使用福尔马林固定液的几个问题及解决方法

植物浸制标本的原色保持1．标本绿色的保持方法方法1：将醋酸酮缓慢加入到50％的冰醋酸中制成饱和溶液，然后将此溶液按1∶4的比例稀释。

随后加热，当加热到80℃的时候，把绿色标本投入到溶液中，继续加热。

当绿色标本逐渐由绿色变黄、变褐，最后又变绿时即可停止加热。

这样绿色标本便可置于福尔马林固定液中长期保持绿色。

方法2：将标本置于硫酸铜、福尔马林溶液中，浸泡10-20天后，再更换一次硫酸铜与福尔马林溶液并浸泡10天后取出，用清水冲洗干净，再用福尔马林固定液可长期保持绿色。

方法3：以20％的氯化镁浸泡1-4天，然后分别用30％、50％、75％的氯化镁溶液依次浸泡，每次浸泡5-7天(pH值为5.8左右)，再用85％、95％、100％的氯化镁溶液依次浸泡，每次7-10天。

最后，在过饱和氯化镁固定溶液中保持原色。

(引自《生物》杂志，此法还可以保持花和果实的其他颜色)大凡绿色植物浸制标本制作过程中，浸泡或浸渍时间是关键。

浸渍时间的长短，要视植物老嫩程度和种类而定。

一般地说，植物幼苗浸3～5天即可，而成熟的植物则需浸8～14天。

最妥善的办法是从浸泡后的第三天起，每天检查一次，见到植物褪成黄色而又重新变成绿色时，即可取出。

用清水将浸泡液洗净，然后放到5％的福尔马林溶液中保存，标本就制成了。

2．标本红色的保持方法(1)固定液配制：4ml 40％的福尔马林溶液，3g硼酸，400ml水。

(2) 保存液配制：20ml 40％的亚硫酸，10g硼酸，580ml水。

(3) 保存方法：把红色果实浸泡在固定液中1-3天，等到果实变成深色的时候取出，用注射器向果实里注射少量的保存液，然后固定在保存液中，果实逐渐恢复本色。

这种方法还可以预防标本腐烂。

对红绿交错的果实，如剖开的红瓤西瓜、红辣椒，或是植物的红色根、茎，如红萝卜、红皮甘蔗等，可以浸泡在质量浓度为0.05g ／ml的硫酸铜溶液里约10天左右，当标本由红变褐时取出。

漂洗后移到盛有质量浓度为0.01～0.02g／ml的亚硫酸溶液的标本瓶里保存。

固定液和组织的比例依据
固定液和组织的比例是根据所需固定的组织的大小和类型来确定的。

一般而言，常用的固定液和组织的比例是10:1，即10部分的固定液与1部分的组织混合。

然而，不同的组织类型可能需要不同的比例。

以下是一些常用的组织固定液比例：
1. 大体组织：对于较大的器官或动物组织，通常使用10%缓冲福尔马林溶液（10% buffered formalin）固定。

这意味着将10部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的组织混合。

2. 细胞和细胞簇：对于大部分细胞和细胞簇的固定，一般使用4%缓冲福尔马林溶液。

这意味着将4部分的缓冲福尔马林溶液和1部分的细胞或细胞簇混合。

3. 骨骼组织：对于骨骼组织的固定，常用的固定液是10%缓冲福尔马林溶液或中性缓冲福尔马林溶液。

需要较长的固定时间。

除了以上常用的固定液比例外，还有其他特殊组织和细胞类型可能需要不同的固定液比例。

此外，固定时间和固定温度也会影响固定效果，需要根据具体实验要求进行调整。

因此，最好根据实验需要和参考相关文献确定合适的固定液和组织比例。

石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过抗原抗体特异性反应来检测并定位蛋白的方法，目前广泛应用于组织病理学诊断。

其中，抗原修复（Antigen repair，AR）是免疫组化过程中不可忽略的关键步骤。

原因是组织经福尔马林等固定液固定和石蜡包埋后，抗原决定簇与核酸易发生交联，引起蛋白质空间结构的改变，导致抗原决定簇被封闭，使抗原与抗体的结合点减少，从而令抗原的阳性检测率及着色强度相对减弱。

