磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书
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细菌基因组DNA磁珠提取试剂盒说明书【试剂盒组成】试剂盒组成 数量Lysis-Binding Buffer 30mL×1瓶Wash Buffer W1 40mL×1瓶Wash Buffer W2 150mL×1瓶Elution Buffer 10mL×1瓶磁珠(Magnetic beads) 1mL×1支使用说明书1份【规格】100 tests/盒【贮藏与有效期】所有试剂室温保存,有效期为一年。
如发现Lysis-Binding Buffer溶液中有沉淀析出,属正常现象,请在使用前将其置56℃温浴溶解。
【制品说明】本试剂盒也适合提取食品致病菌(微生物)基因组提取,如:金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌O157:H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等革兰氏阳性或革兰氏阴性中快速简单地提取基因组DNA的方法;一次可处理<150uL正处于指数生长期的细菌培养液。
在提取过程中不需要用到酚氯仿抽提和耗时的醇类沉淀。
配合自动化仪器如thermofisher 96一起使用时,一次纯化96样品的总基因组DNA可在30min左右完成,无需进行离心操作。
【手工实验操作程序】1、取100uL菌液于1.5mL离心管中2、加入3倍量的Lysis—Binding Buffer,旋涡振荡30 s注意:对于革兰氏阳性菌,建议延长旋涡振荡时间至1min3、加入混匀的磁珠10uL,旋涡振荡20s,室温静止3min,旋涡振荡20s,室温静止3min4、置磁架上,静止20 s,吸弃上清注意:如果管盖上有磁珠残留,建议用枪吸取并转移至离心管中5、加入400uLWash Buffer W1,旋涡振荡混匀磁珠15s6、置磁架上,静止20 s,吸弃上清7、加入500uL Wash Buffer W2,旋涡振荡混匀磁珠20s8、置磁架上,静止20 s,吸弃上清注意:如果管盖上有磁珠残留,建议用枪吸取并转移至离心管中9、重复步骤7-8二次,并尽量除去所有的液体10、开盖,室温干燥7min注意:乙醇挥发不干净,会抑制后续PCR反应11、加入30-100uL Elution Buffer(ddH2O),盖上管盖,旋涡振荡混匀磁珠30 s注意:小的洗脱体积有助于获得终浓度较高的核酸12、65℃,7min,期间旋涡振荡一次。
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意:1.使用之前,把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2.加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备:可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程:(提取过程在室温下进行):1.在10-20ml试管中,将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB(含氨苄青霉素50μg/ml),37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是:endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取,如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min,去上清3. 加250µl溶液Ⅰ(含RNase A),涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
(用移液枪吹打进行重悬浮)4.加入250µl溶液Ⅱ,温和颠倒离心管4~6次,获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min,剧烈混合会使剪切染色体DNA,降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ,温和颠倒数次混合,至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min,紧凑的白色沉淀就会形成,迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清,移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min,至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液,加500µl Buffer HB,10000×g离心1min,清洗吸收柱,除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高,如酶消化法等其它筛选方法,此步可省略9.弃滤过液,再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱,10000×g离心1min,弃过滤液。
