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Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程1 目的建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。
2 范围Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。
3 职责操作人员和责任人员对本规程的实施负责。
4 内容4.1 组成G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。
4.2 在线清洗若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。
首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。
4.3 开机接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。
约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。
双击桌面上的Instrument 1 Online，计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。
画面如下所示。
4.4 色谱条件的设定4.4.1 方法的编辑●在method and run control 状态下，单击“method”选择“edit entire method”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。
●进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。
●进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。
Agilent 1200 LC（中文版 B01.01）现场培训教材安捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部一、培训目的：●基本了解1200LC硬件操作。
●掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
二、培训准备：1、仪器设备：Agilent 1200LC●G1310A :(单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。
● G1313A（标准型自动进样器）。
● G1316A（柱温箱）。
● G1314A（VWD检测器）。
● G1362A（示差检测器）。
●色谱柱: Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um column P/N 993967-9022、溶剂准备：●色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。
●二次蒸馏水基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
2、打开 1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“视图”菜单中的“显示顶部工具栏”，“显示状态工具栏”，“系统视图”,“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开冲洗阀。
7、点击“泵”图标，点击“设置泵…”选项，进入泵编辑画面。
8 、设流速：5ml/min，点击“确定”。
9、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“启动”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
10、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。
11、点击“泵”图标，点击“设置泵…选项”，设流速：1.0ml/min。
安捷伦1200液相色谱仪安捷伦1200液相色谱仪Agilent 1200系列液相色谱系统是Agilent 1100系列液相色谱系统的升级型号，是生产、科研领域最先进的液相色谱系统。
它提供给分析工作者以最为弹性的溶剂选择方式，最理想的自动分析方法，适应更广泛的领域的需求。
快速的溶剂转换、分析方法切换，提供二元、三元、四元梯度系统使得1200成为市场上最为人性化的产品。
配合自动进样系统又使1200成为多方法、大容量分析中最理想的解决方案。
该系统主要由溶剂架、真空脱气单元、泵、进样器、柱温箱、检测器、电脑工作站和检测与分析软件组成（其中泵、自动进样器、检测器可根据需要进行选配），其主要用于有机分子和生物大分子的分离纯化和鉴定。
特性与优势1、四种溶剂同时或梯度使用，快捷方便，使得流动相的准备得心应手。
2、极宽的流动（高达10ml/min）和延迟体积（800-1100ul）支持小量、标准分离或半制备应用。
3、简单易控的程序和控制：使用连续操作模块或化学工作站，轻松自如。
4、内置的微真空泵脱气装置，获得最高的洗脱效果，彻底免除了使用氦吹的烦恼。
5、直接朝前的通路，使得维修维护更加方便。
6、自诊断功能提供快速的故障查找排除，内建的工作日志和程序方法。
7、提前的维护回馈（EMF）功能。
长期跟踪仪器使用和用户自定义设定的限定标准，提供超限反馈信息。
8、LC1200系统全部模块具备升级扩展功能。
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程一、开机前准备a、明确实验目的，检测样品的性质，选择相应的分析色谱柱；b、配制分析的样品和流动相，选用色谱纯流动相或用0.22 μm的过滤膜过滤，样品也可10000rpm离心10min；c、检验仪器和计算机的电源线，数据线是否连接完好。
二、开机a、打开计算机的电源，待计算机运行完全后；b、依次打开脱气机、泵、柱温箱、检测器的电源开关；c、待仪器自检完成后，双击桌面上的“Instrument 1 online 在线”图标，打开工作站。
Agilent 1200 系列自动进样器恒温器用户手册注意©安捷伦科技有限公司， 2007, 2008根据美国和国际版权法，未经安捷伦公司书面许可，本书内容不得以任何形式复制（包括电子存储修改或翻译）。
