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网络出版时间：２０２３－０８－２８０９：２５：３４ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｕｒｌｉｄ／３４．１０８６．ｒ．２０２３０８２５．１００２．００６酪氨酸激酶抑制剂引起的肝损伤机制研究进展刘慧慧，魏静瑶，张丽珍，冯进伟，刘瑞娟，田 鑫（郑州大学第一附属医院药学部，河南郑州 ４５００５２）收稿日期：２０２２－０３－１７，修回日期：２０２２－０６－２１基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１９０３７２０）作者简介：刘慧慧（１９９８－），女，硕士生，研究方向：药理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｈｈ１８５３８２７７７８１＠１６３．ｃｏｍ；刘瑞娟（１９８８－），女，博士，副主任药师，研究方向：临床药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｆｃｃｌｉｕｒｊ＠ｚｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；田 鑫（１９７５－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向：药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｔｉａｎｘ＠ｚｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０３０５２文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０９－１６１３－０５中国图书分类号：Ｒ ０５；Ｒ３４５ ５７；Ｒ５７５；Ｒ９７７ ３摘要：酪氨酸激酶抑制剂（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＴＫＩｓ）为一类靶向抑癌基因相关受体酪氨酸激酶的小分子化合物，通过阻断下游的信号通路发挥抗癌作用。
ＴＫＩｓ广泛用于癌症的治疗，对于部分肿瘤显示出较传统化疗药物更好的疗效。
然而，ＴＫＩｓ引起的药物性肝损伤是其在临床应用中面临的难题之一。
笔者通过查阅国内外相关文献，对ＴＫＩｓ的分类、临床应用及其引起肝损伤的机制等进行综述，以期为阐明ＴＫＩｓ肝损伤的机制和寻找有效的防治手段提供一定的参考。
关键词：酪氨酸激酶；酪氨酸激酶抑制剂；药物性肝损伤；靶向药物；机制；靶点开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）： 酪氨酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｓ，ＴＫｓ）对于肿瘤细胞的信号转导、细胞增殖、转移和凋亡发挥着重要作用［１］，以ＴＫｓ作为靶点进行相关药物研发是当前抗肿瘤药物研究的热点。
谷氨酸合成酶（GOGAT）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4450规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支4℃保存试剂三粉剂×2支4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存溶液的配制：1、工作液的配制：取试剂二、试剂三、试剂四各一支加入30mL试剂一中溶解，现用现配，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。
产品说明：GOGAT主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的前质体中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
GOGAT以NADH为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸，NADH在340nm 吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
理性代谢工程改造促进谷氨酸棒杆菌高效合成L-谷氨酰胺乔郅钠;吕青兰;李翔飞;王晴;徐美娟;饶志明【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2022(41)8【摘要】L-谷氨酰胺(L-glutamine,L-Gln)是人体液中含量最丰富的一种半必需氨基酸,具有多种营养和药理功能,被广泛应用于医药、食品添加剂、营养保健品、饲料等领域。
目前,微生物发酵法是生产L-Gln的主要方法,发酵产酸效率低、副产物多、菌种性能欠缺等问题严重限制了其工业化应用。
为解决这一问题,作者以实验室前期构建的L-Gln生产菌株CGQ03为出发菌株,通过强化谷氨酸脱氢酶表达及辅因子NADPH供应促进前体L-谷氨酸合成、增强辅因子ATP胞内含量、过表达溶氧相关蛋白VHb提高细胞携氧能力、增强关键酶谷氨酰胺合成酶催化活性及发酵工艺优化等策略提高了L-Gln产量。