磁珠法血液基因组DNA小量提取试剂盒(便捷·预装版)MagBeads Blood DNA Extraction Mini Kit (Smart & Pre-loading Version)【目录号】NBDE-P-5001【运输条件】2~25℃;【保存条件】主试剂板2~8℃,蛋白酶K -20℃;【试剂盒组成】【注意事项】1. 试剂板严禁反复冻融,以免磁珠受到损害;2. 试剂板中6/12号孔位洗脱液预加入量为100μL,如需要可用配套洗脱液自行增加用量;3. 蛋白酶K长期不使用,请置于-20℃保存,融化后4℃保存,并尽快使用;4. 本操作指南经本公司反复验证,使用前请仔细阅读并按照操作指南建议操作。
【产品简介】本试剂盒适用于从新鲜或冷冻抗凝血中提取基因组DNA。
跟常规磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒相比,本试剂盒将“血液裂解”和“DNA结合”两步操作简化为一步进行操作,不需要预先单独对血液样本进行裂解,然后再进行DNA结合,过程简便、高效。
在裂解液(NBDE Buffer ML)环境中,基因组DNA特异性的结合于磁珠表面,经清洗和洗脱等步骤之后,可得到高纯度的基因组DNA产物,OD260/280比值在1.7~1.9之间,OD260/230比值大于1.8,完整性好,可直接用于PCR反应、杂交、测序、酶切等下游分子生物学实验。
本试剂盒提前将试剂组分预分装入96孔板,节省实验操作者加液时间,提高工作效率。
试剂盒需配合磁棒法核酸提取仪使用。
【试剂盒说明】【自备仪器】1. 英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪(或其它品牌磁棒法核酸提取仪);2. 核酸提取仪配套用磁棒套;3. 甩板离心机。
【操作步骤】本指南以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例,同步可完成32份样本提取工作。
1.试剂板准备1) 从试剂盒中取出独立包装预封装试剂板,颠倒数次使磁珠重悬均匀;2) 用甩板机离心(500rpm, 1min)使试剂及磁珠集中到孔板底部;3) 小心撕去铝箔封口膜,避免孔板振动,防止液体溅出。
组织基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)使用说明书(Cat#Yu-TD02-1)【产品介绍】组织基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系,能从样品中分离纯化高质量DNA。
在一定条件下,磁珠表面修饰的基团高效吸附目的DNA,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,达到快速分离纯化DNA的目的。
整个过程安全、无毒、便利,提取的DNA质量稳定、纯度高。
纯化后的DNA适用于多种后续实验。
本试剂盒可以从少量动物组织中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。
【产品特点】1. 效率高:DNA提取得率高,操作简便。
2. 安全、无毒害:整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质,提取环境更加安全。
3. 高纯度:OD260/230在1.5左右,OD260/280在2.0左右。
可直接用于各种分子生物学实验。
【试剂盒组成】【规格】50T/盒【自备试剂】无水乙醇,异丙醇【贮藏与有效期】裂解吸附液和Buffer AW1必须室温(15-25℃)避光保存;磁珠室温保存;其他所有试剂室温保存,有效期为1年。
【注意事项】1、Buffer AW1使用前,加入18mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为60%。
★2、Buffer AW2使用前,加入21mL无水乙醇,混匀,使乙醇含量为70%。
★3、磁珠使用前必须充分混匀。
★4、组织最好置于组织核酸(DNA/RNA)保存液(Cat#Yu-TP01)或液氮中保存。
【操作步骤】1、样本的处理1.1、液氮中保存的组织将组织在液氮中磨成粉末后,使液氮充分挥发。
再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。
以下进入步骤2。
1.2、组织保存液中保存的样本取出在组织保存液中保存的组织,加入1mL无水乙醇洗涤组织两次。
再以50-100mg组织中加入1mL裂解吸附液,充分研磨。
以下进入步骤2。
2、吸取400µL研磨后的裂解吸附液转入1.5mL的EP管中,加入5µL蛋白酶K,60℃1500rpm10分钟。
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号:HS0101)产品包装(注意:使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀,2 ~ 8℃保存)保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存,可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理,质粒可从菌体中释放出来,并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质,在低盐、高pH 条件下洗脱,最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ,在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速:步骤少,操作简便,节约时间。
