控制菌检查用培养基的适用性检查方案

控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。

二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。

三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。

2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。

3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。

4.液体融化装置：用于融化固体培养基。

5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。

6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。

7.放射源：用于灭菌工作区域。

8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。

9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。

四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。

2.准备所需的培养基和试剂。

3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。

4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。

5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。

6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。

7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。

8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。

9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。

10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。

11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。

12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。

13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。

14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。

五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。

2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。

3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。

控制菌检查培养基适用性检查方案一、研究背景和目的：菌检查是指通过检测和培养方法，对样品中的细菌进行分离鉴定和数量测定的过程。

菌检查培养基是进行菌检查的重要工具，其适用性直接影响到检测结果的准确性和可靠性。

因此，对菌检查培养基的适用性进行检查和验证，对于确保菌检查结果的准确性和可靠性具有重要意义。

本检查方案旨在对菌检查培养基的适用性进行系统检查，建立合理、可行的检查流程，以确保培养基的适用性符合相关标准和要求。

二、检查方法和步骤：1.收集样品：2.培养基准备：根据不同菌种和检测要求，选取合适的培养基进行准备。

培养基的准备需要按照相应的标准操作程序进行，以确保培养基的质量和规范性。

3.菌液接种：将收集的菌种，按照规定的菌液接种方法，接种于相应的培养基上。

4.培养条件控制：控制培养基的温度、湿度等条件，以及培养时间，以确保菌种在培养基上可以适应和生长。

5.菌落计数和观察：在培养时间结束后，观察培养基上的菌落形成情况，并进行菌落计数。

6.鉴定和比对：选择代表性的菌落进行鉴定和比对，以确认其和已知菌种的相似性和差异性。

7.结果评估：对所得的结果进行评估和统计分析，比对实验结果与对培养基适用性的要求是否一致。

8.结论和建议：根据实验结果，得出结论并提出相应的建议，包括是否适用、适用范围、注意事项等。

三、影响因素和处理措施：1.培养基成分：培养基中的成分可能对菌种的生长和繁殖产生影响，因此需要确保培养基中的成分符合菌种的需求和标准要求。

2.培养条件控制：地域、温度、湿度、pH等环境因素都会对菌种的生长和繁殖产生影响，因此在进行实验时需要控制这些因素的影响，以确保实验的可靠性和可重复性。

3.常见菌种筛选：针对不同食品、水等样品中的常见菌种，通过前期调查和研究，筛选出适用于相应样品的菌种进行实验。

4.对照组设定：在实验中设置对照组，以确保菌检查培养基的适用性与已知的标准相一致。

四、质量控制措施：1.培养基质量控制：对培养基的成分进行严格控制和质量评估，确保培养基的质量符合标准和要求。

培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。

2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。

3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。

45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。

5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。

6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。

6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。

6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。

6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。

7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。

72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。

分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。

接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。

上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。

培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。

2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。

3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。

4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。

4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。

4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。

4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。

a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。

b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。

如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。

4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。

4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。

⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

培养基适用性检查规程目的：建立一个培养基的灵敏度检查，确保培养基性能可靠。

范围：适用于微生物检验。

责任：微生物检验员。

依据：《中国药典》2010年版一部附录、2010版GMP实施指南规程：1.不应在同一无菌室内同时操作2个或2个以上菌株。

2.菌株传代次数不得超过5代（以菌种保存中心获及的冷冻干燥菌种为第0代）。

一、计数培养基的适用性检查1、菌液制备取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。

2、适用性检查取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml（50-100cfu）,分别注入无菌平皿中，立刻注入待检查营养琼脂培养基和对照营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备4个平皿（其中2个注入待检查营养琼脂培养基，另两个注入对照营养琼脂培养基）。

30-35℃培养48h，计数。

取白色念珠菌1ml（50-100cfu）,注入无菌平皿中，立刻注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基和对照玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备4个平皿（其中2个注入待检查玫瑰红钠琼脂培养基，另两个注入对照玫瑰红钠琼脂培养基）。

23-28℃培养72h，计数。

3、结果判断若被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落数的70%，且菌落大小、形态两者一致，判断该培养基的适用性检查符合规定。

二、控制菌检查用培养基的适用性检查1.菌液制备取大肠埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤或营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24h；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时，取上述培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10-100cfu、每1ml50-100cfu 和每1ml大于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。

1目的建立一个控制菌检査用培养基检査操作程序。

2适用范围控制菌检查中用的培养基。

检查项U包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。

3发放范围质量部4职责5内容5. 1菌种和菌液制备5. 1. 1控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。

大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(BO 44102]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC (BO 26003乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC (B) 10104生抱梭菌(Clostridium sporgenes) [CMCC (B) 64941]口色念珠菌 Candida albicans) [CMCC (B) 98001]5.1.2将金黃色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆陈液体培养基中或在胰酪大豆腺琼脂培养基上，30-35°C培养18-24小时，将口色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25°C培养2-3天，将生抱梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35°C培养24-48小时或接种于硫乙醇酸盐液体培养基中30-35°C培养18-24小时。

5. 2各种培养基需要测试的能力及判断指标5.2.1液体培养基促生长能力检查，取不大于lOOcfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。

