(整理)凝聚胺介质交叉配血试验操作规程

凝聚胺介质交叉配血试验操作规程凝聚胺介质交叉配血试验操作规程(SOP文件)1目的作为介质辅助用于完全抗体及不完全抗体的临床筛选检测及辅助用于临床交叉配血实验。

2检验原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM)，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。

其后，加入凝聚胺（Polybrene)溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。

最后，加入悬浮液（Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene)阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

3储存条件及有效期未开封试剂应贮存于2℃~25℃、相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体的室内；已开封试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室温环境，试剂用后应及时拧紧瓶盖保存；未开封试剂的有效期为二年，在有效期内的已开封试剂应在开封后的6个月内使用完。

4样本要求4.1新鲜血清，含EDTA抗凝血浆、3%~5%的红细胞悬液。

4.2不能使用溶血标本及含枸橼酸钠、肝素抗凝血浆标本。

5检验方法辅助交叉配血试验5.1取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清（血浆）2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴，次侧管反之。

5.2各加LIM0.65ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

5.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力）离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。

交叉配血操作规程交叉配血试验（凝聚胺法）[原理]凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。

距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。

而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。

如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。

交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。

[试剂组成]1，洁净试管，离心机，显微镜。

2，0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至1000 ml。

试剂启用后，有效期为：二周。

3，凝聚胺试剂*1 低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。

*2 凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。

*3 复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。

*4 阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。

4，抗人IgG 血清。

[试剂保存和稳定性]1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃。

2．有效期内可使用。

3．抗人IgG血清低温冰箱保存。

复溶后放2—4℃冰箱保存。

[标本收集和准备]1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。

以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。

2．2% 红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞3次。

根据下表进行红细胞悬液的配制。

悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）----------------------------------------------------------------2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)----------------------------------------------------------------[操作步骤]1．取出3支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴，次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1滴，对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴。

交叉配血试验标准化操作规程(聚凝胺法)一、目得为保证临床输血得相容性,确保临床输血安全,对全血、红细胞悬液、洗涤红细胞、浓缩红细胞、少白细胞红细胞、冰冻红细胞、机采浓缩白细胞悬液等血液成分进行交叉配血试验。

二、方法采用聚凝胺介质试管法;三、原理聚凝胺法第一步采用低离子强度溶液降低红细胞与抗体反应介质得离子强度,从而减少了红细胞周围得阳离子云,促进带正电荷得IgG抗体与带负电荷得红细胞发生反应,这样大大加快了抗原与抗体反应得速率。

第二步通过加入聚凝胺来促使红细胞产生可逆性得非特异性凝聚、聚凝胺就是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物,可以中与红细胞表面得负电荷,使红细胞得Zetａ电位降低,从而产生红细胞可逆性得聚集,缩短红细胞之间得距离,让IgG抗体可直接引起红细胞凝聚、第三步加入重悬液,重悬液可中与聚凝胺得作用。

可区分由聚凝胺诱发得红细胞之间得非特异性凝聚与由抗原抗体反应所致得特异性凝聚。

四、适用范围适用于输血前需进行交叉配血试验得血液及血液成分。

五、仪器设备普通离心机;血型专用离心机;六、试剂1、试剂名称:快速聚凝胺试剂盒2、试剂生产厂家:珠海贝索生物技术有限公司;３、批准文号:国食药监械(准)字2009第3400076号;4、包装规格(盒):4。

１低离子强度溶液(ＬＩM) 49ml×2;4、2聚凝胺溶液(Pｏlybreｎe Ｓoｌutｉon) 15ｍl×1;4、3重悬液(Resｕｓpendｉng Ｓolutiｏn) 15ml×１;4、贮藏条件;2－8℃避光保存。

5、有效期:自检定合格之日起2年;七、检测样本要求1、标本类型:静脉血(ＥDＴA抗凝剂:血液=1:１0)。

2、标本采集:见输血科标本管理标准化操作规程。

3、标本储存与运输:新鲜血2~８℃贮存时间不超过72小时、4、标本拒收状态:标识不准确、标本稀释、细菌污染,严重溶血等不能测定。

八、操作步骤1、收集标本,严格进行查对无误后,分离血清(浆)、2、取1０mｍx60mm洁净小试管2支,分别标明主(次)侧管。

临床交叉配血操作规程交叉配血试验（凝聚胺法）[原理]凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。

