土壤中性磷酸酶(S-NP)活性测定试剂盒说明书

土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC4045规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，4℃保存，10mg无水葡萄糖。

临用前加入1mL试剂一溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。

产品简介：S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

S-NI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与NI活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水、50目筛（或更小）、甲苯。

操作步骤：一、样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤及加样表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04mg/mL 的葡萄糖标准溶液备用。

3、加样表：试剂名称测定管对照管标准管空白管土样（g）0.020.02--试剂一（μL）-160-160试剂二（μL）160---标准液（μL）--160-甲苯（μL）4444混匀，37℃准确水浴1h后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水或冰浴冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000rpm，常温离心10min，取上清。

上清液（μL）140140140140试剂三（μL）60606060混匀，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm处蒸馏水调零，记录各管吸光值A，记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。

土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4025规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入3mL丙酮溶解。

产品说明：S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。

S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

自备实验用品及仪器：天平、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、丙酮、30目筛（或更小）。

操作步骤：一、样本处理土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，蒸馏水调零。

2、加样表：测定管对照管土样（g）0.030.03甲苯（μL）1515震荡混匀，室温静置15min。

试剂一（μL）255255试剂二（μL）30-30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。

流水冷却至室温。

试剂二（μL）-3014000g常温离心10min，取200μL上清于405nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照顾管。

三、酶活计算公式（1）按微量比色皿计算：酶活性定义：每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。

S-LAP活性（U/g）=△A÷(ε×d)×109×V反总÷W÷T=0.507×△A÷W。

ε：对硝基苯胺摩尔消光系数：9.87×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，300μL=3×10-4L；W：土样质量，g；T：反应时间，60min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

土壤β-木糖苷酶（S-β-XYS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4028规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体3mL×1瓶（自备）2-8℃保存试剂二液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶-20℃保存试剂四液体60mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：甲苯自备。

2、试剂三：临用前取1瓶加入10mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周。

3、标准品：5mmol/L的对硝基苯酚溶液。

产品说明：β-木糖苷酶（EC3.2.1.37，β-XYS）存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。

另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

S-β-XYS催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在400nm处有特征吸收峰，测定400nm光吸收增加速率，可计算S-β-XYS活性。

S-β-XYSP-Nitrophenol-β-D-Xyloside P-Nitrophenol（400nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30-50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min，波长调至400nm，蒸馏水调零。

2、标准溶液的稀释：临用前取20μL5mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂二，充分混匀，配制成100μmol/L标准液使用，现用现配。

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0270规格：50T/24S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用；试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体2mL×1支，0.2μmol/mL酪氨酸溶液，4℃保存。

产品说明：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。

土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿、蒸馏水、50目筛（或更小）。

样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

操作步驟：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：第1页，共2页试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1--试剂一（μL）100100--试剂二（μL）200----混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6次，使土样与反应液充分接触。

试剂三（μL）200200--试剂二（μL）-200--混匀，10000rpm室温离心10min，取上清液--上清液（μL）220220--标准液（μL）--220-蒸馏水（μL）---220试剂四（μL）650650650650试剂五（μL）130130130130混匀，40℃水浴10min，10000rpm室温离心10min，取上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

【关键字】精品土壤磷酸酶活性的测定【摘要】在植物的土壤磷素营养中，有机磷化合物占有一定的比例，而有机磷往往要在土壤磷酸酶的酶促作用下，才能转化成为植物可能利用的形态。

所以，土壤磷酸酶的活性直接影响土壤中磷的有效性。

研究土壤的磷酸酶活性，对于弄清土壤中磷的转化过程、方向及强度具有重要意义。

磷酸酶根据PH不同，分为酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和中性磷酸酶。

本文主要讲述磷酸酶的活性的测定。

【关键词】土壤磷酸酶活性碱性磷酸酶活性酸性磷酸酶活性中性磷酸酶活性pH5醋酸盐缓冲液pH7柠檬酸盐缓冲液pH9.4硼酸盐缓冲液标准曲线的测定酸性磷酸酶标准曲线的测定碱性磷酸酶标准曲线的测定中性磷酸酶标准曲线的测定【正文】在植物的土壤磷素营养中，有机磷化合物占有一定的比例，而有机磷往往要在土壤磷酸酶的酶促作用下，才能转化成为植物可能利用的形态。

