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RCS大鼠病变发育过程中视网膜神经节细胞形态学变化的研究

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文章编号:100025404(2005)0820749204 论著RCS大鼠病变发育过程中视网膜神经节细胞形态学变化的研究张辰星,阴正勤,许红霞,王仕军,姚军平 (第三军医大学西南医院全军眼科中心,重庆400038) 提　要:目的　研究皇家外科学院大鼠(royal college of surgeon rat,RCS)病变发育过程中视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RG Cs)形态学变化。

方法　取RCS大鼠、RCS2rdy+大鼠3、5、7、9、11周龄视网膜,固定后行视网膜平铺片,甲酚紫染色,使用LEIC A DM TRET显微镜及自带的LEIC A Q WI N系统软件,观察视网膜神经节细胞层细胞数量总数及RG Cs 亚群数量上的变化。

结果　RCS大鼠病变发育过程中,其节细胞层中细胞横径≥12μm的细胞在数量上,7、9、11周龄段相较与3周龄段出现显著减少(P<0101)。

相同周龄段上的视网膜节细胞层中,RCS大鼠与RCS2rdy+大鼠在横径≥12μm的细胞数量上相互比较,可见RCS大鼠从5周龄段开始相较于RCS2rdy+大鼠出现显著减少(P<0105),7、9、11周龄段相较与RCS2rdy+大鼠减少更为显著(P<0101)。

但是节细胞层细胞总数及横径≥9μm的细胞数量上,RCS大鼠自身发育前后对照以及与RCS2rdy+大鼠相比较没有显著差异。

结论　RCS大鼠视网膜色素变性过程中,随着光感受器细胞的变性和缺失,虽然视网膜节细胞层细胞在整体数量上没有明显变化,但是RCS大鼠视网膜病变发育早期,其节细胞层中胞体横径≥12μm的RG Cs在数量上开始出现明显缺失。

关键词:RCS大鼠;视网膜;神经节细胞 中图法分类号:R322.91;R329.24;R774.13 文献标识码:AStudy on morphological characteristics in the development of the retinal ganglion cells of RCS ratsZH ANG Chen2xing,YI N Zheng2qin,X U H ong2xia,W ANG Shi2jun,Y AO Jun2ping(Ophthalm ology Research Center,S outhwest H ospital,Third Military Medical University,Chongqing400038,China) Abstract:Objective　T o study the m orphological diversity of retinal ganglion cells in the pathological develop2 ment of retinitis pigmentosa in royal college of surgeon(RCS)rats.Methods　The retinal whole m ount preparations of RCS and RCS2rdy+rats of3,5,7,9,11weeks were stained by cresyl violet to count the number of the different subpopulation of the RG Cs and the number of all the cell of the entoretina.Re sults　In the development of the reti2 na of the RCS rats,there was significant difference of the am ount of the cell diameter m ore than12μm in the ganglion cell layer between the postnatal3weeks and the postnatal7,9,11weeks.There was als o significant difference of the am ount of the cell diameter m ore than12μm in the ganglion cell layer between RCS and the RCS2rdy+rats of differ2 ent ages.But there was no significant difference between all the cell of the entoretina and the cell diameter m ore than 9μm.Conclusion　In the pathological development of retinitis pigmentosa,accom panied with the loss of the sens ory retinal neuron,s ome kind of the subpopulation of the retinal ganglion cells have lost,although the am ount of all the cell of entoretina was stable. K ey w ords:royal college of surgeon rat;retina;ganglionic cells 视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)是一组导致进行性感光细胞变性和视觉障碍的遗传病征候 基金项目:国家自然科学基金资助项目(302704577) Su pported by the National Natural S cience F oundation of China(302704577) 作者简介:张辰星(1977-),男,重庆市人,硕士研究生,医师,主要从事视觉发育基础方面的研究。

电话:(023)68754403 通讯作者:阴正勤,电话:(023)68754401,E2mail:Zqyin@ 收稿日期:2005201226;修回日期:2005203217群,是致盲的重要疾病。