这种交联在高温加热或是蛋白酶水解的作用下会发生可逆反应，恢复蛋白的原有构象，这一过程就是抗原修复。

一AR常用的方法是否进行AR、采用什么方法进行AR 要按抗体说明书的要求决定，不同的抗体选择适合该抗体的AR方法，有的要求高温修复，有的要求酶消化。

➤微波法方法：切片于抗原修复液中经微波炉内微波辐射5-20min。

它是利用微波每秒以24亿5千万次的快速运动产生瞬间热。

微波辐射可以使各物质分子作极性运动，促进形成的醛键断裂开。

分子间运动所产生的瞬间热可导致甲醛固定后的蛋白的变性。

该法的特点是：产热迅速，容易操作，但也容易引起抗原修复液的沸腾，使得修复液温度不稳定。

➤高温高压法方法：切片于抗原修复液中在高压锅中加热至沸腾，盖上压力阀至喷汽后持续1-5min。

该法利用高压和高热来促进醛键的断裂，当加热至开锅，加上高压阀后，汽体喷出，此时的温度在100℃-120℃之间，而高压也易使蛋白变性。

➤真空负压法方法：切片于抗原修复液中在预先调至95℃的真空负压干燥箱中真空负压处理5-10min。

这是一种操作简单，效果特佳，温度恒定，能一次性处理大量切片的方法。

该法特点是分子在失重的情况下四处飘游，可以增加各分子间的碰撞机会，而且恒定的温度能保证使甲醛固定的蛋白发生变性又不会使抗原修复液达到沸点。

➤酶修复法方法：0.10%胰蛋白酶或0.40%胃蛋白酶在室温或37℃消化切片15-30min。

产品名称：10%中性福尔马林组织固定液简介：10%中性福尔马林组织固定剂，是由10%中性福尔马林溶液（即4%甲醛）、磷酸盐缓冲液等组成。

用作固定的浓度为10%的福尔马林，实际含甲醛4%，10%福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。

对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。

配制方法：在病理科、手术室中运用，10%福尔马林固定液具备两个条件。

条件一：福尔马林在溶液中的含量浓度为10%（即甲醛含量为4%），甲醛在水中最高浓度为40%，即10%的中性福尔马林溶液，其中甲醛含量即是10%的40%甲醛。

10%中性福尔马林固定剂条件二：10%中性福尔马林溶液的酸碱度为PH值7.2~7.4之间。

调配标准符合国家标准，具有完善的标准体系。

配制过程中特别注意事项：原料很重要，水、甲醛、磷酸二氢钠，磷酸氢二钠。

一般厂家很不注重水，自来水，蒸馏水、去离子水都不太标准。

康乃欣公司用的水是这样一个流程：自来水经过四次中性树脂过滤，目的是去除水中杂质和离子，接着经过紫外线灭菌，经过微纳米中性树脂过滤去菌体尸体，最后经过双重蒸馏后得到的水，才用于调配10%中性福尔马林固定剂。

康乃欣用的40%浓度甲醛，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠都是分析醇。

在配制10%中性福尔马林固定液使用车间，都是三十万级车间、机械流水线灌装。

康乃欣质量标准高于国家标准，采用国际通用标准。

产品用途：维持保存、固定细胞和组织固原有的形态和结构。

适用范围：用于人体、动物组织标本的固定。

产品成分：10%中性福尔马林溶液（即4%甲醛）、磷酸盐缓冲液等。

产品特点：渗透力强、固定均匀；对组织收缩少，尤其对神经及髓鞘、脂肪、糖等固定效果最佳。

操作步骤：1、先在组织固定剂上编号及写上相关信息；2、将离体组织及时浸入固定剂中，离体时间一般不超多5分钟，固定时间为2—12小时。

产品说明：1、组织标本的体积与液体的比例为1:4，此值效果最佳；不大于1:3.2、小块组织标本﹙小于1.2cm×1.2cm×0.6cm）及各种活检验组织标本，固定2—12小时即可，可直接进行切片、脱水、染色、镜检等操作。

