菌种库建立标准操作规程

实验室菌种管理制度及流程

一、引言

细菌在生物科学中扮演着非常重要的角色，它们被广泛应用于实验室研究和工业生产领域。因此，对实验室菌种的管理至关重要，合理的菌种管理制度及流程可以确保菌种的安全、准确、可靠的使用，并对实验室研究项目的顺利进行起到积极的促进和保障作用。本文将从菌种管理制度的建立、菌种信息管理、菌种存储和使用、菌种安全管理等几个方面详细介绍实验室菌种管理的制度及流程。

二、菌种管理制度的建立

1. 制定菌种管理制度的必要性

菌种管理制度及流程的建立，可以提高实验室菌种的管理水平，规范菌种的使用，减少菌种的污染与损失，保障实验室安全与实验数据的准确性。同时，也有利于提高实验室的管理效率和科研工作的顺利进行。

2. 菌种管理制度的制定原则

菌种管理制度的制定应当遵循以下原则：

（1）合法性原则：菌种管理制度应当遵从国家相关法律法规，为实验室合法合规经营提供保障。

（2）科学性原则：菌种管理制度应当遵从科学规范，为实验室的科学研究提供保障。

（3）合理性原则：菌种管理制度应当合理可行，符合实验室实际情况。

（4）可操作性原则：菌种管理制度应当具有一定的可操作性，能够指导实验室工作的开展。

3. 菌种管理制度的具体内容

菌种管理制度的具体内容主要包括菌种采购、接收、存储、管理和使用、处置等方面的规定。涉及到菌种管理的方方面面，为了确保实验室菌种的安全管理，减少菌种污染和损失，同时满足实验室科研工作的需要，菌种管理制度应当是全面的、系统的。

三、菌种信息管理流程

菌种信息管理是菌种管理的基础工作，通过对菌种信息的完备、准确、可靠管理，可帮助实验室科研人员迅速找到所需菌种资源，并保证菌株的溯源、溯名可查。菌种信息管理主要包含两个方面：外部信息管理和内部信息管理。

1. 外部信息管理 （1）收集外部菌种信息：包括市场采购、购买渠道和供应商信息等；

（2）外部菌种信息的登记：获取外部菌种后，需要对菌种进行登记，包括收到的时间、来源、品种、产地、生产批号、采购数量、保质期等关键信息。

205菌种复苏、传代、保存、使⽤、销毁标准操作规程

1 ⽬的

规范微⽣物学检定⽤菌的管理，最⼤限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从⽽确保微⽣物学检验结果的准确可靠。2 适⽤范围

本规程适⽤于检定⽤菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使⽤及销毁等。3 术语

3.1 标准菌种是指由中国药品⽣物制品检定所医学微⽣物菌种保藏管理中⼼提供的冷冻⼲燥菌。

3.2 传代⽤菌种是指⽤标准菌种制备的采⽤特定保存⽅法长期固定保存的菌种，⽤于传代及制备⼯作⽤菌种。

3.3 ⼯作⽤菌种是指⽤标准菌种或传代⽤菌种接种⾄普通琼脂斜⾯培养后，作为⽇常⼯作使⽤的菌种。

3.4 菌种的传代是指将其接种⾄⼀新鲜培养基上或培养基内，每萌发⼀次即称为⼀代，从菌种保藏中⼼获得的冷冻⼲燥菌种为第0代。4 职责

4.1 品管部主管负责菌种的申购、接收、保存、分发。

4.2 微⽣物检验员负责菌种的确认、传代、使⽤及销毁。

5内容

5.1冻⼲菌种的复苏

菌种复苏、接种在超净⼯作台内按⽆菌操作要求进⾏。准备好菌种安瓿管（安瓿管从冰箱取出后⾸先置室温30分钟）、灭菌的⽑细滴管、培养⽫、镊⼦、1ml注射器（配有长针头）、营养⾁汤培养基、灭菌⽔及琼脂斜⾯，将以上物品移⼊菌

种室，⽤75%⼄醇棉球擦净安瓿管外壁放在⽆菌培养⽫内晾⼲，点燃酒精灯，将安瓿管的封⼝⼀端在⽕焰烧灼红热，⽤⽑细管吸取灭菌⽔少许滴在灼热处，使其骤冷⽽炸裂。在不离开⽕焰圈内，迅速⽤1ml注射器抽取0.3ml⾁汤培养基加⼊安瓿管内并摇动使冷冻块溶解，摇匀。⽤注射器吸取该安瓿管中内溶物分别接种⾄1⽀⾁汤培养基、2⽀琼脂斜⾯培养基。将接种后的⾁汤及培养基斜⾯根据菌种特性分别置于菌种相适宜的温度培养，培养完毕，取出培养物，⽤⽆菌接种环蘸取少许⾁汤培养物，然后在平⽫接种处进⾏划线使其形成单菌落，根据菌种特性分别置于适宜的温度下培养18-24⼩时，进⾏⾰兰染⾊镜检及相应的⽣化试验或采⽤细菌鉴定条对其进⾏确认。如不符合要求，应及时与⽣产商联系。5.2菌种传代

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菌种鉴定标准操作规程

目的：建立菌种鉴定标准操作规程

范围：适用于******鉴定标准操作

职责：

内容：

1整体操作步骤

1.1纯化、分离待鉴定菌

用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。

1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。

1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。

1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。

1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。

1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。

2革兰氏染色

2.1染色剂的配制

2.1.1结晶紫染色液：

甲液：结晶紫 1.0g

95%的酒精 20ml

乙液：草酸铵 0.8g

菌种传代贮存接种操作规程 编码：10 第 1 页 共 2 页

陕西汉王药业有限公司GMP管理文件

1 目 的：建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围：适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者：微生物检验员、化验室主任。

4 内 容：

4.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存：

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏（4-6℃）保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种：

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次，在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈450角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通过火焰烧灼。烧灼时，应把环置于酒精灯的外焰上，因外焰的温度比内焰高，容易烧红。

4.3.5 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间，在火焰旁分别拔出两支试管菌种传代、贮存、接种操作

规程 文件编号：10SOP.QC175

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审 核： 日期：

批 准： 日期：