高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究(一)

高效液相色谱法测定鸡蛋、牛奶和猪肉中环丙氨嗪及三聚氰胺的实验研究魏瑞成，王 冉，刘伟荣(江苏省农科院 江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室，江苏 南京 210014)摘 要：本实验研究建立用NH 2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋、猪肉和牛奶中环丙氨嗪和三聚氰胺残留量的高效液相色谱法，样品均质后经NaOH 和20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C 18固相萃取小柱净化等处理后上机检测，环丙氨嗪和三聚氰胺得到了很好的分离，各自的保留时间分别是8min 和12min 。

标准曲线在0.01～1.0μg /ml 浓度范围内呈线性相关，环丙氨嗪、三聚氰胺标准曲线的相关系数(r)分别为0.9999、0.9994。

检测限为0.02mg/kg ，定量限低于0.05mg/kg 。

关键词：环丙氨嗪；三聚氰胺；残留；高效液相色谱法Study on Analytical Method of Cyromazine and Melamine Residues in Egg, Milk and Pork with HPLCWEI Rui-cheng ，WANG Ran ，LIU Wei-rong(Key Laboratory of Animal-derived Food Safety of Jiangsu Province, Jiangsu Academy ofAgricultural Science, Nanjing 210014, China)Abstract ：A high-performance liquid chromatography (HPLC) with NH 2 column and 97% acetonitrile-water as mobile phase to determine the cyromazine and melamine residues in egg, milk and pork was described in this paper. Samples were treated with NaOH, extracted with acetonitrile containing 20% NH 4OH, and cleaned up by using C 18 column solid-phase extraction (SPE).A perfect separation for cyromazine and melamine was achieved with their respective retention time 8 and 12 min. The calibration curves for cyromazine and melamine are linear in the concentration range of 0.01 to 1.0 μg/ml, with the correlation coefficients of 0.9999 and 0.9994, respectively. The detection limits of both the compounds is 0.02 mg/kg and the quantification limit is less than 0.05 mg/kg.Key words ：cyromazine ；melamine ；residues ；high-performance liquid chromatography中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)12-0605-05收稿日期：2007-10-10基金项目：江苏省科技厅攻关项目(BM2003306)作者简介：魏瑞成(1979-)，男，硕士，主要从事畜产品安全性评价研究。

液相色谱-串联质谱法检测禽蛋类产品中26种类固醇激素的含量李新一【摘要】本实验采用高效液相色谱-电喷雾质谱法对禽蛋类产品中的26种类固醇激素进行了测定。

实验过程包括乙腈提取、ZnCl2去除磷脂、PLEXA固相萃取柱净化等。

柱后注射法观察ZnCl2去除磷脂效果，并对固相萃取条件进行了优化。

实验结果表明，应用酶水解法测定游离或结合态的类固醇激素精确性好（RSD≤15%），本方法的定量限为0.05~25 ng/g，平均回收率为63.2%~121.5%。

该法可用于检测不同种类（鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋、鸽子蛋）与不同养殖方式（普通鸡蛋、有机鸡蛋）的蛋类产品，具有灵敏度高，实用性强等特点。

此外，此法也可进行类固醇激素残留检测，为食品安全风险评估提供参考依据。

%A means employed liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) in electrospray ionization mode(ESI)for analyzing 26 steroids in egg was constructed.The step included extraction with acetonitrile and re-moval of phospholipids by zinc chloride(ZnCl2) before SPE cleanup with a Plexa cartridge.The effect of ZnCl2 on phospho-lipid removal was directly observed using the post column infusion and SPE washing and elution conditions were optimized using a shallow gradient procedure.The results indicated that enzyme hydrolysis was used to determine free and conjugated steroids and satisfactory precision (RSD≤15%) was aquired, th e limits of quantification were between 0.05 and 25 ng/g depending on steroid types,the recoveries ranged from63.2%to 121.5%and this method was effectively employed to com-pare thesteroids in eggs belonging to different species (i.e., hen,duck,quail and pigeon eggs) or different raising system (i.e., normal anic eggs).The developed method is sensitive and useful for detection and quantification of steroids in eggs and can be used for residue controlprograms.Furthermore,the acquired steroid content will provide a reference for food risk assessment analysis.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2015(000)013【总页数】9页(P29-37)【关键词】类固醇激素;蛋类产品;液相色谱-串联质谱;主成分分析【作者】李新一【作者单位】全国畜牧总站中国饲料工业协会，北京朝阳 100125【正文语种】中文【中图分类】S816.17类固醇激素在动物的生长发育、成熟和衰老的各阶段发挥着重要的作用，其作用机制是在体内充当化学信使，通过与雄激素、雌激素、皮质激素的受体结合，激发信号转导，从而发挥相应的作用。