既往的研究认为,在视网膜的变性过程中,当色素细胞及光感受器细胞发生变性和缺失后,其视网膜内层神经元仍然能够长期保持相当数量的正常细胞结构和突触连接1。

尤其在黄斑区,即使是在变性晚期仍有相当数量的神经节细胞存活并维持正常的突触结构2。

Marc等3人为将视网膜色素变性分为3个阶段,并认为随着光感受器细胞开始出947第27卷第8期2005年4月 第　三　军　医　大　学　学　报ACT A　AC ADE MI AE　ME DICI NAE　MI LIT ARIS　TERTI AEV ol.27,N o.8Apr.2005现变性和缺失,节细胞早期即出现死亡。

但是随着异位细胞的迁入,星型胶质细胞的增生,这种节细胞数量上的缺失被掩盖以致难以发现,故而观测到的轻微的节细胞数量上的改变可能都意味着比较严重的节细胞数量缺失。

神经节细胞是视网膜内惟一向高级视觉中枢投射的神经元,研究其在视网膜变性疾病中在形态学和数量上的变化,可以为阐明视网膜变性的机制奠定基础,并为将来的视网膜移植研究提供一定的依据。

皇家外科学院大鼠RCS为遗传性视网膜色素变性的经典动物模型,该鼠患有一种因视网膜色素上皮细胞吞噬视细胞外节膜盘能力的缺陷,致使视细胞碎屑堆积,最终导致光感受器细胞进行性变性为特征的常染色体隐性遗传病。

其发病机制和转归与人类有相似点。

本研究,对RCS大鼠视网膜变性进程中神经节细胞进行数量上的分析,为进一步阐述视网膜色素变性病变过程及发病机制提供一定的理论依据。

1　材料与方法1.1　实验动物 出生后RCS及正常对照RCS2rdy+大鼠,前者为变性鼠,后者为正常对照鼠。

两种大鼠均无色素沉着。

两种大鼠3、5、7、9、11周龄段各3只,雌雄不限,由第三军医大学大坪医院野战外科研究所实验动物中心提供,符合国家医用动物实验标准,标准号为清洁级。

1.2　材料及器械 麻醉液:20%乌拉坦;固定液:4g多聚甲醛+30g蔗糖Π011 m olΠL P B(pH712)100ml;染色剂:甲酚紫液浓度1%,甲酚紫1gΠ100ml蒸馏水;甲酚紫由SIG M A公司提供;载玻片:玻片浓硫酸浸泡24h以,生理盐水漂洗,乙醇漂洗晾干后,多聚赖氨酸包埋;显微镜:型号LEIC A DM TRET;分析软件LEIC A Q WI N,运行环境WI N98。

1.3　方法1.3.1　视网膜平铺片的制备和处理 20%乌拉坦按照5mlΠkg腹腔注射麻醉大鼠。

取出大鼠双侧眼球,显微镜下沿角巩膜缘剪除角膜,去除晶体虹膜及玻璃体组织。

迅速置于固定液中,恒温4℃固定48h后,解剖显微镜下完整剥离完整视网膜,尽量剥离玻璃体,去除脉络膜组织及色素上皮层。

剥离好之视网膜于011m olΠL P B(pH712)液中漂洗。

视网膜上、下、颞、鼻4个方向向心剪开,平铺于多聚赖氨酸处理之玻片。

常温下甲酚紫液染色30min。

显微镜下观察显色后,011m olΠL P B(pH 712)小心洗去多余甲酚紫。

乙醇、二甲苯梯度脱水去脂后,中性树脂封片。

1.3.2　电脑处理图像并分类细胞计数 LEIC A DM TRET倒置显微镜下(物镜×20,目镜×10),在视网膜铺片4个象限中的每个象限各取3个取景框,使用LEIC A Q WI N操作软件将图像输入与LEIC A DM TRET显微镜相连的电脑。

使用LEIC A DM TRET显微镜操作系统中自带的细胞计数软件,每个取景框选取3个单位面积计数框(单位面积计数框以μm2计),在选定的单位面积计数框中,按照细胞横径≥12μm、≥9μm及全部细胞3种标准分别计数。

