分子标记技术在葡萄属植物上的研究状况及进展【文献综述】

学号12054214哈尔滨学院学士学位论文分子标记技术在植物研究中的应用院（系）名称：理学院专业名称：生物科学学生姓名：曲悦指导教师：孟令波副教授哈尔滨学院2016年5月学号12054214密级公开分子标记技术在植物研究中的应用The application of molecular markers in plantresearch学生姓名：曲悦所在学院：理学院所在专业：生物科学指导教师：孟令波职称：副教授所在单位：哈尔滨学院论文提交日期：2016.05.24论文答辩日期：2016.06.03学位授予单位：哈尔滨学院目录摘要 (III)ABSTRACT (IV)前言 (V)第1章绪论 (1)1.1分子标记技术类型 (1)1.2 分子标记技术的特点 (2)1.3 分子标记技术的原理和遗传特性 (2)第2章 RFLP分子标记技术及其在植物研究中的应用 (3)2.1 RFLP标记的原理及特点 (3)2.2 RFLP技术在植物研究中的应用 (3)2.2.1构建DNA指纹图谱 (3)2.2.2 进行基因定位 (4)2.2.3鉴定物种多样和亲缘关系 (4)第3章SSR分子标记技术及其在植物研究中的应用 (5)3.1 SSR标记的原理 (5)3.2 SSR标记的特点 (5)3.3 SSR标记技术在植物研究中的应用 (5)3.3.1 构建分子遗传连锁图谱 (6)3.3.2 基因定位 (6)3.3.3 亲缘关系和遗传多样性研究 (6)3.4 SSR分子标记技术的优点和不足： (7)3.4.1 SSR技术的优点： (7)3.4.2 SSR技术的不足： (7)第4章 SNP分子标记技术及其在植物研究中的应用 (8)4.1 SNP技术标记的原理 (8)4.2 SNP技术标记的特点 (8)4.2.1遗传稳定性高 (8)4.2.2 等位基因性 (8)哈尔滨学院学士学位论文4.2.3 检测速度快 (9)4.2.4 分布广泛，数量丰富 (9)4.2.5 代表性强 (9)4.3 SNP技术在植物研究中的应用 (10)4.3.1SNP分子标记技术在物种遗传多样性上的应用 (10)4.3.2 SNP分子标记技术种间亲缘关系间的应用 (10)4.3.3 SNP分子标记技术在种植资源关系上的应用 (11)4.4SNP技术的优点和不足 (11)4.4.1 SNP技术的优点 (11)4.4.2 SNP技术的不足 (11)第5章 AFLP分子标记技术及其在植物研究中的应用 (12)5.1 AFLP标记的原理 (12)5.2 AFLP标记的特点 (12)5.3 AFLP技术在植物研究中的应用 (12)5.3.1基因指纹图谱的构建 (13)5.3.2 品种鉴定 (13)5.4AFLP技术的优点和不足 (13)5.4.1 AFLP技术的优点 (14)5.4.2 AFLP技术的不足 (14)参考文献 (15)结论 (17)致谢 (18)摘要分子标记(Molecular Markers)，是在分子水平上把具有遗传性的物质中核苷酸序列的变异作为研究基础的遗传标记方式。

安徽农业大学学报,2002,29(2):158～162Journal of A nhui A gricultural U niversity分子标记及其在果树种质资源研究中的应用(综述)①吴　俊1,魏钦平1,束怀瑞1,徐　凯2,钟家煌2(11山东农业大学园艺学院,泰安271018;21安徽农业大学园艺系)摘　要:本文就分子标记的类型、特点及其在果树的遗传多样性、分类、起源、进化以及种质鉴定等种质资源研究中的利用进行了简要阐述,同时分析了研究中存在的问题并提出建议。

关键词:果树;分子标记;种质资源 中图分类号:S66012文献标识码:A文章编号:100022197(2002)022*******近年来,分子生物学的发展为生物标记提供了一种基于DNA变异的新技术手段,即分子标记技术。

分子标记是以生物大分子,尤其是生物体的遗传物质-核酸的多态性为基础的遗传标记。

与形态标记和同工酶相比具有以下优点:(1)不受发育时期、组织器官、环境条件影响;(2)标记位点多;(3)不影响基因表达,对不良性状无必然连锁遗传现象,表现为中性;(4)遗传稳定,可靠性强;(5)速度快,操作简便。

因此分子标记一经出现就迅速渗入到生物科学的各个领域,进展较快。

本文仅就分子标记在果树种质资源研究中的应用作一简要综述。

1　分子标记的种类及其特点分子标记以生物种类和个体间DNA序列的差异为前提,其方法在近10年来发展非常迅速,数目繁多,不同的方法有其不同的特点。

但依其使用的分子生物学技术,大致可分为3类。

111　基于Southern杂交技术的分子标记该技术利用限制性内切酶酶解不同生物体的DNA分子后,用特异探针进行Southern杂交,通过放射自显影或非同位素来检测DNA的多态性。

其中最具代表性的是发现最早的限制性片段长度多态性(R FL P,restricti on fragm ent length po lymo rph is m s),其可靠性高,是共显性标记。