试剂和溶液：除另有规定外，使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水甲醇：色谱纯无水乙醇石油醚：沸程30-60℃无水乙醚无水硫酸钠氢氧化钾60%氢氧化钾溶液：60克氢氧化钾，加水40ML 混合溶解胆固醇：纯度≥99%标准贮备液：胆固醇标准品0.05g(精确至0.1mg)，用无水乙醇溶解定容至50mL，溶解每毫升相当于1mg胆固醇，放置4℃密封可贮藏半年标准工作溶液：分别吸取标准贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml，用无水乙醇定容至10ml，配置相当于0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.5mg/ml浓度标准溶液仪器和设备：高效液相色谱仪，具有紫外检测器或相当的检测器分析天平，感量0.1mg色谱柱，C18反相色谱柱（4.6mm*150mm,5um）分析步骤1.样品处理1.1皂化称取粉碎均匀的样品0.25-10g（胆固醇含量约为0.5mg-5mg,精确至0.1mg)，于250ml平底烧瓶中，加入30ml无水乙醇，10ml60%氢氧化钾溶液（4.7），混匀，将试样在100℃磁力搅拌加热套皂化回流1h，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5毫升无水乙醇（4.2）自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温1.2提取定量转移全部皂化液于250ml分液漏斗中，用30ml水分2-3次冲洗圆底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40ml石油醚和乙醚混合液(1+1,体积比）分2-3次冲洗平底烧瓶并入分液漏斗，振摇2min，静置，分层，转移水相于第二个分液漏斗，再用30ml石油醚和乙醚混合液（1+1，体积比）重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馏水每次100ml，洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻振摇，防止乳化，提取液通过约10g无水硫酸钠（4.5）脱水，转移到150ml平底烧瓶中1.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用无水乙醇溶解定容至5ml，溶液通过0.45um过滤膜过滤，收集清液于进样瓶中，待色谱仪测定2.测定2.1色谱参考条件色谱柱：C18反相色谱住柱温：38℃流动相：甲醇流速：1ml/min测定波长：205nm进样量：10ul标准曲线检测分别取10ul标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，检测标准曲线2.3样品中胆固醇的测定取10ul样液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰面积），由标准曲线上差得样液中胆固醇的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量3.结果计算样品中胆固醇的含量（x）以毫克每百克（mg/100g)表示，按下式计算：x=（c×V）÷m×100式中：x-----样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克（mg/100g)c-----样液中胆固醇的含量，单位为毫克每毫升（mg/ml)V-----容体积，单位为毫升（ml)m----样品质量，单位为克（g)平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。

毕业设计开题报告应用化学高效液相色谱法测定鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量一、选题的背景和意义随着人民生活水平的提高，作为一种可能危害人体健康的食品组分—胆固醇已逐渐成为国内外食品医学界辩论的热门话题。

