树舌及提取物中锗含量分析
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长白山药用真菌树舌凝集素的纯化及生化特性张春玉;黄国辉;林景卫;孙非;许守民;刘立侠【期刊名称】《中国生物工程杂志》【年(卷),期】2005(25)9【摘要】用硫酸铵分级沉淀、离子交换和HPLC层析等方法,从长白山药用真菌树舌的菌丝体中分离纯化了一种凝集素(Ganoderma applanatum lectin,简称GAL),SDS-PAGE检测其为单一蛋白条带。
经过SDS-PAGE测得其亚基分子量为15kDa左右,HPLC分析分子量为58kDa左右,表明GAL由4个亚基组成。
氨基酸组成分析表明,GAL中甘氨酸含量较高,不含蛋氨酸和色氨酸,中性糖含量约11.2%。
圆二色CD谱显示其含有3.6%的α螺旋、46.8%的β转角和49.6%无规则卷曲,不含有β折叠。
GAL可以凝集供试的2种动物血和3种血型人血的血红细胞,但对不同来源的血红细胞凝集滴度不同。
糖抑制实验表明,只有棉籽糖和D-松三糖部分抑制GAL的凝血活性。
GAL具有较好的热稳定性且其凝血活性不受Ca2+、Mg2+和Zn2+等二价阳离子的影响。
【总页数】5页(P84-88)【关键词】树舌;凝集素;生化特性;血凝集活性;药用真菌;分离纯化;长白山;HPLC分析;硫酸铵分级沉淀;亚基分子量【作者】张春玉;黄国辉;林景卫;孙非;许守民;刘立侠【作者单位】东北师范大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】Q949.32;Q55【相关文献】1.药用真菌树舌液体深层培养研究 [J], 李正鹏2.长白山大型食药用真菌凝集素的筛选 [J], 刘鹏举;孙东;唐咏;郑晓翠3.药用真菌树舌凝集素抗肿瘤活性的研究 [J], 张春玉;宋凯;王欣平4.巧用药用真菌树舌治疗高血压 [J], 孙宏亮;孙晓;初雪燕5.长白山树舌水溶性多糖的研究——F_T.F_A分离纯化与结构确定 [J], 谭日红;张翼伸;梁忠岩因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
海南野生灵芝和种植灵芝中锗含量的测定华英杰,张宏,胡国廉(海南师范学院化学系,海南海口571158)摘要:采用干法灰化和湿法消化两种方法分别对海南野生和种植两类灵芝样品进行消解,用氢化物发生-原子荧光光谱法同时测定了灵芝样品中的锗(Ge)含量,选择了最佳测定条件.结果表明,种植灵芝中的锗含量(2554.2mg/kg)高于野生灵芝.关键词:灵芝;锗;氢化物-原子荧光光谱法;干法灰化;湿法消化中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1671-8747(2006)02-0148-03灵芝属于担子菌亚门,层菌纲、多孔菌目,灵芝菌科,灵芝属,共有100多个品种.在分类学上一般以赤芝(又称丹芝)为主要代表.另外,常见的还有紫芝、松杉灵芝和薄树芝.中医认为,灵芝具有滋补、健脑、强身、消炎、利尿、益胃等功效,还可治疗神经衰弱、心悸头晕、失眠健忘、慢性肝炎、肾炎、气管炎、冠心病、癌症、脑溢血、动脉硬化、萎缩性肌强直,牛皮癣等多种疾病.药理实验进一步表明:灵芝还具有强心、保肝和镇静作用,对贫血亦有一定的疗效.锗是人类必需的微量元素之一,它是一种倍半氧化物(负离子),可排成网状结构而与体内的污染物、重金属离子(阳离子)相结合成为锗化合物,并且很快排出体外,对人体无任何毒副作用,达到净血之目的;锗还可以促进血液循环畅通,增强红血球携带氧气之能力,并能延缓机体衰老.研究发现,灵芝的药效与灵芝所含的有机锗和高分子多糖密切相关.有机锗具有抗癌、诱发机体干扰素的产生、降低血压、提高机体免疫等功能,并且毒性极低.大量试验研究表明,锗及锗化合物具有促生长、抗癌、抗氧化、清除自由基、刺激造血系统功能、抑菌及提高免疫力等广泛的生物学活性.海南省良好的土壤条件非常有利于灵芝的生长,但对于本地野生和种植灵芝中锗元素的含量的研究尚未见分析报道.本文以海南野生灵芝和种植灵芝作为研究对象,测定其锗的含量,并进行了对比.1实验部分1.1样品采集及预处理分别选取完整的野生灵芝(紫芝)和种植灵芝(紫芝),先以自来水洗,再用二次蒸馏水冲洗干净,在50 ̄70℃烘箱中烘干.