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SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用【摘要】目的：检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，sod)活力及核因子-κb(nuclear factor-κb， nf-κb)在梗阻性黄疸大鼠肝脏中的表达，探讨其在梗阻性黄疸大鼠肝脏损害中的作用。
方法：采用胆总管结扎法构建梗阻性黄疸大鼠模型，检测血清总胆红素(total bilirubin， tb)、直接胆红素(direct bilirubin，db)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase， alt)，以及肝脏组织行he病理切片检查鉴定梗阻性黄疸大鼠模型。
肝脏组织匀浆后检测组织中总sod和cuzn-sod活力，以免疫组织化学方法检测nf-κb在肝脏中的表达。
结果：胆道结扎(bile duct ligation， bdl)组血清tb、db及alt明显增高(p<0.01)；胆道结扎组肝组织中总sod和cuzn-sod活力较假手术组明显减低(p<0.01)。
胆道结扎组nf-κb p65蛋白激活并出现核移位，19 d组较7 d组更加显著。
结论：脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而sod活力的降低及nf-κb的激活，在梗阻性黄疸肝脏过氧化损害中具有重要意义。
【关键词】超氧化物歧化酶；核因子-κb；梗阻性黄疸；肝脏roles of sod and nf-κb in liver injury of obstructive jaundice in rats/xu hai-bo， gong peng.//medical innovation of china，2012，9(12)：003-005【abstract】 objective： to determine the activities of sodand the expression of nuclear factor-κb(nf-κb) in rats with obstructive jaundice induced by bile duct ligation(bdl)， and elucidate the mechanisms of hepatic injury due to obstructive jaundice. methods： the animal model of obstructive jaundice in rats were made to be bile duct ligation. all rats were sacrificed on the 7th day and 19th day after bdl. the blood and liver tissue samples were obtained. total bilirubin(tb)，direct bilirubin(db)， alanine aminotransferase(alt) in serum were detected and liver tissue he pathology section were evaluated. sod enzyme activity was detected by sod kit. the detection of activation of nf-kb was performed by an immunohistochemical method. results： in bdl animals serum，tb， db， and alt significantly increased compared with the sham group (p<0.01). by he pathology section， we observed that in the bdl group， in liver significant damage signs occurred ， and the change on 19th day after bdl was more obvious. the activities of normal sod and cuzn-sod decreased compared to the sham group(p<0.01)， and the decrease on 19th day after bdl was more significant. in bdl group， nf-κbp65 activation and