以均数估算整个视网膜平铺片单位面积细胞数量[( x±s)Πmm2]。

1.4　统计方法 采用SPSS10.1软件包,两组以上均数比较采用单因素方差分析,两组间均数比较采用独立样本t检验。

2　结果2.1　视网膜平铺片甲酚紫染色和LEIC A DM TRET处理图像 RCS大鼠3周龄段获得完整视网膜铺片4个,5、7、9、11周龄段各5个。

RCS2rdy+大鼠3、7、9周龄段获得完整视网膜铺片各5个,5周龄段3个,11周龄段获得4个。

所有视网膜铺片甲酚紫染色后很好的显示了视网膜节细胞层所有细胞(图1),经过LEIC A DM TRET显微镜输入电脑后的图像满足计数要求。

用软件LEIC A Q WI N本身自带的计数系统,选取单位面积计数框(μm2),测量胞体横径,按照细胞横径≥12μm、≥9μm及全部细胞3种标准,分别计数框内满足不同标准的细胞数量(图2)。

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不同发育阶段大鼠视神经的观察-发育生物学论文-生物学论文

不同发育阶段大鼠视神经的观察-发育生物学论文-生物学论文

不同发育阶段大鼠视神经的观察-发育生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——视神经是视觉传导的通路，属中枢神经，由视网膜节细胞发出的神经纤维及神经胶质细胞组成，不含神经元胞体，因此常用作中枢神经损伤再生研究较理想的实验材料[1、2],但有关不同发育阶段大鼠视神经的变化目前还未见系统报道。

本研究从组织形态学的角度，采用常规HE及免疫组织化学染色，结合电镜技术，通过对不同发育阶段大鼠视神经的观察，以期揭示其变化规律，为进一步进行有关视神经的研究提供实验资料。

1 材料和方法1.1 动物及主要试剂来源实验动物由第三军医大学动物实验中心提供成年Wistar品系大鼠，种鼠按雄：雌1∶2笼养交配，次晨检查出现阴栓为妊娠零天。

实验试剂为抗CNPase单抗（23-cyclic nucleotide 3-phosphohydrolase,CNPase,Promega公司）用于标记整个发育阶段的少突胶质细胞，抗GalC（Galactocere-broside GalC,Sigma公司）多抗用于标记成熟的少突胶质细胞。

抗胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acid-ic protein,GFAP,重庆医科大学）单抗用于标记星形胶质细胞。

SP免疫组化试剂盒为中山公司产品。

1.2 分组与检测方法1.2.1动物分组及取材按产后（postnatal）0、3、5、8、15、20、90天平均分成7组，分别命名为P0d、P3d、P5d、P8d、P15d、P20d及P90d,每组4只。

其中HE染色、抗CNPase、GalC和GFAP免疫组化染色2只，电镜2只。

动物断头后1分钟内用显微手术器械于视交叉向前一直达眼球完整取出视神经。

电镜标本放入3%的戊二醛中固定，HE及免疫组化染色标本放入4%的多聚甲醛/PB中固定，常规石蜡包埋切片。

1.2.2免疫组化染色观察操作步骤按说明书进行，只作少许修改，即石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2/甲醇10min,PBS 洗3min3次，7%山羊血清/PBS室温孵育30min,CNPase（1∶1000）单抗，GalC多抗（1∶100）及GFAP单抗（1∶100）4∶过夜，PBS洗5min3次，生物素化IgG（1∶200）37∶6h,PBS 5min3次，HRP标记的链霉卵白素（1∶200）37∶2h,PBS5min3次后，DAB显色光镜观察。

RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞增殖能力的变化及其Shhptc信号调控的开题报告

RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞增殖能力的变化及其Shhptc信号调控的开题报告

RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞增殖能力的变化及其Shhptc信号调控的开题报告
题目：RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞增殖能力的变化及其Shhptc信号调控
背景与意义：
视网膜是人类视觉的重要组成部分，包括视杆细胞和视锥细胞等视觉光感受器，这些细胞的死亡会导致视网膜退行性疾病。