距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。

而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。

如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。

交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。

[试剂组成]1.洁净试管，离心机，显微镜。

2.0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至1000 ml。

试剂启用后，有效期为：二周。

3.凝聚胺试剂①低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。

②凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。

③复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。

④阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。

4.抗人IgG 血清。

[试剂保存和稳定性]1.凝聚胺试剂须保存在2-25℃。

2.有效期内可使用。

3.抗人IgG血清低温冰箱保存。

复溶后放2—4℃冰箱保存。

[标本收集和准备]1.抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。

以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。

2. 2% 红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞3次。

根据下表进行红细胞悬液的配制。

悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）----------------------------------------------------------------2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)----------------------------------------------------------------[操作步骤]1.取出3支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴，次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1滴，对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴。

凝聚胺法交叉配血标准操作规程1.目的规范凝聚胺法交叉配血标准操作程序。

2.原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕,而形成Zeta电位， Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。

其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一种高阶阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。

最后加入悬浮液（Resuspending）， Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

3.试剂由珠海贝索生物技术有限公司生产的凝聚胺法试剂盒，其组成：3.1低离子介质(LIM) 2×130ml。

3.2凝聚胺(Polybrene)溶液2×20ml。

3.3 Resuspending溶液2×20 ml4.仪器4.1 80-2离心机：上海医疗器械有限公司4.2电热恒温水浴箱：上海精宏实验设备有限公司4.3 OLYMPUS显微镜：日本5.操作步骤及结果判断按照试管法血型鉴定检验标准操作程序进行受血者血型鉴定, 并将鉴定结果写于申请单，并签名。

以“同型输注”为原则，取相对应的成分血源进行交叉配血。

5.1取洁净小试管2支,分别标明主、次侧管。

5.2于主侧管中加入受血者血浆2滴和供血者3-5%红细胞悬液1滴,次侧管中加入供血者血浆2滴和受血者3-5%红细胞悬液1滴, 轻轻混匀离心1000r/分钟, 仔细观察有无凝集,无凝集则可进行下一步骤,若有凝集则查找原因。

凝聚胺法交叉配血标准操作规程1.原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。

加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。

2.标本采集：2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。

2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。

3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。

4.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：细菌污染。

溶血标本，标签不齐全不能作测定。

6.试剂：6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2试剂生产厂家：(台资)xxxx生物技术有限公司。

6.3试剂组成：试剂1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。

试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。

试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。

试剂4.8.5％生理盐水。

7.仪器：7.1血型血清xx离心机：XTL-4.7xx离心机械研究所7.2离心机：xx手术器械厂7.3电热恒温水箱：xx长源实验设备厂7.4xx：OLYMPUS(xx)8.操作步骤及结果判断：8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。