nuclear displacement response， on 19th day after bdl， were more significant. conclusion： oxidative stress probably plays an important role in liver injuryinduced by obstructive jaundice. down-regulated expression of sod and nf-κbp65 activation may be the important molecule mechanism in liver damage of obstructive jaundice.【key words】 superoxide dismutase； nuclear factor-κb；obstructive jaundice； liverfirst-author’s address： second affiliated hospital of soochow university， suzhou 215004， chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.12.002胆道梗阻所致的梗阻性黄疸(obstructive jaundice， oj)是外科常见疾病，可以造成全身多器官功能损害，而肝脏损害常最为显著。
SOD及NF-κB在梗阻性黄疸大鼠肝脏损伤中的作用目的：检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力及核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)在梗阻性黄疸大鼠肝脏中的表达，探讨其在梗阻性黄疸大鼠肝脏损害中的作用。
方法：采用胆总管结扎法构建梗阻性黄疸大鼠模型，检测血清总胆红素(total bilirubin，TB)、直接胆红素(direct bilirubin，DB)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)，以及肝脏组织行HE病理切片检查鉴定梗阻性黄疸大鼠模型。
肝脏组织匀浆后检测组织中总SOD和CuZn-SOD 活力，以免疫组织化学方法检测NF-κB在肝脏中的表达。
结果：胆道结扎(Bile duct ligation，BDL)组血清TB、DB及ALT明显增高(P＜0.01)；胆道结扎组肝组织中总SOD和CuZn-SOD活力较假手术组明显减低(P＜0.01)。
胆道结扎组NF-κB p65蛋白激活并出现核移位，19 d组较7 d组更加显著。
结论：脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而SOD活力的降低及NF-κB的激活，在梗阻性黄疸肝脏过氧化损害中具有重要意义。
胆道梗阻所致的梗阻性黄疸(obstructive jaundice，OJ)是外科常见疾病，可以造成全身多器官功能损害，而肝脏损害常最为显著。
脂质过氧化是梗阻性黄疸器官损伤的最重要的机制之一，而超氧化物歧化酶(SOD)为抗过氧化的关键酶[1]。
本实验通过构建梗阻性黄疸大鼠肝脏模型，检测梗黄大鼠肝脏总SOD活力与NF-κB p65蛋白表达，进一步明确SOD及NF-κB在梗黄大鼠肝脏损害中的作用。
1 材料与方法1.1 材料健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，120只，雌雄各半，体重200～250 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(辽)2002-0002。
高氧肺损伤大鼠肺泡内TNF-αIL-1β和IL-6的含量变化研究戴靖榕;侯巧玲;胡萍;郑洁;黄俊橙;王乐【期刊名称】《基层医学论坛》【年(卷),期】2017(021)034【摘要】目的探讨细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6在高氧肺损伤发病过程中的含量变化.方法将新生SD大鼠随机分为对照组和高氧组,在实验的第1,3,7天每组随机处死20只,其中10只取肺组织测定肺湿/干重(W/D)比值,另10只行支气管肺泡灌洗,ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-1β、IL-6含量.结果与对照组相比,高氧组大鼠W/D比值、BALF中TNF-α和IL-1β水平在第1,3,7天均显著升高(P<0.05),高氧组TNF-α水平于第3天较第1,7天高(P<0.01);IL-6水平则在高氧暴露后第3天和第7天明显增加(P<0.05).