医学检验·检查项目:血清尿素_课件模板
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第十三章非蛋白含氮化合物及总胆汁酸测定非蛋白含氮化合物包括除蛋白质以外的尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、核苷酸、嘌呤、谷胱甘肽等多种含氮有机物。
临床上应用较多的有尿素、肌酐、尿酸和肌酸及它们的最终代谢产物氨,含血红素蛋白的代谢产物胆红素,以及肝脏合成的胆汁酸。
尿素、肌酐、尿酸和肌酐清除率可作为肾小球滤过功能的指标,尿酸水平还能反映嘌呤代谢紊乱的情况;尿肌酸测定能反映肌肉损害性疾病。
血氨是肝功能衰竭的指标,胆红素和胆汁酸可反映肝胆功能。
第一节血清尿素测定检测尿素的方法有二乙酰一肟法、半酶法和全酶法。
二乙酰一肟法需煮沸反应,检测精密度较差,目前临床实验室基本上已不使用。
半酶法是直接或间接测定经脲酶作用后由尿素转变成的氨,氨的测定方法有:①离子选择性电极法;②用波氏比色法;③干化学法。
脲酶-波氏比色法在基层实验室较多用。
全酶法用脲酶和谷氨酸脱氢酶偶联,使用连续监测法测定,可自动化,目前在多数医院普遍使用。
实验79 二乙酰一肟法测定血清尿素【原理】二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物,颜色深浅与尿素含量成正比。
因二乙酰不稳定,故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
【试剂】1.酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml,然后加入浓硫酸44ml、85%磷酸66ml。
冷至室温,加入氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g,溶解后用去离子水稀释至1L。
置棕色瓶中,4℃可保存半年。
2.179.9mmol/L二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g溶于去离子水中并定容至1L。
置棕色瓶中,4℃可保存半年。
3.尿素标准贮存液(100mmol/L) 精确称取于60~65℃干燥恒重的尿素(Mw为60.06)0.6g,溶解于无氨去离子水,并定容至100ml,加0.1g叠氮钠防腐,4℃可保存6个月。
4.尿素标准应用液(5mmol/L) 取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。
【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法,了解其意义。
【原理】血清尿素(Urea)是蛋白质的正常代谢产物。
它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。
肾性血清尿素含量增加,提示肾小球损伤。
是研究药物肾毒性的重要指标之一。
【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水【动物】家兔2只【方法】取家兔2只,1只注射氯化高汞5ml/kg(0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg),另1只注射等量的生理盐水。
48小时后,从家兔耳静脉取血1ml,制取血清,按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。
【结果】记录2只家兔血清尿素含量,比较并分析其差别。
附血清尿素(Urea)测定方法【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热,缩合生成色素原二嗪化合物。
因二乙酰不稳定,不宜直接加入,可由化学反应生成。
通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用,产生乙二酰。
二乙酰和尿素反应,缩合生成红色的二嗪。
根据颜色深浅确定尿素含量的多少。
【试剂】(1)酸性试剂:在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml,然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。
冷至室温,加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。
溶解后用蒸馏水稀释至1L,置棕色瓶中冰箱保存,可稳定6个月。
(2)二乙酰-肟溶液:称取二乙酰-肟20g,加蒸馏水约900ml,溶解后,再用蒸馏水稀释至1L,置棕色瓶中,贮放冰箱内可保存半年。
(3)尿素标准贮存液(100mmol/L):称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g,溶解于蒸馏水中,并稀释至100ml,加0.1g叠氮钠防腐,置冰箱内可稳定半年。
(4)尿素标准液应用液(5mmol/L):取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.【操作】按表T4-1进行混匀后,置沸水中加热12分钟,置冷水中冷却5分钟后,用分光光度计在波长540nm,以空白管调至零点。
比色读取标准管及测定管的吸光度。