梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验

梅毒螺旋体抗体检测法原理
梅毒是一种通过性接触传播的疾病，由梅毒螺旋体（Treponema pallidum）引起。

梅毒螺旋体抗体检测法是一种常用的诊断梅毒的
方法，其原理基于检测患者体内产生的抗体来判断是否感染了梅毒
螺旋体。

该检测方法主要分为两种，非特异性试验和特异性试验。

非特
异性试验包括梅毒螺旋体血凝试验（TPPA）和梅毒螺旋体颗粒凝集
试验（MHA-TP），这些试验可以快速筛查出患者是否感染了梅毒螺
旋体。

而特异性试验则包括梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和梅毒螺旋体荧光抗体试验（FTA-ABS），这些试验可以确
认患者是否真正感染了梅毒螺旋体。

在进行梅毒螺旋体抗体检测时，首先需要采集患者的血液样本，然后将样本与梅毒螺旋体抗体相关的试剂进行反应。

如果患者感染
了梅毒螺旋体，其体内会产生特定的抗体，这些抗体会与试剂中的
抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

通过观察这些复合物的形成情况，就可以确定患者是否感染了梅毒螺旋体。

梅毒螺旋体抗体检测法的原理简单而有效，可以帮助医生及时
诊断梅毒感染，从而采取相应的治疗措施。

然而，需要注意的是，梅毒螺旋体抗体检测法也存在一定的假阳性和假阴性情况，因此在进行诊断时需要综合考虑患者的临床症状和检测结果，以确保准确诊断梅毒感染。

总之，梅毒螺旋体抗体检测法是一种重要的梅毒诊断方法，其原理基于检测患者体内产生的抗体来判断是否感染了梅毒螺旋体。

通过该检测方法，可以及时发现患者的感染情况，为患者提供及时有效的治疗。

5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的评价摘要目的评价分析5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果。

方法基于本次研究需求，分别采取梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光法（CLIA）、甲苯胺红不加热血清试验（Trust）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及免疫印迹法（WB）对120例标本实施梅毒螺旋体抗体检测，对比分析5种检测法阳性率，将WB作为参照分析其他4种检测法的总符合率、特异度以及敏感度。

结果经分析，TPPA法、CLIA法、ELISA法以及Trust法和WB法阳性率对比差异无统计学意义（P>0.05）；将WB检测法当作确认试验，TPPA 法、CLIA法、ELISA法特异度、敏感度和总符合率均比较高。

结论经研究结果分析可知，TPPA法、CLIA法、ELISA法不管是敏感度，还是特异度均比较高，实际应用中可根据梅毒螺旋体抗体实际情况合理选用检测法。

关键词血清学；梅毒螺旋体抗体；检测在临床中梅毒作为常见性传播疾病之一，传染性非常高，目前在献血员以及临床患者输血之前、各种创伤性检验中梅毒血清学检验已成为常规检测中一项基本项目，基于该形势下，选用快捷、灵敏度和特异度均比较高以及操作便捷的检测法对于正确筛查与诊断梅毒也变得尤为重要[1，2]。

本次研究就5种血清学方法检测梅毒螺旋体抗体的效果进行评价。

现报告如下。

1 资料与方法1. 1 一般资料本次研究所用标本来自2012年7月～2015年5月到本院诊治患者120例，全部标本均实施梅毒螺旋体抗体检测，其中男50例，女70例，年龄32～56岁，平均年龄（45.26±4.9）岁。

1. 2 方法于空腹状态下采集3 ml静脉血，以3000 r/min进行离心，离心时间一般为10 min，经血清分离实施检测。

5种血清检测法所用仪器如下：洗板机、水浴箱、Clem Clin化学发光免疫分析仪、振荡器、Roto-2600c酶标仪以及离心器等；所用试剂有CLIA试剂、ELISA试剂、TPPA试剂、WB试剂以及Trust试剂。

目 的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。

适用范围：性病实验室工作人员责任 人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。

1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。

1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。

1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。

也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。

溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。

1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。

血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。

1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。

一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。

收集滴出的血液，立即用于检测。

1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。

1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。

1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。

先天梅毒的排除标准主要包括以下几个方面：
梅毒血清学检查阴性：六个月以后，如果梅毒血清学检查（如RPR）结果为阴性，可以排除先天性梅毒感染。

梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）阴性：如果RPR未转阴，始终维持在低滴度1:1的水平，应每三个月检查一次TPPA，一直至产后十八个月。

如果TPPA转阴，也可以排除感染。

特殊抗体检查：有条件的地区可进行特殊的抗体检查，如FTA-ABSIgM，如果结果阳性可诊断为先天梅毒，但结果阴性不能完全排除梅毒感染。

需要注意的是，以上标准并不是绝对的，如果有其他临床表现或疑虑，建议及时就医并咨询专业医生。

同时，预防先天梅毒的最佳方式是早期诊断和及时治疗，以防止母婴传播。

梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)（凝集法）1.目的：标准实验室TPPA检测操作。

2.范围：xxx院xxx 科3 .测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。

这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反响发生凝集，产生粒子凝集反响（Particle Agglutination Test, PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。