结论细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6均参与了高氧肺损伤发病过程.【总页数】3页(P4764-4766)【作者】戴靖榕;侯巧玲;胡萍;郑洁;黄俊橙;王乐【作者单位】邵阳学院医学院,湖南邵阳 422000;邵阳学院医学院,湖南邵阳422000;邵阳学院医学院,湖南邵阳 422000;邵阳学院医学院,湖南邵阳 422000;邵阳学院医学院,湖南邵阳 422000;邵阳学院医学院,湖南邵阳 422000【正文语种】中文【相关文献】1.结肠康泰对大鼠结肠炎肠组织内TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响 [J], 熊鹰;陈如山;王建平;张永锋;关宏2.早产鼠高氧肺损伤中肺泡内IL-8的含量变化 [J], 陈玉君;陈丽阳;陈军;庞玉生;李艳青3.身痛逐瘀汤对大鼠变性腰椎间盘内TNF-α、IL-1α、IL-6、MMP-3的影响 [J], 常有军;邱恒;马天洪4.油酸-内毒素序贯致伤大鼠血浆和肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化[J], 张青;毛宝龄;钱桂生;李琦;陈正堂;徐剑铖5.卡氏肺大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化 [J], 蒋磊;陈成水;章圣辉;吴建波;谭映霞;陈少贤;陈国荣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
油酸性肺损伤大鼠肝组织TNF-α、IL-6的表达的开题报告
一、研究背景
油酸性肺损伤是一种常见的肺部疾病，其病因比较复杂，但通常与吸入化学物质有关。
随着化学工业的发展，油酸性肺损伤的患病率也在逐年增加。
油酸性肺损伤主要表现为肺部症状，但同时也会影响到其他器官，尤其是肝脏。
研究表明，油酸性肺损伤对肝脏的影响主要是通过炎症反应和细胞损伤等途径引起的。
因此，在深入了解油酸性肺损伤的机制和预防治疗方法的基础上，进一步研究油酸性肺损伤大鼠肝组织中炎症相关因子的表达情况是非常必要的。
二、研究目的
本研究旨在探究油酸性肺损伤大鼠肝组织中 TNF-α、IL-6 的表达情况及其与炎症反应的相关性，以期为深入了解油酸性肺损伤对肝脏的影响提供参考依据。
三、研究方法
（1）实验动物：选取健康雄性 SD 大鼠，体重 200±20g ，随机分为对照组和油酸组，每组 10 只。
（2）建立油酸性肺损伤模型：将油酸滴入导管中，通过气管插管的方式将油酸滴入肺部，以建立油酸性肺损伤模型。
（3）取样及检测：在建立模型后分别于 6 小时、12 小时、24 小时、48 小时时分别取肝脏组织标本，检测 TNF-α、IL-6 及其他相关指标的表达情况，并进行数据统计和分析。
四、研究意义
通过本研究，我们可以深入了解油酸性肺损伤对肝脏的危害程度以及机制，为该疾病的诊断和治疗提供新的思路。
同时，也可以为进一步研究油酸性肺损伤的其他并发症及机制提供借鉴和参考。
阻黄联合肝切除术残肝储备功能变化及TNF-α和IL-6对其影响鲍胜华;姚凯;房淑彬【期刊名称】《皖南医学院学报》【年(卷),期】2006(25)4【摘要】目的:观察阻塞性黄疸(间称阻黄)大鼠施行肝切除术后细胞因子TNF-α和IL-6的变化及其对残肝功能影响.方法:采用胆总管结扎的方法制成大鼠胆道梗阻模型,10 d后采用肝蒂结扎法切除大鼠左肝叶和中肝叶(约65%～70%)或左肝叶(约30%),同时行胆肠内引流术.术后不同时段检测剩余肝功能及TNF-α和IL-6的变化.结果:阻黄组IL-6值变化明显,IL-6和残肝功能呈v形改变,TNF-α变化不明显.结论:在阻黄患者中行肝切除术,细胞因子级联反应对残肝功能影响较大.【总页数】4页(P251-254)【作者】鲍胜华;姚凯;房淑彬【作者单位】皖南医学院附属弋矶山医院普外科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院普外科,安徽,芜湖,241001;皖南医学院附属弋矶山医院普外科,安徽,芜湖,241001【正文语种】中文【中图分类】R657.3【相关文献】1.复方四黄液联合VSD对骨科感染缺损性创面修复及IL-6、TNF-α表达的影响[J], 李绪松;郑臣校;罗维维2.功能性残肝体积比联合ICG R15对选择性出入肝血流阻断肝切除术肝储备功能评估分析 [J], 万春;戴兵;万品文3.化滞柔肝颗粒对非酒精性脂肪肝脂联素、IL-6、TNF-α水平的影响 [J], 陈晓顶;范录平;张有超;吴旭才;方芳4.术前ICGR15联合标准残肝体积对巨大肝细胞癌精准肝切除术后肝功能不全的预测价值 [J], 汤地;李勋;姜春林;匡铭;梁力建;彭宝岗5.复方四黄液联合VSD对家兔股骨感染缺损性创面修复及IL-6、TNF-α表达的影响 [J], 李绪松;郑臣校;罗维维;李胜松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
