART-S1 group, as compared with those in ART-S group ( P <0.01),and the reversing effects on the inhibition of CD3ε+and CD3ε+ζ+expressions were obviously kept,as compared with those in ART-S group ( P <0.05).After the second culture,there were no significant differences in , reversing effects on the inhibition of lymphocytes transformation , induced proliferation and the expression of IL-2Rα+between ART-S2 group and ART-S1 group ( P >0.05),nor were the reversing effects on the inhibition of CD3ε+and CD3ε+ζ+expressions between ART-S2 group and ART-S1 group ( P >0.05).Conclusion Humanlaryngocarcinoma Hep-2 cells have T lymphocytes immunosuppression effects .However Artesunate can steadily reversethe immunosuppression effects.Down-regulating tumor immunosuppression effect may be one of important anti -tumor actionmechanisms of Artesunate.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】5页(P972-976)【关键词】青蒿琥酯;喉癌;Hep-2细胞;T淋巴细胞;免疫抑制;逆转【作者】杨彦忠;崔澂;马有祥;唐坚;段乃超;任秀敏【作者单位】050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科;中国人民解放军白求恩医务士官学校医学技术系;首都医科大学附属北京友谊医院耳鼻咽喉头颈外科;中国人民解放军白求恩医务士官学校医学技术系;050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科;050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科【正文语种】中文【中图分类】R285.5E-mail:*********************喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，近年来发病率有明显增长的趋势［1］。

青蒿琥酯影响L 929和Colon 26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究崔澄;胡建军;张拥军;李保红;王润田;刘景东;佟慧【期刊名称】《白求恩军医学院学报》【年(卷),期】2006(004)003【摘要】目的研究青蒿琥酯对L 929和Colon 26肿瘤细胞培养上清免疫抑制作用的影响.方法制备体外经青蒿琥酯作用后,彻底洗去青蒿琥酯,再以新鲜培养液培养L 929及Colon 26,收取再培养上清,同时以不经青蒿琥酯作用的L 929及Colon 26同步处理的相应上清作对照.实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化,以及流式细胞计数分析的CD 4+及CD 8+表达的影响.结果与对照组上清相比,青蒿琥酯作用L 929和Colon 26后,其第一次(A-L 1、A-C 1)及第二次48 h再培养上清(A-L 2、A-C 2)对Con A诱导小鼠脾细胞转化的抑制率均明显降低(分别为37.50%±6.58%,P＜0.01;27.83%±5.50%,P＜0.05;48.71%±3.52%,P＜0.01;5.48%±1.22%,P＜0.01);CD 4+CD 8-细胞表达百分率均明显升高(分别为15.30%±3.51%,P＜0.01;27.68%±2.78%,P＜0.05;10.69%±3.42%,P＜0.01;28.02%±1.08%,P＜0.01);A-L 1、A-L 2及A-C 1上清作用后,NK杀伤活性均明显升高(杀伤率分别为67.58%±4.83%,P＜0.01;66.14%±4.10%,P＜0.01;57.21%±3.38%,P＜0.05),A-C 2对NK杀伤未产生明显改变(杀伤率为45.42%±8.98%,P＞0.05).结论青蒿琥酯可下调L 929及Colon 26肿瘤细胞培养上清的免疫抑制,下调肿瘤免疫抑制可能是青蒿琥酯的抗肿瘤新机制之一.【总页数】3页(P129-131)【作者】崔澄;胡建军;张拥军;李保红;王润田;刘景东;佟慧【作者单位】050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050017,石家庄,河北医科大学基础所免疫室;050081,石家庄,白求恩军医学院;050017,石家庄,河北医科大学基础所免疫室【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.氧化苦参碱对L929肿瘤细胞免疫抑制作用的影响 [J], 刘欣燕;王润田;崔潋;王智华;佟慧;邓郁青;张征峥2.川芎嗪下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究 [J], 崔澂;王润田;张宇辉;支国成;王智华;邓郁青;张征峥3.青蒿琥酯逆转L929肿瘤细胞的免疫抑制作用 [J], 刘欣燕;王润田;崔澂;王智华;佟慧;邓郁青;张征峥4.氧化苦参碱下调小鼠Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外实验 [J], 崔澂;王润田;佟慧;王智华;邓郁青5.青蒿琥酯、苦参素对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的影响 [J], 崔澂;王润田;佟慧;王智华;丁军颖;张征峥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡的分子机制研究【摘要】目的研究青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(HELF)系 HFL-I细胞株体外生长的影响，为青蒿琥酯抗纤维化提供实验依据。

