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O型口蹄疫病毒基因组测序与分析

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一
２ ８一
江苏农业科 学 ２ ０ １ ３年第 ４ １ 卷第 １ ２期
陈思敏 ， 王琳 萱， 张 印红 ， 等． ０型 口蹄疫病毒基 因组测序 与分析［ Ｊ ］ ．江苏农业科学 ， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ １ ２ ） ： ２ ８ — ３ ２
０型 口蹄疫病毒基 因组测序与分 析
陈思敏 ，王琳 萱 ，张 印红 ，刁贺军 ，梁淑 兰 ， 任 丽 杰 ，张秀 萍
（ １ ． 兰州大学公共卫生学院 ， 甘肃兰州 ７ ３ ０ ０ ０ ０ ； ２ ． 辽宁省朝阳市动物疫病 预防控制 中心 ， 辽宁朝 阳 １ ２ ２ ０ ０ ０ ；
３ ． 辽宁省朝 阳市龙城 区动物疫病预防控制 中心 ， 辽宁朝阳 １ ２ ２ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 为明了 ０型口蹄疫病 毒基 因组 的结构 特征及 其 变异 与结 构 、 功 能 的关 系 ， 以及 系统 发生 关系 ， 利用 Ｄ Ｎ Ａ Ｓ ｔ ａ ｒ 程序进行 了 ０型 口蹄疫病毒基因组序列 同源性分析 、 多重排 比。结果表 明 ， ０型 口蹄疫 毒株 （ Ｏ ／ Ｃ ＨＡ ／ ９ ９ ） 基 因组 Ｏ Ｒ Ｆ大小 为 ６ ９ ９ ９ ｎ ｔ ， 编码 ２ ３ ３ ２个氨基酸 （ ａ ａ ） 的多聚蛋白 ； 口蹄疫病毒 Ｒ Ｎ Ａ的保守性 、 变异性 及其遗传变异 ， 对理解 ０型 口蹄疫病毒的感染 、 宿 主范围和传播 有重要作 用。 关键 词 ： 口蹄疫病毒 ； ０型 ； 变异分析 ； 基因组 ； 测 序
（ ｆ ｏ ｏ ｔ —ａ ｎ ｄ ｍ ｏ ｕ ｔ ｈ—ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｆ ＭＤ Ｖ） 在偶蹄类动物身上引 起 的一种急性 、 高度 传染性疾病 ， 其病 原属于小 Ｒ Ｎ Ａ病 毒科
区的 ９ ３～１ ０ ２密 码 子 缺 失 造 成 口蹄 疫 在 台湾 灾 难 性 暴 发 。Ｏ ／ Ａ Ｓ ／ ｓ Ｋ Ｒ ／ ２ ０ ｏ ２是泛 亚血清型 的 １种 ， 包含 １个完
口蹄疫病毒 属。交叉保护和血清学试验确证 口蹄疫病毒有 ７
个血清型 ： Ａ、 Ｏ 、 Ｃ（ 欧洲型 ） 、 Ａ ｓ ｉ ａ ｌ （ 亚 洲 １型 ） 、 Ｓ Ａ Ｔ １ 、 Ｓ Ａ Ｔ ２ 、 Ｓ Ａ Ｔ ３ （ 南 非型） 。Ｆ ＭＤ Ｖ基 因组为正向 、 单链 Ｒ Ｎ Ａ， 由８ ０ ０ ０个 核苷酸（ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ ｔ ｉ ｄ ｅ ｓ ， ｎ ｔ ） 构成 ， 包括 ５ 非编码 区（ ５ ｕ ｎ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ， ５ Ｕ Ｔ Ｒ） 、 ３ 非编码 区（ ３ ｕ ｎ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ， ３ Ｕ Ｔ Ｒ） 和 １个大的开放 阅读框 （ ｏ ｐ ｅ ｎ ｒ ｅ ａ ｄ ｉ ｎ ｇ ｆ ｒ ａ ｍ ｅ ， Ｏ Ｒ Ｆ） 。５ Ｕ Ｔ Ｒ 由１ 个 短的 Ｓ片段 、 １个 多 Ｃ碱基 片段 （ ９ ０ ％） 和 １个 长的 Ｌ 片段构成 ， Ｌ片段包含 ３～ ４个重复 的假结 （ ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｋ ｎ ｏ ｔ ， Ｐ Ｋ ｓ ） 、
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ５ ． ３ 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ： １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） １ ２— ０ ０ ２ ８— ０ ４
口蹄疫 （ ｆ ｏ ｏ ｔ —ａ ｎ ｄ—ｍ ｏ ｕ ｔ ｈ ｉ ｆ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ， Ｆ ＭＤ） 是 口蹄疫 病 毒
整的 ３ Ａ 编码 区 ， 使 其 对 猪具 有 高 致 病 性 ， 但 对 牛 无 致病
性 。此外 ， 猪感 染另 １种 Ｆ Ｄ ＭＶ泛亚 株 （ Ｏ ／ Ｊ Ｐ Ｎ ／ ２ ０ ０ ０） 后 表现出典型的口蹄疫临床症 状 ， 但 在 日本黑 牛身上 的症 状是 非典 型 的 ， 荷 斯 坦 牛、 绵 羊 和 山 羊 不 易 被 感 染 。对 Ｏ ／ Ｊ Ｐ Ｎ ／ ２ ０ ０ ０毒株 的 ２个不同表型结 构蛋 白的氨基酸序 列进
行 比较 ， 发 现存 在 ２个 突变位点 ： Ｖ Ｐ ２的 １ ３ ３位 点和 Ｖ Ｐ ３的
５ ６位点 ” ， 这些替换位 点可能影 响肝素结合。 本研究针对 Ｏ型 口蹄疫 病毒 Ｏ ／ Ｃ Ｈ Ａ ／ ９ ９的细胞适 应毒 株进行基 因组 测序 和 分 析 ， 并将 Ｏ ／ Ｃ Ｈ Ａ ／ ９ ９的全 基 因 组与
Ｕ Ｔ Ｒ长约 ９ ０ ｎ ｔ ， 它含有与 负链 Ｒ Ｎ Ａ合成有 关 的顺 式作用 元 件 ； Ｏ Ｒ Ｆ编码的一个 多聚蛋白裂解成 ４个结构蛋 白（ Ｖ Ｐ １ ～
Ｏ ／ Ｔ Ｗ／ ９ ７和泛亚谱系 １ ４个参考株序列进行 比较 ， 发现 Ｖ Ｐ １ 、
Ｖ Ｐ ２ 、 Ｖ Ｐ ３中由残基发生 替换 可能改变 的受 体 一配体 相互作 用 。通过对 Ｆ ＭＤ Ｖ基 因组测序 ， 分析 Ｆ ＭＤ Ｖ（ Ｏ ／ Ｃ Ｈ Ａ ／ ９ ９ ） 各个单元 的变异特征及其 与系统发 生的关 系 ， 以期 对 Ｆ ＭＤ Ｖ 基 因组 的结构特 征 以及 口蹄 疫在 宿主 间பைடு நூலகம் 染关 系有 新 的认 识， 对新的变异区和保 守区及其 中重要的基序 和位点有 新的 发现 ， 为后续 口蹄疫病毒研究打好基础 。
复制顺式作用元 件 （ ｃ ｉ ｓ —ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｌ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ， Ｃ Ｒ Ｅ） 、 内 部核糖 体进 入 位点 （ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｌ ｉ ｒ ｂ ｏ ｓ ｏ ｍ ｅ ｅ ｎ ｔ ｒ ｙ ｓ ｉ ｔ ｅ ， Ｉ Ｒ Ｅ Ｓ ） ［ ２ １ ， ５ Ｕ Ｔ Ｒ与启 动多 聚蛋 白的翻译 和病毒 的复制有重 要作用 ； ３