使用福尔马林固定液的几个问题及解决方法
福尔马林固定液是一种广泛使用的无毒的固定液，它的主要作用是将组织片在玻片
上固定，以便进行检测。

尽管它在研究领域是有效的，但由于许多因素，这种化学物质也
存在着一些问题。

首先，福尔马林固定液很容易破坏样本，尤其是在一些复杂的实验中。

有时，它会分
解样本，从而影响样本中活性物质的完整性。

其次，福尔马林固定液容易分解，使样本变质。

虽然微生物细胞在极端pH条件下可以稳定存在，但福尔马林固定液的极点是非常脆
弱的，它只在pH4-7之间有效，pH偏离此范围会导致样本变质。

另外，福尔马林固定液本身就非常挥发，因此在使用时它需要定期进行更换，以确保其有效性。

为了解决这些问题，研究人员需要采取一些措施来提高福尔马林固定液的质量。

首先，要在实验中使用新的成分和技术，以减少溅射，从而避免样本被损坏。

其次，选择恒定的pH 值，可提高固定质的稳定性，从而有效地保护样本的完整性。

此外，加入某些稳定剂
也可以有效地防止挥发，从而降低固定质的流失。

最后，定期检查固定液的PH值，有助
于避免变质或失效。

总之，福尔马林固定液是一种重要的化学物质，但需要采取一定的措施来解决一些潜
在的问题，如溅射对样本破坏、产物稳定性差以及挥发性失效等，以保证实验进行顺利。

安徽雷根生物技术有限公司 组织固定液说明书【产品名称】组织固定液【包装规格】货号：DF0111包装规格分别为：500ml、5000ml。

【预期用途】用于新鲜组织标本的固定。

【检验原理】固定的目的在于保护细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长，通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。

固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

本组织固定液主要由甲醛、磷酸盐组成，该固定液适合于绝大多数组织的固定，属于中性福尔马林固定液，pH接近于中性。

【主要组成成分】试剂组成主要成分组织固定液甲醛、磷酸盐【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封固定液的有效期为24个月，在有效期内的已开封固定液建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】组织尽量新鲜。

