DNA甲基化在癌症中的研究进展

３９４　Ｊ　Ｍｏｄ　Ｕｒｏｌ，Ｖｏ１．２３　Ｎｏ．５　Ｍａｙ　２０１８　·综　述·　ＤＮＡ甲基化在肾癌中的研究进展　陈　翔综述，郭剑明审校　（复旦大学附属中山医院泌尿外科，上海　２０００３２）　摘要：肾癌是常见的泌尿系恶性肿瘤，病因尚不明确，但已知多种基因突变与。肾癌相关。随着表观遗传研究的深入，已发现ＤＮＡ　甲基化这一表观遗传修饰在’肾癌中起到重要作用。本文从ＤＮＡ甲基化在。肾癌发生中的作用，ＤＮＡ甲基化与肾癌诊断，ＤＮＡ甲　基化在肾癌生存预测的应用，ＤＮＡ甲基化对肾癌耐药及治疗的影响四个方面对近年发表的相关文献进行综述，以期为肾癌治疗　提供新思路。　关键词：肾癌；ＤＮＡ甲基化；表观遗传　中图分类号：Ｒ７３７　文献标志码：Ｒ　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９　８２９１．２０１８．０５．０２０　肾癌是泌尿系统常见肿瘤，占成人恶性肿瘤的　２　～３　，以肾透明细胞癌（ｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌ　ｒｅｎａｌ　ｃｅｌｌ　ｃａｒ—　ｃｉｎｏｍａ，ｃｃＲＣＣ）最常见，其中约２５　的患者在初诊时　已有转移＿１］。肾癌的发病原因尚不清楚，可能与基因　改变有关。尽管局限性肾癌可通过手术根治，但　３Ｏ　的患者出现术后复发或转移　ｊ。肾癌对放化疗　高度抵抗，目前对转移性’肾癌仍缺乏根治手段，通常　采用靶向药物治疗以延长生存期　］。　表观遗传学主要研究影响基因表型但不涉及　ＤＮＡ序列改变的遗传调控机制，包括但不限于　ＤＮＡ、ｍＲＮＡ和组蛋白的各类共价修饰以及非编码　ＲＮＡ的转录调控作用。和遗传学改变类似，表观遗　传改变在肿瘤的发生和进展中也起到重要作用，其中　以ＤＮＡ甲基化的研究最为深入。ＤＮＡ甲基化是指　在ＣｐＧ双核苷酸的胞嘧啶环５位碳原子上连接甲　基，是一种可遗传、可逆的共价修饰，主要由ＤＮＡ甲　基转移酶引发并维持。启动子和增强子区域的甲基　化可导致基因转录活性降低，下调蛋白表达水平　Ｊ。　目前已有不少ＤＮＡ甲基化与肿瘤发生、诊断、预后、　耐药和治疗相关的报道，现对ＤＮＡ甲基化在肾癌中　的研究进展进行综述。　１　ＤＮＡ甲基化与肾癌的发生和进展　肾癌的发生与多种基因的突变、激活和抑制有　关；这些基因同时受遗传和表观遗传调控，两种调控　机制在不同基因中的重要性不一。既往研究已发现，　绝大部分家族性ｃｃＲＣＣ和７０　的散发性ｃｃＲＣＣ病　例中存在ｖｏｎ　Ｈｉｐｐｅｌ—Ｌｉｎｄａｕ（ＶＨＬ）基因失活和低　氧诱导因子（ｈｙｐｏｘｉａ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｆａｃｔｏｒ，ＨＩＦ）累积，促　收稿日期：２０１７－１０－１１　修回日期：２０１８　０卜Ｏ８　基金项目：国家自然科学基金面上项目（Ｎｏ．８１４７２３７６）　通信作者：郭剑明，教授．研究方向：泌尿生殖系统肿瘤．　Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｕｏ．ｊｉａｎｍｉｎｇ＠Ｚ８　ｈｏｓｐｉｔａ１．ｓｈ．ｃｎ　作者简介：陈翔（１　９９１一），男（汉族），博士研究生在读．　Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｘｉａｎｇ０７９７０＠１　６３．ｃｏｍ　进肾癌发生和血管生成　］。ＶＨＩ　基因的失活可由基　因突变或启动子甲基化造成，其中仅７　的ＶＨＩ　失　活由启动子甲基化造成，且与基因突变互斥，说明表　观遗传改变并非ＶＨＬ失活的主要原因　］。肾癌存　在遗传异质性，在ＶＨＩ　／ＨＩＦ通路外，也存在其他基　因的启动子甲基化失活，这可能与ＶＨＬ／ＨＩＦ通路　靶向药物耐药有关＿７］。　ＲＩＣＫＥＴＴＳ等　发现４Ｏ　的肾癌肿瘤组织中　存在ＯＶＯＬ１基因启动子甲基化；该基因的产物可抑　制转录因子ｃ—Ｍｙｅ的表达，其甲基化则增加ｃ—Ｍｙｃ　表达，激活多种癌基因，促进肾癌的发生。抑制转化　生长因子ｐ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｐ，ＴＧＦ￣）信　号通路的ＳＭＡＤ６基因也在肾癌中被发现存在高甲　基化，可激活ＴＧＦ８通路并促进肿瘤增殖　］。ＴＥＺ—　ＶＡＬ等［１。］发现促肾上腺皮质激素释放结合蛋白基　因（ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ，　ＣＲＨＢＰ）甲基化可促进肾癌的转移，提示肾上腺轴激　素在肾癌的进展中可能起到一定的作用。ＣＨＤ５这　一抑癌基因的表达产物可抑制肿瘤上皮间质转化及　肿瘤干细胞的产生。肾癌中ＣＨＤ５几乎不发生突　变，但在４４　的肾癌组织中因启动子甲基化而处于　沉默状态，使肿瘤易于迁移和侵袭［１　。ＮＥＬＬ１和　ＮＥＩ　Ｉ　２蛋白分别与骨和神经发育相关。ＮＡＫＡ　ＭＵＲＡ等　发现。肾癌细胞系和组织中这两个基因　存在启动子甲基化，蛋白表达低于正常肾组织；而去　甲基化药物处理可增加其表达，增加癌细胞的粘附　性，抑制其迁移，这提示ＮＥＩ　Ｌ１／２甲基化可能在肾　癌的进展中发挥作用。　含胱天蛋白酶募集域的凋亡相关斑点样蛋白　（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｓｐｅｃｋ—ｌｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ＣＡＲＤ，ＡＳＣ）能够诱发细胞凋亡；该基因在肾癌组织　和细胞系中因启动子甲基化而低表达，且甲基化水平　

