当前位置：文档之家 › 氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响

氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响

  • 格式：pdf
  • 大小：571.97 KB
  • 文档页数：4

中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH3361 1Department of Urology, Guizhou Provincial People’s Hospital, Guiyang 550002, Guizhou Province, China;2Department of Urology, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430064, Hubei Province, ChinaHu Jian-xin★, Master, Associate chief physician, Department of Urology, Guizhou Provincial People’s Hospital, Guiyang 550002, Guizhou Province, Chinahjx918@ Correspondence to: He Jian, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Urology, Guizhou Provincial People’s Hospital, Guiyang 550002, Guizhou Province, China gzhejian@yahoo. Supported by: the Science and Technology Foundation of Guizhou Health Committee, No. gzwkj2009-1-055* Received: 2010-11-19 Accepted: 2011-02-14氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响*★胡建新1，何坚1，刘军1，孙兆林1，王元林1，刘修恒2Effect of oxygen free radicals on adenosine triphosphatase and somatostatin in reproductive cellsHu Jian-xin1, He Jian1, Liu Jun1, Sun Zhao-lin1, Wang Yuan-lin1, Liu Xiu-heng2AbstractBACKGROUND: Most of studies about oxygen free radicals focus on production and scavenging of free radicals in animal cells. OBJECTIVE: To investigate the effect of oxygen free radical on adenosine triphosphatase (ATPase) and somatostatin (SOM) inspermatogonial cells cultured in vitro.METHODS: Spermatogonial cells isolated from mice were purified and cultured in vitro and divided into two groups after 24-hourculture. In the experimental group, xanthine-xanthinoxidase (X-XO) was used to establish an oxygen free radical damagingmodel. In the control group, normal saline was added. After 24 and 48 hours, changes of ATPase and SOM were observed in thetwo groups. Gray value and absorbance value at 492 nm were determined.RESULTS AND CONCLUSION: After 24 and 48 hours, the gray values of ATPase and SOM in the experimental group weresignificantly higher than those in the control group (P < 0.01), while the absorbance values in the experimental group were lowerthan those in the control group (P < 0.01). These indicated that oxygen free radicals can decrease the ATPase and SOM, andinfluence the growth and proliferation of spermatogonial cells cultured in vitro.Hu JX, He J, Liu J, Sun ZL, Wang YL, Liu XH.Effect of oxygen free radicals on adenosine triphosphatase and somatostatin inreproductive cells.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3361-3364.[ ]摘要背景：有关细胞自由基的研究，主要集中在动物体内细胞自由基的产生与清除方面。

目的：观察氧自由基对体外培养的睾丸生殖细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)和生长抑素含量的影响。

方法：体外分离、纯化小鼠睾丸生殖细胞，培养24 h后，将其分为2组，实验组添加黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶建立氧自由基损伤模型；对照添加生理盐水。

继续培养24，48 h，采用酶组化及免疫组化染色观察各组ATPase和生长抑素表达变化。

采用LUZEX-F图像分析仪分别测定其灰度值；用酶联免疫检测仪测定492 nm波长的吸光度值。

结果与结论：给药后24，48 h，实验组ATPase、生长抑素灰度值显著高于对照组(P < 0.01)，吸光度值显著低于对照组(P < 0.01)。

提示氧自由基可降低ATPase和生长抑素含量，影响生殖细胞在体外培养过程中的生长与增殖。

关键词：睾丸生殖细胞；体外培养；氧自由基；三磷酸腺苷酶；生长抑素doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.032胡建新，何坚，刘军，孙兆林，王元林，刘修恒.氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3361-3364. [http://www.c http://c n.zglc kf.c om]0 引言在生殖细胞体外培养过程中会产生大量的氧自由基，对生殖细胞的生长、增殖与分化都产生不利的影响。

三磷酸腺苷酶(ATPase)和生长抑素含量的变化是评定细胞代谢活动、生殖细胞生理功能的良好指标。

本文通过对氧自由基损伤睾丸生殖细胞ATPase和生长抑素含量变化的定量观察，分析氧自由基损伤导致生殖细胞在体外培养过程中生长、增殖与分化受抑制的病理基础。

1 材料和方法设计：细胞水平，对比观察实验。

时间及地点：于2010-04/08在贵州省人民医院中心实验室完成。

材料：选用健康SPF级12~15 d昆明雄性小鼠，体质量20~25 g，由贵阳医学院动物实验中心提供，动物合格证号：2008-D532。

取小鼠睾丸生殖细胞进行体外培养。

实验过程中对动物处置方法符合动物伦理学要求。

主要试剂：DMEM/F12培养基液、青霉素100 U/mL、链霉素100 mg/L、锥虫蓝、Percoll 密度梯度液、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶，均购自Sigma公司。