【检验方法】l、一般标本固定时间控制在1～4小时/mm，大标本应适当延长固定时间；2、固定好的组织，可在10%福尔马林固定液或70%乙醇中长期保存。

【检验方法的局限性】仅限于病理组织内容物固定。

【注意事项】l、避免过度延长固定时间，否则引起生物大分子过度交联，取材厚度不同，固定时间也不同。

2、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

3、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

4、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。

5、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。

6、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

【基本信息】备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。

组织固定处理与包埋常见问题对策组织固定处理与包埋是组织学基础实验的重要步骤，通过这一步骤可以使样本变得易于切片，并且能够持久保存。

不过在组织固定处理和包埋过程中，常会出现一些问题，我们需要采取相应的措施来解决这些问题，下面将详细介绍。

1. 组织过度固定：组织过度固定会导致标本变硬，难以切开，并且染色效果不好。

解决方法：对于异步性细胞，如肝、肾等组织，应采用较轻的固定方法，如乙醛、触发剂或冷冻等方法进行固定处理。

对于快速增殖的细胞，应使用更强的固定方法，如福尔马林、乙酸铅等方法进行固定，可以增加固定效果。

2. 组织固定不足：组织固定不足会导致组织在切片和染色过程中变形或脱离，影响最后的结果。

解决方法：应根据组织类型选择合适的固定方法，在固定过程中时间不宜过短。

对于大块切片，应保证固定液覆盖整个切片的表面。

对于不同的组织类型，还可以采用适当的预处理方法，如高压处理、冻切处理等方法，可以改善固定效果。

3. 细胞核破裂：细胞核破裂会导致核染色质扩散或缩小，影响染色效果。

4. 交叉污染：在固定过程中，不同样本之间会互相污染，导致结果出现误差。

解决方法：要遵循严格的实验操作规范，采用合适的消毒措施，避免不同样本之间发生交叉污染。

1. 组织断裂：组织在包埋过程中受到挤压或剪切力，容易断裂，影响切片质量。

解决方法：在包埋过程中应尽量避免施加压力，均匀地分布组织样本，避免组织之间出现空隙。

在包埋前，对组织进行预处理，包括脱水和浸透等操作，可以使组织更牢固地与包埋剂结合，避免断裂现象的发生。

2. 包埋剂不适：不同的包埋剂对不同的样本有不同的适应性，否则会导致样本变形或脱落。

解决方法：选择合适的包埋剂，根据样本性质和实验需要进行评估和比较，选择最佳的包埋剂。

对于不同的组织类型，还可以使用不同的包埋方法，如冷冻切片、半薄切片等，以提高样本质量。

3. 包埋剂固化不完全：包埋剂固化不完全会导致切片过程中出现裂纹或碎片。

解决方法：控制包埋剂的温度和时间，使包埋剂充分固化。

常见病理标本的处理固定问题及对策发表时间：2016-08-30T15:55:07.500Z 来源：《航空军医》2016年第14期作者：陈丽芳王仁玉赵玉萍[导读] 深入解析如何使病理标本能够在第一时间得到正确的固定。

福建省妇幼保健院福建福州 350001【摘要】目的深入解析如何使病理标本能够在第一时间得到正确的固定。

方法通过对手术室及各病房及门诊小手术间标本固定液配制的检查，发现手术室、各病房及门诊小手术间配制固定液的方法、储存及装标本的容器等存在不规范的现象，医务科、护理部及病理科相互协商，进一步完善操作规范，并进行相关培训。

结果病理标本得到正确、规范、安全的处理，手术室的工作环境得到大幅度改善，提高了职业安全防护。

结论制定操作规范，进行相关培训，对病理标本正确、规范、安全的固定非常重要。

【关键词】病理标本；固定方法；操作规范；培训The common problems and countermeasures of fixing the pathological specimen.[Abstract] Purpose：To fix the specimen in time and in appropriate way，we deeply research from all kinds of aspects. Methods：Through inspecting to operate theatre，wards and outpatient operate theatre，we find much problems on the method of preparing and restoring of formalin. After mutual consent of medicine department，nursing department，and pathology department，we make standard of operation of fix the specimen，then process a series of trains. Results：Fix specimen in time，standard of operation，and safely. Sharply improved the environment of operation room，and occupational safety protection. Conclusions：Make standard of operation of fix the specimen，then process a series of trains，which is very import to fix specimen in time，standard of operation，and safely. Key words：the pathology specimen；the method of fixing；standard of operation；train病理标本是形态教学和科研的重要材料，也是肿瘤诊断的重要依据，而组织固定是制作诊断切片的关键。

北京雷根生物技术有限公司
酒精-福尔马林-甘油固定液
简介：
固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。

固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。

固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

Leagene 酒精-福尔马林-甘油固定液主要由乙醇、福尔马林、甘油组成，该固定液属于脱水-交联固定剂，在辨认特定抗体的免疫组化反应中能产生极好的结果，尤其适用于长期保存材料。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。

2、 一般标本固定时间控制1～4h/mm ，大标本应适当延长固定时间。

注意事项：
1、 Leagene 酒精-福尔马林-甘油固定液有一定刺激性和腐蚀性，请在通风环境下小心操作。

2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。

对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

3、 固定液的容量应足够。

如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。

4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

5、 取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 24个月有效。

编号 名称 DF0172 Storage 酒精-福尔马林-甘油固定液 500ml RT 避光 使用说明书 1份。

病理工作中的常见问题和对策作者：郑娟来源：《维吾尔医药》2013年第07期浙江省永康市第一人民医院浙江永康 321300摘要：目的探讨病理技术工作中影响病理质量的因素。