文章编号：2096-0387 (2018) 02-0126-03第4卷第2期 生物化工 Vol.4 No.22018 年 4 月 Biological Chemical Engineering Apr. 2018

DNA甲基化检测技术研究进展

代微，刘继强+

(北京康普森生物技术有限公司，北京102206)

摘要：DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，在基因转录中发挥调控作用，与遗传印记、胚胎发育及多种疾病密切相

关，因此甲基化检测技术在研究中就尤为重要。随着生物技术的发展，开发了多种甲基化检测技术用以满足不同的研究目的，本

文对国内外近期研究进行探讨，期望加深对其认识，把握发展方向。

关键词：DNA甲基化；检测技术；高通量测序；基因芯片

中图分类号：Q75 文献标志码：A

The Progress on Detection Methods of DNA Methylation

Dai Wei, Liu ji-qiang

(Beijing Compass Biotechnology Co., Ltd., Beijing 102206)

Abstract: DNA methylation is an important part of epigenetic, which plays a regulatory role of gene transcription and is closely related to the genetic imprint, embryonic development and a diseases, it is very important to study the methylation detection method. With the development of bio-technology, there are a lot of methylation detection methods that have been developed to meet the requests of different aims of study so far. This paper discussed some recent researches all over the world, and should be useful for other researchers in this area.Key words：DNA methylation; Detection method; High throughput sequencing; Microarray