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口蹄疫病毒全基因组序列特征分析

口蹄疫病毒全基因组序列特征分析

口蹄疫病毒全基因组序列特征分析杨鹏华;倪凤娥【摘要】对口蹄疫病毒全基因组序列特征的分析有助于了解口蹄疫病毒复制、翻译等生命活动的相关机制.利用DNAStar和DNAMAN软件,对249株口蹄疫病毒全基因组序列进行了比对分析.结果表明,口蹄疫病毒ORF的长度为5 982～7 020 bp,平均长度为6 975 bp,编码1 994～2 340个氨基酸.各基因的核酸序列同源性均在74％以上,最高达到94.29％.在5'- UTR存在大量保守位点,并发现3个长的保守序列.3'- UTR区存在4段保守序列,可以形成2个发卡结构.研究结果为进一步研究口蹄疫病毒基因组序列结构与病毒生存机制的关系提供了重要的生物信息,为病毒防制提供了理论依据.%There was no much information about the life circle of foot and mouth disease virus (FMDV) , such as replication, translation as well as assembly of virus. Analysis of the FMDV genome may provide a chance to discover the mystery to some extent. Presently,the genomes of 249 FMDV isolates were aligned by the biological software,DNAStar and DNAMAN. The lengths of the open reading frame (ORF) in all isolates were between 5982 to 7020bp, which code 1994 to 2 340 amino acids. The homology of all genes of FMDV was above 74% and up to 94. 29%. Three long conserved sequences and four conserved motifs were obtained in the 5 -UTRs and 3'-UTRs of FMDV, respectively. The result provided a new basis for understanding the relationship between the genome sequence and life mechanism of FMDV.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2011(040)011【总页数】5页(P140-144)【关键词】口蹄疫病毒;序列比对;基因组【作者】杨鹏华;倪凤娥【作者单位】长江大学生命科学学院长江中游湿地农业教育部工程研究中心,湖北荆州434025;长江大学生命科学学院长江中游湿地农业教育部工程研究中心,湖北荆州434025【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.6口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性、热性和高度接触性人畜共患传染病，主要感染各种偶蹄动物。