加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。

主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。

交叉配血操作规范（凝聚胺法）【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。

【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。

【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。

【应用范围】交叉配血（凝聚胺法）的手工操作。

【标本采集和处理】1．由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。

备血使用的受血者标本必须是输血前三天之内的血样。

采血时要防止溶血及多量组织液混入（多发生在静脉穿刺不顺利勉强抽血时），在病人输液时采集标本，必须从未输液的一侧肢体抽取，绝不允许在输液管接头处采集。

2．非急症病人输血前，应事先采取血标本作血型鉴定，填写申请单配血单上，以便核对。

急症抢救输血，未能事先采血检测血型，则要求由专人核对、贴标签、采取血标本送检。

3. 检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。

确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号。

并按日期索引进行登记。

4. 将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。

保证血浆于血球有效分离。

溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。

【方法学原理】凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。

距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。

而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。

如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。

交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。

【试剂和材料】1．供血者血清（血浆）；2．受血者血清（血浆）；3．BASO凝聚胺（Polybrene）试剂盒。

交叉配血操纵规程（凝集胺法）一．目标规范交叉配血实验操纵;包管临床用血的安然性和有用性.二．实用规模实用于临床配血标本.三．职责血库技巧人员负责交叉配血实验四．所需材料和装备材料：凝集胺试剂盒.患者血标本.心理盐水.小试管.滴管.献血者标本.装备：通俗离心计心情.血型血清学专用离心计心情.37℃恒温水浴箱.显微镜五．操纵步调1.凝集胺法（1）以心理盐水配制供.受者3％～5％红细胞悬液.（2）取试管3支,标识表记标帜主.侧和自身对比主侧加受血者血浆（血清）2滴,献血者3%～5%的红细胞悬液1滴;次侧加献血者血浆（血清）2滴,受血者3%～5%的红细胞悬液1滴;自身对比管加患者血浆（血清）2滴和患者3%～5%的红细胞悬液1滴混匀.（3）以1000r/分钟离心1分钟,不雅察盐水介质实验成果.（4）每管各加低离子介质（LIM）溶液0.7ml,混杂平均,室温孵育1min.（5）每管各加2滴凝集胺溶液,混匀后静置15s.（6）1000r/分钟离心1分钟,倾去上清液,不要沥干.（7）轻轻动摇试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,必须反复步调（3）-（6）（8）参加2滴重悬液,并轻轻混杂,不雅察成果.（9）成果剖断如凝离合开,则为凝集胺引起的非特异性凝集,判为阴性成果,配血相合;如凝集不散开,则为抗原抗体联合的特异性反响,判为阳性成果,配血不相合,如肉眼不雅察凝集强度弱,可进一步在显微镜下不雅察有无凝集.成果剖断请求在1min内完成,最长不要超出3min,因为弱凝集的阳性成果,超出1min可能变成阴性.六．留意事项1.配血技巧①通例配血技巧：选择的技巧不但要能检讨出不合营的IgM 抗体,还必须能检讨出尽可能多的不合营的IgG抗体,最大限度地削减抗体的漏检.今朝以为盐水法交叉配血是输血前检讨必不成少的实验,起首采取盐水法进行交叉配血,再采取可以或许检出IgG 类抗体的办法进行交叉配血;②特别配血技巧,如：预温配血技巧：重要用于解决无临床意义的冷抗体引起的交叉配血不合营.2.主侧交叉配血不相合的原因①患者或供者ABO血型定型不准确,或二者的ABO血型不合营;②患者血清中消失同种抗体,与供者红细胞上的响应抗原起反响;③患者血清中消失自身抗体,与供者红细胞中的响应抗原起反响;④供者红细胞上已经包被了抗体,导致抗球蛋白阳性;⑤患者血清不正常,如白蛋白/球蛋白比例不正常引起缗钱状假凝集,血清中消失高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用盐水添加实验来解决）;⑥实验体系被污染.3.次侧交叉配血不相合的原因①供者血清中消失针对患者红细胞抗原的抗体;②患者与供者的ABO血型不相合;③患者红细胞已经包被了抗体,直接抗球蛋白实验阳性.。