实用临床医学２０１２年第１３卷第５期Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，Ｖｏｌ　１３，Ｎｏ　５　ＤＮＡ甲基化与胃癌的研究进展　史艳芹（综述），冯义朝（审校）　（延安大学医学院附属医院消化内科，陕西延安７１６０００）　关键词：胃癌；表观遗传学；ＤＮＡ甲基化；去甲基化　中图分类号：Ｒ７３５．２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００９—８１９４（２０１２）０５—０１３１—０２　胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一．严重威胁　着人们的健康。在胃癌的发生过程中，除ＤＮＡ序列　改变外，有表观遗传学研究基因表达的变化．但不　涉及ＤＮＡ序列的改变。ＤＮＡ甲基化是指由ＤＮＡ甲　基转移酶（ＤＮＭＴ）催化．将活性甲基从Ｓ一腺苷甲硫　氨酸转移到胞嘧啶Ｃ５位上．形成５一甲基胞嘧啶的　化学修饰过程，是一种表观遗传修饰。最近的研究　证明，在正常细胞转化为肿瘤细胞以及肿瘤细胞侵　袭性不断增强的过程中，表观遗传学的改变．特别　是基因的异常甲基化在肿瘤的发生与演进过程中　发挥重要作用［１　。近年来，对胃癌ＤＮＡ异常甲基化　的研究逐渐成为热点。本文对胃癌相关基因甲基化　状态的研究进展以及去甲基化药物的临床应用进　行综述。为寻找胃癌早期诊断的分子标志物及干预　治疗的靶点提供新的思路。　１胃癌相关基因甲基化　１．１脆性组氨酸三联（ＦＨＩＴ）基因　ＦＨＩＴ基因是抑癌基因『４］，位于人类染色体３ｑ１４　区上，其ｅＤＮＡ由ｌＯ个外显子组成，外显子５￣９组　成ｌ长约５００　ｂｐ的开放型阅读框．编码１个由１４７　个氨基酸组成的相对分子量为１６８　０００的蛋白。该　基因表达参与一系列的细胞进程，包括对细胞周期　调控、细胞凋亡和微管活动的调节等。由ＦＨＩＴ基因　启动子区高甲基化导致的表达静默被认为是引起　胃癌发生的分子机制。并且已经在胃癌组织中得到　了证实。胡宏波等　研究发现。７４例胃癌组织中有　３８例发生甲基化，甲基化率为５１．４％，而ＦＨＩＴ基因　在正常胃黏膜组织中均未出现甲基化阳性片断。戴　观荣等［６　３研究的８８例胃癌组织中．有３５例发生了　ＦＨＩＴ基因甲基化，阳性率为４０％，５３例表达ＦＨＩＴ　蛋白，阳性率为６３％。此外，ＦＨＩＴ基因在低分化胃　收稿日期：２０１２—０２—１９　・１３１・　