胆固醇—学名：5-胆烯-3-β-醇。

在类固醇核的C-3上连接一羟基，而在C-17位上接有一条八碳或更多碳原子的脂族侧链。

是由乙酰辅酶A通过异戊二烯单位的缩合反应而合成,可作为胆酸和类固醇激素的前体。

动物组织中含有大量胆固醇，又以肾上腺、神经组织与胆汁最为富集。

血浆中胆固醇水平过高，是引起动脉粥样硬化的危险因子。

胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。

其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等溶剂。

胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料。

胆固醇一般分为两类：低密度脂蛋白胆固醇(简称LDL-C)，能对动脉造成损害；而高密度脂蛋白胆固醇（简称HDL-C），则具有清洁疏通动脉的功能。

目前, 对食品中胆固醇的测定方法主要包括: 比色法、气相色谱法、高效液相色谱法及其它方法。

由于胆固醇不溶于水, 在食物中又常伴有共存脂质, 因而对其测定非常复杂。

在所报道的这些方法中, 样品的处理不可避免地要经过皂化-萃取步骤, 并以多步溶剂萃取进行纯化和浓缩。

尤其是样品的皂化过程, 往往是造成测量误差和操作不便的最主要的原因。

本项工作旨在建立一种测定蛋黄胆固醇的相对简单的高效液相色谱分析方法。

二、研究目标与主要内容（含论文提纲）本实验选择高效液相色谱分析法。

与其他测定方法相比，此法操作高效、高灵敏度、分析速度快,可广泛用于胆固醇含量的测定。

三、拟采取的研究方法、研究手段及技术路线、实验方案等本实验采用液相色谱法对鸭蛋蛋黄中胆固醇的含量进行测定，主要涉及实验所需溶液的制备，实验步骤，数据处理三个方面的问题。

实验方案：1.仪器（1）高效液相色谱系统（2）流动相：乙腈-异丙醇（4∶1, V/ V）2.试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，均为蒸馏水。

鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。

研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。

鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。

HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【摘要】应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定.采用C18色谱柱为固定相,以甲醇为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温为25℃;蒸发光散射检测器的氮气流速为2 L·min-1,漂移管温度为85℃.结果表明,胆固醇进样量在4.008～40.080 μg范围内,其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系,相关系数R=0.9991,低、中、高三个浓度回收率为95.4%～99.1%.该方法操作简便、快速,精密度好,结果准确可靠.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)003【总页数】3页(P76-78)【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测器;鸡蛋;胆固醇;含量测定【作者】王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【作者单位】广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】O657.72胆固醇是环戊烷骈多氢菲的衍生物，亦称“胆甾醇”，是动物体内维持正常生理活动所必需的最重要的固醇，通常以游离状态或酯化状态存在于动物组织中[1]。

但是人体内过多的胆固醇将引起高血脂，进而引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病[2]，因此控制饮食中胆固醇摄入量非常必要。

鸡蛋中含有大量的胆固醇，是人体摄入胆固醇的重要途径。

对于鸡蛋中胆固醇含量的测定，文献报道多以在208 nm波长处紫外检测为主，对流动相的要求高，且样品中高紫外吸收物质的干扰大，易造成基线不稳，如果梯度洗脱则会引起基线漂移，使得胆固醇定量难度较大[3]。