最终的基因工程菌CGQ08/pDXW10-glnASc-gdhCg在5 L发酵罐上补料分批发酵66 h,L-Gln的产量最高达(94.5±1.8)g/L,糖酸转化率为34.8%,生产强度为1.43 g/(L·h)。
本研究为L-Gln及其相关化合物的工业化生产提供了借鉴。
【总页数】10页(P65-74)【作者】乔郅钠;吕青兰;李翔飞;王晴;徐美娟;饶志明【作者单位】江南大学生物工程学院【正文语种】中文【中图分类】Q815【相关文献】1.谷氨酰胺合成酶基因的过量表达有效提高谷氨酸棒杆菌中L-谷氨酰胺产量2.利用谷氨酸棒状杆菌高效表达枯草芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶发酵生产L-谷氨酰胺3.代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌促进L-异亮氨酸发酵合成的研究进展4.代谢工程改造谷氨酸棒杆菌合成四氢嘧啶5.代谢工程改造枯草芽孢杆菌促进L-赖氨酸高效合成研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
之马矢奏春创作卵白质的定位与卵白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPARIPA裂解液配方1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitorand 10μl phosphatase inhibitor加水到 100mlAprotinin 10μg/μl ；用10mM HEPES-KOH（PH8.0）溶解,备用.●Nonidet P-40简称NP-40,乙基苯基聚乙二醇,经常使用非离子性去垢剂.●Na-deoxycholale,脱氧胆酸钠,离子型去垢剂.离子型去垢剂主要作用有：裂解细胞；溶解卵白,尤其是可以溶解一些难溶于水的卵白,如膜卵白等；很适合做WB,但在Co-IP中使用,需要谨慎.●亮抑霉肽（Leupeptin）：抑制丝氨酸卵白酶包括胰卵白酶、纤溶酶、猪胰激肽原酶）和半胱氨酸卵白酶（包括木瓜卵白酶和组织卵白酶B）●抑肽素A（Pepstatin A）抑制各种天门冬氨酸卵白酶,例如组织卵白酶D、肾素、胃卵白酶、细菌天门冬氨酸卵白酶和HIV卵白酶；●胰凝乳卵白酶抑制剂（Chymostatin）抑制具有糜卵白酶类特异性丝氨酸卵白酶（包括糜卵白酶、胃促胰酶、组织卵白酶 G）和年夜大都丝氨酸卵白酶（包括组织卵白酶B,H,L）●抗木瓜卵白酶（Antipain）抑制木瓜卵白酶、胰卵白酶和纤溶酶.●氟化钠抑制酸性磷酸酶●正钒酸钠：抑制碱性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶（tyrosine phosphatase）●焦磷酸钠（sodium pyrophosphate）：抑制丝氨酸-苏氨酸磷酸酶（serine－threonine phosphatase） .在与卵白相关的检测中,首先最关键的一步即是卵白质的提取.卵白质的提取过程中,我们要经常加和卵白酶抑制剂以防止卵白质的降解.另外在磷酸化卵白的研究过程中,磷酸酶抑制剂也是必不成少的,本文总结了经常使用的卵白酶抑制剂PMSF,Leupeptin 亮肽素,Aprotinin抑肽酶,Pepstatin胃卵白酶抑制剂,EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠,Na3VO4 原矾酸钠 ,BETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠,Na2P2O4 焦磷酸钠等.对这些卵白酶抑制剂的溶解配制,贮存液与工作液浓度,保管都做了详细的说明.卵白酶抑制剂PMSF：特性：丝氨酸卵白酶抑制剂,如胰凝乳卵白酶,胰卵白酶和凝血酶,也抑制半胱氨酸卵白酶如木瓜卵白酶（可逆的空中处置）.溶解性：溶于异丙醇,乙醇,甲醇和丙二醇果>10mg/ml.在水溶液中不稳定.在100%异丙醇, +25℃时稳定至少9个月分子量：174.2使用：贮存浓度：200mM,工作浓度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸卵白酶如胰卵白酶,木瓜卵白酶,纤溶酶,和组织卵白酶B溶解性：高度溶于水（1mg/ml）.4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：贮存浓度：1mg/ml,工作浓度0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸卵白酶抑制剂,抑制纤维卵白溶酶, 激肽释放酶,胰卵白酶,糜卵白酶的高活性.不抑制凝血酶或因子X.溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如,tris,0.1M,pH8.0）.pH 约7-8的溶液在4℃可保管1周,分装保管在-20℃可至少保管6个月.防止反复冻融, pH>12.8的碱性环境可使其灭活.