分子标记技术及其在植物基因组研究中的应用基因有限公司市场/技术支持部本文献汇编包括以下内容:1, 遗传标记简介2, 分子标记介绍3, 两种重要的分子标记技术AFLP和SNP及其在植物基因组研究中的应用4, 有关仪器介绍1)LI-COR公司的GLOBAL IR2 系统2)PYROSEQUENCING公司的PSQ96 DNA系统一, 遗传标记简介以下内容摘自:邱芳伏健民金德敏王斌,遗传多样性的分子检测,生物多样性,1998年5月,第6卷,第2期选读材料:梁明山等,遗传标记及其在作物品种鉴定中的应用,植物学通报,2001年3月,第18卷,第3期遗传标记(genetic markers)是基因型的特殊的易于识别的表现形式.遗传标记的发展过程主要分为4种类型：（1）形态标记(morphological markers)；（2）细胞标记(cytological markers)；（3）生化标记(biochemical markers)；（4）分子标记(molecular makers)。

前3种标记都是基因表达型的标记，可利用的多态位点较少，易受环境影响，不能满足物种资源鉴定的需要。

直到1980年美国Botstein提出DNA限制性酶切片断长度多态性（RFLP）可以作为遗传标记，开创了直接应用DNA多态性发展遗传标记的新阶段。

80年代DNA多聚酶链式反应（PCR）技术的出现，又推动产生了许多新型的分子标记如RAPD标记，SSR标记等。

1992年由Zebeau和Vos发展起来的扩增片段长度多态性（AFLP）技术被认为是迄今为止最有效的分子标记，既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性。

分子标记的飞速发展促进了真核生物遗传图谱的构建，目前人类和各主要作物的RFLP遗传图谱已基本完成，可以提供基因组各基因间相互作用的全面信息，观察到群体内和群体间由于位点间互作引起的变异分化，在基础理论、遗传育种和物种进化等方面显示出重要应用价值。