增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基浑浊。

固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于lOOcfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下培养，与对照培养基比较，被检査培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。

一、菌液制备：
培养基名称：
检查项目：需做的检查在口内划“√”。

培养箱编号：培养温度：
口1.增菌培养基促生长能力检查
分别接种不大于100cfu的试验菌于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

培养结果：
检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。

结论：
口2.固体培养基促生长能力检查
培养结果：
检验标准：被检培养基菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

结论：
培养基名称：
口3.培养基抑制能力检查
划线接种于被检培养基平板上，在相应控制检查规定的培养温度和时间下培养培养结果：
检验标准：试验菌应不得生长。

结论：
口4.培养基指示能力检查
分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制检查规定的培养温度和时间下培养
培养结果：
检验标准：被检培养基试验菌生条的菌落形态大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。

结论：
复核人/日期：试验人/日期：。

培养基适用性检验验证方案文件编号：VMP-VV-501-00起草人：审核人：批准人：同意日期：年月日验证立项申请表验证方案审批表1.概述经过验证以确定所采取培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌测定及控制菌检验，依据特征制订检验方法和检验条件，按制订方法进行试验，依据验证结果判定是否符合验证标准。

若符合，按验证方法和条件进行微生物程度检验；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设置验证标准。

2.验证目标及范围为了确定所采取细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检验培养基是否符合微生物程度检验法要求要求，以确保检验结果正确、可靠及检验方法完整性。

3.验证风险评定对于此次验证实施进行了以下风险分析：4.验证前准备4.1验证人员培训：验证汇报起草人有责任在方案同意后（且在验证实施前）对此次验证相关人员进行培训。

培训人员统计见附件1。

4.2将全部平皿和稀释剂全部应该严格按摄影关灭菌程序消毒，以确保其对试验结果没有影响。

4.3仪器和器具：恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、无菌移液管。

5.验证内容5.1测试环境条件要求全部检验在环境洁净度C级下局部A级洁净度单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能预防微生物污染。

5.2计数培养基5.2.1验证用菌种及培养基：5.2.1.1起源：食品药品检验所5.2.1.2菌落计数用菌种注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。

5.2.2培养基及其制备方法：取市售脱水培养基，分别根据要求方法进行配制后灌装于洁净三角烧瓶中，然后加塞灭菌，在试验前加温熔化备用。

5.2.3菌液制备5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～二十四小时，取此培养液1ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采取10倍递增稀释法，稀释至10-6～10-7，使菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。

培养基适用性验证方案控制菌培养基控制菌检查用培养基的适用性检查方案目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 参照标准 (2)4. 验证项目 (2)5. 验证小组人员及职责 (2)6. 试验材料 (3)7. 控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标 (4)8. 菌液制备 (4)9. 验证步骤 (4)10 .附表 (6)1.概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

控制菌检查用培养基可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合检验要求。

2.验证目的：2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

本次验证的目的是确认胆盐乳糖培养基（BL）、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养基（MUG）、营养肉汤培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）是否符合检验要求。

3.参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。

4.验证项目：胆盐乳糖培养基（BL）、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养基（MUG）、营养肉汤培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）。

5.验证小组人员职责及要求：5.15.2验证人员职责及要求：5.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

5.2.2认真观察并做好验证原始记录。

5.2.3对实施验证的结果负责。

5.3验证中各部门的职责：5.3.1验证领导组职责：5.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

5.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

5.3.1.3负责验证方案的批准工作。

5.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

5.3.1.5负责验证报告的批准工作。

5.3.2验证工作小组职责：5.3.2.1负责验证方案的起草工作。

5.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

审核日期颁发部门质保部受控号批准日期分发部门质量控制科质保部1. 目的：建立控制菌检查用培养基的适用性检查的标准操作规程，确保培养基的有效性和试验结果的科学性。

2．适用范围本规程适用于微生物限度检查中所用控制菌培养基的适用性检查。

3．引用相关文件《中华人民共和国药典2010年版一部》附录XIII C 微生物限度检查法4．培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

4.1.菌种金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B)50094]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]。

实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。

4.2.菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取上述培养物1ml用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍递增稀释，一般金黄色葡萄球菌稀释至10-6，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌稀释至10-7，枯草芽孢杆菌稀释至10-5，制成每1ml含菌数为10-100cfu的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。

4.3.检测项目及方法控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

各培养基的检测项目及所用菌种见下表1：表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查审核日期颁发部门质保部受控号批准日期分发部门质量控制科质保部控制菌检查培养基特性试验菌株大肠埃希菌胆盐乳糖培养基4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群乳糖发酵培养基乳糖发酵培养基曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌大肠埃希菌沙门菌营养肉汤培养基四硫磺酸钠亮绿培养基胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志贺氏属琼脂培养基曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂三糖铁琼脂培养基促生长能力促生长能力抑制能力促生长+指示能力促生长+指示能力指示能力乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌胆盐乳糖培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基绿脓菌素测定用培养基促生长能力抑制能力促生长能力抑制能力促生长+指示能力铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌营养肉汤甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长+指示能力抑制能力金黄色葡萄球菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌4.3.1液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。