梗阻性黄疸时TNF-α对大鼠肝、肾的影响杨光;吴德全;王海波【期刊名称】《哈尔滨医科大学学报》【年(卷),期】2003(37)2【摘要】目的探讨梗阻性黄疸时血液中的TNF α与肝、肾损伤的关系。
方法77只大鼠随机分为 3组 :假手术组 (sham) 7只 ;胆总管结扎组 (BDL) 35只 ;抗TNF α组 (PTX) 35只。
BDL组与PTX组均作胆总管双重结扎复制梗阻性黄疸模型 ,两组大鼠分别随机分为 5个小组 ,每小组 7只。
PTX组于术后第一天开始注射0 .5 %PTX ,1ml 10 0mg体重 ,每日 1次 ,直至按计划处死大鼠当日。
各小组分别于术后 1、4、7、10、14天处死 ,经股动脉采血测TB、ALT、Cr、TNF α ,将两组第 14天处死大鼠的肝、肾组织进行病理学检查。
结果BDL组血清中TNF α的水平明显高于sham组及PTX组。
BDL组TNF α与ALT的变化呈正相关(r=0 .75 8,P <0 .0 1) ,TNF α与Cr的变化呈正相关 (r=0 .5 0 2 ,P <0 .0 5 )。
PTX组TNF α与ALT的变化呈正相关 (r =0 .835 ,P <0 .0 1) ,TNF α与Cr的变化无相关性 (r =0 .0 98,P =0 .5 8)。
光镜下检查显示 ,BDL组及PTX组均可见肝细胞坏死及增生 ,汇管区可见胆管扩张、胆汁淤积 ,肝坏死程度以BDL组为重。
在肾脏两组均可见肾小球无明显改变 ,肾小管上皮细胞肿胀。
结论梗阻性黄疸时TNF α明显升高 ,抗TNF α治疗可减轻肝损伤,TNF α可能是导致肝损伤的重要因素之一;TNF α也可能是导致肾损伤一个因素 ,但抗TNF【总页数】4页(P143-146)【关键词】梗阻性黄疸;TNF—α;大鼠;肝;肾;影响【作者】杨光;吴德全;王海波【作者单位】哈尔滨医科大学第二临床医学院普外一科【正文语种】中文【中图分类】R575【相关文献】1.川芎嗪注射液对梗阻性黄疸肾缺血再灌注损伤大鼠肾功能及血清TNF-α的影响[J], 张雪霞;李毅;周文英2.梗阻性黄疸大鼠肝内TNF-α及血液中IL-6表达与肝损伤机制 [J], 戴勇;董晋3.梗阻性黄疸大鼠肝改变与TNF-α的关系 [J], 韩德兰;刘丽;赵芝;刘楠4.缺血后处理对梗阻性黄疸肾缺血再灌注损伤大鼠血清 TNF-α水平的影响 [J], 李毅;张雪霞;贾英斌;李文华;张百萌5.丹参酮ⅡA磺酸钠对梗阻性黄疸大鼠肝、肺、肾组织丙二醛与超氧化物歧化酶的影响 [J], 谷化剑;潘耀振;张浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
第33卷第4期青海医学院学报Vol．33No．42012年JOURNAL OF QINGHAI MEDICAL COLLEGE2012戴勇（1968 ），男，蒙古族，江苏籍，副主任医师梗阻性黄疸大鼠肝内TNF －α及血液中IL －6表达与肝损伤机制戴勇，董晋（青海大学附属医院，西宁810001）摘要目的探讨梗阻性黄疸大鼠肝内TNF －α及血液中IL －6的表达与肝损伤机制。
方法健康雄性SD 大鼠50只，随机分出8只组成对照组。
剩余42只组成模型组(行胆管结扎术建立梗阻性黄疸大鼠模型)，分别于造模后第1、4、7、14、21天共计5个时间点取大鼠肝脏做病理切片、抽取大鼠血样，并行免疫组化和固相夹心法酶联免疫吸附实验。
结果模型组中IL －6在造模后不断升高，至第4天达最高(427．43μg /L )，以后与对照组相比也呈相对较高水平。
模型组均高于对照组(P ＜0．05)。
TNF －α阳性计数逐渐增加(P ＜0．05)。
结论TNF －α的增加与梗阻性黄疸和肝损伤的加重成正相关。
TNF －α和IL －6参与了肝损伤机制。
关键词梗阻性黄疸肿瘤坏死因子白介素6中图分类号R543文献标识码AHEPATIC TISSUE TNF －αAND SERUM IL －6EXPRESSION INOBSTRUCTIVE JAUNDICE AND THEIR MECHANISMIN LIVER DAMAGEDai Yong ，Dong Jin（Affiliated Hospital of Qinghai University Xining ，Qinghai 810001）Abstract ObjectiveTo observe the hepatic tissue tumor necrosis factor （TNF －α）and serum IL －6expres-sion in Obstructive Jaundice and their mechanism in liver damage．