将烘干过的灵芝剪成碎片后,再用粉碎机粉碎,过50目筛子,筛制成灵芝标准粉,分别于干燥器内密封干燥储存供测定使用.1.2主要仪器和试剂1)仪器AFS-820型双道原子荧光光度计(北京吉大小天鹅仪器有限公司,具仪器参数设置、自动进样、数据显示、运算、打印并根据设置自动完成校准曲线等多种功能的计算机控制系统);锗特种空心阴极灯(北京有色金属研究总院);FW-100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);FA1604型电子收稿日期:2004-06-08基金项目:国家自然科学基金资助项目(20273012);海南师范学院博士科研启动基金资助项目第19卷第2期海南师范学院学报(自然科学版)Vo1.19No.22006年6月JournalofHainanNormalUniversity(NaturalScience)Jun.2006[1][1][2][3][4]天平;SX2-4-10型箱式电阻炉(配KSW-4-12型温度控制台);各种规格容量瓶等.2)试剂锗粉:高纯试剂,津Q/HG3-1109-79,华北地区特种化学试剂开发中心(天津);浓硝酸(AR):广州市东红化工厂;85%磷酸(AR):武汉化学试剂厂;浓硫酸(AR):广州市东红化工厂;30%过氧化氢(AR)、氢氧化钠(AR):天津市化学试剂一厂;硼氢化钾(AR):天津市化学试剂一厂.1.3溶液配制1)标准溶液的配制准确称取0.1000g锗粉于100mL烧杯中,加入0.5mol/LNaOH溶液20mL,加入几滴质量分数为30%H2O2,加热溶解锗粉,取下冷却,转入100mL容量瓶中,以二次蒸馏水定容,得1g/L的锗标准使用液.准确量取10mL上述锗标准使用液于100mL容量瓶中,得0.1g/L的锗标准液,再准确量取10mL0.1g/L锗标准液于1000mL容量瓶中,得1mg/L锗标准液.分别吸取锗标准液1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL于5只25mL比色管中,分别加入5mLw=40%H3PO4+w=10%H2SO4溶液,用二次蒸馏水定容至25mL,配成40.00,80.00,120.00,160.00,200.00μg/L的锗标准系列溶液.2)灵芝样液的制备(a)干法灰化法:精确称取干燥灵芝试样粉于灰化皿(30mL瓷坩埚)内,于500℃下在电阻炉中灰化18~19h.取出放冷,之后向灰化皿周围喷少量水,注意不要让灰分飞散,同时润湿灰分,加入1mL1∶1HNO3,再加入5mLw=20%H3PO4,转入100mL烧杯中,在电炉上加热微沸,取下烧杯,冷却后.转入25mL容量瓶中,以二次蒸馏水定容.(b)湿法消化法:精确称取灵芝试样粉于100mL烧杯中,先加入10mL浓硝酸,再加入2.5mL浓硫酸,盖上玻璃表面皿放置过夜,次日置于电炉上加热.当加热近干时,取下稍冷,缓慢加入2mLw=30%H2O2,加热,重复3次,以除去残留HNO3,并加热至白烟出现,取下冷却.加入5mLw=20%H3PO4移入25mL容量瓶中以二次蒸馏水定容.1.4仪器测试条件设定仪器工作条件和测量条件见表1.表1测试条件负高压/原子化器灯电流/载气流量/屏蔽气流量/积分测定读数读数时V高度/mmmA(mL・min-1)(mL・min-1)方式方式方式间/s3008.0803001000峰面积标准曲线荧光度If152结果与讨论分别取锗标准系列溶液、样品空白溶液于自动进样器专用管中,以w=20%H3PO4+w=5%H2SO4为载体,w=3%KBH4+w=0.5%NaOH为还原剂依次测定其荧光强度值.以锗的标准系列溶液浓度值c(这里为质量浓度!)为横坐标,荧光强度If为纵坐标绘制标准工作曲线(见图1).由图1可见,在40.00~200.00μg/L范围内荧光强度与锗的浓度呈良好的线性关系,回归线性方程:If=2.4467c+13.0397,相关系数r=0.9984.2.2灰化时间的影响2.1标准曲线的绘制图1锗标准工作曲线[5,6][7-9][10]在500℃下将野生灵芝和种植灵芝分别灰化8,11,15,18,21,24h,然后将灰分制成灵芝样液进行测定,结果表明两种样品在灰化20h以上都可以灰化完全.2.3测定结果由于在灰化时间达到20h以上时,样品已经灰化完全,因此,我们选择灰化时间为22h,进行了4次平行测定,表2是种植灵芝和野生灵芝的实验测定结果比较.湿法结果采用80mA灯电流、过夜条件下的数据(见表3).由标准偏差计算公式:第2期华英杰等:海南野生灵芝和种植灵芝中锗含量的测定149C!=!(Xi-X")2n-1#=18.7μg/kg,由变异系数公式:cv%=C!X"×100%=1.12%.