所以，土壤磷酸酶的活性直接影响土壤中磷的有效性。

研究土壤的磷酸酶活性，对于弄清土壤中磷的转化过程、方向及强度具有重要意义。

1.酸性磷酸酶活性的测定（一）实验原理本法基于以磷酸苯二钠为基质，酶解释放出的酚，使其与氯代二溴对苯醌亚胺试剂反应生色。

用比色法测定出游离的酚量，用以表示酸性磷酸酶活性。

（二）试剂配制（1）0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）；（2）pH5醋酸盐缓冲液；（3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前都可使用；（4）酚的标准溶液：酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；酚工作液——取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；（5）甲苯；（6）0.3％硫酸铝溶液。

（三）实验步骤（1）标准曲线绘制取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mLpH5醋酸盐缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、0.0018、0.0022和0.0026mg·g-1浓度的酚标准溶液梯度。

土壤纤维素酶活性测定试剂盒说明书(分光光度法)货号:BC0150规格:50管/24样产品说明：S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

本产品采用3.5－二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

试剂组成：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/ml。

加样表和测定步骤：对照管测定管标准管风干土样（g）0.250.25-试剂一(μL)125125-煮沸15min（盖紧）振荡混匀，室温放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）10001000-蒸馏水（μL）250250-振荡混匀，40℃水浴糖化1h后，煮沸15min（盖紧，防止水分散失）,得糖化液糖化液(μL)505050试剂四(μL)150150150混匀，沸水浴中煮沸显色15min（盖紧，防止水分散失），冷却蒸馏水（μL）105010501050混匀，540nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，样品管计算ΔA=A测定管-A对照管标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。

以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。

活力计算：根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算样品浓度y（mg/mL）。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力（U/g）＝y×V反总÷W÷T=156×yT：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：1.625mL；W：样本质量，0.25g。

货号：QS2936 规格：50管/24样土壤纤维素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

测定原理：
采用3.5－二硝基水杨酸法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存；
加样表和测定步骤：
第1页，共2页
混匀，550nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。

S-CL活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.3356x - 0.012；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.012) ÷0.3356×V反总÷W÷T =465×(ΔA+0.012)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：1.625mL；W：样本质量，0.25g。

第2页，共2页。

中性、碱性土壤速效磷含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2965规格：100T/96S产品内容：提取液：液体125mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL双蒸水，溶解后4℃保存一周。

试剂三：液体5mL×1瓶，室温保存。

标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存。

工作液：35mL棕色空瓶×1瓶。

O：试剂一：试剂二：试剂三=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为工作液（定磷剂）的配制：按H2浅黄色。

若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷、一部分微溶性的无机磷和易矿化的有机磷等，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

用弱碱法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm 光吸收，即可计算磷含量。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、20目筛、漩涡震荡仪、EP管、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理：新鲜土样风干，过20目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10-20的比例（建议称取约0.05g 土样，加入1mL提取液），振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、将10μmol/mL标准液用提取液稀释为6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL的标准溶液备用。

土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2995规格：100T/48S 产品内容：试剂一：粉剂×1支，4℃保存。

加入1mL蒸馏水溶解，4℃保存2周。

临用前用蒸馏水稀释400倍，现用现配。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加15mL蒸馏水溶解，4℃保存2周。

试剂三：液体15mL×1瓶。

此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。

试剂四：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂五：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，4℃保存。

10mg亚硝酸钠，临用前加入1.45mL蒸馏水配成100μmol/mL的标准溶液。

4℃保存2周。

产品说明：土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的关键酶之一，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原酶类，可将NO 2-还原为NO，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

亚硝酸还原酶可将NO 2-还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO 2-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、30目（或更大）筛、冰和蒸馏水。

测定操作：1、样本处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

2、操作步骤：（1）可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm。

蒸馏水调零。

（2）将标准溶液用蒸馏水稀释为0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL的标准溶液。

（3）加样表：无机质管空白管1对照管测定管标准管空白管2风干土样（g）--0.050.05--蒸馏水（μL）-100100--试剂一（μL）100-100--试剂二（μL）100100100100--混匀后，25℃反应3h试剂三（μL）100100100100--充分震荡30s，10000rpm，4℃，离心10min--上清液（μL）100100100100--标准品（μL）----100-试剂四（μL）100100100100100100试剂五（μL）100100100100100100蒸馏水（μL）-----100充分混匀，室温放置15min后吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中测定540nm各管吸光值，分别记为A无机质管、A空白管1、A对照管、A测定管、A标准管和A空白管2，计算ΔA测定=（A无机质管-A空白管1）-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-A空白管2。