方法：精原干细胞(Spermatogonial stem cell, SSC)分离纯化及鉴定：采用差速贴壁联合非连续性Percoll密度梯度离心方法[1]。

颈椎脱臼处死小鼠，取双侧睾丸。

剥除被膜及血管，剪碎，加胡建新，等. 氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响P .O. Box 1200, Shenyang 110004 3362www.CRTER .org1贵州省人民医院泌尿外科，贵州省贵阳市550002；2武汉大学人民医院泌尿外科，湖北省武汉市 430064胡建新★，男，1970年生，湖北省咸丰县人，土家族，2006年贵阳医学院毕业，硕士，副主任医师，主要从事泌尿外科及男科研究。

hjx918@163. com通讯作者：何坚，主任医师，硕士生导师，贵州省人民医院泌尿外科， 贵州省贵阳市 550002 gzhejian@ 中图分类号:R318 文献标识码:B文章编号:1673-8225 (2011)18-03361-04收稿日期：2010-11-19修回日期：2011-02-14 (20101020014/G ·W)入10倍体积的Ⅳ型胶原酶溶液，34 ℃消化。

弃上清，加入2.5 g/L 胰蛋白酶，34 ℃消化，体积分数10%胎牛血清终止消化，400目筛网过滤，离心。

弃上清，加入DMEM/F12完全培养液，调整细胞浓度为1×109L -1，接种至培养瓶孵育。

将Percoll 细胞分离液分别稀释为10%，25%，35%，50%的梯度液。

从离心管底部开始依次由高到低浓度加入梯度液各 2 mL ，在最上层加入新收集的细胞悬液。

18 ℃离心，分层收集细胞。

HBSS 漂洗，培养液重悬细胞，调整细胞浓度为3×109L -1。

各梯度分离细胞涂片后姬姆萨染色，光镜下观察细胞形态。

SSC 主要分布于27%~35%Percoll 梯度层。

加入免疫荧光抗体后在荧光显微镜下观察细胞特异性抗体表达情况，流式细胞仪检测，鉴定[2]。

氧自由基损伤模型建立：生殖细胞的培养方法参照文献[3]的实验方法进行。

用培养液重悬细胞，调整SSC 浓度为3×109L -1，加入DMEM/F12完全培养液进行细胞培养，细胞培养24 h 后分为实验组和对照组，每组5 mL 。

合集下载

医学基础知识重要考点内分泌-生理学

医学基础知识重要考点内分泌-生理学

医学基础知识重要考点：内分泌-生理学资料来源汕尾中公教育生理学属于医疗卫生招聘考试医学基础知识需要掌握的内容，中公卫生人才招聘考试网帮助大家梳理知识-内分泌。

1.何谓激素受体的增量调节和减量调节?试举例说明。

激素受体的亲和力和数量可随生理条件的变化而发生改变，某一激素与受体结合时，可使该激素受体或另一种激素受体的亲和力与数量增加或减少，前者称为增量调节，而后者则称为减量调节。

例如，给去卵巢大鼠注射少量雌激素，使子宫组织雌激素的受体数量增加，属于增量调节;而长期使用大剂量胰岛索，在淋巴细胞膜上的胰岛素受体数量将减少，属于减量调节。

2.简述含氮激素的作用机制。

含氮激素分子较大，一般不能进入细胞内，只是与靶细胞表面细胞膜上的特异性受体结合，通过细胞膜内的G 蛋白(鸟苷酸调节蛋白，或称GTP蛋白)激活膜内的腺苷酸环化酶，在Mg2+参与下，使细胞内的ATP转变为cAMP。

cAMP作为第二信使进一步激活细胞内的蛋白激酶系统(PKA)，最后影响蛋白质磷酸化过程，引起细胞的各种生物效应，如腺细胞的分泌、肌细胞的收缩、细胞膜通透性的改变，以及细胞内各种酶促反应等。

