[医学]中国药典-高效液相色谱

中国药典2020 高效液相色谱

高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、检测、定量化合物的分析技术。它通过样品在固相填充柱（也称为色谱柱）中与流动相相互作用，达到物质的分离和检测的目的。

高效液相色谱的主要设备包括进样器、泵、检测器和色谱柱。进样器负责将样品注入到色谱柱中，泵则负责向色谱柱内注入流动相，检测器则负责检测和记录某特定物质的浓度，并把数据传回计算机。色谱柱则是样品分离的关键部分，它由一种或多种材料组成，使样品能够在流动相中以一定速率流过。

高效液相色谱通常用在检测复杂样品中的化合物，如食品、药品、生物样品等。它的主要特点是高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性。它能够检测到微量量级以下的化合物，并且很容易从复杂矩阵中提取所需的物质。

高效液相色谱的工作原理是基于化学物质的亲性性质。样品经过某种预处理后，以一定的注入速度进入色谱柱中。在色谱柱中，样品物质会和填充柱内固定的某种材料作用，根据化合物的特性不同，有些化合物会与某些色谱柱材料形成亲和作用，有些则会与其他材料发生反应，并根据这些作用发生时的瞬间不同时刻，生成不同的荧光信号。

高效液相色谱的流动相包括两种，一种叫极性流动相，即水相。另一种叫做非极性流动相，即有机溶剂。在高效液相色谱的运用过程中，这两种流动相经常会互相使用，互相搭配，以达到更好的分离效果。

总结来说，高效液相色谱是一种分离、检测和定量化合物的重要技术，其优点包括高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性等。在现代科学和工业生产中，高效液相色谱不仅在药品、食品、生物样品分析方面得到广泛应用，而且还在环保、冶金、化工等其他关键领域起到了巨大的作用，使科技更加先进，生产更为精准。

化学药品分析中液相色谱柱的选择及应用

关于邀请您在我们北京液相色谱柱选择指南交流会上做报告的题目，初步拟定为：化学药品分析中液相色谱柱的选择及应用 ； 整体会议的Agenda是：

1. 化学药品分析中液相色谱柱的选择及应用 （邀请）

2. 液相色谱柱技术及其对色谱分离的影响

3. 安捷伦液相色谱柱介绍及快速高效解决方案

会议时间暂定为6月7日， 如果可以的话， 您的PPT 5月27号左右给我就成，

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例如 药典方法总结，药典发展趋势，FDA药典方法色谱柱选择（e.g.如何确保使用色谱柱能够符合FDA法规或者高于FDA法规要求，是否一定严格按照FDA的规格尺寸选择色谱柱）。

难分离药物色谱条件优化举例，改善分离效果的办法等

XXXXX药股份有限公司

标准操作规程

标 题：LC-10AVP高效液相色谱标准操作规程

生效日期 年 月 日 页次：1/6

编号：SOP-QC-238-01 颁发部门：质量管理部

新订□ 修订□ 原文件号：

编制： 部门审核： QA审核： 批准：

分发部门：QC。

目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。

范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。

责任者：QC主任，设备使用人员。

规程：

依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。

1.定义及概述：

1.1.高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。

1.2.高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

1.3.高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

第八章- 1 - 第八章 高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatograph)

第一节 概述（Generalization）

以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。

HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。

高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。C18（ODS）是最常使用的化学键合相。

根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。

《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。

一、 高效液相色谱法的特点

目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。达到传质阻力小，分离效率高。早期HPLC的固定相用涂渍的方法制备，液膜厚度df大，这和GC一样，会大大降低色谱柱的柱效。现代HPLC填料大多采用键合固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱效。高效固定相会带来什么新问题呢？使用高效填料带来两个新问题：一是柱流动阻力大大增大，因此需要采用高压泵输液；二是表面能很大，要采用专业的装柱技术。