方法采用CCK-8法检测青蒿琥酯对体外培养的HFL-I细胞的生长抑制作用，用流式细胞术测定细胞凋亡率; RT-PCR 法测定Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达。

结果青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制HFL-I细胞增殖，HFL-I细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.01)，Bcl-2 mRNA的表达显著低于对照组，Bax mRNA的表达显著高于对照组。

结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用，可能机制为通过下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖，促进HFL-I细胞凋亡。

【关键词】青蒿琥酯; 人胚肺成纤维细胞; 增殖; 凋亡; Bax; Bcl-2肺纤维化是多种病因引起的一种慢性炎性间质性肺疾病，患者平均生存时间一般不超过3年，目前尚无有效治疗方法。

近年研究发现，青蒿素类药物除可抗疟疾外，亦具有抗肿瘤、抗感染及抗纤维化等作用。

2009-06～2009-11，我们观察了青蒿素衍生物青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast，HELF)系 HFL-I细胞增殖、凋亡的影响及机制，旨在为临床治疗肺纤维化提供理论依据。

1 材料HFL-I细胞株(中国科学院细胞库提供)，青蒿琥酯(分析纯，纯度>99% ，广西桂林南药公司产品，批号ZA080203)，CCK-8试剂，二甲基亚砜(DMSO)，碘化丙啶(PI)，D-MEM/F-12培养基，FBS，胰酶;RNA提取试剂Trizol，反转录试剂盒PrimeScript TMRT reagent Kit，PCR试剂盒Premix PrimeSTAR HS，引物由上海生物工程有限公司合成。

2 方法2.1 HFL-I细胞培养取 HFL-I细胞株，用含10% FBS、1×105U/L青霉素及100 mg/L链霉素的D-MEM/F-12培养液培养，37℃、5% CO2培养箱培养，3 d换液1次，5～6d传代1次。

青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡的研究
李颖;李英;崔新;徐功立
【期刊名称】《临床血液学杂志》
【年(卷),期】2005(18)5
【摘要】目的:研究青蒿琥酯体外诱导U937细胞凋亡及其过程中细胞内游离钙的变化。

方法:采用光镜、透射电镜技术、DNA片段化电泳、流式细胞术对青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡进行了观察,并应用激光共聚焦显微镜技术检测凋亡过程中细胞内游离钙浓度的变化。

结果:6.250mg/L的青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡,作用于细胞后30min,Ca2+浓度即明显升高,1h达高峰,48h仍维持在较高水平。

结论:青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡,细胞胞质内Ca2+是青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡信号传导过程中重要的信号分子。