高效液相色谱法测定鸡蛋中的脑磷脂和卵磷脂王雅蕾;黄建国;马春建【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2010(000)003【摘要】目的:建立鸡蛋中脑磷脂和卵磷脂的高效液相色谱测定方法.方法: 取冻干鸡蛋粉30mg,加入5mL甲醇,超声波震荡20min后离心取上清液进样检测.色谱条件为:色谱柱Zorbax SIL硅胶柱(4.6mm×250mm),流动相为甲醇:1%磷酸(50:1,V/V),流速0.5mL/min,柱温20℃,紫外检测器波长为205nm,进样量5μL.结果:脑磷脂在529.2～5292ng/μL浓度范围内呈线性关系(R2=0.9999),卵磷脂在4455～44550ng/μL浓度范围内呈线性关系(R2=0.9997),脑磷脂和卵磷脂的平均回收率分别为97.54%和96.42%.结论: 应用本方法能快速准确同时测定鸡蛋中脑磷脂和卵磷脂的含量,样品前处理简单易行.【总页数】4页(P34-37)【作者】王雅蕾;黄建国;马春建【作者单位】北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097【正文语种】中文【相关文献】1.高效液相色谱法测定奶粉中卵磷脂的质量分数 [J], 王飞;农云军;苏流坤;窦文渊;石燕丽2.高效液相色谱法测定胡麻卵磷脂中磷脂酰肌醇含量 [J], 吕旭;关明;古再丽努尔·阿尔肯3.梅花鹿血液中卵磷脂含量的高效液相色谱法测定研究 [J], 张启迪;崔丽春;唐超;田长永;马泽方4.高效液相色谱-蒸发光检测器法测定鸡蛋中卵磷脂的含量 [J], 孔凡华;王轩;于连洋;白沙沙;徐佳佳;杨春雪;李东;崔亚娟5.高效液相色谱法测定大豆中卵磷脂的含量 [J], 张德权;陈卫涛;张柏林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2021，30（1）福建分析测试Fujian Analysis &Testing超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中7种喹诺酮类药物的基质效应黄碧慧（厦门市食品药品质量检验研究院，福建厦门361004）收稿日期：2020-9-3作者简介：黄碧慧（1984—），女，工程师，从事食品检验工作，Email ：****************摘要：研究了超高效液相色谱-串联质谱测定鸡蛋中7种喹诺酮类药物的基质效应。

比较了鸡蛋中7种喹诺酮类药物经固相萃取柱净化法、正己烷除油法和未净化法3种前处理方法在高效液相色谱-串联质谱检测模式下基质效应的差异，结果表明固相萃取柱净化法方法优于其他两种，在此基础上进一步研究了不同称样量和目标化合物不同进样浓度的基质效应评价。

结果表明随着称样量的增加，化合物的基质效应也越来越高；随着检测质量浓度的增大，目标化合物受基质效应的影响逐渐减小。

因此在设计喹诺酮检测实验步骤时，首先应在保证方法灵敏度的前提下尽可能的减少称样量，其次可以采用固相萃取柱法作为净化步骤，能有效去除基质中大部分杂质，最后如果有合适的同位素内标物或者与化合物性质相似的物质，也可以用内标校正法来降低目标化合物的基质效应。

关键词：鸡蛋；基质效应；喹诺酮类药物；超高效液相色谱-串联质谱法中图分类号：TS207.3+O657.72文献标识码：A文章编号：1009-8143（2021）01-0001-06Doi:10.3969/j.issn.1009-8143.2021.01.01Matrix Effects in the analysis of seven Quinolones Residues in Eggs by UPLC-MS/MSHuang Bi-hui（Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control ，Xiamen ，Fujian 361004，China ）Abstract:The matrix effect of seven quinolones in eggs was studied by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS ）.In this paper ，the matrix effects differences of seven quinolones in eggs were compared by three purification methods ：solid phase extraction （SPE ）purification method ，n-hexane degreasing and unpurified meth⁃od.The results showed that the solid phase extraction （SPE ）purification method was superior to the other two methods.On this basis ，the matrix effect evaluation of different sample weighting and different injection concentration of the target com⁃pound was further studied.It was found that the matrix effect of the compounds increased with the increase of the sample weighting ，and the influence of matrix effect on the target compounds decreased gradually with the increase of the detection concentration.Therefore ，when designing the experimental procedure of quinolones ，the author should first reduce the sam⁃ple weighting as much as possible on the premise of ensuring the sensitivity of the method ，and then take solid phase extrac⁃tion （SPE ）as the effectively purification step.Finally ，if the appropriate isotope internal standard or the substance with sim⁃ilar properties can obtain ，we can reduce the matrix effect of the target compound by internal standard method.Key words ：eggs ；matrix effects ；quinolone ；ultra performance liquid chromatography-mass /mass spectrometry （UPLC-MS /MS ）前言喹诺酮类抗生素是一类重要的合成广谱抗生素，这类抗生素在动物体内的残留可能给消费者带来的危害是，引起人体过敏反应或诱发病原体对抗生素的耐药性[1-2]。