Methods 50healthy male SD rats were randomly divided into two groups．The model group and the control group ，except 8rats as control group ，the remaining 42rats were taken to establish bile duct ligation model of obstructive jaundice．And then the model group was randomly di-vided into 12groups ，each group n =4，respectively．In obstructive jaundice days after modeling ，five time points ，e．g．1，4，7，14，21day were selected to take rats liver biopsy and serum to carry out immunochemistry and solid －phase sandwich enzyme －linked immunosorbent assay ，respectively．SPSS17．0statistical software was used to do statistical analysis．Results Comparison of the model group and the sham －operation group rats ，the model group showed the yellow urine ，4hours later the skin ，the hair changes into yellow．The energetic appetite drops and some of them affected the infection．TNF －αlevel in model group was higher than the control group （P ＜0．05）．IL －6in the model group was increased obviously 1to 4，the 4th day was highest （427．43ug /L ，P ＜0．050．05）．Con-clusion TNF －αand IL －6are increased the in obstruction jaundice ，and both of them are suggested to participate372in the liver damage mechanism．Key words liver obstructive jaundice TNF－αIL－6TNF－α、IL－6是一类由单核巨噬细胞、淋巴细胞等分泌的具有调节细胞功能的细胞因子，是参与机体炎症、免疫反应和一系列病理生理过程的重要介质，且与疾病的活动性有关。
TNF作为一种多功能的细胞因子，既是一种生长因子，又是一种破坏介质，其作用具有双重性［1－2］，在正常情况下，局部适量浓度具有抗肿瘤、抗感染等作用，但大量TNF 持续释放会导致恶化病变，使其在疾病的发展过程中处于特殊地位。
IL－6具有肝脏保护作用，可能与其抗炎性质及对TNF－α的调节作用和增强肝细胞再生有关。
TNF－α可诱导IL－6的合成，而IL －6抑制TNF－α的产生［3－4］。
慢性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病患者及实验性肝损伤动物常表现为TNF －α升高，并与肝细胞坏死程度密切相关。
IL－6表现为升高或变化不显著。
TNF－α、IL－6对肝损伤的形成起到促进作用还是抑制作用，目前观点不统一。
1对象与方法1．1研究对象6 8周龄雄性SD大鼠50只，普通级，体重：（205ʃ18．65）g/只，购于青海省地方病预防控制所。
饲养于青海大学附属医院动物实验室，单笼喂养，给予普通饲料喂养，室内温度18ħ 22ħ。
1．2研究方法1．2．1对照组和模型组大鼠的分组将50只雄性SD大鼠称重、编号，按照随机化原则，抽出8只组成对照组。
其余42只组成模型组，模型组分为术后第1、4、7、14、21天组，每小组8只。
1．2．2梗阻性黄疸模型的建立模型组大鼠行腹腔内注射麻醉（25%乌拉坦溶液，1g/kg）。
麻醉成功后，取腹部正中切口，暴露胆总管，距其起始部位0．5cm处游离胆总管，以3 0号线双重结扎后切断关腹。
1．2．3TNF－α测定免疫组化法。
常规二甲苯脱蜡，TNF－α采用胰酶修复。
每张切片加内源性生物素阻断试剂盒中的试剂A和B，新配制的3%H2O2甲醇溶液孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性。