【总页数】3页(P287-289)
【关键词】U937细胞系;青蒿琥酯;细胞凋亡;钙
【作者】李颖;李英;崔新;徐功立
【作者单位】山东省立医院血液科
【正文语种】中文
【中图分类】R329.2;R978.61
【相关文献】
1.抗人DR5单克隆抗体诱导Jurkat和U937细胞凋亡作用的研究 [J], 王靖;丁春生;韩大正
2.熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究 [J], 潘莉萍;袁伟;郭静明
3.线粒体凋亡途径在槲皮素诱导U937细胞凋亡中的作用研究 [J], 朱玲玲;赵捷平;窦勤玲;张景利
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青蒿琥酯免疫调节作用的研究进展
胡俊平;李燕
【期刊名称】《河南中医》
【年(卷),期】2007(27)11
【总页数】2页(P85-86)
【关键词】青蒿琥酯;免疫调节;免疫细胞;细胞因子;免疫球蛋白;补体;酶
【作者】胡俊平;李燕
【作者单位】成都中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.青蒿琥酯抗病原微生物及免疫学研究进展 [J], 杜志峰;李振彬
2.青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫调节作用 [J], 张新欣;李晓丽;庄珊;刘深;李秀华;李衍滨
3.青蒿琥酯对迟发型超敏反应小鼠脾脏T淋巴细胞的免疫调节作用 [J], 李覃;陈虹;白淑芳;韦娜;张实
4.青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒感染中国恒河猴模型T淋巴细胞活化的调节作用 [J], 陈剑涛;熊思艺;林子峰;李钱锋;唐琴;符林春
5.青蒿琥酯对狼疮性肾炎患者免疫功能调节作用的临床研究 [J], 黄雪霞
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【关键字】精品青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答作者：郑智茵，王建峰，胡致平，沈建平，高瑞兰，叶宝东，林圣云，沈一平【摘要】本研究探讨凋亡白血病细胞负载的树突状细胞（dendritic cells, DC）能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞反应。

用青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡, 从正常人外周血单个核细胞诱生DC，将凋亡U937细胞负载DC, 并添加TNFα诱导DC老练, 然后与自体T淋巴细胞共育,并联合 IL2以诱生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）；应用流式细胞术分析DC和T 细胞免疫表型, 采用Dextran FITC内吞试验检测DC的抗原摄取能力；用ELISA法检测IL12p70的产生；采用MTT法检测凋亡U937细胞负载及未负载DC诱导的自体T淋巴细胞对不同的靶细胞（U937细胞和NB4细胞）的杀伤效应。

结果表明：青蒿琥酯1 μg/ml作用于U937细胞48小时后, U937细胞的凋亡率达51.52%, DC在未老练阶段时吞噬Dextran FITC 的能力最强，负载凋亡U937细胞之后并不能促使未老练DC（iDC）分化为老练DC（mDC）。

凋亡U937细胞负载后的iDC在TNFα的作用下能够成为mDC。

与未负载的mDC相比, 凋亡U937细胞负载后的mDC（mDC ApoU937）分泌IL12p70水平明显增高, 而且由其所激发和扩增的T细胞以CD8+的T细胞为主。

细胞毒性实验显示: mDC ApoU937诱导的T细胞的对U937细胞的杀伤显著超过对NB4细胞的杀伤。

结论： mDC ApoU937能有效地诱导特异性抗白血病效应。

【关键词】白血病Immune Response of Dendritic Cells Capturing Antigens from Apoptotic U937 Cells Induced by ArtesunateAbstract The objective of study was to investigate whether U937 cells loaded dendritic cells (DCs) could induce anti leukemic immune activity. The apoptosis of U937 cells was induced by artesunate(ART). DCs derived from peripheral blood mononuclear cells of health donors were loaded with apoptotic U937 cells, and induced to maturation in the presence of TNFα. Matured DCs were cocultured with autologous T lymphocytes, and combined with IL 2 in order to induce the leukemia specific CTL. The phenotypes of DCs and T lymphocytes were tested by flow cytometry. The ability of DC capturing antigens was measured by Dextran FITC endocytosis. The IL12p70 level was assayed by ELISA kit. The proliferation of CTL and CTL activity were measured by MTT assay. The results showed that the apoptotic rate of the U937 cells was 51.2% when U937 cells were induced by 1 μg/ml ART for 48 hours in vitro. DCs had the most powerful ability of endocytosis in its immature phase. Apoptotic U937 cells could not induce the features of DC maturation, and apoptotic U937 cell pulsed immature DCs could be matured with TNFα. The IL12p70 level secreded by apoptotic U937 cell loaded mature DCs（mDC ApoU937） was higher than that of non loaded mDC. The proliferation of autologous T lymphocytes co cultured with mDC ApoU937 was significantly remarkable and the content of CD8+ CTL was significantly higher in comparison with any other groups. CTL induced by mDC ApoU937 had stronger killing effect on U937 cells than NB4（p&lt;0.01）. It is concluded that the mDC ApoU937 can effectively generate T cell mediated青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突细胞后的免疫应答目前, 以树突状细胞（DC）为基础的免疫瘤苗已在淋巴瘤、黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的临床治疗中获得明显疗效, 但针对急性白血病的治疗尚处于探索阶段。