方法提出病理技术工作中的常见问题及其对策。

结果克服影响结果的诸多因素，提高病理技术工作质量。

结论严格按规范化操作，可以做出高质量的病理切片。

关键词：病理技术问题对策质量在临床病理诊断和形态学研究中，每一个步骤和环节都可能影响最终检测结果。

旨在规范病理技术的管理、提高技术人员的技术水平和制片质量，为病理诊断提供有力的保证。

我们根据多年的实践经验，针对在病理技术工作过程中出现的常见问题进行了分析，并提出了切实可行的对策，现介绍如下。

1、常规制片问题在切片染色中出现的一些人为现象可能是由于组织固定不适当，固定剂类型不合适，脱水和浸蜡不够，试剂不适当，切片刀不锋利和切片机性能较差所造成的。

经常切片上出现一种细黑色沉淀物与组织无关（例如，沉淀物出现在组织的边缘，组织间隙及血管内）提示形成了福尔马林色素。

组织块取得比较薄而且用充足的中性福尔马林固定（固定液与组织的比率为10：1）会减少福尔马林色素这种人为现象的发生。

组织在透明和浸蜡之前脱水不够，组织就会变软，组织在无水乙醇和二甲苯中停留时间过长，组织就会变脆，切片时会出现组织碎裂或空洞等人为现象。

组织脱水时间要充分，最终乙醇脱水液的浓度应保持在100%。

如果脱蜡剂使用多次或室温较低，应延长脱蜡时间。

组织在固定过程中，如果固定液变为深棕色或红色，应该更换新固定液固定。

切片脱水透明不彻底，出现镜下观察模糊不清、容易褪色等问题。

封片不及时引起组织干涸，出现组织收缩和裂痕，即“龟裂”现象，或因吸收空气中的水分使部分细胞核透明不良而出现“黑核”现象。

盖玻片下气泡多数情况是由于封固剂太稀，盖玻片下封固剂干后浓缩而形成气泡。

封固剂太稠，封片方法不当也容易形成气泡（滴加封固剂后盖玻片应该从一侧轻轻放下，这样封固剂就会慢慢向另一侧散开，避免气泡的形成。

10％中性缓冲福尔马林配制中应注意的问题陈余朋;王行富;王密;王鹏程【期刊名称】《湖北民族学院学报（医学版）》【年(卷),期】2012(029)002【总页数】2页(P67,69)【关键词】中性缓冲福尔马林;福尔马林;配制【作者】陈余朋;王行富;王密;王鹏程【作者单位】福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005;福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005;福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005;福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350005【正文语种】中文【中图分类】R36110%中性缓冲福尔马林溶液(pH值7.2～7.4)是临床诊断及实验病理学中最常用的固定剂，具有较强的组织穿透能力，组织收缩小，固定均匀、稳定，能使组织硬化，保证HE制片的高质量；能更好的保持组织的抗原性[1,2]，有利于免疫组织化学标记物的检测。

研究[3]表明用10%中性缓冲性福尔马林固定剂的石蜡组织提取的DNA在质量上明显优于普通的非缓冲型福尔马林固定剂。

ASCO /CAP HER-2检测指南和我国2009年HER2基因检测指南指出，组织处理的标准化固定剂为10%中性缓冲福尔马林, 以获得最佳的原位免疫荧光检测[4,5]。

目前很多医院尤其基层单位在10%中性缓冲福尔马林配制上并不规范，主要有以下问题应引起同行重视。

试剂称重的准确性按照临床病理技术操作规范[1]，10%中性福尔马林固定液的配制方法(1000 ml)：甲醛(40%)100 ml，无水磷酸氢二钠6.5 g，磷酸二氢钠4 g，蒸馏水900 ml。

该配制方法并不能直接准确地配制10%的中性缓冲福尔马林，因为其中磷酸二氢钠并没注明是无水还是含一水化合物(NaH2PO4·H2O)或二水化合物(NaH2PO4·2H2O)，使用不同磷酸二氢钠的量将直接影响最终的pH值。

