细菌接种培养方法

第 1 页 共 3 页 供应室工作环境监测

各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下：

环境类别

范围 标准

空气

（cfu/m3） 物体表面（cfu/m3） 医务人员手

（cfu/m2）

Ⅰ类 层流洁净手术室，层流洁净病房 ≤10 ≤5 ≤5

Ⅱ类 普通手术室，产房，婴儿室，早产儿室，普通保护性隔离室，供应室无菌区，烧伤病房，人流室、重症监护病房、 ≤200 ≤5 ≤5

Ⅲ类 儿科病房，妇产科检查室，注射室，换药室，治疗室，供应室清洁区，急诊抢救室，化验室，各类普通病房 ≤500 ≤10 ≤10

Ⅳ类 传染科及病房，供应室污染区 ≤2500 ≤15 ≤15

消毒液的采样及检查方法

采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。

采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀

浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用于消毒物品的消毒液其染菌量﹤100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格;

空气采样及检查方法

检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超第 2 页 共 3 页 过4h。未检出致病菌为合格，不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定区域所执行的标准参数；

空气采样及检查方法：

采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样；

采祥高度：与地面垂直高度80－150cm；

布点方法 ：室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处各取一点;室内面积>30m2，设东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m，注意采样时不走回头路，不得逆行；

采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。

实验报告

课程名称：

医学微生物学 指导老师：________________成绩：__________________

实验名称： 细菌培养接种、常用生化反应及细菌生长方式 实验类型：_____同组学生姓名：_____

一、实验目的和要求（必填）

二、实验内容和原理（必填）

三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤

五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填）

七、讨论、心得

一、实验目的

1. 了解细菌常用培养基

2. 掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法

3.

熟悉细菌各种生长现象

4. 熟悉细菌常用生化反应

二、实验材料

生理盐水、大肠杆菌液、白色葡萄球菌液、痢疾杆菌液，接种环、酒精灯以及多种培养基。

三、操作方法

1. 细菌接种法

1) 分离培养法——平板划线法（葡萄球菌/大肠埃希菌）

2) 纯种培养法

① 斜面培养基接种法（葡萄球菌/大肠埃希菌）

a) 用左手握住菌种管和斜面培养基管，右手持接种环或接种针。

b) 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。

c) 用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。

d) 伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。

e) 接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。

② 半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法（大肠埃希菌/痢疾杆菌）

a) 用左手握住菌种管和半固体培养管，右手持接种针

b) 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。

c) 用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。

d) 垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。

e) 塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察生长情况。

③ 液体培养基接种法 （葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌）

细菌的培养方法

根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。

1. 一般培养法

将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18－24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。少数生长缓慢的细菌，需培养3－7天直至一个月才能生长。为使培养箱内保持一定湿度，可在其内放置一杯水。培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固，以防培养基干裂。

2. 二氧化碳培养法

某些细菌，如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空气中才能生长，尤其是初代分离培养要求更为严格。将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法，常用方法有以下几种：

(1) 二氧化碳培养箱 可将已接种的培养基直接放入箱内孵育，即可获得二氧化碳环境。

(2) 烛缸法 将已接种的培养基，置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内。缸盖或缸口处均需涂以凡士林，然后点燃蜡烛直立置入缸中，密封缸盖。待燃自行熄灭时，容器内约含5－10％的CO2 容器置37℃培养。

(3) 重碳酸钠－盐酸法 每升容积的容器内，重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例，分别将两种药各置一器皿内（如平皿内），连同器皿置于标本缸或干燥器内，盖严后使容器倾斜，两种药品接触后即可产生二氧化碳。

3. 厌氧培养法

目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。

(1) 厌氧罐法 是目前应用较广泛的一种方法，共分为以下几种。

抽气换气法：该法适用于一般实验室，其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境。标本接种后，将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa，停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 、20%H2 、10%CO2 （有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果）。罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管，美蓝在有氧的环境下呈蓝色，无氧时为红色。临用前首先将美蓝煮沸使变成无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即可持续无色。 气体发生袋法：气体发生袋系由锡箔密封包装，其中含有两种药片，一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片，另一种是含有硼氢化钠的药片。前者遇水放出二氧化碳，后者可释放氢。使用时在袋的右上角剪一小口，灌进10ml蒸馏水，立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中，拧紧盖子经2－3分钟后，可感到盖子微热并有少量水蒸气出现。密封后1小时左右罐中的O2 的含量可低于＜1%。

污水处理好氧细菌培养规程

（有接种污泥）

一、培养前的准备工作

1、各构筑物建成，并经清池清除建筑垃圾，静压试验证明无渗漏，无下沉位移，最后按有关规程验收合格。

2、电器、机械、管路等全部设备建成并经单机试车、联动试车正常。最后按有关规程验收合格。

3、根据日后运行管理需要，有条件的污水处理厂（站）需进行最基本的常规化验测试，如pH、水温、COD、DO、生物相等，用以指导活性污泥的培养过程和日常运行。

4、基础数据的调查摸底，包括污水流量昼夜变化情况，水质（pH、水温、COD、BOD5/CODCr、含氮、含磷、有毒物质等）及其变化情况，各种设施和设备的技术参数。

5、根据处理水质状况备足必需的营养物(碳源：大粪及淀粉、氮源：尿素、磷源：普钙Ca（H2PO4)2)，以备缺什么补什么。

6、操作人员应熟悉整个系统的管道布置和公用工程方面的情况，了解污泥培养的基本过程和控制要求。

7、人员到位，自培养和驯化后一般应使系统连续运行，不能脱人。

8、编制必要的化验和运转的原始记录报表以及初步的建章立制。从培菌伊始，逐步建立较规范的组织和管理模式，确保启动与正式运行的有序进行。

二、污泥驯化（调试）阶段

1、初期（3d）

① 首先将生化池注入一定量的清水和部分待处理的污水，然后将污泥倒入物料化制池。一般第1次投加适量污泥，同时投加大粪等培养料，加水搅拌后按比例均匀投加到生化池内。投加培养料以生化池COD的质量浓度控制在300

mg/L为准。然后按比例补加普钙Ca（H2PO4)2（由于投加大粪无需补加氮源）。

② 闷曝：投料后进行闷曝。水气体积控制在1：（5~10）。第1天曝气采取6h充氧，4h停机的方式进行。 ③ 再次投料：经过1d闷曝后，第2天COD的质量浓度降至100mg/L左右。需再次投料，第2次可投入略少于第1次投加量的污泥至化料池。同时投加以大粪为主的培养料，投加培养料仍以控制生化池COD的质量浓度在200