4.标本：采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸檄酸钠和EDTA抗凝剂。

样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去, 并确定样本未变质方可使用。

4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。

样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2-8°C 的冰箱中；假设需48小时以上保存或运输，那么应冻存于・20°C以下，防止反复冻融。

使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。

4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。

5.试剂：珠海丽珠试剂股份提供的试剂。

试剂盒在2°C-10°C储存，防止冷冻，防止强光照射，有效期12个月。

试剂盒开启使用后，冷冻枯燥品配好后，2C—10°C保存可使用7日，使用前必须做对照试验。

5.3试剂组成5.溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。

5.血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。

5.致敏粒子（冷冻枯燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。

5.未致敏粒子（冷冻枯燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。

5.阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1： 320（最终稀释倍数）。

6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1. 1溶解液（液体）：按照测定操作规那么使用。

血清稀释液（液体）：按照测定操作规那么使用。

梅毒螺旋抗体TPPA（凝集法）传播途径：1、性接触这是主要的传染途径。

未经治疗的病人在感染后的1年内最具有传染性；随着病期的延长，传染性越来越小；到感染后4年，通过性接触一般无传染性。

2、血传播梅毒患者、潜伏梅毒及隐性梅毒血清具传染性，通过输血及共用针头可传染他人。

3、胎传患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染，一般认为感染发生在妊娠4个月以后。

名称：赛乐迪亚原理：将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。

这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体,并且可用来测定抗体效价。

操作方法：试验前试剂应恢复到15～30℃。

用前30分钟按规定量加溶解液（0.6ML)溶解致敏颗粒、未致敏颗粒并混匀；按规定量加溶解液于质控血清。

(1)标本稀释液加至微量反应板孔内，第l孔100微升，第2-5孔各25微升。

(2)取血清或血浆25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔，混匀后取25微升至第5孔，混匀后弃去25微升。

(3)第4孔未致敏颗粒25微升，第5孔加致敏颗粒25微升。

(4)将反应板置振荡器振荡30秒。

(5)加盖后于室温（15-30℃）下水平静置，2小时后观察结果。

结果判断：判定基准阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－），致敏粒子（最终稀释倍数１：８０以上）的反应图象判定为（＋）时,最终判定为阳性，进行方法2的测定时，将显示出反应图象为(+)时的最终稀释倍数作为抗体效价。

阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图象，只要致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象显示为（－）时，最终判定即为阴性。

未致敏粒子（最终稀释倍数１：４０）的反应图象判定为（－）且致敏粒子（最终稀释倍数１：８０）的反应图象判定为（±）时，最终判定为保留。

注意事项：使用过的器具（移液管、试管等）、废液、废物等除用次氯酸钠（有效氯浓度1,000ppm，浸泡1小时以上），戊二醛（2%，浸泡1小时以上）进行消毒以外，还要进行高压蒸汽灭菌（121℃1小时以上）及焚烧等处理。

医学食疗与健康 2021年3月第19卷第6期·影像学及诊断实验·187梅毒检验中应用梅毒螺旋体颗粒凝集试验与甲苯胺红不加热血清试验的效果比较【摘要】目的：比较梅毒检验中应用梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）与甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）的效果。

方法：选取2019年3月至2020年6月来本院进行梅毒检验的146例患者，根据有无感染梅毒分成两组，其中将94例梅毒患者作为观察组，将52例未感染梅毒患者作为对照组。

上述人员均采取TPPA、TRUST 等两种诊断方法，比较两种诊断方法对梅毒螺旋体（TP）的阳性检出情况及诊断效能。

结果：TPPA 法检测TP 的阳性率96.81 %明显较TRUST 法的88.30 %高（P ＜0.05），检测Ｉ期梅毒的阳性率均明显较TRUST 法高（P ＜0.05），灵敏度、准确度及阴性预测值亦明显较TRUST 法高（P ＜0.05）。

结论：与TRUST 法相比，TPPA 法对不同时期梅毒的阳性检出率更高，诊断效能更强。

【关键词】梅毒检验；梅毒螺旋体颗粒凝集试验；甲苯胺红不加热血清试验【中图分类号】R759.1　【文献标识码】A　【文章编号】2096-5249（2021）06-0187-02李冬森灵台县皇甫谧中医院，甘肃灵台　744400梅毒是由梅毒螺旋体（TP）所致一种慢性性传播疾病，传播渠道有性接触、血液、母婴垂直传播等3种。