RCS大鼠是视网膜色素上皮细胞脱落的动物模型，是研究视网膜退行性疾病的重要模型之一。

干细胞治疗作为一种新兴的治疗方法，已经被广泛应用于多种疾病的治疗中，包括视网膜细胞的再生。

因此，在RCS大鼠视网膜退行性疾病的治疗中，生发区干细胞的增殖能力和调控机制是非常重要的研究内容。

研究方法：
本研究将RCS大鼠的视网膜边缘生发区干细胞收集分离。

通过构建光学相干断层扫描显微镜（OCT）和电子显微镜（TEM）实验模型，观察干细胞在体内的行为，检测干细胞增殖率，并进一步分析其中的分子调控机制。

同时，建立Shhptc信号转导和NF-κB通路的启动模型，探讨其中的调节机制。

预期结果：
本研究预计可以探索到RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞增殖能力的变化，并且能够深入分析干细胞增殖的分子机制。

同时，预计能够揭示Shhptc信号转导和NF-κB通路的启动机制，为干细胞治疗的实践提供实验依据和理论指导。

结论：
本研究的主要目的是探究RCS大鼠视网膜边缘生发区干细胞的特性和机制。

预计相关研究成果将有望为视网膜退行性疾病以及干细胞治疗提供一定的理论基础和实践指导，具有重要的临床应用价值。

糖尿病大鼠早期视网膜神经节细胞凋亡机制的探讨

糖尿病大鼠早期视网膜神经节细胞凋亡机制的探讨

糖尿病大鼠早期视网膜神经节细胞凋亡机制的探讨谷瑞东;郝莹莹;陈晓隆【期刊名称】《国际眼科杂志》【年(卷),期】2014(14)3【摘要】目的：探讨糖尿病大鼠模型早期视网膜神经节细胞（ retinal ganglion cells ，RGCs）凋亡的机制。

<br> 方法：SD大鼠60只，随机分为对照组（ CON ）及糖尿病组（ DM），糖尿病组一次性腹腔注射1％STZ诱发糖尿病鼠模型，两组于第4，8，12 wk分别行HE、透射电镜及TUNEL法检测RGCs的凋亡情况，并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子浓度的变化。

<br> 结果：糖尿病组第8 wk开始出现RGCs数量减少、细胞排列紊乱的病理改变，第12 wk更为明显。

糖尿病组透射电镜下可见第4 wk 时 RGCs 出现线粒体肿胀；第8 wk 时RGCs内肿胀的线粒体更为明显、数目增多，染色质边集于核膜周边，部分细胞体积缩小、细胞器减少；第12 wk时出现RGCs体积变小，甚至出现细胞核断裂。

TUNEL阳性RGCs最早于糖尿病组第4wk时出现，随病程延长凋亡的阳性细胞逐渐增多，凋亡指数与同期对照组相比，差异有统计学意义（P＜0．01）。

糖尿病组第8，12wk 时RGCs内钙离子浓度明显高于同期对照组，差异显著（ P＜0．01）；糖尿病组第8 wk与第12 wk比较，升高差异亦有统计学意义（P＜0．05）。

<br> 结论：糖尿病早期出现了视网膜神经节细胞的凋亡，其机制可能与细胞内钙离子浓度升高有关。

%AIM:To investigate the mechanism of retinal ganglion cell apoptosis in early stage of streptozotocin ( STZ )-induced diabetic rats. <br> METHODS: Sixty SD rats were randomly divided into two groups:control group ( CON) and diabetesmellitus group ( DM ) . Diabetic rat model was produced by intraperitoneal injection of 1% STZ in 30 adult male SD rats.At 4, 8, 12wk,the rats were killed and eyeballs were enucleated for the HE staining, TUNEL staining, transmission electron microscopy detection respectively, and laser confocal microscope detection was used to detect the calcium ion concentration. <br> RESULTS: At 8wk RGCs decreased gradually and appeared disordered arrangement and got worse at 12 wk in DM group.In DM group, mitochondrial swelling was detected at 4wk., and became more obvious, more in number at 8wk with reduction in some cells'volume and the number of organelles decreased.In DM group, few TUNEL positive RGCs were seen at 4wk, and became more and more at 8 and 12wk.The apoptosis index was significantly higher in DM group compared with CON group in different time points ( P<0.01).Intracellular calcium ion concentration of RGCs in DM group began to elevate obviously at 8 and 12wk in contrast with CON&nbsp;group in the same time point (P<0.01).In DM group, Intracellular calcium ion concentration of RGCs increased difference was statistically significant between 8 and 12wk (P<0.05). <br> CONCLUSION: The study suggested that RGCs apoptosis occurs in early stage of diabetes, the mechanism might be associated with increased intracellular calcium ion concentration.【总页数】5页(P402-406)【作者】谷瑞东;郝莹莹;陈晓隆【作者单位】110004 中国辽宁省沈阳市，中国医科大学附属盛京医院眼科;110004 中国辽宁省沈阳市，中国医科大学附属盛京医院妇产科;110004 中国辽宁省沈阳市，中国医科大学附属盛京医院眼科【正文语种】中文【相关文献】1.大鼠糖尿病早期给光/撤光中心视网膜神经节细胞分层的变化 [J], 秦要武;徐格致;王文吉2.洛美利嗪对糖尿病早期大鼠视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 谷瑞东;郝莹莹;陈晓隆3.Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用 [J], 左中夫;刘万鹏;刘学政4.神经生长因子玻璃体腔注射对早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 吕航;王启常;唐罗生5.神经生长因子玻璃体腔注射对早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用 [J], 吕航; 王启常; 唐罗生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