青蒿琥酯对急性肺损伤的保护作用摘要：青蒿琥酯（Artesunate）为抗疟疾首选药物，近年来其抗炎功效逐渐受到重视，其可以通过TLR4--NF-κB信号通路和PPAR-γ相关信号通路降低炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6等，起到抗炎的效果。

本文探讨青蒿琥酯在由于炎症因子失调所引起的急性肺损伤（ALI）中可能存在的保护作用，旨在为老药新用提供新的思路。

关键词：青蒿琥酯；急性肺损伤；信号通路急性肺损伤(Acute Lung Injury，ALI)是造成临床上急性呼吸窘迫症(Acute Respiratory Distress Syndrome，ARDS)的原因。

由于其诱发因素复杂、发病率较高且危害性较大的疾病，中国上海市15家成人ICU 2001年3月至2002年3月ARDS病死率也高达68.5%，临床上尚无根治此病的方法。

青蒿琥酯为1972年我国科研人员首次从菊科植物黄花蒿中分离得到的青蒿素的衍生物，有着良好的抗疟疾活性。

目前,青蒿琥酯毒性低,抗疟疾作用强,已替代了传统抗疟药喹啉治疗疟疾的地位,被WTO批准为在世界范围内治疗脑型疟疾和恶性疟疾的首选药物。

【1】近年，发现青蒿琥酯在免疫抑制、通过非半胱天冬氨酸途径诱导细胞凋亡、减轻高脂血症和免疫抑制及抗炎症反应方面都有一定的效果。

本文就青蒿琥酯在抗炎的方面探讨其在急性肺损伤中的保护作用。

为老药新用提供新的思路。

1急性肺损伤的发病机理肺泡毛细血管膜是由两层独立的细胞构成——毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞。

在ALI中，这层屏障的完整性由于上皮还是两者同时的损伤而被破坏。

这种破坏在急性期的后果包括血管通透性增加、肺泡充盈、失去扩散能力和广泛的由Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤导致的变态反应。

虽然目前ALI的细胞和分子机制仍在被广泛的探讨，但是最近的研究成果表明，肺部的损伤是由于促炎因子和抗炎因子的协调不平衡导致的。

中性粒细胞中性粒细胞被认为在ARDS的发病中起了重要作用。

中药在诱导肿瘤细胞凋亡方面的机制研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目前研究表明，肿瘤的发生不仅与细胞增殖速度有关，也与过剩的细胞不能清除到体外直接有关。

因此应用药物促使肿瘤启动细胞凋亡程序，就成为抗肿瘤治疗的一个有意义与希望的研究领域。

目前中医药抗肿瘤机制的研究热点之一就是中药诱导细胞凋亡。

初步了解其相关机制，能为进一步研究打下基础。

【关键词】凋亡；中药；肿瘤Abstract：The current study shows that the incidence of cancer not only dues to the speed of cell proliferation, but also is related to the speed of removing excess cells in tissues. Therefore a meaningful and hopeful field of anti-tumor treatment study is applying medicine to start the tumor cell apoptosis process. At present,one hot point about anti-tumor mechanism of TCM is to induce tumor cell apoptosis. A preliminary understanding of the relevant mechanisms can provide fundamentation for further study.Key words：Apoptosis; Traditional Chinese medicine; Tumor细胞凋亡(apoptosis)又称细胞程序性死亡，是一个多因素参与的生理过程，涉及到免疫应答、基因调控、信号传导等多种过程。