含氮激素的这一作用机制，也称第二信使学说。

但是，也有的激素与受体结合后通过G蛋白抑制腺苷酸环化酶的活性，使细胞内cAMP减少，从而产生抑制性效应。

同时，含氮激素也并不都是通过影响腺苷酸环化酶-cAMP系统起作用的，有些激素可通过激活细胞膜内的磷脂酶C，改变磷脂酰肌醇的代谢，以三磷酸肌醇、二酰甘油或Ca2+作为第二信使而引起生理反应。

除PKA外，还有蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)等。

简述类固醇激素的作用机制。

类固醇激素一般分子较小且为脂溶性，可自由穿过细胞膜扩散人细胞内。

进入细胞内的激素与胞质中的受体结合，然后移位入细胞核内，与核内受体结合，进而启动(或抑制)DNA的转录过程，也即启动(或抑制)基因表达，促进(或抑制)mRNA的形成：mRNA透过核膜进入胞质，诱导(或减少)特异蛋白质生成，从而发挥激素的生物效应。

中医药调节肠道菌群治疗2型糖尿病的研究进展

中医药调节肠道菌群治疗2型糖尿病的研究进展

·论著·中医药调节肠道菌群治疗2型糖尿病的研究进展田　硕1，毋建华2*，高会萍3*（1.莲湖区北关社区卫生服务中心，陕西　西安　710015；2.西安大兴新区社区卫生服务中心，陕西　西安　710014；3.陕西省西安市莲湖区卫生局，陕西　西安　710002）[摘要]2型糖尿病是一种常见的代谢性疾病。

近年来，我国2型糖尿病患者的数量逐年增多。

此病已成为威胁我国居民健康的主要疾病之一。

人在生命的各阶段均与微生物及其代谢产物有着紧密的联系，微生物能够与宿主共同构成“共生功能体”。

正常情况下，微生物与宿主之间处于动态平衡的状态，当这种动态平衡状态被打破时，就可能引起包括2型糖尿病在内的多种疾病。

多种中医疗法（针灸疗法、中药疗法等）对肠道菌群均有正向调节的作用。

采用中医疗法对肠道菌群进行调节可治疗2型糖尿病。

本文主要是总结采用中医药疗法调节肠道菌群在治疗2型糖尿病方面的研究进展。

[关键词]中医药；肠道菌群；2型糖尿病；研究进展[中图分类号]R587.1 [文献标识码]B [文章编号]2095-7629-（2021）8-0001-03Research progress of TCM regulating intestinal flora in the treatment of type 2 diabetes mellitusTIAN Shuo1，WU Jianhua2*，GAO Huiping3*(1. Lianhu District Beiguan Community Health Service Center, Xi 'an 710015, Shaanxi, China;2. Community Health Service Center of Xi 'anDaxing New District, Xi 'an 710014, China;3. Lianhu District Health Bureau, Xi 'an, Shaanxi Province, Xi 'an 710002, China)[Abstract] Type 2 diabetes mellitus is a common metabolic disease. In recent years, the number of type 2 diabetes patients in China has been increasing year by year. This disease has become one of the major diseases threatening the health of Chinese residents. Human beings are closely related to microorganisms and their metabolites at all stages of life, and microorganisms can form “symbiotic functions” with their hosts. Under normal conditions, there is a dynamic equilibrium between the microbe and the host, and when this dynamic equilibrium is disturbed, it can lead to a variety of diseases, including type 2 diabetes. Various traditional Chinese medicine therapies (acupuncture therapy, Chinese medicine therapy, etc.) have positive regulation effect on intestinal flora. Type 2 diabetes mellitus can be treated by adjusting intestinal flora with TCM therapy. This article mainly summarizes the research progress in the treatment of type 2 diabetes mellitus by using TCM therapy to regulate intestinal flora.[Key words]traditional Chinese medicine; Intestinal flora; Type 2 diabetes; The research progress糖尿病（Diabetes mellitus）是一种常见的代谢性疾病。