2. 简便:离心吸附柱不需要预平衡,漂洗液不需要另加乙醇,即开即用。
3. 高质:OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定:正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液,室温12,000 rpm离心1 min,尽量将上清去除干净。
(注意:根据菌液的浓度决定取液量,浓度高时取1 ml菌液离心即可,浓度低时可多收集一次)2. 加入250 ul Buffer P1,用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
(注意:是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀;菌体沉淀是否悬浮充分,如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解,导致提取的质粒浓度及纯度降低)3. 加入250 ul Buffer P2,温和颠倒混匀6 ~ 8次,直到溶液变得清亮粘稠。
质粒小量提取试剂盒说明书货号:D1100规格:50T/100T保存:常温保存,复检期一年。
(注:RNase A以附件形式发货,收到未使用前请-20℃保存)试剂盒内容:试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明:本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA (将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2-8℃保存。
如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物,12000rpm离心1min,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意:混匀一定要温和,以免污染细菌基因组DNA,此时菌液应变得清亮粘稠,作用时间不要超过5min,以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,尽量不要吸出沉淀。
磁珠法核酸提取试剂盒说明书磁珠法核酸提取试剂盒说明书在科学研究和临床诊断中,核酸提取是至关重要的一步。
随着技术的不断发展,磁珠法核酸提取试剂盒逐渐成为了研究人员和临床医生们的首选。
那么,什么是磁珠法核酸提取试剂盒?它的工作原理是什么?在使用过程中需要注意哪些事项?本文将从广度和深度两方面进行全面评估,带你深入了解磁珠法核酸提取试剂盒。
一、磁珠法核酸提取试剂盒的工作原理磁珠法核酸提取试剂盒是利用磁珠的磁性特性,结合核酸和其他杂质的不同特性,通过磁场的作用将目标核酸分离提取出来的一种试剂盒。
具体步骤包括细胞裂解、磁珠与核酸结合、洗涤和最终洗脱等过程。
通过这一系列步骤,能够快速、高效地从样本中提取出纯度较高的核酸,为后续的分子生物学实验和临床检测打下基础。
磁珠法核酸提取试剂盒本质上是一种高度精密的技术产品,涉及到多方面的知识和技术。
在使用过程中需要严格按照说明书上的操作步骤进行,以确保提取的核酸具有良好的质量。
二、磁珠法核酸提取试剂盒的使用注意事项在使用磁珠法核酸提取试剂盒时,有一些注意事项是需要特别关注的。
首先是样本的处理和裂解步骤,不同样本的裂解条件可能会有所不同,需要根据具体情况进行调整。
其次是磁珠的使用,需要注意磁珠的悬浮情况和使用量,以确保能够有效地结合目标核酸。
在洗涤和洗脱步骤中,也需要注意洗涤缓冲液的温度和使用次数,以及洗脱缓冲液的使用量和温度等细节。
只有严格按照说明书上的要求进行操作,才能够得到高质量的核酸提取物。
三、磁珠法核酸提取试剂盒的个人观点和理解从个人角度来看,磁珠法核酸提取试剂盒无疑是一种高效、便捷的核酸提取工具。
相比传统的有机溶剂提取法和硅基膜法,磁珠法核酸提取试剂盒具有操作简便、提取效率高、纯度好等优点。
在日常的科研工作或临床诊断中,使用磁珠法核酸提取试剂盒能够大大提高工作效率,节约时间和成本。
总结回顾通过本文对磁珠法核酸提取试剂盒的深度评估,相信读者已经对这一产品有了更全面、深刻的理解。
Mag-MK 磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒 简易操作流程图
产品编号 产品名称
包装规格
SK8791 50次
SK8792 100次
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒
实验前准备
订货信息
磁力架、小型高速离心机(最大离心力 ≥ 12,000 × g )、水浴锅、1.5 ml离心管、70% 乙醇
试剂盒初次开启,取1 ml Buffer MP1至标有RNase A的离心管中,吸打混匀后将其全部加入Buffer MP1中,充分混匀后在瓶身做好标记。
储存于2~8°C,有效期6个月。
每次使用前请检查Buffer MP2是否出现沉淀,如有沉淀,请于37°C溶解沉淀,待冷却至室温后使用。