可见分光光度法土壤中性磷酸酶（S-NP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4050规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体21mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入50mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周；2、试剂四：临用前取1支加入576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。

试剂变褐色后不能再使用，2-8℃可保存2周；3、标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。

产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

中性环境中，S-NP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-NP活性。

Phenyl Disodium Phosphate S-NP Phenol+Na2HPO4Phenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Alkaline Conditions Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水、乙醇、30~50目筛和甲苯（不允许快递）。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比可以例参考文献）1.新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase）活性测定试剂盒（分光光度法）使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A测定管。

土壤过氧化氢酶（S-CAT）活性检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4001规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体0.3mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支2-8℃保存试剂三液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需将EP管先离心。

临用前取0.05mL试剂一加入9.95mL蒸馏水稀释待用或者按比例配制。

用不完的试剂2-8℃保存一周；2、试剂二：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂2-8℃保存4周。

产品说明：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。

S-CAT2H2O2(240nm)2H2O+O2注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵、30~50目筛和蒸馏水、。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、加样表（1.5ml EP管）：试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g）0.030.03试剂一（μL）260260蒸馏水（μL）26025℃振荡培养20min试剂二（μL）101010混匀8000g，25℃离心5min，取全部上清试剂三（μL）303030混匀，取200μL至微量石英比色皿或96孔板（UV板）中，240nm处记录各管吸光值A。

土壤过氧化物酶（S-POD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC0895规格：100T/48S产品内容：试剂一：粉剂×1瓶，临用前每瓶加入10mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂四：乙醚50mL×1瓶，4℃保存；（自备）标准品：液体10mL×1瓶，4℃保存，相当于每mL乙醚相中含有0.1mg/mL紫色没食子素。

产品说明：S-POD主要来源于土壤微生物，能够氧化土壤有机物质产生过氧化物，在腐殖质的形成过程中具有重要作用。

S-POD催化有机物质氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。

自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、乙醚（不允许快递）、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：1、样品处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

2、标准品处理：将标准品用0.5mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL。

分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，0mg/mL管调零，测定标准管的吸光度，根据吸光度和浓度建立标准曲线。

3、测定步骤：第1页，共2页试剂名称测定管无基质管风干土样（g）0.020.02蒸馏水20试剂一（μL）100100试剂二（μL）20振荡混匀，30℃恒温培养1h试剂三（μL）5050试剂四（μL）430430振荡数次室温静置30min，用蒸馏水调零，取0.2mL上层液于430nm处测定吸光值A。

计算△A=A测定管-A无基质管4、S-POD活力计算：根据标准曲线，将△A（x）带入公式中计算出y值（mg/ml）。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-POD活力（U/g土样）＝y×V提取相÷W÷T=516×yT：反应时间，1h=1/24d；V提取相：提取相总体积0.43mL；W：样本质量，0.02g。

货号：QS2301 规格：50管/24样中性蛋白酶（Neutral protease, NP）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：NP在一定的温度和中性pH条件下，催化水解蛋白质。

由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。

测定原理：中性条件下，NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加10 mL蒸馏水溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入10 mL试剂一，沸水溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加50 mL蒸馏水溶解。

试剂五：液体×1瓶，4℃保存。

标准品：液体×1支，0.25 μ mol/mL标准酪氨酸溶液，4℃避光保存。

粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。

2.血清或培养液：直接测定。

3.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作：1.分光光度计预热30min，调节波长到680 nm，蒸馏水调零。

2.试剂二、试剂三和试剂四置于30℃水浴保温30min。

3. 对照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL试剂二，混匀后置于30℃水浴保温10min；加入200μL试剂三，混匀后8000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL试剂四，200μL试剂五，混匀后置于30℃水浴保温20min，于680nm 测定光吸收，记为A对照管。