交叉配血操作规程凝聚胺法交叉配血是指将一定数量的输血者的红细胞与另一组供血者的血清进行混合，通过观察混合血后是否发生凝集反应来确定血型。

交叉配血操作主要采用凝聚胺法进行，以下是交叉配血操作规程的详细步骤。

1.准备工作a.配置所需试剂，包括输入血浆、配血瓶、试剂盘、标本管、溶血酶溶液、配血盘等。

b.通过测定输血者和供血者的血型，确认双方的血型信息，并记录在相关记录表中。

2.标本采集a.采集输血者和供血者的静脉血标本，放入标本管中，避免血样凝固。

b.标本采集的相关操作要符合严格的无菌原则，确保血样的无菌及安全性。

3.标本处理a.将标本管中的静脉血标本置于冰上，在4℃下保存。

b.用溶血酶溶液处理输血者的红细胞，将3滴红细胞加入到每一个配血瓶中，轻轻摇动混合均匀。

4.试剂配置a.将配血盘中的试剂盘取出，配置新鲜的抗血型血清和已知血型标准红细胞。

5.凝胶装配a.打开凝胶洞口，将配血盘的试剂盘放入凝胶洞中。

b.确保试剂盘的位置正确，使试剂液体触及到凝胶洞的底部。

6.样本混合a.取出保存在冰上的输血者和供血者的静脉血标本，放置于试剂盘的对应位置。

b.轻轻旋转试剂盘，使血样和试剂充分混合起来，注意避免搅拌过于激烈。

7.观察凝聚反应a.在一定的时间内，观察配血盘中是否发生凝聚反应。

b.根据凝聚反应的情况，判断输血者和供血者的血型是否兼容。

8.结果判读a.若输血者的红细胞与供血者的血清发生凝聚反应，表示两者的血型不兼容，不适合进行输血。

b.若输血者的红细胞与供血者的血清没有发生凝聚反应，表示两者的血型兼容，可以进行输血。

9.记录和报告a.记录每次交叉配血的操作过程和结果，包括输血者和供血者的血型信息、配血的凝聚反应情况等。

b.报告输血者的血型结果和是否适合进行输血。

交叉配血操作规程凝聚胺法主要是通过观察凝聚反应来判定血型的兼容性，该方法操作简单、结果可靠。

但需要注意的是，交叉配血结果只能作为指导输血的参考依据，还需要综合考虑患者的临床情况和输血指征等因素，确保安全有效地进行输血操作。

凝聚胺交叉配血标准操作规程一、目的:为规范交叉配血试验的技术操作，保证临床输血安全有效，特制定本规程.二、适用范围适用于输血科进行交叉配血试验三、职责输血科技术人员负责交叉配血试验。

四、测定原理：红细胞表面带有大量的负电荷,凝聚胺是一种高效价阳离子季胺盐多聚物，溶解后产生较多正电荷，可以中和红细胞表面的唾液酸带有的负电荷，使红细胞之间的距离减少。

若是未被抗体致敏的红细胞，加入悬浮液它具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体所致敏，则会被凝聚胺凝集,凝块就不会散开，试验结果为阳性。

五、试剂及材料(一)聚凝胺试剂盒(合肥天一生物技术研究所）成分:低离子介质溶液、聚凝胺溶液、重悬液、阴性及阳性对照液；保存条件：2～8℃贮存2年，试剂盒打开使用后可置于室温(二）材料：玻璃试管、微量移液器、离心机、载玻片、显微镜等六、标本要求:（一）抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2—3ml（注意核对病人信息)，在3000r/min条件下离心5分钟备用.(二）标本保存:血液样本必须密封,2～8℃保存7天。

(三)用于交叉配血必须是2～8℃保存3天以内的标本.七、操作程序：（一）将受血者红细胞配成3％盐水悬液，鉴定ABO血型及Rh血型。

（二)将供血者血样配制3％红细胞悬液，鉴定ABO血型及Rh血型。

（三)取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）或“主侧”；另1支标明供血者血清(DS）+受血者细胞(PC)或“次侧”。

(四）主侧管:受血者血清100ul+供血者红细胞悬液50ul.次侧管：供血者血清100ul+受血者红细胞悬液50ul。

各加低离子介质溶液0.6 ml,混匀后静置1分钟，再各加聚凝胺溶液2滴，静置15s.（五) 混合均匀后,在1000g条件下离心15s,然后倒掉上清液。

（六）轻轻侧动试管里的细胞扣，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做.（七) 最后加入重悬液2滴，轻轻转动试管混合，并同时观察结果，必要时在显微镜下观察结果。

操作人员3.1.1负责对检测标本进行聚凝胺介质交叉配血的具体操作并编写实验报告单。

仪器管理人员3.2.1负责相关仪器的日常保养。

3.2.2负责相关仪器的维护。

质量监督员负责操作过程监督，仪器室内质量控制。

科室主任或授权者负责检测报告审核。

实验原理聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的相互作用，引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚力是可逆的。