分子量：6,512使用：贮存浓度:1mg/ml, 工作浓度：0.06–2.0 ug/ml(0.01–0.3 uM)Pepstatin胃卵白酶抑制剂特性：抑制天冬氨酸（酸）卵白酶如胃卵白酶,肾素,组织卵白酶D,凝乳酶, 许多微生物酸性卵白酶溶解性：溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇,过夜溶解可到达1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml.4℃稳定一周,分装贮存于-20℃时可保管1个月分子量： 685.9使用：贮存浓度：1mg/ml,使用浓度：0.7 μg/ml(1 μM)EDTA-Na2特性：金属卵白酶抑制剂溶解性：溶于水至0.5M,在pH8-9的条件下,4℃稳定至少6个月分子量: 372.24使用：工作浓度：0.2–0.5 mg/ml(0.5–1.3 mM),不需现用现配,在溶液pH值调至8-9时再加入.磷酸酶抑制剂NaF氟化钠溶解性：溶于水分子量： 41.99使用：贮存液：5M 工作浓度：10-20mMNa3VO4 原矾酸钠分子量：183.91溶解性：溶于水,我们购买过来的是原矾酸钠.原矾酸钠需要经过处置以后才华成为激活的矾酸钠,激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用.原矾酸钠酿成激活的矾酸钠的过程是:100mM原矾酸钠激活贮存液配制(1).取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10(颜色变黄)(2).煮至无色(3).室温冷却(4).重调PH至10(5)重复（１）（２）（３）（４）直至溶液坚持无色,而且ＰＨ稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管.(终浓度为1mM),-20度保管.使用：贮存液：100mM 工作浓度：1mMBETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠溶解性：溶于水分子量：306.11使用：贮存液：100mM 工作浓度：25mMNa2P2O4 焦磷酸钠溶解性：溶于水分子量：265.9贮存液：100mM, 工作浓度：1-2 mMSDS ,NP-40 ,TritonX-100这三种去垢剂的作用是分歧的,或者说作用力量强弱分歧.SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破失落,DNA 会释放出来,裂解液变得很粘稠.NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏失落胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆卵白.TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40,也是经常使用的细胞裂解液成份之一,在呵护卵白活性方面有一定作用（SDS 基本会使卵白变性失活）.Brij Buffer I。
癌诊断试剂γ-L-谷氨酰-α-萘胺的合成
秦玉楠
【期刊名称】《中国医药工业杂志》
【年(卷),期】1991(22)3
【摘要】γ-L-谷氨酰-α-萘胺(1)在医学上用于肝癌、肺癌和胃癌的诊断。
目前,我国尚依赖进口,价格昂贵,每克需50元以上。
我们应许多医院要求。
【总页数】2页(P99-100)
【关键词】癌症;诊断试剂;谷氨酰;萘胺;合成
【作者】秦玉楠
【作者单位】成都化学制药厂
【正文语种】中文
【中图分类】TQ463.26
【相关文献】
1.γ-谷氨酰转肽酶法合成γ-L-谷氨酰-L-酪氨酸 [J], 佘维娜;周治;姚忠;徐虹;韦萍
2.γ-L-谷氨酰-α-萘胺在乙醇(二氧六环)/水混合介质中的电离常数研究 [J], 兰丽艳;孙亚光;高恩君
3.固定化γ-谷氨酰转肽酶催化合成γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸 [J], 宋希文;周治;姚忠;肖彦羚;徐虹;韦萍
4.L-丙胺酰-L-谷氨酰胺的合成 [J], 刘西环
5.癌诊断试剂——L-γ-谷氨酰-α-萘胺的合成 [J], 秦玉楠
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人酪氨酰-tRNA合成酶释放两种不同的细胞因子
黄仕和;许四宏
【期刊名称】《生命的化学》
【年(卷),期】2000(20)1
【总页数】1页(P12-12)
【关键词】酪氨酸-tRNA合成酶;EMAPⅡ;IL-8;细胞凋亡
【作者】黄仕和;许四宏
【作者单位】卫生部武汉生物制品研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q559.1;Q28
【相关文献】
1.γ-干扰素诱导人甲状腺细胞产生吲哚胺2,3-双加氧酶和色氨酰-tRNA合成酶 [J], 章晓芳;綦一澄;张倩为;黄凤姣;林东平;宁光;王曙
2.敲低亮氨酰-tRNA合成酶抑制人胶质瘤细胞U251增殖和迁移的体外研究 [J], 谭富强;张安玲;南阳;王乐;叶敏华;王广秀;贾志凡;康春生;钟跃
3.诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响 [J], 刘雪梅;金晓玲;巩菊
芳
4.人源色氨酰tRNA合成酶H130R突变体的酶活和初步晶体学分析 [J], 孙晓亮;
刘雪梦;倪晓敏;王小艳;袁震;杨磊;徐晓玲
5.不同抗氨酰tRNA合成酶抗体阳性的抗合成酶综合征60例临床和影像学相关特征分析 [J], 赵娜;刘颖;孙小凤;汤艳春
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