Doi：10．13621/j．1001－5949．2019．04．0374·综述·

DNA甲基化在肺癌中的研究进展

侯岩君1，马云帆2，韩育宁2

［关键词］肺癌；DNA甲基化［中图分类号］Ｒ338［文献标识码］A

［作者单位］1．宁夏医科大学，宁夏银川7500042．宁夏医科大学总医院普胸外科，宁夏银川750004［通讯作者］韩育宁，Email：nxhyuning@163．com肺癌已是发达国家和发展中国家男性癌症死亡的主要原因［1］。中国肿瘤流行病现状显示，中国肺癌男性发病率居首位，女性发病率居第二位［2］，但是中国肺癌男性及女性死亡率均居首位［3］。受现有的检查方式、体检意识、医疗资源分配等相关因素的影响，大部分患者诊断肺癌时已为晚期，5年生存率不足20%［4］。随着科技的进步、研究的深入以及研究人员对肿瘤认识的不断全面化，以前认为肿瘤是由癌基因和抑癌基因突变而引起的，然而这经典的遗传学已经不能完全解释肿瘤的发生和发展。研究人员逐步将目光转移到了表观遗传学，其可以不依靠DNA序列的变化而使得基因的表达发生变化，主要集中在DNA甲基化、组蛋白修饰等方面［5］；表观遗传学的改变几乎影响到了肿瘤的形成、进展和治疗的每一个步骤，这就为理解肿瘤的发生与恶性发展提供了重要依据［6］。本文对DNA甲基化在肺癌中的研究进展进行概述。1DNA甲基化的定义DNA甲基化是指一个甲基集团通过甲基化转移酶（DNMT）的作用，以共价键结合在基因组胞嘧啶－磷酸－鸟嘌呤（CpG）二核苷酸的胞嘧啶5碳原子上的过程［7］。DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分也是最早发现的修饰途径之一，DNA甲基化可以导致染色质结构、DNA构象和DNA稳定性的变化，进而控制基因的表达［5］。在人类基因中，被甲基化的CpG位点约占70%［8］，非甲基化的CpG是不均匀分布的，表现为局部的聚集现象，形成一些CG（胞嘧啶、鸟嘌呤）含量较高、CpG二核苷酸相对聚集的区域，就是CpG岛［9］。CpG岛常处在基因的5`端，具有可以调控下游基因表达的作用，在基因组中其常常位于第一外显子区、基因启动子区或者内含子区［10］。正常情况基因启动子区域处于非甲基化状态，可以正常表达，假如该区域发生了甲基化，可对该基因的表达产生影响，如表达沉默、表达降低甚至不表达。一些CpG岛的高甲基化与癌症等相关疾病的发生有着密切的联系［6］，其中抑癌基因启动子区的高甲基化情况使得其转录受到抑制作用，导致抑癌基因表达量减少致使肿瘤的发生［11］。在肿瘤的发生和发展时，经常伴随着全基因组的甲基化水平的降低，一些癌基因也表现为低甲基化状态，促使肿瘤的进一步发展。实验研究表明，细胞周期调节基因、凋亡基因、抑癌基因等重要基因的DNA甲基化使其基因表达沉默或者表达明显降低，这在肿瘤的形成过程中起着关键作用。在保持高甲基化状态的过程中，DNMTs（甲基化转移酶的总称）起到了关键酶的作用。在恶性肿瘤中，DNMTs的表达水平是增加的，该酶是致使抑癌基因产生高甲基化水平的主要因素之一［12］。DNA的甲基化是一个可逆的反应，DNMTs抑制剂可以把高甲基化的被沉默的基因恢复表达。2DNA高甲基化与肺癌随着甲基化研究的广泛深入，甲基化检测技术的进步，肺癌相关的高甲基化基因被广泛的报道和证实。抑癌基因启动子区的CpG岛高甲基化状态使其表达沉默或者降低，进而导致了肿瘤的发生和发展。目前，已证实有多个抑癌基因的高甲基化状态与肺癌的发生发展密切相关。Yuan等［13］实验研究证实，抑癌基因GPC5在肺腺癌组织和肺癌细胞系中与正常肺组织相比明显高甲基化，GPC5的甲基化水平与其转录和表达呈现负相关性；而GPC5的过度表达抑制了肺癌细胞在体外的增殖、迁移和侵袭。GPC5的低表达与肺癌预后不良紧密相关。JunaidAnsari等［14］的研究表明，抑癌基因p16、APC、DAPK等在CpG岛的高甲基化情况使它们表达沉默，与早期肺癌的形成相关。Yang等［15］实验研究了117名NSCLC（非小细胞肺癌）患者的癌组织、癌旁组织和血液中DAPK启动子甲基化状态进行检测，同时将115名健康受试者的血清样本作为对照进行了分析。结果表明，NSCLC组织中的DAPK启动子甲基化频率显著高于正常组织；血清标本比较，NSCLC患者DAPK甲基化频率也显著高于正常对照组。