按照《组织学技术的理论与实践》介绍的10%中性福尔马林的配制方法[2]:福尔马林(37%-40%的甲醛溶液) 100 ml，Na2HPO46·5 g，NaH2PO4·H2O 4 g，蒸馏水900 ml,pH值应为7.2-7.4, 该配方明确磷酸二氢钠是一水化合物，只要这样准确称量，准确配制，pH值即为7.2～7.4。

组织固定处理与包埋常见问题对策1. 引言1.1 组织固定处理与包埋常见问题对策组织固定处理与包埋是组织学与病理学实验中的重要步骤，它们对于保持组织结构完整和准确展示细胞形态具有至关重要的作用。

在进行固定处理与包埋过程中，常常会遇到各种问题，如组织变性、破损等，这些问题如果不能及时有效地解决，将会影响实验结果的准确性与可靠性。

我们需要对固定处理与包埋过程中常见的问题进行深入分析，并提出相应的对策。

固定处理的重要性在于可以保持组织结构的完整性，防止细胞结构的变性和变形，从而确保实验结果的准确性。

固定处理过程中常见的问题包括固定液选择不当、固定时间过长或过短等。

针对这些问题，我们可以通过选择合适的固定液、控制固定时间以及调整固定温度等方式来解决。

包埋操作流程是将固定处理后的组织样品嵌入到蜡块中，使其固定在蜡块内，方便后续切片。

在包埋过程中，常见的问题包括包埋液的温度不稳定、气泡产生等。

针对这些问题，我们可以通过控制包埋液的温度、排除气泡等方式来解决。

加强固定处理与包埋的技术培训、定期检查设备和工具的状况、及时处理固定处理与包埋过程中出现的问题，是确保实验结果准确可靠的关键所在。

只有认真对待固定处理与包埋过程中的每一个细节，才能最大程度地提升实验的质量与可靠性。

【2000字结束】2. 正文2.1 固定处理的重要性固定处理是组织学研究中不可或缺的一步，它是保证组织形态结构完整性和细胞学形态保持不变的关键步骤。

固定处理的主要作用包括停止细胞内外生化反应和细胞构造的改变、保持各种细胞和组织结构之间的空间和时间关系、保存组织标本的形态和结构以及便于后续的染色和观察。

在组织学研究中，固定处理的质量直接影响着后续实验的可靠性和结果的准确性。

如果固定处理不完全或不当，可能导致细胞结构的变形、物质的流失或生化反应的进行，从而影响组织形态学的观察和细胞学的研究。

正确的固定处理是组织样本能够得到准确、可靠结果的基础。

固定处理还有利于组织样本的长期保存，使得研究者可以随时对已固定的组织样本进行后续的检验和分析。

谈谈固定液的使用作者: liza3(站内联系TA)发布：2013—01-11当前，应用于固定试剂的种类较多,它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能,才能合理的固定组织。

根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型:Ⅰ类:醛类，甲醛，戊二醛,多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等.Ⅱ类:氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾,重铬酸钾等。

Ⅲ类：蛋白变性类,甲醇，乙醇，醋酸等.Ⅳ类：其他,氯化汞，苦味酸等.上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。

下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。

(1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37-40%，由甲醛气体饱和于水而成,比重为1。

12。

它也可以稳定的固体形式存在,它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。

甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇,这种在组织化学方法当中，能使酶钝化,影响其反应。

甲酸,它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。

甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。

参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环.甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。

甲醛有这种交联的功能,也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中,需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色.甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法,就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10％的福尔马林。

当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少，保存固有物质好。

病理切片、石蜡切片制作过程中注意事项病理切片是病理医生用来诊断患者疾病的主要手段之一。

病理切片制作过程复杂漫长，影响病理切片制作质量的因素众多，常见问题归纳如下：一、固定标本要充分及时：固定标本是制片的第一个环节；固定时间不合适或者固定不正确的组织，在染色时常会出现较浅的核质着色和轮廓不清，还会出现不同程度的片状发白区；固定液的浓度要适宜，固定标本的正确方法为：组织离体后快速放入适宜浓度的固定液中，固定液的量大约为标本体积的7倍左右，盛放标本的容器以不使标准变形为宜，大小适中。