当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生凝集，凝集和聚集外表上肉眼不能区分，当再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根标本接收6.1.1可接收标本：受检的标本为输血前3天内抽取的静脉血标本，抗凝或不抗凝全血标本上有完整的与申请单相对应的受检者姓名、标本号、检测项目标签，标本量符合要求，外包装合格无污染。

6.1.2拒收标本：标本上无与申请单相对应的受检者姓名、标本号、检测项目标签，标本量不符合要求，外包装明显污染。

标本有发生污染、溶血、稀释、脂血及保留血标本时间不合要求等情况。

患者ABO血型鉴定，见《ABO血型定型试管法操作规程》。

患者Rh（D）定型，见《Rh血型鉴定试管法操作规程》。

患者血清进行抗体筛选实验，见《抗体筛选试管法操作规程》。

聚凝胺法交叉配血实验6.5.1患者标本准备6.5.1.1分离血清，标记为PS。

6.5.1.2配制3%-4%患者红细胞生理盐水悬液，标记为PC。

《Rh血型鉴定试管法操作规程》（SXK-SOP-002）《抗体筛选试管法操作规程》（SXK-SOP-005）《盐水介质交叉配血操作规程》（SXK-SOP-007）。

聚凝胺交叉配血试验标准操作规程一、目的建立聚凝胺手工交叉配血试验标准操作规程，确保聚凝胺交叉配血试验操作的准确性和规范性。

二、职责本科工作人员应用此操作规程，用于交叉配血的检测三、原理利用多聚季胺盐类—聚凝胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则不能解散，以此来判断供、受者间血液的相容性。

四、适用范围适用于使用聚凝胺试剂手工进行交叉配血试验。

五、器材与试剂1、器材：BaSO血清学专用离心机、玻璃试管（10×12mm）、试管架、滴管、记号笔；2、试剂：生理盐水、聚凝胺配套试剂（LIM液、Resuspending液、Polybrene液）。

六、环境条件温度：20-27℃湿度：≤80%RH七、标本采集与送检要求1、标本必须是无溶血的血清。

2、医护人员持输血申请单和贴好标签的试管，当面核对患者姓名、性别、年龄、住院号、血型和诊断采集血样。

由医护人员或专门人员将受血者的血样与输血申请单送交血库，双方进行逐项核对。

八、操作程序1、取洁净玻璃试管二支，标明主、次侧，主侧管加入受血者血清（血浆）2滴，供血者3%-5%红细胞悬液1滴，次侧管加供血者血清2滴，受血者3%-5%红细胞悬液1滴；（受血者和献血者红细胞均应洗涤3次，2000转，2分钟。

）2、各试管分别加LIM液0.7ml，充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀；3、血型血清学BaSO专用离心机3000rpm；1000g，10sec）离心，把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体；4、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做以上步骤；5、最后加入Resuspending液2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。

如果在30sec～1min内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

交叉配血（凝聚胺法）试验操作规程（SOP）1. 目的：交叉配血；检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型2. 原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体1. 目的：检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型2. 原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体搭桥的特异性凝集。

3. 适用范围：配血、免疫性抗体检查、红细胞血型鉴定、特殊的研究4. 所需材料：聚凝胺试剂、定型血清、谱细胞、洁净试管、滴管、离心机5. 操作程序：（以交叉配血为例）5.1以生理盐水洗涤受血者和献血者红细胞 1 —3次，配成3-5%的悬液。