·473·宁夏医学杂志2019年4月第41卷第4期NingxiaMedJ，Apr．2019，Vol41，No．4Zheng［16］等研究显示，WIF－1基因启动子高甲基化的情况在肺癌组织中明显高于对照组，并且与吸烟紧密相关。样本亚组分析表明，在肺癌组织当中WIF－1启动子的高甲基化水平明显高于血液和胸腔积液亚组，表明WIF－1启动子区域的高甲基化在肺癌的形成中产生了重要影响。YiHan等［17］人通过对1056名肺癌患者的Meta分析，研究hMLH1基因启动子高甲基化与非小细胞肺癌的相关性，证实hMLH1基因参与NSCLC的肿瘤发生是通过其启动子的高甲基化而造成hMLH1表达失活，这可能是NSCLC发病机制的一个决定性因素。肺癌与吸烟和二手烟暴露密切相关［3］，烟草在肺癌的甲基化过程当中也起着促进作用，烟草烟雾的致癌成分参与了肺癌发生的多个阶段过程。HuangT等［18］人的Meta分析显示，7个高甲基化的基因（CDKN2A、ＲASSF1、MGMT、ＲAＲB、DAPK、WIF－1和FHIT）与NSCLC患者的吸烟行为显著相关。2013年，国际癌症研究机构（IAＲC）将PM2．5列为人类Ⅰ类致癌物。有研究表明，人群中肺癌死亡率随大气中颗粒物浓度含量每m3增加10μg而上升15%～27%［19］。长期暴露在PM2．5中，可激活诱导某些抑癌基因启动其高甲基化，形成全基因组低甲基化和特定基因高甲基化的肿瘤DNA甲基模式。实际上，在很多恶性肿瘤和癌前病变或者病变的早期时就已经存在了抑癌基因的高甲基化状态，这也许说明了它可能就是肿瘤发生的始动因素之一。3DNA低甲基化与肺癌在肿瘤细胞中，抑癌基因高甲基化的同时，也常常伴有癌基因的低甲基化，低甲基化可以使癌基因激活，开始表达肿瘤相关蛋白致使肿瘤的发生。Gai-netdinov等［20］人对56名NSCLC患者和44名健康人LINE－1基因启动子甲基化指数进行检测，结果显示NSCLC患者中的LINE－1启动子相对于健康人，其表达显著低甲基化，说明LINE－1重复元件的低甲基化与肺癌的发生密切相关。Yokohama等［21］人的研究显示，TET1介导的DNA低甲基化调节肺腺癌中MUC4基因的表达。高MUC4的表达与肺癌的不良预后相关。Fujii等［22］人的实验表明，AＲL4C过度表达参与了肿瘤的发生，AＲL4C的表达与其基因3＇－UTＲ（3＇－非翻译区）的DNA低甲基化有关，从肺和舌的鳞状细胞癌的患者组织标本免疫组化分析显示，在非肿瘤区没有观察到AＲL4C，但是在肿瘤病灶中高频率表达，在AＲL4C阳性肺鳞癌的肿瘤病变中，经常检测到AＲL4C基因的3’－UTＲ中的DNA甲基化低于非肿瘤区域，并且AＲL4C低甲基化状态参与了癌细胞的恶性进展。GaoX等［23］证明了吸烟对8个肺癌相关基因的DNA甲基化（KLF6，STK32A，TEＲT，MSH5，ACTA2，GATA3，VTI1A和CHＲNA5）产生了影响，其中11个位点的DNA低甲基化是与吸烟相关。由此可见，癌基因低甲基化也被证实与肺癌的进展有关，目前对于全基因组DNA甲基化状态的降低，具体原因仍不清楚，但是认为可能与DNMTs的活性相关。4DNA甲基化与肺癌的诊断肺癌的早期诊断是一个难题，如果提高肺癌的早期诊断率，肺癌患者的5年生存率将有一个明显的提高。使用LDCT（低剂量计算机断层扫描）早已被证明有改善检测和降低死亡率的作用，但是，LDCT是由于其特异性低，因此作为筛选工具远远不能令人满意［24］。而液体活组织检查，可以利用从肿瘤细胞中释放出来的细胞核苷酸和蛋白质进行检测，其有助于癌症的诊断。ctDNA（循环肿瘤DNA）的甲基化作为肺癌的生物标志物已经引起了越来越多的关注。目前研究显示，肺癌早期抑癌基因常常伴有高甲基化的发生。HulbertA等［25］人对150个病理诊断为非小细胞肺癌患者（Ⅰ期和Ⅱ期）与60名正常人的血浆和痰液标本的肿瘤特异性基因SOX17、TAC1、HOXA7、CDO1、HOXA9和ZFP42进行了甲基化检测，结果显示，和对照组相比肿瘤患者的DNA高甲基化更为频繁，其中5个基因（SOX17、TAC1、HOXA7、CDO1和ZFP42）差异具有统计学意义；应用痰液检测，每个基因进行肺癌诊断的敏感性和特异性分别为63%～86%和75%～92%，而应用血浆则为65%～76%和74%～84%；最佳个体基因的三个基因（TAC1、HOXA17、SOX17）组合使用痰液的敏感性和特异性分别为98%和71%。