二、规范对标本进行取材：取材的原则为：保持病变的特征和器官的完整性。

尽量修除无关组织，切面尽量做到平整，原则上小标本要全部制片，大标本宜在病变部位以及病变部位与正常组织交界处多处取材。

三、及时更换试剂：在整个切片过程中，试剂的使用比较频繁，试剂的浓度改变，会影响到组织的脱水、透明、浸蜡效果，有些试剂因为挥发到别的试剂中，甚至会导致对病理组织的污染，从而产生误诊。

因此，制片过程应注意观察试剂情况，根据标本量的大小及时更换试剂，确保组织处理达到要求。

四、组织包埋、切片：小块组织要采用线状包埋，大块组织要在包埋时整理平整，以防出现切片不完全或片内组织杂乱而造成诊断医师误诊[3]。

切片机应随时检查刀口是否钝化，随时保持刀口锋利以防出现切片断裂、破碎的情况。

切片力求完整，尽量将每块组织切到最大面，以防发生漏诊。

五、染色、封固要仔细，掌握好烤片条件：一般为60℃烤片0.5～1 h，过高温度和过长时间都会导致组织发黑，染色不清；脱蜡过程也相当重要，如果出现脱蜡不干净，那么就会出现切片不易着色和着色不匀的情况。

盐酸乙醇的分化是影响染色效果的关键环节。

分化不足和过度都会导致染色失败。

树胶的稠度也应适中，树胶过稀过多会发生溢胶，树胶过稠过少又会出现封片不全或空泡。

完成切片固封后，应及时贴好标签，防止出现混淆事故。

六、加强操作人员的工作责任心，减少因人为因素导致差错事故及坏片的发生。

免疫化学染色技术常见问题及解决方法染色不足
2. 阳性对照有足够的特异性染色，背景干净；组织显示很少或没有特异性染色，但在几种组织成分中有不同的程度的背景染色。

背景染色
1. 背景染色见于所有对照组织和标本组织，或在一些组织成分，如结缔组织、脂肪和上皮组
2. 标本组织和阴性试剂对照玻片显示背景染色，阳性和阴性对照组织显示正确的特异性染色；
局灶性背景染色
1. 在对照、标本和玻片的局部区域出现染色不一致
2.标本中的脂肪或结缔组织、阴性对照组织和阳性对照试剂玻片中，背景染色出现在结缔组织和上皮组织中
3. 标本中的上皮组织、阴性对照组织、阳性对照组织和阴性对照试剂玻片中，特别在上皮呈中至强染色；背景染色出现在结缔组织和上皮组织中
7. 应用生物素—链菌素卵白素染色系统时，在所有对照和标本组织中均见背景染色
不正确的“特异性”染色
1.在标本组织、阳性对照、阴性组织对照和阳性试剂对照的白细胞胞膜出现阳性染色。

中性福尔马林固定液(10%,RNase free)简介：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。

固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。

固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。

固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。

Leagene 中性福尔马林固定液(10%,RNase free)主要由甲醛、磷酸盐、去离子水组成，经RNase free 处理，pH 为7.2～7.4，该固定液适合于绝大多数组织的固定，尤其适用于与RNA 有关的实验样本的固定。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 按实验具体要求操作。

2、 一般标本固定时间控制，大标本应适当延长固定时间。

3、 固定好的组织，可在中性福尔马林固定液(10%,RNase free)或70%乙醇中长期保存。

注意事项：1、 Leagene 中性福尔马林固定液(10%,RNase free)有一定刺激性和腐蚀性，请在通风较好的环境下小心操作， 避免吸入。

2、 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。

常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm ，一般不超过6mm 。

对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。

3、 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。

如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。

4、 温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。

5、 取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。

6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。

编号 名称 DF0118 Storage 中性福尔马林固定液(10%,RNase free) 500ml RT 避光 使用说明书相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001 DEPC处理水(0.1%)PS0013 RIPA裂解液(强)PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)。