手册部件号G1330-97011版本11/08Germany印刷Agilent TechnologiesHewlett-Packard-Strasse 876337 Waldbronn仅供研究之用。
禁止在诊断过程中使用。
声明本书内容如有改变，恕不另行通知。
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软件的使用，复制或解密受安捷伦科技标准商业许可条款的管理，美国政府的非DOD部门和机构将获得不比法案FAR 52.227-19 (c) (1-2)（1987年6月）大的权利。
美国政府的用户将获得不比法案FAR 52.227-14 (c) (1-2)（1987年6月）或DFAR252.227-7015 (b) (2)（1995年11月）确定的限制权利大的权利，这一原则适用于任何技术数据。
安全警告小心提示表示危险。
提醒您在操作过程中注意，如果执行不当，将影响产品或丢失重要数据。
Agilent 1200 HPLC操作说明及维护一、目的本文描述了Agilent 1200 HPLC的硬件操作，化学工作站的开机、关机，参数设定，学会数据采集，数据分析，及日常维护。
二、操作1. 开机1.1取出记录本登记操作时间和操作者。
1.2启动计算机：打开计算机电源，登陆windows操作系统。
1.3启动液相：打开Agilent1200各模块电源。
待各模块自检完成后（模块右上角指示灯为无色），双击“仪器1联机”图标，1.4开启工作站：工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”。
打开仪器控制视图：选择“视图---系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图---样品视图”，即可显示样品信息视图。
1.5. 配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中，设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上，单击鼠标左键，出现，点击溶剂瓶填充量，设置溶剂瓶实际体积。
1.6. 冲洗流动相管路：旋开溶液排空阀（两圈），左键单击泵图标，点击设置泵，设置“流速”为3.0 ml/min，点击中的灰色按钮，即可开启“%”设置框，输入需要设置的数值百分比，单击右侧的空白框，A相可自动配置为的百分比。
设置完成后，点击确定。
1.7. 开启模块：单击每个模块右下角的按钮，可单独启动模块或者，单击，点亮检测器的灯，或者单击“启动”按钮，启动全部模块。
为了延长紫外灯的寿命，建议冲洗色谱柱时，可先不开灯。
泵运行至肉眼看不到管路中的气泡时，流速降到1.0 ml/min，关闭排空阀（拧紧），冲洗管路。
2. 数据采集方法编辑建议在“脱机”中编辑方法。
在“方法和运行控制”状态下，点击菜单栏“方法---新建方法”，然后点击“编辑完整方法”，出现编辑“方法选项表”，去掉“数据分析”，点击确定，出现“方法注释”，根据需要填写或不填，点击确定，出现“设置泵”选项。
2.1设置泵流速---设置时要考虑到泵的压力，通常控制压力不要超过130bar，避免损害色谱柱。
Agile nt 1200液相色谱仪操作规程设备组成：G1311A （四元泵）、G1329A （标准型自动进样器）、G1316A （柱温箱）、G1314B （VWD 检测器）、 G1315D （ DAD 检测器）。
基本操作步骤： （一）、开机：1、 打开计算机，进入 Windows XP 画面。
（IP 地址由Bootp Service 程 序写入）2、 打开1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击仪器1联机”图标，或（点击屏幕左下角的开始”选择程序”选择“ Agile nt Chemstatio n,选择仪器1联 机”化学工作站自动与1200LC 通讯，进入的工作站画面如下所示。
ft>-dr雄前篩*■丸 馬?!側［电!漏|.启占击豪聊. Start 卫倉3 £ ®琴 » |谥便”.dD:..」^jl2.一一| 电]12.」JJC:...|-JC:...|匕®备辭❹厚口旦宕糧* 2L ：514、从 视图”菜单中选择 方法和运行控制”画面，点击 系统视图”样品 视图”使其命令前有 V”标志，来调用所需的界面。
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7、点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。
8、设流速：3-5ml/min ，点击“确定”。
1.目的（Purpose）：规范Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护，确保仪器正常运转。
2.范围（Scope）：适用于公司QC部Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护。
3.职责（Responsibility）：QC仪器操作人员对本仪器的使用和维护负责。
4.定义（Definition）4.1高效液相色谱仪：用高效液相色谱法对物质进行定性、定量分析的仪器。
4.2紫外检测器是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动性不吸收光，则吸光度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。
物理上测得物质的透光率，然后取负对数得到吸光度。
4.3示差折光检测器（RID）利用纯流动相和含有组分的洗脱液二者折光率之间的差别进行检验。
由于折光率随温度变化，检测器要求有一恒温小空间，使温度稳定，最好能控制在±0.001℃以内。
依据反射定律，在玻璃-液体界面，反射光的程度与入射角和玻璃与液体的折光率有关。
折光率改变时，反射光的强度也发生变化，在光电管中产生的信号被放大和记录下来。
5.安全注意事项（Safety Precaution）5.1流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
5.2在流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
5.3如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。
6.程序（Procedure）：6.1仪器组成及电源6.1.1仪器组成本仪器由四元泵（G1311A）、标准自动进样器（G1329A）、柱温箱（G1316A）、VWD检测器（G1314B）、示差检测器（G1362A）、脱气系统（G1322A），各部件电源插头。