因此，痰或血浆中肺癌特异性基因启动子的高甲基化检测可对早期肺癌的诊断有所帮助。LiuD等［26］人通过大样本（2238名肺癌患者和2563名健康人）和多基因（32个基因）的Meta分析表明，甲基化的SOX17、CDO1、ZFP42、TAC1、FAM19A4、FHIT、MGMT、p16和ＲASSF1A是筛选和辅助检测肺癌的潜在的优良生物标志物。NiS等［27］发现，p16、ＲASSF1A、APC和SHOX2基因的甲基化状态与肺癌有显著的相关性。p16、ＲASSF1A和APC的高甲基化在肺癌患者中的诊断效果与非肿瘤对照组相比有显著差异。此外，SCC（鳞癌）与AC（腺癌）相比，SHOX2基因在SCC中的甲基化率明显高于AC，而甲基化的p16、ＲASSF1A、APC和ＲAＲβ2基因在这两种组织中的频率相似，提示高甲基化的SHOX2基因具有作为支气·573·宁夏医学杂志2019年4月第41卷第4期NingxiaMedJ，Apr．2019，Vol41，No．4管肺癌的诊断，尤其是SCC诊断的特异性和非侵入性生物标志物的潜力。很多研究表明，特异性的ctDNA甲基化组合在诊断早期肺癌中具有一定的临床价值，但是要成为一种应用于临床的诊断方法还有较长的路要走。5DNA甲基化与肺癌的治疗目前肺癌的化疗方案是根据患者的病理类型、患者化疗后的耐受情况以及肿瘤大小的变化而决定。但是对于同一种病理类型，同一分期的不同患者采取相同的化疗方案，治疗效果却各有不同，甚至有的根本没有任何效果，所以个体化的治疗受到了广泛的关注和认可。WuF［28］等人的研究表明，hM-LH1的启动子甲基化参与了对NSCLC、A549/DDP细胞中顺铂敏感性的影响，以顺铂为基础的辅助化疗更有益于无hMLH1甲基化的NSCLC患者。hM-LH1甲基化有可能成为非小细胞肺癌个体化治疗的生物标志物。和经典的遗传学不一样，表观遗传学的甲基化变化是可逆的，DNMTs是该过程的关键酶。因为启动子区域的高甲基化导致抑癌基因的表达改变是大部分肿瘤发生的机制，然而DNA和甲基化抑制剂（地西他滨、5－氮胞苷等）结合后，与DNMTs形成稳定的复合物，进而引起DNMTs活性降低，从而抑癌基因组的甲基化率下降，诱导肿瘤细胞向正常细胞分化或导致肿瘤细胞凋亡。所以，DNMTs和其抑制剂也许会成为治疗肿瘤的研究热点。6DNA甲基化与肺癌的预后目前评价肿瘤患者的预后情况，是根据肿瘤病理类型、肿瘤的分级及分期综合判定。有一些肿瘤患者分级及分期早，病理的恶性程度不高，理论上预后是较好的，但是术后很快发生了肿瘤的复发和转移。由此可见，传统的评估预后指标已经不能准确地反映患者的预后，需要进一步完善相关评价标准，那么基因甲基化标志物也许可以起到一定的评估预后作用。YangXY［19］的研究招募了117名NSCLC患者，对其DAPK甲基化进行检测结果表明，DAPK甲基化的NSCLC患者5年生存率低于未甲基化DAPK患者。ZhangX［29］等人的研究，发现PAX6基因在NSCLC中表现高甲基化，并证明了PAX6基因启动子高甲基化与NSCLC患者的病理类型的分化程度、转移情况以及TNM分期呈正相关性，表明甲基化PAX6可能是NSCLC预后评估的生物标记物。DNA甲基化可以评价肿瘤患者的复发转移。由于其半衰期短并且肿瘤细胞代谢旺盛，ctDNA可以准确地反映肿瘤负荷，起到监视肿瘤变化的作用。在容易复发的手术后，应用ctDNA甲基化的检测来监视肿瘤的复发，可以成为影像和肿瘤标志物的良好替代品，可以通过发现复发来改善临床效果。7展望肺癌的表观遗传学已经研究了近二十年，在这期间内，已经积累了很多肺癌发生和发展重要作用及机制的成果。肺癌的液体活检是目前的研究热点之一，它是一项无创检测并且其中的信息量很大，尤其是DNA甲基化，已经被广泛的研究。DNA甲基化标记稳定且易于在组织或体液（血液、痰液等）中检测到，并可能对肺癌的早期诊断、预后、预测治疗效果和追踪治疗耐药性等方面发挥巨大的检测作用。但是，目前甲基化的检测缺乏标准化，这阻碍了甲基化的发展，所以建立标准化的方案显得格外重要。也许在将来液体活检可以为治疗肺癌的临床工作提供有力的支撑，也为肺癌的治疗提供新的思路。