生物技术进展２０１６年㊀第６卷㊀第２期㊀１３７~１４０ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ㊀ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１进展评述Ｒｅｖｉｅｗｓ㊀收稿日期:２０１５￣１１￣２７ꎻ接受日期:２０１６￣０１￣１２㊀基金项目:山西省农业科学院博士基金(ＹＢＳＪＪ１２０２)资助ꎮ㊀作者简介:ɦ董志刚与刘政海为本文共同第一作者ꎮ董志刚ꎬ副研究员ꎬ博士ꎬ研究方向为葡萄遗传育种及种质资源鉴定评价ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｇｓｓｄｚｇ＠１６３.ｃｏｍꎮ刘政海ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为酿酒葡萄品种选育及种质资源鉴定评价ꎮＴｅｌ:０３５４￣６２１５０１５ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｇｓｓｄｚｇ＠１６３.ｃｏｍꎮ∗通信作者:唐晓萍ꎬ研究员ꎬ博士ꎬ研究方向为葡萄栽培育种ꎮＴｅｌ:０３５４￣６２１５０１５ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｔｘｐ￣１９５９０４０１＠１６３.ｃｏｍＳＳＲ标记技术在葡萄品种鉴别及遗传育种上的应用董志刚１ɦꎬ㊀刘政海２ɦꎬ㊀李晓梅１ꎬ㊀谭㊀伟１ꎬ㊀王新平１ꎬ㊀茹慧玲１ꎬ㊀唐晓萍１∗１.山西省农业科学院果树研究所ꎬ山西太谷０３０８１５ꎻ２.山西农业大学ꎬ山西太谷０３０８０１摘㊀要:ＳＳＲ标记因其数量多㊁重复性好㊁出现频率高和共显性遗传等优点在植物的种质资源品种鉴别㊁遗传育种等方面得到广泛应用ꎮ简要介绍了ＳＳＲ标记在葡萄上的发展和葡萄遗传多样性分析㊁品种鉴定㊁ＤＮＡ指纹图谱构建和遗传育种等方面的应用ꎬ并对ＳＳＲ标记未来在葡萄育种应用的研究方向作出了展望ꎮ关键词:葡萄ꎻＳＳＲ标记ꎻ遗传育种ꎻ遗传多样性ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣２３４１.２０１６.０２.１０ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＳＲＭａｒｋｅｒｓｉｎＶａｒｉｅｔｙＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＢｒｅｅｄｉｎｇｏｆＶｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａＤＯＮＧＺｈｉ￣ｇａｎｇ１ɦꎬＬＩＵＺｈｅｎｇ￣ｈａｉ２ɦꎬＬＩＸｉａｏ￣ｍｅｉ１ꎬＴＡＮＷｅｉ１ꎬＷＡＮＧＸｉｎ￣ｐｉｎｇ１ꎬＲＵＨｕｉ￣ｌｉｎｇ１ꎬＴＡＮＧＸｉａｏ￣ｐｉｎｇ１∗１.ＰｏｍｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＳｈａｎｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＳｈａｎｘｉＴａｉｇｕ０３０８１５ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｈａｎｘｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈａｎｘｉＴａｉｇｕ０３０８０１ꎬＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ:ＳＳＲ(ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ)ｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇａｎｄｇｅｒｍｐｌａｓｍｒｅｓｏｕｒｃｅｓｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｂｅｃａｕｓｅｉｔｈａｓｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆａｂｕｎｄａｎｔｑｕａｎｔｉｔｙꎬｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙꎬｈｉｇｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃꎬｃｏｄｏｍｉｎａｎｔｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅａｎｄｓｏｏｎ.ＴｈｅｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＳＲｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｉｎｇｒａｐｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬｖａｒｉｅｔｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇ.ＴｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｏｆＳＳＲｍａｒｋｅｒｓｉｎｇｒａｐｅｂｒｅｅｄｉｎｇｗａｓａｌｓｏｐｒｅｓｅｎｔｅｄ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＶｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａꎻＳＳＲｍａｒｋｅｒｓꎻｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇꎻｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ㊀㊀葡萄(Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ)为葡萄科(Ｖｉｔａｃｅａｅ)葡萄属(Ｖｉｔｉｓ)的多年生藤本植物ꎬ在全世界范围内广泛栽培ꎬ其种植历史久远ꎬ可以追溯到约８０００多年前[１]ꎮ葡萄在其进化发展过程中形成了许多种群㊁品种群和变种群ꎬ且因其基因组杂合度高ꎬ不同种间以及品种间经济性状㊁抗逆性状等方面存在着极其丰富的变异ꎬ导致种质资源鉴定分类和抗性基因利用十分困难[２]ꎮ随着生物技术的迅速发展ꎬ区别于以形态学标记为主的葡萄种质资源分类ꎬ从分子水平对物种的亲缘关系进行分析更加直接准确ꎮＳＳＲ标记是一种基于ＰＣＲ技术的ＤＮＡ标记方法ꎬ具有数量多㊁重复性好㊁出现频率高和共显性遗传等优点ꎬ目前ꎬ在ＥＳＴ数据库的利用㊁系谱重建㊁品种鉴别及新品种保护等领域展示出巨大的发展潜力ꎮ在葡萄遗传多样性分析㊁品种鉴定㊁遗传指纹图谱构建和葡萄育种等方面得到了较广泛的应用ꎮ本文综述了ＳＳＲ分子标记在葡萄品种鉴别及遗传育种方面的研究进展ꎬ并对ＳＳＲ在未来葡萄育种方面的应用进行了展望ꎬ以期为葡萄的品种鉴别和遗传育种研究提供参考ꎮ. All Rights Reserved.