土壤磷酸酶（酸性、中性和碱性磷酸酶1.土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

2.Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。

测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。

前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。

后一种称为无机磷含量法。

研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。

所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。

测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。

测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。

常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。

（用缓冲液配制）；取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、-1浓度的酚标准溶液梯度。

30min后比色测定。

绘制标准曲0.0018、0.0022和0.0026mg?g线。

5g风干土置于200mL三角瓶中，加2.5mL甲苯，轻摇15min后，加入20mL0.5％磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在37?下培养24h。

土壤纤维素酶（Solid—cellulase，S—CL）活性测定试剂盒说明书土壤纤维素酶（Solidcellulase，SCL）活性测定试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义：SCL重要来源于土壤微生物，SCL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是重要的碳源营养物质。

测定原理：采用蒽酮比色法测定SCL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的构成和配制：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保管；（自备）试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保管；试剂三：液体40mL×1瓶，4℃保管；试剂四：粉剂×1瓶，4℃保管；临用前加入5mL蒸馏水和45mL浓硫酸充分溶解待用。

样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30～50目筛。

加样表和测定步骤：对照管测定管风干土样（g）0.050.05试剂一（μL）5050振荡混匀15min试剂二（μL ）90试剂三（μL ）370370蒸馏水（μL ）1809037℃振荡反应3h后，90℃水浴15min（盖紧，防止水分散失），冷却后8000g 25℃离心10min，取上清，得糖化液糖化液（μL）140140试剂四（μL）260260混匀，90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测620nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管A对照管。

每个测定管设一个对照管。

SCL活力计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x 0.0462；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

SCL活力（mg/d/g）＝（ΔA+0.0462）÷5.018×V反总÷W÷T =19.1×（ΔA+0.0462）T：反应时间，3h=1/8d； V反总：反应体系总体积：0.6mL；W：样本质量，0.05g。

土壤木质素过氧化物酶（S-Lip）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4016规格：50T/24S紫外分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体10μL×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前取1瓶加入2.5mL乙醇溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2周，实验前再将试剂二用乙醇稀释10倍备用，用多少配多少。

（1瓶粉剂溶解后可做50T，为了延长使用时间，此产品多给1瓶粉剂）2.试剂三：使用前请离心再用。

取2μL试剂三加入1mL蒸馏水充分混合备用（约20T的量），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛，在310nm处有特征吸收峰。

Veratrol S-LipVeratraldehyde(310nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：天平、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、移液器，水浴锅、震荡仪、甲苯（不允许快递）、乙醇（不允许快递）、30-50目筛、研钵、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min以上，波长调至310nm，蒸馏水调零。

2.样本测定（1.5mL EP管）：测定管对照管土样（g）0.10.1甲苯（μL）5050室温静置15min。

土壤磷酸酶（酸性、中性和碱性磷酸酶1.土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

2.Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。

测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。

前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。

后一种称为无机磷含量法。

研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。

所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。

测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。

测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。

常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。

（用缓冲液配制）；取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、-1浓度的酚标准溶液梯度。

30min后比色测定。

绘制标准曲0.0018、0.0022和0.0026mg?g线。

5g风干土置于200mL三角瓶中，加2.5mL甲苯，轻摇15min后，加入20mL0.5％磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用醋酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，在37?下培养24h。

北京索莱宝科技有限公司土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC3975规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入15mL蒸馏水备用。

试剂三A：液体0.4mL×1支，4℃保存。

试剂三B：液体1.6mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂三A倒入试剂三B中混匀备用（A：B=1：4比例配置）。

试剂四：液体2mL×1瓶，常温保存。

标准品：液体1mL×1支，10µmol/mL氮标准液，4℃保存。

产品说明：S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率，即可计算其酶活性。

试验需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、30~50目筛（或更小）、甲苯、冰和双蒸水。

操作步骤：一、样品前处理：新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至630nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、将标准溶液用蒸馏水稀释64倍得0.156μmol/mL的标准溶液。

3、样品测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称测定管对照管标准管空白管土样（g）0.050.05--甲苯（μL）2525--常温静置10min。

试剂一（μL）275275--试剂二（μL）200-蒸馏水-20080混匀，37℃水浴1小时。

10000g常温离心10min，取上清液于96孔板或者1.5mL EP管中。

上清液8080--标准液--80-试剂三16161616试剂四12121212蒸馏水92929292混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。