安捷伦1200液相色谱仪一、培训目的:? 基本了解1200LC硬件操作。
? 掌握化学工作站的开机～关机～参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
? 掌握仪器故障诊断及维护保养基本知识? 掌握液相色谱仪分离物质的基本原理二、培训准备:1、仪器设备: Agilent 1200LC? G1310A :(单元泵),G1312A～。
? G1329A,标准型自动进样器,。
? G1316A,G1316B XL,柱温箱,。
? G1314B,G1314C XL,VWD检测器,。
? 色谱柱: Zorbax Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um columnP/N 993967-902 /5063-6600 2、溶剂准备:? 色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。
? 二次蒸馏水三、原理高效液相色谱法是一种现代液体色谱法～其基本方法是将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液～作为流动相～用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱～注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后～各成分先后进入检测器～用记录仪或数据处理装臵记录色谱图或进行数据处理～得到测验结果。
四、仪器组成LC1200高效液相色谱仪基本由泵、自动进样器、色谱柱、紫外-可见检测器、柱温箱、四元梯度比例阀在线脱气机和色谱数据处理系统。
另外根据不同的检品～操作过程中可能使用超声波洗机、电子天平、附0.45μm滤膜的过滤器等。
五、实验操作5.1操作前的准备5.1.1流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相～水应是新鲜制备的高纯水。
对规定pH值的流动相～应使用精密 pH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45μm滤膜滤过～用前使用超声波洗机脱气。
流动相要临用新配～且要足量。
5.1.2供试品溶液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液。
定量测定时～对照品溶液和样品供试溶液应分别配制2份。
供试品溶液在注入色谱仪之前～一般应经过0.45μm适宜滤膜滤过。
5.1.3 检查上次使用记录和仪器状态检查色谱柱是否适用于本次实验～色谱柱的出口位臵是否与流动相流向一致～原保存溶液剂与现流动相是否互溶～流动相的pH是否与色谱柱相适应～仪器是否完好～仪器的各开关是否处于关断的位臵。
1981About this ManualWe’ve added this manual to the Agilent website in an effort to help you support your product. This manual is the best copy we could find; it may be incomplete or contain dated information. If we find a more recent copy in the future, we will add it to the Agilent website.Support for Your ProductAgilent no longer sells or supports this product. Our service centers may be able to perform calibration if no repair parts are needed, but no other support from Agilent is available. You will find any other available product information on the Agilent Test & Measurement website, .HP References in this ManualThis manual may contain references to HP or Hewlett-Packard. Please note that Hewlett-Packard's former test and measurement, semiconductor products and chemical analysis businesses are now part of Agilent Technologies. We have made no changes to this manual copy. In other documentation, to reduce potential confusion, the only change to product numbers and names has been in the company name prefix: where a product number/name was HP XXXX the current name/number is now Agilent XXXX. For example, model numberHP8648A is now model number Agilent 8648A.s1。
Agilent 1200液相操作规程Agilent 1200液相操作规程(一)开机1、打开计算机，进入Windows XP画面。
2、打开1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“仪器1 联机”图标，进入的工作站画面，点击界面中的“启动”图标，如下图。
4、确保溶剂瓶中流动相充足，打开冲洗阀；鼠标左键点击“泵”图标，进入泵编辑画面，设置流速5mL/min，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
5、点击“泵”图标，调流速1 mL/min，点击“确定”，关闭冲洗阀。
(二)分析方法编辑1、泵参数的设定鼠标左键点击“泵”图标，设定流速、流动相配比等。
2、柱温箱参数设定鼠标左键点击“柱温箱”图标，设定柱温。