１㊀不同ＳＳＲ标记技术在葡萄中的应用１.１㊀ＥＳＴ￣ＳＳＲ分子标记在葡萄中的应用近几年随着国内外对功能基因研究的不断深入ꎬ产生了许多ＥＳＴ数据库ꎬ其中包含大量的ＳＳＲ分子标记ꎬＥＳＴ￣ＳＳＲ分子标记技术随之产生ꎬ因其保守程度更高ꎬ转移率也较大ꎬ不同物种的通用性强ꎬ且经济便捷ꎬ迅速得到应用ꎮ王娟等[３]通过构建聚类树状图分析葡萄不同品种间的亲缘关系ꎬ验证了ＥＳＴ￣ＳＳＲ技术在对葡萄种质分类鉴定中的可行性ꎮ通过筛选１６对ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对６２份葡萄材料进行分子水平的比较分析ꎬ发现６２份材料相似系数在０.４８~１.００之间ꎬ为葡萄亲缘关系探讨提供了可靠的分子生物学依据ꎮ１.２㊀ｃｐＳＳＲ分子标记在葡萄上的应用叶绿体微卫星(ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔＳＳＲꎬｃｐＳＳＲ)是近几年发展起来的一种基于叶绿体基因组的分子标记技术ꎮ叶绿体基因组相比核基因组具有以下特点:分子量小㊁结构简单㊁其中多为环状双链ＤＮＡꎻ为原核性ꎬ序列保守ꎬ进化速率慢ꎻ具有单亲遗传特性ꎬ不参与基因重组ꎬ为独立遗传进化ꎮ这些特性决定了ｃｐＳＳＲ对植物进行系统性和进化学研究具有很大的优势ꎮ易官美等[４]利用ｃｐＳＳＲ分子标记对榧树１０个自然分布群进行了遗传多样性分析ꎬ解释了榧树经历历史遗传漂变形成单倍型分布式样的重要原因ꎮ陈平等[５]利用ｃｐＳＳＲ引物对苎麻属进行亲缘分析ꎬ在２２对引物中筛选出５对引物ꎬ共扩增出１６条多态带ꎬ聚类分析分为３类ꎬ结果与传统方式一致ꎬ而且其多态比例为２２.７３％ꎬ表明ｃｐＳＳＲ具有较好的通用性ꎮ开发适宜的ｃｐＳＳＲ引物ꎬ在葡萄起源研究和亲缘关系鉴定方面必将得到极大的应用ꎮ１.３㊀ＩＳＳＲ分子标记在葡萄上的应用ＩＳＳＲ(ｉｎｔｅｒ￣ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ)标记技术也是在ＳＳＲ基础上发展起来的一项新型标记技术ꎬ由于其引物设计比ＳＳＲ简单ꎬ不需像ＳＳＲ引物那样通过测序获得ＳＳＲ两侧的单拷贝序列ꎬ开发费用较低ꎬ同时ꎬ与ＳＳＲ标记相比ꎬＩＳＳＲ引物可以在不同的物种间通用ꎬ多态性高㊁重复性好ꎬ能够提供更多的基因组信息ꎮ目前ꎬＩＳＳＲ标记已广泛应用于植物品种鉴定㊁遗传作图㊁基因定位㊁遗传多样性㊁进化及分子生态学研究中ꎮ李继洋等[６]对１９个新疆葡萄品种进行了分析ꎬ利用２条ＩＳＳＲ引物构建了１４个葡萄品种的ＤＮＡ指纹图谱ꎬ提供了利用ＩＳＳＲ分析葡萄品种亲缘关系和遗传多样性的新方法ꎬ建立的葡萄指纹图谱为今后探索葡萄种质资源奠定了基础ꎮ２㊀ＳＳＲ标记在不同葡萄研究领域中的应用２.１㊀ＳＳＲ标记在葡萄遗传多样性中的应用遗传多样性是指同一物种种内的性状差异ꎬ能够反映一个物种适应环境的能力和所具有的被改造㊁利用的潜力大小ꎬ是育种工作的基础[７]ꎮ葡萄品种繁多ꎬ包括大量天然杂交品种和实生选育品种ꎬＳＳＲ标记的高多态性对于如此繁多复杂的品种进行判定提供了有效手段ꎮ郝宇等[８]㊁方连玉等[９]分别对供试葡萄种质资源进行了遗传多样性分析ꎮＢａｎｅｈ等[１０]利用１３条葡萄染色体上的２３个ＳＳＲ标记位点ꎬ研究了伊朗葡萄的遗传演化及其遗传多样性ꎬ发现了一批有价值的葡萄种质资源ꎮ郭春苗等[１１]利用ＳＳＲ分子标记技术进行了葡萄品种(系)遗传多样性分析与指纹图谱构建ꎬ并对新疆４４个相对适宜制干葡萄品种(系)进行了遗传多样性研究ꎮ２.２㊀ＳＳＲ标记在葡萄品种鉴定中的应用葡萄是一个历史悠久的物种ꎬ目前已知有８０００个以上的品种ꎬ分布在世界广大地区ꎬ并且葡萄品种极易发生芽变变异ꎬ这使得葡萄同物异名及同名异物的现象较多ꎬ因此在葡萄研究和生产实践中ꎬ品种鉴别成为重要环节之一ꎮ之前的研究主要利用葡萄的形态学㊁生理学㊁农艺性状特征进行鉴定和分类ꎬ但由于基因和环境的互作影响ꎬ这些鉴定方法具有很大局限性ꎮ利用ＳＳＲ标记可对葡萄品种进行快捷准确的鉴定ꎬ同时可对其亲缘关系进行分析ꎮＢｏｗｅｒｓ等[１２]应用ＳＳＲ技术成功鉴定了酿酒葡萄品种赤霞珠的亲本是品丽珠和索维浓ꎮ吴子龙等[１３]利用９对多态性较高的ＳＳＲ引物区别了８个山葡萄及山欧杂种葡萄品种ꎮ８３１生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.２.３㊀ＳＳＲ标记在构建葡萄ＤＮＡ指纹图谱中的应用随着人们对品种保护意识的增强ꎬ许多植物开始构建ＤＮＡ指纹图谱ꎮ利用ＳＳＲ分子标记技术构建葡萄的ＤＮＡ指纹图谱ꎬ可为保护葡萄品种的自主知识产权㊁鉴定和检测葡萄品种苗木真实性和纯度提供客观㊁科学和准确的技术保障ꎮ杜晶晶等[１４]利用ＳＳＲ标记技术为中国农业科学院国家葡萄资源圃８０份葡萄材料构建了分子身份证编码ꎮ通过筛选后的ＳＳＲ引物对葡萄种质进行了区分ꎬ平均一对引物区分种质８.９份ꎬ实验结果更加准确ꎬ实验方法更加简便ꎬ使得利用ＳＳＲ标记构建葡萄种质分子身份证成为可能ꎮＷａｒｒｅｎ等[１５]对２１个葡萄品种和４个杂交种后代的１１０份资源进行ＳＳＲ指纹图谱分析ꎬ结果发现ꎬ已有研究划分的归属于２个不同种的葡萄资源拥有完全相同的ＳＳＲ指纹图谱ꎬ表明它们拥有相同的基因型ꎬ可能是同物异名ꎮ李雪雁等[１６]采用ＳＳＲ标记建立了７５份葡萄品种ＤＮＡ指纹图谱体系ꎻ李继洋等[６]利用２条ＩＳＳＲ引物构建了１４个品种的ＤＮＡ指纹图谱ꎬ图谱的建立为葡萄品种鉴定和亲缘分析提供了理论依据ꎮ尹玲等[１７]为我国近几年新育成的葡萄品种建立了指纹图谱ꎬ更清晰的追溯了他们的亲缘关系ꎬ完善了我国葡萄品种数据库ꎮ其研究表明ꎬ昌黎７号㊁昌黎８号㊁蜜光㊁春光㊁宝光和昌黎２１号等６个４倍体品种亲本均为巨峰ˑ早黑宝的后代ꎮＴｒｏｇｇｉｏ等[１８]以ＳＮＰ技术为基础建立了欧洲葡萄的遗传图谱ꎬ此图谱的构建使用了４８３个ＳＮＰ标记㊁１３２个ＳＳＲｓ标记和３７９个ＡＦＬＰ标记ꎬ为ＳＳＲ标记技术在亲缘关系更近的品种㊁品系的鉴别提供了依据ꎮ通过分子标记绘制的指纹图谱具有个体特异性ꎬ能准确㊁快速鉴定品种或品系ꎬ该技术为作物育种和种质管理提供了极大的便利ꎬ有利于推动我国果树苗木向着规范化㊁制度化和法制化的方向快速发展ꎮ２.