5.2交叉配血试验：主侧：2滴患者血清加1滴供者3-5%的RBC悬液。

次侧：2滴供者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。

阳对：2滴抗-D血清加1滴RH（ +）3-5%的RBC悬液。

5.3每只试管加600微升低离子液，混合放置1分。

自身对照：2滴患者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。

5.4 分别加2 滴Polybrene 应用液，混合放置15 秒。

5.5 离心3400转/分15 秒，弃上清，控干。

5.6 观察管底有无聚凝物，如果没有则需重做。

5.7 每管各加2 滴解聚液，轻轻混合10 秒，观察结果并做记录。

5.8 结果判定：10 秒内若为Polybrene 引起的聚合应该会散开，判为阴性。

若为抗原抗体引起的凝聚则不会散开，判为阳性。

6. 注意事项：6.1可以用EDTA血浆代替血清6.2 加入解聚液后应该在3 分钟之内观察结果6.3 解聚液不可多加，以免降低试验灵敏度。

凝聚胺交叉配血步骤
1.取试管两支，用0.9%生理盐水分别配受血者和供血者5%红细胞悬液（取分离血清后受血者底层红细胞50ul与0.9%生理盐水1mL，取分离血清后供血者底层红细胞50ul 与0.9%生理盐1mL）
主侧：受血者血清（血浆）100uL＋供血者红细胞悬液50uL
次侧：供血者血清（血浆）100uL＋受血者红细胞悬液50uL
2.各加LIM0.65mL（按压到底一次），混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

3.用离心机3400转／min（相当于1000g离心力）离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1mL液体。

4.轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。

5.最后加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。

如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene 引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

交叉配血操作规程（凝聚胺法）一．目的规范交叉配血试验操作；保证临床用血的安全性和有效性。

二．适用范围适用于临床配血标本。

三．职责血库技术人员负责交叉配血试验四．所需材料和设备材料：凝聚胺试剂盒、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管、献血者标本。

设备：普通离心机、血型血清学专用离心机、37℃恒温水浴箱、显微镜五．操作步骤1.凝聚胺法（1）以生理盐水配制供、受者3％～5％红细胞悬液。

（2）取试管3支，标记主、侧和自身对照主侧加受血者血浆（血清）2滴，献血者3%～5%的红细胞悬液1滴；次侧加献血者血浆（血清）2滴，受血者3%～5%的红细胞悬液1滴；自身对照管加患者血浆（血清）2滴和患者3%～5%的红细胞悬液1滴混匀。

（3）以1000r/分钟离心1分钟，观察盐水介质实验结果。

（4）每管各加低离子介质（LIM）溶液0.7ml,混合均匀，室温孵育1min。

（5）每管各加2滴凝聚胺溶液，混匀后静置15s。

（6）1000r/分钟离心1分钟，倾去上清液，不要沥干。

（7）轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重复步骤（3）-（6）（8）加入2滴重悬液，并轻轻混合，观察结果。

（9）结果判定如凝聚散开，则为凝聚胺引起的非特异性凝集，判为阴性结果，配血相合；如凝聚不散开，则为抗原抗体结合的特异性反应，判为阳性结果，配血不相合，如肉眼观察凝集强度弱，可进一步在显微镜下观察有无凝集。

结果判定要求在1min内完成，最长不要超过3min，因为弱凝集的阳性结果，超过1min可能变为阴性。

六．注意事项1.配血技术①常规配血技术：选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗体，还必须能检查出尽可能多的不配合的IgG抗体，最大限度地减少抗体的漏检。

目前认为盐水法交叉配血是输血前检查必不可少的试验，首先采用盐水法进行交叉配血，再采用能够检出IgG类抗体的方法进行交叉配血；②特殊配血技术，如：预温配血技术：主要用于解决无临床意义的冷抗体引起的交叉配血不配合。

交叉配血操作规程[原理]凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。

距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。

而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。

如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。

交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。

[试剂组成]1.洁净试管，离心机，显微镜。

2.0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至 1000 ml。

试剂启用后，有效期为：二周。

3.凝聚胺试剂①低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2 钠及稳定剂。

②凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。

③复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。

④阳性对照血清：含抗D 血清，氯化钠及稳定剂。

4.抗人IgG 血清。

[试剂保存和稳定性]1.凝聚胺试剂须保存在2-25℃。

2.有效期内可使用。

3.抗人IgG 血清低温冰箱保存。

复溶后放2—4℃冰箱保存。

[标本收集和准备]1.抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2 抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。

以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。

2. 2% 红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞3 次。

根据下表进行红细胞悬液的配制。

悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）----------------------------------------------------------------2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)----------------------------------------------------------------[操作步骤]1.取出3 支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2 滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1 滴，次测管：加入供血者血清（浆）2 滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1 滴，对照管：加入2 滴*4 阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1 滴。