结果:天然灵芝经干法灰化处理后所得的结果(2439.7μg/kg)比经湿法消化法处理后所得的结果(1671.6μg/kg)要高,种植灵芝经干法灰化处理后所得的结果(2554.2μg/kg)比经湿法消化法处理后所测得的结果(2103.0μg/kg)要高,这说明两种灵芝用干法灰化法处理比用湿法消化法处理效果好.序号1234均值wGe/(μg・kg-1)2597.52500.22527.72591.42554.2表2种植灵芝与天然灵芝干法灰化结果比较表3种植灵芝与天然灵芝湿法消化结果比较wGe/(μg・kg-1)2394.12452.92440.02471.72439.7序号123均值wGe/(μg・kg-1)1879.12213.72216.52103.1wGe/(μg・kg-1)1690.31671.61652.91671.63结语海南种植灵芝中的锗含量要高于野生灵芝.随着自然环境的人为破坏,野生灵芝的品种和数量正在日益减少,但我们完全可以利用海南良好的土壤条件,通过种植灵芝来填补这种不足,满足人们强身健体和治疗疾病的需要.参考文献:[1]申永福,宋俊肖.谈对灵芝的一些认识[J].晋东南师范专科学校学报,2002,19(2):37-38.[2]初敬华,鲍智娟.灵芝与人类健康[J].生物学通报,1995(3):23-24.[3]符克军,曹光辉,徐艳钢,等.人体生命元素[M].北京:中国医药科技出版社,1995.[4]宋春玲,计成,王永杰.锗的理化性质及其对畜禽的营养生理功能[J].饲料与草业,2004(6):19-21[5]戴锦明.催化极谱法测定岩矿样品中痕量锗[J].地质实验室,1998,14(4):241-286.[6]龙洲雄.石墨炉原子吸收法直接测定痕量锗[J].广东微量元素化学,1999,6(5):54-56.[7]郭小伟.原子荧光分析方法手册[M].北京:北京万拓仪器有限公司,2001:116.[8]华英杰,王志军,张家荣,等.海南野生灵芝和种植灵芝中硒含量的测定[J].海南师范学院学报:自然科学版,2005,18(1):54-57.[9]杭州大学化学系分析化学教研室.分析化学手册:第1分册[M].北京:化学工业出版社,1997:396.[10]宋波,姚哲源.ICP-AES氢化物发生法测定灵芝酒中的痕量锗[J].中国食品卫生,1999,4(11):32-35.MeasurementoftheactivearinciplegermaniumofnaturalandplantedganodermaluciduminHainanHUAYing-jie,ZHANGHong,HUGuo-lian(DepartmentofChemistry,HainanNormalUniversity,Haikou571158,China)Abstract:Onemethod(dry-ash)wasusedtoclearupnaturalandplantedGanodermaluciduminHainan.Andhydridegenerationatomicfluorescencespectrometrywasusedforthemensurementoftracegermanium.Theworkingconditionsoftheap-paratusandthedisposalmethodwerealsoexplored.ThetracegermaniumofnaturalGanodermaluciduminHainanwascomparedwiththatofplantedGanodermalucidum.TheresultshowedthatthegermaniumcontentoftheplantedGanodermaluciduminHainanwas2554.19μg/kg,whichwashigherthanthatofnaturalGanodermalucidum.Keywords:Ganodermalucidum;germanium;hydridegenerationatomicfluorescencespectrometry;dry-ash150海南师范学院学报(自然科学版)2006年。