４㊀ＳＳＲ标记在葡萄育种中的应用赖呈纯等[１９]利用ＩＳＳＲ分子标记技术对９５份葡萄品种(系)资源进行了遗传多样性和亲缘关系分析ꎬ结果表明ꎬ１２条引物扩增出１６０个清晰可辨的位点ꎬ品种间的遗传相似系数为０.５５~０.９９ꎬ聚类分析结果表明ꎬ９５份葡萄资源划分为３大类:欧亚种㊁欧美杂种和东亚种群ꎮＬｉ等[２０]通过利用与无核相关的分子标记进行早期目标性状的筛选ꎬ解释了葡萄种子败育的机制ꎮ陶红霞等[２１]利用ＳＳＲ标记对黑心病基因定位ꎬ寻找与抗性目标性状紧密连锁的分子标记ꎬ探讨了黑心病的遗传基础ꎬ为培育抗黑心病品种提供了重要方法ꎮＳＳＲ分子标记为发现丰富的遗传品种和种质资源提供了有效的手段ꎬ在杂交前通过ＳＳＲ分子标记对预选亲本的亲缘关系进行分析ꎬ为育种亲本的选配提供了更为明确的方向性和目标性ꎬ为优良基因的有效利用和进行分子标记辅助选择育种提供了理论支持ꎮ３㊀展望随着ＤＮＡ分子标记技术在各方面的应用ꎬＳＳＲ标记的开发更加快速ꎮＳＳＲ分子标记将和其他类型的标记一起在葡萄遗传多样性㊁品种鉴定㊁遗传图谱和育种等方面得到更加广泛的应用ꎬ在进行芽变品种的鉴别㊁嫁接苗砧木品种的鉴定㊁葡萄加工品种的筛选方面展现更大的潜力[２１ꎬ２２]ꎮ我国野生葡萄资源丰富ꎬ而且变异类型多样ꎬ而这些野生品种往往具有较高的抗寒性㊁抗病性等特性[２３]ꎬＳＳＲ分子标记可以为利用和保护好这些宝贵的种质资源的相关研究提供更多帮助ꎮ科研工作者已将ＳＳＲ分子标记技术应用到葡萄抗病性研究中ꎬ并取得了一定进展ꎮ这些研究将有利于对杂种进行早期抗性选择ꎬ缩短育种周期ꎬ大大提高育种效率ꎮ在今后葡萄遗传育种的研究中ꎬＳＳＲ分子标记将有越来越大的发展空间ꎬ我们可以通过ＳＳＲ分子标记构建葡萄属植物的系统发育树ꎬ建立我国葡萄资源指纹图谱数据库ꎬ充分利用我国丰富的葡萄资源ꎬ通过种间杂交㊁芽变体筛选ꎬ定位我国葡萄资源的抗性和品质基因ꎬ以及预测杂交优势ꎬ使育种更具方向性和目的性ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀ＦｉｓｃｈｅｒＢＭꎬＳａｌａｋｈｕｔｄｉｎｏｖＩꎬＡｋｋｕｒｔＭꎬｅｔａｌ..Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｆｕｎｇａｌｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆａｃｔｏｒｓｏｎａｍｏ￣ｌｅｃｕｌａｒｍａｐｏｆｇｒａｐｅｖｉｎｅ[Ｊ].Ｔｈｅｏｒ.Ａｐｐｌ.Ｇｅｎｅｔ.ꎬ２００４ꎬ１０８(３):５０１－５１５.[２]㊀ＺｈａｎｇＷＷꎬＰａｎＪＳꎬＨｅＨＬꎬｅｔａｌ..Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｆｏｒｃｕｃｕｍｂｅｒ[Ｊ].Ｔｈｅｏｒ.Ａｐｐｌ.９３１董志刚ꎬ等:ＳＳＲ标记技术在葡萄品种鉴别及遗传育种上的应用. All Rights Reserved.Ｇｅｎｅｔ.ꎬ２０１２ꎬ１２４(２):２４９－２５９.[３]㊀王娟ꎬ陶永焕ꎬ宋尚伟.葡萄ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物的开发及部分种质聚类分析[Ｊ].华北农学报ꎬ２０１４ꎬ２９(２):１２１－１２６. [４]㊀易官美ꎬ邱迎君.榧树居群遗传多样性的ｃｐＳＳＲ分析[Ｊ].果树学报ꎬ２０１４ꎬ３１(４):５８３－５８８.[５]㊀陈平ꎬ喻春明ꎬ王延周ꎬ等.苎麻ｃｐＳＳＲ标记筛选及在亲缘关系研究中的应用[Ｊ].湖北农业科学ꎬ２０１４ꎬ２１(５３):５０８４－５０８６.[６]㊀李继洋ꎬ代培红ꎬ罗淑萍.基于ＩＳＳＲ的葡萄品种亲缘关系分析及其指纹图谱构建[Ｊ].新疆农业大学学报ꎬ２０１４ꎬ３７(１):２４－２９.[７]㊀张金然.ＤＮＡ分子标记在林木遗传育种中的应用[Ｊ].林业科学ꎬ２０１４ꎬ１１:９９－１０１[８]㊀郝宇ꎬ张淑静ꎬ张世红ꎬ等.葡萄品种资源的ＳＳＲ鉴定及遗传多样性分析[Ｊ].河北农业大学学报ꎬ２０１１ꎬ３３(１):５４－５９.[９]㊀方连玉ꎬ王军ꎬ许雷ꎬ等.１５份葡萄种质遗传多样性的ＳＳＲ分析[Ｊ].分子植物育种ꎬ２０１０ꎬ８(３):５１１－５１５.[１０]㊀Ｄｏｕｌａｔｉ￣ｂａｎｅｈＨꎬＭｏｈａｍｍａｄｉＳＡꎬＬａｂｒａＭ.ＧｅｎｅｔｉｃｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｉｎＶｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａＬ.ｃｕｌｔｉｖａｒｓｆｒｏｍＩｒａｎｕｓｉｎｇＳＳＲｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ].Ｓｃｉ.Ｈｏｒｔｉｃｕｌ.ꎬ２０１３ꎬ１６０:２９－３６. [１１]㊀ＢｏｗｅｒｓＪＥꎬＭｅｒｅｄｉｔｈＣＰ.Ｔｈｅｐａｒｅｎｔａｇｅｏｆａｃｌａｓｓｉｃｗｉｎｅｇｒａｐｅｃａｂｅｒｎｅｔｓａｕｖｉｇｎｏｎ[Ｊ].Ｎａｔ.Ｇｅｎｅｔ.ꎬ１９９７ꎬ１６(１):８４－８７.[１２]㊀郭春苗ꎬ李宁ꎬ周晓明ꎬ等.基于ＳＳＲ标记的葡萄品种(系)遗传多样性分析与指纹图谱构建[Ｊ].新疆农业科学ꎬ２０１５ꎬ５２(１１):２０５１－２０５８.[１３]㊀吴子龙ꎬ王军ꎬ沈育杰ꎬ等.８个山葡萄及山欧杂种葡萄品种的ＳＳＲ分析[Ｊ].植物遗传资源学报ꎬ２００８ꎬ９(１):１０５－１０９.[１４]㊀杜晶晶ꎬ刘国银ꎬ魏军亚ꎬ等.基于ＳＳＲ标记构建葡萄种质资源分子身份证[Ｊ].植物研究ꎬ２０１３ꎬ３３(２):２３２－２３７. 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分子标记在观赏植物分类中的应用分子标记在观赏植物分类中的应用近年来，随着生物技术的迅猛发展，分子标记技术在观赏植物分类领域的应用日益广泛。