凝聚胺交叉配血操作流程一、移植前检查1、医护人员、手术室用品、抗污染措施、各种设备的准备工作，并检查交叉配血的源和受者，确保安全性。

2、根据预定的方案，做出血液学等检测，同时分析所需肝脏移植的浓度，做好调整。

3、双方做出的抗原检测结果要在移植完成之前确定。

4、检查医疗设备是否正确，确保手术室和床位安全，调整好手术条件。

二、合并操作1、将免疫调节剂，如凝聚素、胺和相关成分连续输入受者，按照相关程序，以保持肝脏合并正确。

2、将肝脏活性素加入受者的血流中，把受者的血液和肝脏活性素混合，以使受者的免疫反应得到有效抑制。

3、注入受者口服的药物，防止受者抗原性反应，减轻排异反应。

4、受者注射相关基因，避免向受者体内输入来源肝脏所含有的抗体。

5、注入必要的抗血清，防止受者抗原性反应。

三、移植后护理1、检查受者情况，监测血液学，根据医生要求调节抗滤膜质量，确保肝脏在移植后运转正常。

2、严格控制膳食，定期检查肝功能、电解质和血糖，确保受者的生理机能。

3、血液循环不良应及时处理，以防止移植的肝脏受到损伤。

4、定期给受者注射抗排异药物，以保持肝脏的抗排异能力，维持器官功能正常。

5、及时给受者施用抗感染药物，防止移植肝脏因感染而被破坏。

四、交叉膜交叉配血1、以源者血浆、受者血液和未活化剂为原料，让血浆中卡蛋白复制聚合，形成膠状状态。

2、把聚合物倒入由特殊材料制作的滤膜内，完成小分子量混合吸附，透过滤膜转换成血液。

3、改变滤膜的温度和压力，完成混合、转换和稳定血浆，使源者和受者的血液交叉混合，在一起稳定、混合。

4、将混合血液安全输入受者体内，完成肝脏移植。

五、总结交叉膜交叉配血是一种技术复杂、程序繁琐的血液学手术，是肝脏移植的基本步骤，也是保证肝脏移植安全、排异反应程度采取合适措施的重要步骤。

在血漿交叉配血程序中，凝聚素、胺和相关成分是抑制受者的排异反应的主要因素。

此外，混合血液的温度、压力等也是手术过程中必不可少的要素。

凝聚胺交叉配血试验标准操作规程1、目的为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理4.1试验方法：凝聚胺介质配血法4.2原理：针对不规则抗体的检出及鉴定多采用红细胞的凝聚反应试验，而凝聚反应试验的成效则与分布红细胞表面之电荷以及抗体的亲和性息息相关。

凝聚胺法是利用低离子介质（LIM）来降低介质的离子强度，进而减少红细胞之间距，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体发生特异性结合；接着加入凝聚胺（polybrene）此种多价阳离子聚合物来中和红细胞上的阴性电荷，使细胞间发生非特异性凝聚；最后加入重悬液，使之中和由凝聚胺所引起之非特异凝聚，倘若没有凝聚发生，则判定为阴性；若有凝集，则得知存在特殊性之抗原抗体反应，则判定为阳性。

5、样本采集和处理同盐水交叉配血试验。

6、试剂：贝索的试剂盒：1)低离子溶液（LIM）2)聚凝胺溶液（POLYBRENE）3)悬浮液（RESUSPENDING）7、操作步骤7.1 取试管两支,分别标明主次侧管,主侧管加入受血者血清两滴,再加入2~5%献血者红细胞悬液1滴,次侧管反之。

7.2每支试管中加入0.7mlLIM液,混匀;再各加入2滴POLYBRENE 液,混匀。

7.3 3400转离心10秒，弃上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。

7.4轻摇试管，目测红细胞有无凝集，若无凝集则必须重作。

7.5加2滴resuspeneing液，轻摇试管混合并同时观察结果。

8、结果判断立即目测并镜检观察凝集状态。

如果30秒内凝集散开，代表是由polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。

若凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性凝集，配血结果不相合。

若反应可疑，可进一步用显微镜观察。