0．5%小牛血清白蛋白封闭非特异性抗体，加入一抗和二抗及链霉菌生物素蛋白———过氧化酶。
DAB溶液显色，常规脱水、透明，中性树胶封片。
阴性对照以PBS （10mM，PH7．4）代替一抗。
结果判定与分析：肝细胞内存在棕黄色颗粒为阳性，以切片中阳性细胞所占比例多少表示其强度，－：阴性；+：阳性细胞数＜10%；++：阳性细胞数10% 30%；+++：阳性细胞数＞30%。
1．2．4IL－6测定固相夹心法酶联免疫吸附法。
用纯化的IL－6抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的IL－6抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中（大鼠血液）的IL－6呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
1．2．5统计学处理应用SPSS17．0统计软件分析。
计量资料数据采用均数ʃ标准差表示，两组间比较采用t检验，方差不齐者用t'检验，同一组不同时期指标值比较采用方差分析和LSD检验，显著性检验水准α=0．05。
2结果2．1TNF－α及IL－6水平变化（Table1 2，Fig．1）Table1Model group、control group TNF－αlevel（%）时间（天）对照（n=8）模型组（n=8）观察1000个细胞，其内存在棕黄色颗粒的细胞个数（百分数）－+术后1917（91．7）83（8．3）术后4724（72．4）276（27．6）术后7527（52．7）463（46．3）术后14483（48．3）517（51．7）术后21146（14．6）854（85．4）472Table2modelgroup、control group IL－6level（珔xʃs）组别n术后1天术后4天术后7天术后14天术后21天F P 对照组8189．68ʃ32．40185．37ʃ21．92200．70ʃ30．87194．58ʃ24．50191．58ʃ10．530．4110．800模型组8380．11ʃ46．21427．43ʃ54．79★310．41ʃ46．77★◆285．07ʃ45．75★◆254．88ʃ43．74★◆□17．837＜0．001 t－9．54411．6465．5374．9323．980－－P－＜0．001＜0．001＜0．001＜0．0010．004－－注：★表示与术后1天比较P≤0．05；◆表示与术后4天比较P≤0．05；□表示与术后7天比较P≤0．05．Figure1The rat liver tissue TNF－αexpression（Immunohistochemical method400times）5722．2血浆胆红素及ALT水平变化（Table3 4）。
术后模型组血清胆红素水平迅速升高，各个时间均高于对照组（P＜0．01），术后第7天到达峰值，以后维持一个较高的水平。
血清ALT在术后的第3天的升高最明显，均高于模型组（P＜0．01），后面也维持一个较高的水平。
Table3Plasmabilirubin（μmol/L）Content contrast（珔xʃs）组别n术后1天术后4天术后7天术后14天术后21天F P对照组87．22ʃ0．837．37ʃ1．057．35ʃ0．677．17ʃ0．987．30ʃ0．730．0740．990模型组829．87ʃ4．1058．02ʃ15．04★211．15ʃ21．65★◆196．37ʃ50．61★◆177．97ʃ44．15★◆54．371＜0．001 t－15．3289．50326．61510．57310．933－－P－＜0．001＜0．001＜0．001＜0．001＜0．001－－注：★表示与术后1天比较P≤0．05；◆表示与术后4天比较P≤0．05．Table4Plasma alanine aminotransferase（μmol/L）Content contrast（珔xʃs）组别n术后1天术后4天术后7天术后14天术后21天F P对照组850．98ʃ8．8848．24ʃ6．2651．52ʃ3．9150．31ʃ8．8252．73ʃ6．920．4270．788模型组8155．8ʃ10．28458．17ʃ18．67★410．23ʃ13．48★◆352．40ʃ17．86★◆□286．78ʃ32．85★◆□○272．932＜0．001 t－21．83558．88672．28542．89319．711－－P－＜0．001＜0．001＜0．001＜0．001＜0．001－－注：★表示与术后1天比较P≤0．05；◆表示与术后4天比较P≤0．05；□表示与术后7天比较P≤0．05；○表示与术后7天比较P≤0．05。