在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株,于37°C摇床充分振荡培养12~16 h。
对于高拷贝质粒,取1~2 ml菌液,室温10,000 rpm 离心2 min收集菌体,吸净上清。
可将本页贴于实验台前,方便您实验时参阅。
(仅供参考,首次参阅,请先详细阅读说明书中的标准抽提步骤)。
质粒小量提取试剂盒(磁珠法)目录号:PL02试剂盒组成保存PL0202100次PL0203200次RNaseA(10mg/ml)-20℃300µl 300µl×2 溶液P1 4℃30ml 30ml×2 溶液P2 室温30ml 30ml×2 溶液P3 室温40ml 40ml×2漂洗液WB 室温25ml 25ml×2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15ml 10ml×2磁珠悬浮液室温 1.5ml 1.5ml×2保存条件:本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时,将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化。
产品介绍:本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,磁珠在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从磁珠上洗脱。
产品特点:1.磁珠吸附量差异极小,可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
自备仪器及试剂:1,小型离心机,2磁力架(博迈德),3无水乙醇注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
质粒DNA 小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法,结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法,适合1-4ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次) DK301-02 (200次)RNase A1*30 μl 120 μlBuffer BL 15 ml 60 mlBuffer P1 15 ml 60 mlBuffer P2 15 ml 60 mlBuffer P3 20 ml 90 mlBuffer WA§19 ml 75 mlBuffer WB§16 ml 65 mlDNA吸附柱-B 50套200套1.5 ml离心管50个200个TE※15 ml 30 ml说明书1份1份*RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存;第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中,于4℃保存。
§Buffer WA和Buffer WB,使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇,混合均匀。
※TE:10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外,其他组成成分于室温储存。
三、注意事项1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物,避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛,立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处,必要时寻求医疗咨询。
2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子,以免影响下次使用效果。
3. 操作步骤A2和B2,充分悬浮细菌,无可见的块状菌团,不然会影响裂解效果。
4. 操作步骤A3和B3,缓慢翻转离心管,以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染,同时避免打断质粒DNA,保持其完整性。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【运输条件】2~25℃;【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存;组分⑦于-20℃保存;其它组分室温保存;【试剂盒组成】1. 使用前将RNase A溶液(组分⑦)全部加入菌体悬浮液(组分①)中,4℃保存备用;2. 使用前检查菌体裂解液(组分②)是否出现浑浊,如有请置于37℃水浴中温浴至澄清;3. 实验前质粒复性液(组分③)需提前置于4℃冷却充分;4. 菌体裂解液(组分②)和质粒复性液(组分③)使用后应请立即盖紧盖子;5. 磁珠悬浮液(组分④)严禁冻融和离心,以免磁珠受到损害,使用前务必充分混匀;6. 所有离心步骤均为室温下进行,其中加入质粒复性液(组分③)后低温离心效果更佳;7. RNase A溶液(组分⑦)长期不使用于-20℃保存,融化后4℃保存,并尽快使用;8. 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关;9. 本操作指南经公司反复验证,使用前请仔细阅读并按指南建议操作。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。