分子标记是利用生物学技术手段，通过对生物体内特定基因或DNA序列的研究和分析，来进行生物分类和鉴定的一种手段。

作为一种快速、准确的分类方法，它对观赏植物的分类和鉴定起着至关重要的作用。

一、分子标记技术在观赏植物分类中的基本原理分子标记技术是通过对DNA序列或蛋白质序列进行测定和分析，利用生物信息学的方法进行分类和鉴定。

在观赏植物分类中，通过提取植物样品中的DNA，对其进行PCR扩增、测序和序列比对等一系列操作，来获取其遗传信息，从而进行分类和鉴定。

尤其是在形态学特征相近或难以鉴定的植物种类中，分子标记技术的应用更是显得尤为重要和必要。

二、分子标记技术在观赏植物分类中的应用1. 物种鉴定通过对观赏植物样品中的DNA进行序列比对和分析，可以准确快速地鉴定出其所属的物种，解决了因形态特征相似而难以鉴定的难题。

2. 种属间亲缘关系分析利用分子标记技术，可以对观赏植物的遗传亲缘关系进行深入研究，揭示植物种属间的进化关系、亲缘关系和起源地等重要信息。

这有助于更好地理解植物的分类演化历史，为保护濒危物种和开展植物遗传资源的保护和利用提供科学依据。

3. 品种鉴定和杂交育种在观赏植物的育种中，分子标记技术可以用于品种的鉴定和杂交育种的指导，帮助培育出更具经济、观赏和科研价值的新品种，丰富了观赏植物的品种资源。

4. 优良性状分析分子标记技术还可以帮助研究人员分析观赏植物的优良性状的遗传基础，指导其良种选育和种质资源的合理利用，为观赏植物的改良和推广提供重要依据。

三、分子标记技术在观赏植物分类中的发展趋势随着生物技术、基因工程和生物信息学的飞速发展，分子标记技术在观赏植物分类中的应用也将不断拓展和深化。

从最初的PCR-RFLP、SSR、AFLP等分子标记技术，到如今的基因芯片技术、全基因组测序技术等，不断涌现出更加高效、快速和精准的分子标记技术，为观赏植物分类研究提供了更加丰富的手段和方法。

分子标记技术及其在果树种质资源上的应用分析作者：陈薇薇来源：《南方农业·下旬》2018年第12期摘要分子标记技术是一种遗传标记技术，其具有特别的优越性，在生物学领域中被广泛应用，对各种动植物的长效发展具有重要的推动作用。

基于此，将分子标记技术及其在果树种质资源上的应用作为研究对象，通过对分子标记技术的概述，进而对其在果蔬种质资源上的应用展开分析，以期为果树种植奠定良好的基础。

关键词分子标记技术;果树种质资源;应用分析中图分类号：Q75 文献标志码：B DOI：10.19415/ki.1673-890x.2018.36.070近年来，分子标记技术发展迅速，人们对于生物遗传规律的认知也日渐加深。

从1975年开始，人们开始通过DNA分子技术对生物进化、分类以及基因、遗传建立等方面展开研究，直到1985年有学者提出了PCR技术，其实现了复杂DNA片段的体外扩增，凭借着迅速、准确以及高度灵敏等优势受到生物界的重视，在品种鉴定、系谱分析、遗传图谱建立等领域广泛使用。

1 分子标记技术类型分子标记的类型较多，其按照分子生物学技术主要分成3种。

1）在杂交技术基础上提出的分子标记，其中代表性最强的就是RFLP技术。

2）在PCR技术基础上提出的分子标记技术，其主要分为RAPD、AFLP、SCAR等技术。

3）在重复序列基础上提出的分子标记技术，其中具有代表性的就是SSR、ISSR等技术。

2 分子标记技术在果树种质资源上的应用2.1 品种鉴定分类果树基本为多年木生植物、无性繁殖，不同地区栽培技术互相借鉴，使得更多物种产生，类型增多，如葡萄品种超过20 000种，但是实际计算发现其只有5 000～8 000种，果树品种鉴定分类混乱成为当前果树种质资源开发的一个重点问题。

传统的果树品种鉴定分类主要是利用植物特征比较和细胞学、酶学等方面进行，但其无法准确区别材料关系相近的果树。

随着科技的发展，分子标记技术的提出和应用使得果树品种鉴定分类更加准确，其通过DNA多态性为我国果树品种的鉴定分类起到了重要的推动作用。

果树分子生物学研究进展——DNA分子标记技术在葡萄的分子生物学的研究与应用初探摘要：DNA分子标记技术是现代分子生物学中最重要也是应用最广泛的技术之一，在葡萄分子生物学研究领域中也发挥着巨大作用。