犊牛口蹄疫病毒抗体检测与分析

犊牛口蹄疫病毒抗体检测与分析


1000 500
0
86.82 370
657.14 551.14 312.29 225.14
首免 2免 2免后1月 2免后2月 2免后3月 2免后4月 2免后5月 2免后6月
O 型疫苗，第二组分别在 90、120 日
图 1 口蹄疫病毒 O 型疫苗免疫后抗体水平
龄分别免疫口蹄疫病毒 O 型、A 型
二价灭活疫苗。按照常规的饲养管
试验已经确定了混合动态发酵豆粕的
注：同列数据肩标大写字母不同表示差异极显著（P <0.01）;小
最优发酵时间 96h，菌种接种时间差
写字母不同表示差异显著（P<0.05）,相同表示差异不显著(P>0.05)。
9h，菌种最佳混合比例米曲霉：枯草芽孢杆菌：嗜酸乳杆菌为
由表 2 可见，发酵温度 30℃处理组大豆肽转化率极显
以标样浓度为横坐标，以其对应的峰面
疫 O 型、A 型阻断 ELISA 抗体检测
积为纵坐标。做得以下图。
试剂盒由兰州兽医研究所提供。
O 型口蹄疫抗体平均效价
选择体重相近的
2500 2000
1954.29
90 日龄出生的犊牛 20 头，平均分 1500
1374.29
成 2 组，每组 10 头，第一组分别在 90、120 日龄分别免疫口蹄疫病毒
余
毒海 抗霞
柳 河 镇 兽 医 站
型 ； 口 蹄 疫
体
， 青
型
海；
检
海 北
抗 体 检
测
测 ；
与︶
分
析
ELISA 812300
A
O
DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2019援07.024
口蹄疫O型抗体不同检测方法的比较和分析

口蹄疫O型抗体不同检测方法的比较和分析


1 ∶ 16 1 ∶ 64 1∶8 1 ∶ 64 1 ∶ 64
1 ∶ 180 1 ∶ 360 1 ∶ 45 1 ∶ 360 1 ∶ 720
1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 64
1 ∶ 360 1 ∶ 360 1 ∶ 720 1 ∶ 360 1 ∶ 360
1 ∶ 16 1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 64
1 ∶ 180 1 ∶ 360 1 ∶ 720 1 ∶ 360
表 3 间接血凝和液相阻断 ELISA 方法检测结果的一致性比较
合格 不合格
间接血凝 43 5

2019 年第 2 期 兽医实验室
样品编号
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48
金标试纸条 1 ∶ 16 1∶8 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 16 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 16 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1∶8 1 ∶ 64 1 ∶ 64 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1∶8 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 16 1 ∶ 32 1∶8 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 32 1 ∶ 32 1∶8 1 ∶ 32 1 ∶ 64 1 ∶ 32
剂盒。 3. 判定标准。根据各试剂盒操作规程，最终试验数
据依据各说明书判定标准确定。 正向间接血凝抗体效价≥ 1：25 判定为免疫合格 ; 液相阻断 ELISA 抗体（猪）效价≥ 1 ∶ 64，保护
口蹄疫病毒基因组序列分析及VP1基因表达的开题报告

口蹄疫病毒基因组序列分析及VP1基因表达的开题报告

口蹄疫病毒基因组序列分析及VP1基因表达的开题报告
题目：口蹄疫病毒病理学及VP1基因表达的分析研究
1. 研究背景
口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性、高度接触性传染病，严重危害动物农业经济。

病毒分为七个血清型，分别为O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1型，其中O、A、Asia1型为全球性流行病毒。

该病毒的主要刺激免疫原是VP1蛋白，因此VP1基因的
表达对研究口蹄疫病毒的病理机制和疫苗研发具有重要意义。

2. 研究目的
本次研究旨在通过对口蹄疫病毒O型VP1基因序列的分析，探究其在口蹄疫病毒病理学中的作用，并通过重组表达VP1蛋白，从而为病毒病理学和疫苗研发提供理论基础。

3. 研究内容及进展
（1）分析病毒基因组序列：采集病毒样本，提取RNA并进行RT-PCR扩增VP1基因。

将所得序列进行比对、进化分析及序列特征分析。

（2）重组表达VP1蛋白：将VP1基因克隆到表达载体中，通过大肠杆菌表达系统进
行重组表达VP1蛋白，纯化蛋白并进行Western blot验证和质谱鉴定。

4. 研究意义
该研究将对口蹄疫病毒的病理机制和疫苗研发提供重要的理论支持。

口蹄疫病毒的基
因组序列分析可以为病毒的进化起源和流行病学提供重要信息，而VP1基因的表达与
功能研究则为口蹄疫病毒抗原疫苗的研发提供了实验基础。