试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。
磁珠表面修饰有特殊化学基团,在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力,当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA,从而达到分离纯化质粒DNA的效果。
整个操作过程简便、快速。
本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质,保证提取所得质粒DNA的纯度,所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作(单人同时操作1~6块96孔板,可同步实现96~576份样本抽提工作)、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
【试剂盒说明】【自备仪器、耗材和试剂】手动普通版金属浴、涡旋混合仪、离心机、EP管、EP管用磁力架、80%乙醇。
手动高通量版涡旋混合仪、吸水纸、烘箱或电风扇、水浴锅、96孔圆孔板(孔体积2.2mL)、96孔圆孔板专用磁力架、96孔板离心机、48孔尖底板(孔体积4mL)、48孔板用硅胶垫(或PCR板封板膜)、80%乙醇。
仪器自动版英芮诚ETP-400核酸提取仪、涡旋混合仪、离心机、EP管、96孔圆孔板、80%乙醇。
【手动普通版操作步骤】1. 菌体收集将适量菌体(1.0~5.0mL)转移至EP管中,室温、12000rpm离心2min,吸弃上清液。
2. 菌体悬浮向EP管中加入200μL菌体悬浮液,摇晃将菌体沉淀彻底悬浮。
3. 菌体裂解向EP管中加入200μL菌体裂解液,上下轻柔颠倒EP管约2min使菌体充分裂解,裂解磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒液应变为基本澄清。
注:如果菌液量较大,可延长裂解时间至约4min,但不宜超过4min,否则质粒难以复性。
4. 质粒复性向EP管中加入350μL质粒复性液(已4℃冷却充分),上下轻柔颠倒EP管使质粒复性(最佳状态为内容物呈蛋花状)。
将EP管于4℃、12000rpm离心10min,将上清液转移到新的EP管中,并做好记录。
5. 核酸结合向转入上清液的EP管中加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液,涡旋振荡5min,确保磁珠与溶液充分混匀。
6. 磁性分离将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全。
如EP管内盖有磁珠残夜,保持EP管于磁力架上,整体颠倒两次使磁珠吸附完全,然后彻底吸弃上清液,期间避免接触磁珠。
7. 清洗1)向EP管中加入500μL清洗液,从磁力架上取下,上下用力摇动3~5次(或使用移液器吹打)使磁珠分散均匀,然后涡旋震荡1min,参考步骤6进行磁性分离。
2)使用500μL 80%乙醇,参照步骤7(1)操作2次。
注:该步骤DNA量过多时可能引起磁珠团聚,但不影响最终DNA得量及质量。
8. 除醇保持EP管于磁力架上,置于55℃烘箱中干燥8min。
注:如没有烘箱,可将EP管置于通风橱通风或电风扇直接吹10min。
9. 洗脱取出EP管,加入50μL洗脱液,用移液器吹打3min(或1000rpm涡旋振荡3min)使磁珠与洗脱液充分混匀。
注:该步骤操作完毕后,将EP管放入金属浴中继续温浴5min,再次1000rpm涡旋振荡3min,可增进一步提高洗脱效率,特别是针对分子量较大的质粒。
10. 核酸转移将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全,用移液器将洗脱液转移至另一干净EP管中得DNA回收产物,抽提过程完毕,此时可弃去磁珠。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【手动高通量版操作步骤】本试剂盒直接在48孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂解和复性步骤后,转入96孔板完成后续抽提工作1. 菌体收集菌液提前在48孔板中培养过夜,将48孔板于4000rpm离心5 min,确保沉淀紧附于48孔板底。
小心直接倒扣弃去培养液,继续呈倒扣状置于干净吸水纸上吸尽残液。
2. 菌体悬浮向48孔板样本孔中分别加入200μL菌体悬浮液,4000rpm涡旋震荡1~2min将菌体沉淀彻底悬浮。
3. 菌体裂解向48孔板样本孔中分别加入200μL菌体裂解液,将48孔板于400~500rpm温和涡旋震荡1min使菌体裂解,裂解液应变为基本澄清,然后静置1min。
注:如果菌液量较大,可延长裂解时间至约4min,但勿超过4min,否则质粒难以复性。
4. 质粒复性:向48孔板样本孔中分别加入350μL质粒复性液(已提前4℃冷却充分)。
将48孔板于700rpm温和涡旋震荡1min使质粒复性(最佳状态为内容物呈蛋花状)。
将48孔板4000rpm 离心15min,查看是否依然有悬浮物,若有则继续离心5min使孔道底部形成密实白色沉淀。