72例急性胃黏膜病变诊治体会

72例急性胃黏膜病变诊治体会

原发病密切相关。
【 关键词】 胃黏膜病 变； 急诊 胃镜
急性 胃黏膜病变是以 胃黏膜浅表性损 害性 病变 ， 以 且 上消化道出血为主要临床表现 。为探讨急性 胃黏膜病变的 致病 因素 、 临床特 点及有效治疗 方法 ， 采用 回顾性 调查方 法 ，对 ２ ０ 年 １ ０８ 月一 ２ ０ 年 ｌ ｏ９ ２月住 院的 ７ ２例急性 胃黏 膜病变进行 了分析 ， 报告如下 。 １ 临床资料 １１ 一 般资料 ． 本组 患者 ７ ２例 ，男女 比为 ４： ，年龄 １ １ ７ ８ ２岁。且经 胃镜检查同时大部分行组织活检 ， 以及行 Ｂ超 （ 、 、 、 ） 肝 胆 脾 胰 等排除消化性 溃疡 、 食管 胃底 静脉 曲 张、 胃癌 、 胆道 出血等其他原因引起 的上消化道 出血后。
１ 内镜 表 现 ． ２ 直 视 下 以 胃黏 膜 上 皮 下 出血 及 扁 平 的 或
２３ 诊 断 诊断主要依据病 史及 临床表现 ， ． 确诊有赖于发
病 ４ ８ｈ内行 胃镜检查。
２ 治 疗 与 预 防 ． ４
Ａ ＭＬ的治疗措施颇多 ，但去除诱因 、积极处理原发 Ｇ
病、 抑制胃酸 、 降低 胃内酸度是治疗 的基础。胃内酸度升高
凹陷的 ， 胃黏膜糜烂 、 溃疡 为特点 ， 一般仅 为黏膜出血 ， 糜 烂或浅表溃疡 ， 不侵犯肌层 。
１ 结果 ． ３ 急性 胃黏膜病 变中 ， 、 男 女患病 的比为 ４： ， ｔ 而 年 龄 段 的 患 病率 为 ：４ １ １～ ７岁 占 １．７ ，８ ３ ６７ ％ １～ ５岁 占
高血脂 、 糖尿病非 常重要 。它能减少 急性脑血 管病 的发生 而并发的急性 胃黏 膜病 变 ， 同时也应积极提倡合理饮食如 高血 压、 高血脂病人 应低盐 ， 低脂饮食 ， 理锻炼 ， 合 劳逸结
缺氧诱导因子-1通过表观遗传修饰和自噬调控肝星状细胞活化机制的研究

缺氧诱导因子-1通过表观遗传修饰和自噬调控肝星状细胞活化机制的研究

英文缩略词缩略词英文全称中文名BNIP3 BCL2/adenovirus E1B 19kDainteracting protein 3 Bcl-2/腺病毒E1B 19kDa 相互作用蛋白3GLUT-1 glucose transport-1 葡萄糖转运蛋白-1GSY1 glycogen synthase 1 糖原合成酶1H3K4me3 Histone H3 lysine 4 trimethylation 组蛋白3第4位赖氨酸的三甲基化MTA Methylthioadenosine 甲基硫代腺苷OGT O-linked N-acelylglucosamin（GlcNAc）transferase O-linked 乙酰葡糖胺(GlcNAc)转移酶P4HA1 prolyl 4-hydroxylase，alpha polypeptide 脯氨酰4-羟化酶，α多肽I STC-1 stanniocalcin-1 斯钙素-1缺氧诱导因子-1通过表观遗传修饰和自噬调控肝星状细胞活化机制的研究摘要目的：肝纤维化是一种可逆转的创伤性修复，细胞外基质在肝脏中积累；肝脏内细胞外基质主要由活化的肝星状细胞产生，在肝纤维化发生发展中发挥不可忽视作用。

前期我们已证实，缺氧诱导因子-1（Hif-1）通过调节自噬影响肝星状细胞的活化，但具体机制尚未明确。

本文旨在探究Hif-1如何调控自噬而影响肝纤维化的发生发展，并从表观遗传学的角度如组蛋白甲基化修饰的角度探讨Hif-1对肝星状细胞自噬和活化的调控机制，进一步研究肝纤维化发生发展机制，为逆转肝纤维化提供科学的理论依据。

方法：以常氧或100μM CoCl2缺氧诱导处理人肝星状细胞LX-2后，提取两组样品总RNA，逆转录成cDNA后，进行全基因组表达芯片分析，筛选自噬或组蛋白甲基化修饰相关基因，并用Western blot验证表达。

以常氧或CoCl2缺氧诱导处理人肝星状细胞LX-2，用Western blot和免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）检测Hif-1与组蛋白甲基化修饰H3K4me3的关系。