该疾病早期症状不明显，极易被忽视，随着病情持续进展，可出现梅毒疹，不仅可给患者带来痛苦，还会影响美观[1]。

若病情进展至晚期可出现全身多脏器损害，进而使患者生命健康受到威胁。

因此，应及早对梅毒做出明确诊断，使患者尽早接受治疗，以控制病情发展。

目前，常用的梅毒检验方法有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等。

为寻求更有效的检验方法对梅毒进行诊断，本研究对上述两种检验方法在梅毒诊断中的效能进行了分析，现报道如下。

梅毒螺旋体抗体诊断试剂（凝集法）使用说明书一、检验方法：如果利用自动分析测定装置来使用本试剂时，请按照仪器的使用说明书进行操作。

以下所述是手工操作方法，请连贯地进行操作。

试剂的调制。

A：溶解液（液状）按照测定操作规则使用。

B：血清稀释液（液状）按照测定操作规则使用。

C：致敏粒子（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。

D：未致敏颗粒（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。

E：阳性对照血清（液状）按照测定操作规则使用。

1.方法1（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴（100μl），从第二孔至第四孔各滴1滴（25μl）。

（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。

然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一空稀释至第四孔。

（3）用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，在第四孔中滴入1滴（25μl）致敏粒子。

（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。

2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。

另外，即使静置至次日也不影响判定结果。

在方法1中判定为阳性的样品，请再用具有确定意义的方法2进行检测。

2.方法2（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴(100μl)，从第二孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）。

（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。

然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一孔稀释至最后一孔。

（3））用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，从第四孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）致敏粒子。

（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。

2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。

梅毒螺旋体抗体测定方法比较目的：对胶体金法、酶联免疫法(ELISA)、免疫发光法、凝集法（TPPA）四种梅毒螺旋体抗体测定方式进行比较。

方法：选取我院60份确诊为梅毒患者的血清，同时抽取60例健康人群的血清，对四种检测方式进行比较。

结果：四种检测方法中凝集法检测率为100%，准确率最高，酶联免疫法与免疫法光法的阳性平均检出率为98%，而胶体金法的梅毒阳性检出率为95%，且假阳性出现比例为3%，与其他三种检测率比较,p＜0.05,差异具有统计学意义。

结论：胶体金法在操作中简便快速，但假阳性假阴性均有发生，质量控制没有另外三种方法好，凝集法检出率最高，为最准确的梅毒抗体检测方式。

标签：梅毒螺旋体抗体；胶体金；测定梅毒是一种由苍白密螺旋体苍白亚种病毒所引起的疾病，本病起病较慢，是一种全身性的疾病，主要通过性来传播。

由于本病对患者的伤害较大且发病缓慢，因此本病的早期诊断是非常重要的。

血清诊断为主要的诊断方式，目前在临床中通常有胶体金法、酶联免疫法、免疫发光法、凝集法四种，本院将对四种抗体测定方式进行研究比较，寻找准确率最高的测定方式。

1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年3月——2014年3月间60份确诊为梅毒患者的血清，同时抽取60例健康人群的血清，60例梅毒患者中有37例为一期梅毒患者，16例为二期梅毒患者，7例为三期梅毒患者。

所有患者血清均来自于我院体检以及住院部患者群中，所有标本收集完成后均行血清分离处理，放置冰箱保存。

1.2仪器试剂方法一：胶体金法（SYP）试剂来源：北京万泰生物药业股份有限公司。

方法二：酶联免疫法(ELISA)仪器:科华ST-360酶标仪试剂来源：英科新创（厦门）科技有限公司。

方法三：免疫发光法(CMIA)仪器：ABBORT C16200 全自动生化免疫分析仪，试剂配套。

方法四：凝集法（TPPA）试剂来源：富士瑞必欧珠式会社。

1.3结果观察对四种测定方式测定的梅毒阳性率进行比较，并做好详细记录。

梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）1.原理梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。

2.方法2.1仪器耗材：1)TPPA检测试剂盒2)移液器3)保湿盒2.2检测流程：1)试剂准备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。

2)加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔（100μl），从第2孔-第4孔各滴25μl。

3)样本稀释：用移液器取待检血清25μl置第1孔中，然后以2n 的方式从第1孔稀释至第4孔。

4)加对照液：用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子；在第4孔滴入25μl致敏粒子。

5)混合：以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟。

6)反应：加盖置湿盒内，于室温（15℃-30℃）下水平静置。

2小时后观察并记录结果。

附：重吸收试验对于未致敏粒子和致敏粒子均显示±以上凝集的样品，要按照下列程序在完成吸收操作的基础上进行再试验。

1)取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。

2)加入样品50μl混合，于室温（15℃-30℃）下放置20分钟以上。

3)离心分离（2000rpm、5分钟），然后分别吸取上清液【吸收完毕的稀释样品（1：20）】50μl至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。

4)从第4孔以后，要预先各滴入25μl血清稀释液，从第3孔至最后一孔用移液器以2n 的方式进行稀释。

5)之后的步骤同上。

3.结果3.1结果判读首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔），判断试验有效性后，再根据致敏粒子与标本反应孔（第4孔）与致敏粒子是否产生1+ ～2+凝集反应凝集反应，判断结果。

如未致敏粒子反应孔出现凝集（第3孔）为无效试验，需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。

++ ：产生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜状延展；+ ：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围；±：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形；- ：粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。