注:此步骤离心操作务必在板孔底部形成密实白色沉淀,否则应继续延长离心时间5~10min。
5. 核酸结合分别转移600μL质粒复性上清液至96孔板中,向样本孔中分别加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液,将96孔板用封板膜封住,于1200rpm涡旋震荡5min,使磁珠均匀分散于溶液中。
6. 磁性分离将96孔板置于专用磁力架上约20s至磁珠吸附完全。
如板孔内壁有磁珠残夜,保持96孔板于磁力架上,倾斜96孔板使上清液冲洗磁珠将磁珠吸附完全。
然后小心直接倒扣弃去上清液,继续呈倒扣状置于干净吸水纸上吸尽残液。
7. 清洗1)向96孔板样本孔中分别加入500μL清洗液,1200rpm涡旋振荡1min,参考步骤6进行磁性分离。
2)使用500μL 80%乙醇,参照步骤7(1)操作2次。
8. 除醇保持96孔板在磁力架上,置于55℃烘箱中干燥8min。
注:如没有烘箱,可将EP管置于通风橱通风或电风扇直接吹10min。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒9. 洗脱取出96孔板,向样本孔中分别加入50μL洗脱液,1200rpm涡旋振荡3min,使磁珠与洗脱液充分混匀。
注:该步骤操作完毕后,将96孔板放入65℃水浴锅中继续温浴5min,再次1200rpm涡旋振荡3min,可增进一步提高洗脱效率,特别是针对分子量较大的质粒。
10. 核酸转移将96孔板置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全,用移液器将洗脱液转移至干净EP管或者PCR板中,抽提过程完毕,此时可弃去磁珠。
(亦可使用本公司96孔板配套磁力爪,直接将磁珠从96孔板中移除,将洗脱液留在96孔板中)【仪器自动提取操作步骤】本方法以英芮诚ETP-400型全自动核酸提取仪为例,在96孔圆孔板中进行操作,同步可完成48份样本的质粒DNA抽提工作。
1. 准备96孔板参照下表用量向96孔板相应孔位中加入对应试剂:2. 菌体收集、悬浮、裂解、复性参考【手动普通版操作步骤】或者【手动高通量版操作步骤】完成菌体收集、菌体悬浮、菌体裂解和质粒复性操作。
将质粒复性液转移至96孔板的第2/8列孔位,并做好记录。
3. 上机提取将96孔板放入ETP-400型核酸提取仪中,插入磁棒套,打开仪器操作软件,选择“质粒DNA提取”程序,点击“运行”执行程序。
“质粒DNA提取”程序各参数设置如下,如机器和说明书不一致,请以说明书为准:4. 核酸转移程序运行完毕,取下96孔板,将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中,提取过程完毕,此时可以弃去96孔板。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案附录1:ETP-300 | 自动核酸提取仪------具有卓越性能的磁棒法自动化核酸纯化系统【仪器简介】ETP-300系列自动核酸提取仪是基于纳米磁珠分选技术,集富集、清洗、洗脱于一体,且全过程能自动化控制的一种仪器。
其可以从全血、病毒、组织、植物、细菌和培养细胞等样本中自动纯化核酸。
凭借预先录入的程序,该仪器可为每个忙碌的实验室提供一个高稳定性、高效率的自动化核酸纯化解决方案。
【仪器型号】ETP-300: 适用96孔板,单个处理体积为:20~1000μL,可轻松实现1~32个样本处理。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒【卓越的优势】1、高灵活性✧磁棒/磁套的混合强度和振度幅度可自由选择混合强度和振动幅度的可调使得溶液混匀和清洗等更加合适,完美满足要求;✧独有的20秒微振技术在磁珠吸附过程中配有独特的提前20秒2mm微震模式,使得磁珠更加容易聚集到磁棒的底端,杜绝磁珠上跑现象,使提取率>98%,结果更加稳定;✧唯一的磁珠释放高度可调技术磁棒释放磁珠的高度位置可以选择,最大程度杜绝磁珠的挂壁现象;✧创新的多步骤程序设定技术,样本的操作具有极高的自由度操作步骤可设置为2-12步,孔位间可以自由选择移动,可以满足cfDNA提取、片段DNA筛选、双磁珠法等所有磁珠法试剂盒的磁棒移动需求。
2、独一无二的8道独立控温技术✧采用独一无二的8道独立控温技术每个通道的温控均可在室温-75℃间自由选择。
✧唯一实现同一样本位不同温度裂解需求结合多步骤程序设定技术,唯一实现在同一个样本位先后采用不同的加热温度,完美实现组织样本的不同温度深度裂解需求。
3、程序提醒功能自动化程序操作结束,即有美妙的音乐提醒。
磁珠法·自动化:为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案附录2:英芮诚·磁珠法(部分)试剂盒一览1. 高通量PCR产物回收试剂盒;2. 高通量胶DNA回收试剂盒;3. 质粒DNA抽提试剂盒;4. 唾液基因组DNA提取试剂盒;5. 拭子基因组DNA 提取试剂盒;6. 血斑基因组DNA 提取试剂盒;7. 血液基因组DNA提取试剂盒;8. 病毒DNA提取试剂盒;9. 细菌基因组DNA 提取试剂盒;10. 高通量PCR产物回收试剂盒;11. 高通量PCR产物部分回收试剂盒(100bp以下被去除);12. 土壤基因组DNA提取试剂盒;13. 游离DNA提取试剂盒;14. 酵母质粒DNA抽提试剂盒;15. 大分子量质粒DNA提取试剂盒。