树舌灵芝总三萜提取工艺优化及其抗氧化作用研究贾瑞博;赵慧;刘凯丽;李燕;周文斌;吕旭聪;刘斌【摘要】以树舌灵芝为原料,研究总三萜的提取工艺及其抗氧化性.选择料液比、乙醇浓度、超声温度和超声时间进行单因素实验,在单因素实验基础上,采用Box-Behnken试验设计,以树舌灵芝总三萜得率为响应值进行响应面分析,确定最优工艺参数为:料液比1∶20 (g/mL),乙醇浓度70%,超声温度55℃,超声时间60 min.在此工艺条件下进行5次验证性实验,树舌灵芝总三萜的提取得率平均值为1.75%.并通过测定DPPH的清除率、羟基自由基的清除率以及总还原力,研究其抗氧化活性.【期刊名称】《应用化工》【年(卷),期】2016(045)006【总页数】6页(P1030-1035)【关键词】树舌灵芝;总三萜;响应面;工艺优化;抗氧化【作者】贾瑞博;赵慧;刘凯丽;李燕;周文斌;吕旭聪;刘斌【作者单位】福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002;福建农林大学食品科学学院,福建福州 350002;国家菌草工程技术研究中心,福建福州 350002【正文语种】中文【中图分类】TQ914.1树舌灵芝(Ganoderma applanatumn)别名树舌、树舌扁灵芝、平盖灵芝、扁目灵芝,属真菌门、担子菌亚门、层菌纲、多孔菌科、灵芝属[1]。
树舌灵芝的化学成分及新化合物的绝对构型测定卜庆华;罗奇;程永现【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2016(028)005【摘要】利用各种色谱技术从树舌灵芝的子实体中分离得到8个化合物,结合波谱学方法鉴定了它们的结构,分别为:shushene A(1)、shushene B (2)、lucidulactone A(3)、2,3-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-1-propanone(4)、6-hydroxy-4H-chromen-4-one(5)、1-(4-ethylphenyl)-1,2-ethanediol(6)、1-(2-ethylphenyl)-1,2-ethanediol(7)和吲哚醛(8).其中化合物1和2是新化合物,化合物3~8系首次从树舌灵芝中获得.化合物1和2是外消旋体,我们对其进行了手性拆分并通过量子化学计算确定了其对映体的绝对构型.此外,还采用ELISA法对化合物1和2的肾保护活性进行了测试.【总页数】5页(P650-654)【作者】卜庆华;罗奇;程永现【作者单位】大理大学药学与化学学院,大理 671002;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明 650201;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明 650201;中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650201【正文语种】中文【中图分类】R93【相关文献】1.树舌灵芝中3种化学成分的分离与鉴定 [J], 周忠波;马红霞;图力古尔2.树舌灵芝液体深层发酵菌丝体化学成分研究 [J], 刘英杰;李雨婷;苏玲;宋慧;薛强3.顶空固相微萃取结合气质联用分析树舌灵芝的化学成分 [J], 李田田;花朋朋;黄梓芮;潘雨阳;贾瑞博;陈弘培;刘斌4.树舌灵芝发酵液中灵芝酸的提取及测定 [J], 刘海良;宋爱荣;黄芳5.顶空固相微萃取结合气质联用分析树舌灵芝的化学成分 [J], 李田田[1];花朋朋[1];黄梓芮[1];潘雨阳[1];贾瑞博[1];陈弘培[1];刘斌[1,2]因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
安徽大学江淮学院本科毕业论文题目:树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化活性研究学生姓名:张珊学号: 01124022 系别:理工部专业:生物科学入学时间:2012年09月导师姓名:吴庆喜职称/学位:讲师 /博士导师所在单位:安徽大学生命科学院完成时间:2016年04月树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化研究摘要目的:研究树舌灵芝多糖的分离纯化及抗氧化作用。
方法:利用传统的水提醇沉的方法得到粗多糖,采用超滤的方法进行分离纯化,得到单一组分多糖,并从分子量大小,红外光谱,单糖组成等进行简单的表征分析,进一步研究了单一组份多糖对羟自由基,DPPH自由基清除能力。
结果:分离纯化得到单一组分的糖GT-2分子量为5.04×103,红外光谱分析表明树舌灵芝多糖GT-2具有典型的多糖吸收峰是β-葡萄吡喃糖,单糖组成得到五种单糖的摩尔比为1:3.3: 6.2:14.35:17。