本文从分子标记在葡萄多个研究方面的应用出发，初步探讨了在葡萄分子生物学研究中应用较为广泛的几种DNA分子标记技术的原理以及在国内的研究与应用进展。

关键词：葡萄；分子标记；应用；研究进展葡萄是一种具有悠久栽培历史的果树种类，其果实具有优良的食用口感，也有酿酒、榨汁等加工用途，所以广受人们喜爱，在世界各地都有广泛的栽培。

在长期的进化过程中，葡萄形成了许多种群、品种群、变种和生态型，又加之葡萄基因组杂合度高，存在大量多态性，同时葡萄的形态特征和同工酶容易受发育阶段和环境的影响。

以前所采用的形态解剖、生理生化等方法很难对葡萄的品种、杂种及亲缘关系进行准确的研究、分析和鉴定，因而给人们对其相关研究带来了较大的阻碍。

与传统的形态标记、细胞标记和生化标记相比，DNA 分子标记具有直接以DNA 形式表现、标记位点数量多、多态性高、表现为“中性”、检测迅速和操作简便等优势[1]，因而在葡萄品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因连锁标记筛选、分子辅助选择和基因克隆等方面得到了较广泛的应用。

一、种质鉴定和系谱分析葡萄在全世界分布十分广泛，易发生芽变等突变，种类和品种众多，同物异名及同名异物的现象比较普遍，因此品种鉴别成为葡萄研究和生产实践的重要环节之一。

传统方法受基因型与环境的互作影响，使这些鉴定方法受到了许多限制，导致传统的鉴别方法分辨率不高[2]。

分子标记技术则提供了一种更为有效的品种鉴定方法。

应用DNA 标记技术可以对近缘作物品种甚至芽变品种（系）进行分子鉴定。

应用在种质鉴定中的分子标记主要有以下几种：1.RAPD标记1.1原理RAPD标记是目前葡萄种质鉴定上应用最多的标记类型之一。

RAPD全称为随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphism DNA)，RAPD技术是William和Welsh等人1990年同时提出的一种DNA分子标记技术。

果树资源學報 2021,2(2):01-04专家论坛我国葡萄种质资源收集劇轍彌矗牒保存和研究利用进展赵旗峰，黄丽萍，刘晓婷，王 敏，荀志丽，马小河**收稿日期:2021-01-15基金项目：农业部农作物种质资源保护，枣葡萄种质资源收集、编目、更新与利用(111821301354052002)；科技部资源平台专项：国家枣葡萄种质资源平台(NHGRC2020 — NH12 —2)；国家现代农业产业技术体系专项(CARS —29 —yz —5)第一作者简介：赵旗峰(1975 — ),男，副研究员，硕士，主要从事果树资源与育种研究。

电话= 139****2764；E-mail :446021445@qq. com *通讯作者：马小河(1964 — ),男，研究员，主要从事果树生理与栽培技术研究。

电话:138****3581 ;E-mail :138****3581@qq. com(山西农业大学果树研究所/果树种质创制和利用山西省重点实验室，山西太原030031)摘 要：葡萄种质资源是葡萄科技创新和现代产业发展的物质基础，对促进乡村振兴和现代农业发展发挥着重要的支撑作用。

文章系统总结了我国葡萄种质资源的收集保存、鉴定评价和创新利用等方面的研究进展，分析存在的主要问题,对未来的发展趋势和研究方向进行了展望。

关键词：葡萄；种质资源；收集保存;鉴定评价;创新利用文章编号：2096-8108{2021)02-0001-04 中图分类号：S663. 1 文献标识码:ACollection , Conservation of Grape GermplasmResources and Progress of Research, Utilization in ChinaZHAO Qifeng , HUANG Liping , LIU Xiaoting , WANG Min , XUN Zhili , MAO Xiaohe *(Pomology Institute, Shanxi Agricultural University/Shanxi ProvincialKey Laboratory of Fruit Germplasm Creation and Utilization, Taiyuan 030031,China)Abstract : Grape germplasm resources are the material basis for grape science and technology innovation and modern indus ­trial development, and play an important supporting role in promoting rural revitalization and modern agricultural development.This paper systematically summarizes the research progress in the collection and preservation , identification and evaluation andinnovative utilization of grape germplasm resources in my country, analyzes the main problems , and looks forward to the futuredevelopment trend and research direction.Keywords :grape ； germplasm resources ； collection and preservation ； identification and evaluation ； innovative utilization葡萄属于葡萄科(Vitaceae),葡萄属(Vitis L.)。

江苏农业科学2017年第45卷第15期15李贝贝，刘崇怀，姜建福，等•葡萄品种分子鉴定研究进展及展望[J]•江苏农业科学，2017,45(15) ：5 -20.d o i：10. 15889/j. issn. 1002 - 1302.2017. 15. 004葡萄品种分子鉴定研究进展及展望李贝贝12,刘崇怀2,姜建福2,张颖2,樊秀彩2,张国海1(1.河南科技大学林学院，河南洛阳471000;2.中国农业科学院郑州果树研究所，河南郑州450009)摘要:品种鉴定是葡萄种质资源保存、研究、开发利用以及新品种品种权保护的重要依据。