控制菌检查用培养基适用性验证方案1．试验目的控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是为了确认麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基、RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基适合大肠埃希菌、沙门菌的控制菌检查。

2. 试验方法照中国药典2015版四部非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）进行试验。

3.试验材料3.1 培养基3.2 菌种3.3 仪器XXXXX水平流净化工作台/生物安全柜、XXXXX立式压力蒸汽灭菌器、XXXXX电热恒温培养箱(30～35℃)、XXXXX生化培养箱（20～25℃）、XXXXX气浴恒温振荡器3.4 稀释剂0.9%无菌氯化钠溶液4.试验过程4.1菌液制备用0.9%无菌氯化钠溶液制成每0.1ml含菌数为不大于100cfu的菌悬液，菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。

4.2 适用性检查4.2.1 麦康凯液体培养基适用性检查取大肠埃希菌菌悬液各0.1 ml分别接种于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24h，进行促生长能力检查。

取金黄色葡萄球菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24h，进行抑制能力检查4.2.2 麦康凯琼脂培养基适用性检查取大肠埃希菌菌悬液各0.1 ml分别涂布被检培养基和对照培养基平板上，在35℃条件下培养24h，进行促生长能力和指示特性检查4.2.3 RV沙门菌增菌液体培养基适用性检查取乙副伤寒沙门氏菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，进行促生长能力检查。

取金黄色葡萄球菌菌悬液各0.1 ml接种于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，进行抑制能力检查。

4.2.4 木糖赖氨基酸脱氧胆酸盐琼脂培养基适用性检查取乙副伤寒沙门氏菌菌悬液各0.1 ml分别涂布被检培养基和对照培养基平板上，在35℃条件下培养24h，，进行促生长能力和指示特性检查。

微生物实验室培养基适用性操作规程建立培养基适用性检查操作规程，保证培养基的质量，确保检验结果的准确性。

本规程规定了培养基适用性检查方法和操作要求，适用于微生物实验室计数用培养基、控制菌检查用培养基的适用性检查。

1、简述1.1 培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基、按处方自行配制培养基所用不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查要求。

1.2 计数用培养基适用性检查包括需氧菌、霉菌及酵母菌总数计数。

1.3 控制菌检查用培养基适用性检查包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。

2 计数用培养基适用性检查微生物限度检查中计数用培养基有5种，胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、平板计数培养基。

2.1 培养基及配制2.1.1 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基；R2A琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基；平板计数培养基。

2.1.2 配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。

2.2 试剂及稀释剂配制2.2.1 试剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、聚山梨酯80、氯化钠。

2.2.2 稀释剂配制➢∙pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g,加水1000mL溶解，分装，灭菌（121℃、15min）。

➢∙0.05％（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取已经灭菌好的聚山梨酯80（1mL），加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，即得。

➢∙0.9％无菌氯化钠溶液：称取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000mL，分装，灭菌（121℃、15min）。

3 试剂及消毒液配制3.1 试剂新洁尔灭溶液、84消毒液、苯酚、75％医用消毒酒精。

培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。

2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。

4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。

开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。

5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。

5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。

供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。

5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。

菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。

取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。

控制菌培养基适用性实验
（促生长能力、抑制能力和指示特性）
控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查。

1.菌种
大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]
2.菌液制备；验用菌种；取经30～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物1ml，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液10倍稀释至10-5－10-7，含菌数50～100cfu/ml，备用。

3.适用性检查
3.1计数培养基适用性检查：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌或铜绿假单胞菌各50～100cfu，分别注入被检培养基管（皿），每株试验菌平行制备2管（皿），混匀，置30～35℃培养3天，观察结果。

3.2同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行试验。

4.结果判断：
4.1促生长能力和指示特性检查合格判断标准：被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好，且被检培养基与对照培养基生长的菌落大小，形态特征应一致。

4.2抑制能力检查合格判断标准；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应不生长。

接种不少于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检査规定的培养温度及不小于规定的最长培养时间下培养，试验菌应不生长。

目的制定培养基适用性检查标准操作规程。

范围本规程适用于微生物培养基适用性测定。

责任人文件起草、审核、签批、使用、归档、保管人员。

执行标准《中国药典》2010版一部附录ⅩⅢ培训对象检验人员、QC主管内容1. 计数培养基的适用性检查1.1 适用范围细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性，成品培养基、由脱水培养基或按处方配置的培养基均应检查。

1.2菌种试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。

1.3菌液的制备1.5结果判定若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。

2控制菌检查用培养基的适用性检查2.1 适用范围控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。

2.2 菌种试验用菌株的传代数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特征。

2.3菌液制备2.4 适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。

各培养基的检测项目及所用菌株表1。

表1 控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力检查2.5 液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最短培养时间下培养。

增菌培养基多为澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生产良好，表现为液体培养基变浑浊。

2.6 固体培养基促生长能力检查取试验菌液各0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布与被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30~35℃）及最短培养时间下培养。

培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该内容的应用范围采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限引入了对照培养基的概念判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性该部分内容均为新增规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目采用标准菌种比较的判定方法根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。

微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。

2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。

2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。

即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。