临床微生物样本采集规范-讲解版本

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BLAST比对
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苛养菌、厌氧菌、少见菌
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眼科医院角膜组织-----链格孢霉
杭州艾迪康少见菌分享
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纤毛菌——血培养 12
女性.65岁，尿液标本 13
苛养菌、少见菌
——艾迪康微生物实验室
伤口分泌物，泥土味很重， 咬琼脂，G+杆菌。
——链霉菌
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2 微生物项目组合
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临床标本的分类
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3 微生物项目采集 规范 22
正确的采取、处理与运送标本
临床医生最不能接受的微生物报告结果: 1.阳性率低！ 2.三种菌以上，疑是标本污染！
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微生物样本采样基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。 4.采样后立即送检（最好在2h内,保存不超过24h ），甚至床旁接种尤其是厌氧培养，
临床微生物项目 与样本采集规范
汇报提纲
01
微生物新技术
02
微生物新项目组合
03
微生物项目采集规范
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1 微生物新技术
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微生物新技术
• MALDI-TOF-MS • 16S rRNA和真菌ITS/D2（28S)测序
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微生物质谱仪
16S rRNA
6ห้องสมุดไป่ตู้
• 判断16S rRNA序列扩增是否成功：经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近 出现条带，说明16S rRNA已经扩增成功。由于16S rRNA序列长度一 般1500bp左右。
• 不可避免地受到污染 • 唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。 • 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现

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对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺 炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时 必须注意生物安全防护。
对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次， 连续2-3天；不建议24h内多次采集，除 非痰液外观性状改变；
怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清 晨痰液送检
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（二）采集方法
1、自然咳痰法 以晨痰为佳。用清水反 复漱口，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液 直接吐入无菌容器中，尽快送检。否则有 的细菌（如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌） 在外界可能死亡。不能及时送检的标本， 室温保存≤2h。要求采到肺深部的痰液， 不要唾液。
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可置肉汤培养
临床微生物标本采集 （一）血培养检测采血指征
临床上疑为败血症、脓毒血症 或其他血液感染的患者
1. 发热（≥38℃）或低温 （≤36℃）
2. 寒战 3. 白细胞增多（>10×109/L， 特别有“核左移”未成熟的或杆 6
5 . 血小板减少 6．皮肤粘膜出血
7．昏迷，休克 8．多器官衰竭
3.支气管镜采集法
–-经支气管镜直接吸引
–-支气管肺泡灌洗
–-防污染样本毛刷 28
（三）注意事项
1. 痰标本不能及时送检者，可暂存4℃ 冰箱。室温下耽搁数小时，定植于口 咽部的非致病菌过度生长而肺炎链球 菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率 则明显降低。
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2. 在临床上咳痰仍是诊断肺部感染最 常用的标本，但咳痰也最易被口咽部 正常菌群污染。痰液标本的细菌学检 验，必须区分是病原菌还是来自上呼 吸道的正常菌群。经过洗涤处理的痰 液或自气管镜采集及气管穿刺所获标 本，结果比较可靠。
素。成人血培养采血量在2~30ml之间，病原 菌检出率及采血量成正比例增长。每增加1ml 的血液，病原菌的检出率增加3.2%。儿童患 者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无 需等同于成人。对血液病患者或者血容量相 对较低的患者建议使用儿童瓶来减少血液的 采集量增加病原菌的检出率。

临床微生物标本的采集与送检
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采集方法
自然排便采集法 自然排便后，挑取其脓 血、粘液部分2-3g，液状粪便取絮状物23ml，盛于灭菌容器内或保存液中送检
直肠拭子方法 如不易获得粪便时，或排 泄困难的患者及婴儿，可用直肠拭子采取， 即以无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入 肛门内4-5cm（幼儿2-3cm）轻轻转动取出， 插入无菌试管内送检。
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静脉血采集操作步骤及要点
携用物至床边，核对床号、姓名、解释 戴手套，选择静脉，常规系止血带、 消毒皮肤，嘱患者握拳 行静脉穿刺、取血、松止血带、 嘱患者松拳、按压针眼、迅速拔针 穿刺点按压2～3min
临床微生物标本的采集与送检
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血液注入标本瓶内方法 血清标本：
取下针头，将血液顺试管 壁缓慢注入干燥试管（最常 用）内。
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标本的运送原则
①所有的标本都必须立即送往实验室，最 好在2h内,保存时间不应超过24h.
②最佳的临床标本送检首先取决于所获取 标本的量.量少的标本应在采集后15-30min 内送检.
③对环境敏感的微生物如志贺菌、奈瑟氏 菌和流感嗜血杆菌（对低温敏感）应立即 处理，禁止冷藏脊髓液和生殖道、眼部、 内耳道标本。
临床微生物标本的采集与送检
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血标本的微生物学检查
1.采血时间及次数：一般应在抗生素治疗前， 发热初期或高峰时抽血。
a. 伤寒患者应在发热1-2周内抽血 b. 化脓性脑膜炎、鼠疫或野兔热患者应在发热
1-2d内抽血 c. 急性败血症应在24小时内抽血3次或更多次，
并可在不同部位，如左、右手臂或颈部
临床微生物标本的采集与送检
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痰及上呼吸道标本
采集时间: 痰：一般以晨痰为好；支气管扩张症患者，

二、痰标本中常见病原体
细菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌卡他莫拉菌、脑膜炎奈瑟菌、白喉棒状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、百日咳杆菌、军团菌、支原体和衣原体等
真菌
白假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌和毛霉菌等
真菌
念球菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
厌氧菌
拟杆菌、产气荚膜梭菌
三、临床意义
血液感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验，提供病原学的诊断极为重要。 当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症,若有全身性炎症反应的表现称为脓毒症。血液标本的细菌培养是诊断菌血症的基本而重要的方法，若从患者血液中检出细菌，一般视为病原菌感染，提示有菌血症。
其他
放线菌（衣氏放线菌、诺卡菌）
三、临床意义
由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。细菌造成伤口感染一般认为需每克组织内细菌数量在105 ～106个以上。外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，且易发生混合感染。烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染，如铜绿假单胞菌等，次为革兰阳性球菌感染，可单独也可混合细菌感染。
真菌性肺炎
支原体肺炎
细菌性肺炎
第六节 粪便
一、标本采集
用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。
粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的提倡使用运送培养基。
细菌种类