随着分子生物学技术 的深人发展，出现了多种基于D NA水平的分子标记技术用于品种鉴定。

本文综述了目前国内外几种主要的分子标记 技术（人?1!>、11人?0、311、、3311、、11人？、以？、1?£»)在葡萄品种鉴定中的应用与研究进展,并阐述了各种标记方法的基本 原理和特点，以期为今后葡萄品种鉴定提供参考依据。

关键词:葡萄;分子标记;品种鉴定;研究进展;基本原理;特点中图分类号:S663.101 文献标志码：A文章编号:1002 -1302(2017)15 -0015 -06葡萄为葡萄科（Vitaceae)葡萄属L.)植物，是世界 范围内栽培最广泛的树种之一，目前世界已经报道的葡萄品 种有6 000 ~ 10 000个[1。

在葡萄的生产过程中，优良品种是 提高葡萄质量和种植效益的必要条件，也是其产业持续发展 的重要保障，回顾我国葡萄产业的发展历程，每一个快速发展 时期都伴随着新品种的引进、选育与推广，新品种对促进葡萄 产业的发展发挥着越来越重要的作用[2]。

葡萄多为无性繁殖，扦插繁殖容易，不同地区之间品种交 流频繁，导致其种类和品种繁多，同名异物及同物异名现象严 重[3]。

另外，由于国内现阶段的种苗市场管理还不完善，部 分不法苗木商为了自身利益，导致市场上以劣充优、以假乱真 现象时有发生[]。

文稿标题：分子标记在观赏植物分类中的应用探究一、概述在观赏植物分类领域，分子标记技术的应用备受关注。

本文将就分子标记在观赏植物分类中的应用进行全面评估，探讨其在类裙鉴定、遗传多样性分析、亲缘关系重建以及新种发现等方面的作用。

将从简到繁地介绍分子标记技术的原理和方法，并总结其在观赏植物分类中的意义和前景。

通过本文的阐述，读者能够更深入地理解分子标记在观赏植物分类中的价值和意义。

二、分子标记技术概述分子标记是利用生物大分子的遗传变异进行分类、鉴别和研究的技术手段。

常见的分子标记包括DNA条码、ISSR标记、SSR标记等。

这些标记通过检测特定的DNA片段或序列，可以帮助科学家对观赏植物进行分类和鉴定，同时也可以用于分析遗传多样性和亲缘关系。

三、分子标记在类裙鉴定中的应用分子标记技术在观赏植物类裙鉴定中具有重要意义。

通过对植物样本进行DNA提取和PCR扩增，可以获得其特定的DNA片段序列，从而实现植物的快速鉴定和分类。

这项技术的应用，可以提高观赏植物分类的准确性和效率，对于大量的未知植物样本的鉴定工作有着重要的意义。

四、分子标记在遗传多样性分析中的应用遗传多样性是观赏植物保护和遗传改良的重要基础。

分子标记技术在遗传多样性分析中发挥着重要的作用。

通过对不同种质资源的DNA进行分子标记分析，可以更准确地评估观赏植物的遗传多样性水平，为植物资源的保护和开发利用提供科学依据。

五、分子标记在亲缘关系重建中的应用研究观赏植物的亲缘关系对于揭示其进化历史和遗传关系至关重要。

分子标记技术可以通过对不同物种或不同种质资源的DNA进行序列比对和系统发育分析，帮助科学家快速准确地重建不同观赏植物的亲缘关系，为观赏植物资源的有效保护和合理利用提供科学依据。

六、分子标记在新种发现中的应用观赏植物资源的丰富多样性为新种的发现提供了广阔的空间。

分子标记技术可以通过对未知植物的DNA序列特征进行分析，帮助科学家快速准确地对新种进行鉴定和分类，促进观赏植物新种的发现和命名工作。

SINO-OVERSEAS GRAPEVINE & WINE基于SCoT 分子标记的37份葡萄种质遗传多样性分析马玉姣1，何西堂2，吴玉森1，刘利1，李勃1，李秀杰1*（1. 山东省葡萄研究院，山东济南 250100；2. 莒南县城乡建设综合服务中心，山东莒南 276699）摘 要：为进一步解析鲜食葡萄种质的遗传关系及遗传多样性，为新品种选育提供理论依据。

基于SCoT 分子标记对泰安金牛山基地和郑州果树研究所国家葡萄种质资源圃收集的37份葡萄种质（优系）进行遗传关系及多样性调查，并利用NTSYS 2.10软件进行聚类和主坐标分析。

结果表明，11对SCoT 引物共扩增出115条清晰的谱带，平均每条引物扩增条带数为10.45条；115条谱带中多态性条带102条，平均多态性比例为87.90%；遗传相似系数分析显示其遗传范围在0.612～0.929；当遗传相似系数为0.67时，可将37份葡萄种质分为两大类，说明37份葡萄种质遗传背景存在差异，但多数葡萄种质与亲本或潜在亲本分布在同一类内。

以上结果表明，SCoT 分子标记可以分析葡萄种质的潜在亲本关系，该结果可用于葡萄育种的早期鉴定，为后期优良种质的选育提供理论依据。

关键词：葡萄种质；SCoT 分子标记；遗传关系；遗传多样性中图分类号：S663.1 文献标志码：A DOI ：10.13414/ki.zwpp.2023.04.003收稿日期：2022-11-23基金项目：山东省农业良种工程（2020LZGC008）；山东省重点研发计划（重大科技创新工程，2022CXGC010605）山东省农业科学院科技创新工程（CXGC2022E15）；2022年山东省科技成果转移转化补助（鲁渝科技协作）项目作者简介：马玉姣（1991—），研究方向为葡萄栽培生理与分子生物学。

E-mail:*******************通信作者：李秀杰（1980—），研究方向为葡萄优质高效栽培技术研发及推广应用。