3、检测器参数设定鼠标左键点击“检测器”图标，设定检测波长等。
4、样品信息设定点击“运行控制”，选择“样品信息”项，编辑样品信息。
5、设定好色谱条件，仪器准备好，基线平稳后，便可手动进样，待样品全部成分出峰完毕，从“运行控制”项下选择“停止运行”。
6、对所编辑的方法可在“方法”项下进行“保存方法”。
(三)关机1、关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。
2、退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭Agilent 1200各模块电源开关。
3、关闭计算机（用shut down关）。
(四)Agilent 1200 LC维护保养1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。
2、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
流动相使用前必须进行脱气处理。
3、关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。
4、样品进样前必须用微孔滤膜过滤。
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1目的规范Agilent 1200型高效液相色谱仪的操作，确保使用本仪器的检验结果准确可靠。
2实验步骤2.1开机2.1.1准备好流动相并安装色谱柱。
2.1.2依次打开仪器各部件电源开关(在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器或荧光检测器等)，约5 min后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。
2.1.3打开电脑，点击亿【Instrument 1 online】，约30s后，计算机进入工作站2.2色谱条件的设定2.2.1直接设定在操作页面的右下部——色谱工作参数中设定。
将鼠标移至要设定的参数，如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击【OK】，即完成。
2.2.2调用已设置好的文件在命令栏【Method】下，选择【Load Method】，或直接单击快捷操作的【Load Method】图标，选定文件名，单击【OK】，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同“4.2.1”项下，在色谱工作参数中做修改；也可以在命令栏【Method】选择【Edit Entire Method】，随后工作站即按顺序出现一系列参数设置页面，在每个页面中键人设定值，单击【OK】，即完成。
2.2.3编辑新文件先在命令栏【Method】下，选择【New Method】，然后再在命令栏【Method】下，选择【Edit Entire Method】，在每个参数设置页面下输入设定值，完成后，在命令栏【Method】下，选择【Save Method】，给新文件命名，单击【OK】，即完成。
2.3 仪器的运行当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【ON】，仪器开始运行。
此时，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的Not Ready变为绿色的Ready，表明可以进行分析。
一、如何处理HPLC 中的盐带来的问题？很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。
建议在清洗时将水加热后再冲洗，这样既可以将盐溶解的更好，也可以溶解一些脂溶性物质，会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出，基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。
泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。
下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。
流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损，流动相（特别是水相）应该新鲜配置并且过滤。
上机前对流动相进行适当的超声脱气，以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。
比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道，建议将盐溶液接在下面的通道（A或D），将有机溶剂接在上面的通道（B或C）上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。
且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内，是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯，用于过滤流动相中的微粒，是经常需要维护的地方。
当系统压力有异常增高时，首先需要检查过滤白头是否阻塞了。
判断的方法是：打开排气阀，以纯水作流动相，将流速设为5mL/min，如果泵压超过10bar，则说明过滤白头需要更换了。
对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次，更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫，如果发现变形，也应及时更换。
如果过滤白头更换过于频繁，则需要认真检查一下流动相的品质，确保流动相上机前过滤，确保使用了合适的过滤膜。
如果流动相有长菌现象，除了配置新的溶剂，还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。
柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界，工作时，它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦，使用一段时间后，会有一定的磨损，因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。