视网膜变性模型大鼠部分生物学特性分析

视网膜变性模型大鼠部分生物学特性分析

离 乳 仔 数 死 亡 数 、成 活 数 ，统 计 仔 鼠 的离 乳 成 活
率 和 后 代 公 母 比例 。
１ 材 料 与方 法
１１ 实验 动物 及其繁 殖方 法 ．
１ 。 生产发育指标观察 ．２ ３
取４ 周龄的视网膜变性
模 型大 鼠 ２ ４只（ 雌雄 各 半） — ２周龄 每 周称 重 一 ，４ １
次 ：ｌ ～ ０周 龄 每 ２周 称 重一 次 ，绘 制 生长 曲线 ， ２３
随机选取 ８ ～ Ｏ日 ５ ９ 龄视 网膜变性模型大 鼠 ８ ０
［ 收稿 日期】 ０ ００ ．１ ２ １ ．６２ 【 作者简介】 沈 艳（９ ７）女， １７ ． ， 硕士， 主要从事动物模型的建立
及实验研究， — ｉ ｓｅ ｙ ＠ｓａｈ ． ｇ Ｅ ｍａ ：ｈｎ ａ ｈ ｐ ｃ ｒ ｌ ｎ ｏ
１３ 实验 方 法 ．
系大 鼠的报道研究仍甚少。为此， 作者通过定期测定 视网膜变性模型大 鼠的体重， 观察繁殖特性， 检测血液 生理与 生化指标 ， 了解其生物学特性， 为视 网膜变性模 型大鼠的推广与应用提供基础的生物６ ．１ ３ 胎，离乳后种 鼠 亦 同 居 交 配 。记 录 每 胎 产 仔 数 、 仔 鼠雌 雄 比 例 、
【 关键词】 网膜变性模型大鼠； 视 生物学特性； 繁殖性能； 生长发育； 理化指标
【 中图分类号］ ９ ．３ 【 Ｑ ５３ 文献标识码】 ［ Ｂ 文章编号】 ６ ４５ １ （ １） —２ ０ １７ —８７２ ０ ０ １—４ ０１ ３ １
视 网膜 变 性模 型大 ￣（ ｙｌ ｏｌ ｅｏ ｕｇ ｏ ｒ ａ ｃｌｇ ｆｓｒｅｎ ｏ ｔ ｒｔＲＣＳ，是 英 国皇 家 外科 学 院将 白毛 鼠和 棕 斑 、 ａ， ） 粉 眼 、 营养 不 良鼠通 过 一 系 列 回交 培 育 而 成 的 鼠 种， 是第 一个被发 现具有人类 视 网膜 变性主要特 征 的 动物模型【 １ 卜３ 。该 品系 大 鼠的 鼠体 特 征 为 ：粉 眼 ， 全 身 多 为 白毛 ， 颈 部 背 部 有 深 棕 色 不 规 则 花 斑 。 视 网膜变性模型大 鼠已经是 国际上一种成熟 的用 于研 究视 网膜退化 的动物模 型， 目前 国内对 于此 品 但