结论:用超滤得到的单一组分的多糖GT-2分子量较小,蛋白质含量较少,具有典型的多糖吸收峰,由甘露糖,葡萄糖醛酸,葡萄糖,半乳糖,阿拉伯糖组成,抗氧化研究表明具有很强的抗氧化能力。
关键词:树舌灵芝多糖;超滤;抗氧化作用;表征分析Purification and Antioxidant Activity of Ganoderma lucidumPolysaccharides Isolated Tree TongueSummaryObjective: To study the water-soluble polysaccharide Purification and antioxidant effects. Methods:The traditional water extraction and alcohol precipitation method obtained crude polysaccharide, were isolated and purified by ultrafiltration method, single component polysaccharide, and carries on the simple characterization analysis from the size of the molecular weight, infrared spectroscopy, monosaccharide composition, the further study of the single component polysaccharide on hydroxyl radical, DPPH free radical scavenging ability.Result: Separation and purification of get single group of sugar GT-2 molecular weight is 5.04 x 103 and infrared spectrum analysis showed that Ganoderma applanatum polysaccharide GT-2 is typical of the polysaccharide absorption peak is beta - Grape pyranose and monosaccharide compositions were the molar ratio of five kinds of monosaccharide 1:3.3: 6.2:14.35:17. Conclusion: Obtained by ultrafiltration single group of polysaccharide GT-2 molecular weight smaller, less protein content, with the typical absorption peak of the polysaccharide, composed of mannose, glucuronic acid, glucose, galactose, arabinose, antioxidant research show has very strong antioxidant ability.Keywords:Ganodermalucidum;Ultrafiltration;Antioxidant;Characterization and Analysis目录1 引言 (1)1.1 树舌灵芝的研究 (1)1.2 树舌灵芝多糖功能活性研究 (1)1.3 树舌灵芝多糖的分离纯化研究进展 (1)1.4 本课题研究的意义及目的 (2)2 材料、试剂和仪器 (3)2.1 材料 (3)2.2 试剂 (3)2.3 仪器设备 (3)3 方法 (3)3.1 原材料的处理 (3)3.2 树舌灵芝多糖的提取 (3)3.3 树舌灵芝多糖的分离纯化 (3)3.4 树舌灵芝多糖单一组分的简要表征分析 (3)3.4.1 树舌灵芝多糖紫外扫描 (3)3.4.2 单一组分灵芝多糖总糖含量测定 (4)3.4.3 分子量测定HPLC法 (4)3.4.4 单糖组成 (4)3.4.5 红外光谱 (4)3.5 树舌灵芝多糖单一组分的抗氧化研究 (4)3.5.1 对DPPH清除作用 (4)3.5.2 对羟基自由基清除作用 (5)3.6 数据处理 (5)4 结果与分析 (5)4.1 树舌灵芝多糖含量的测定 (5)4.1.1 葡萄糖标准曲线 (5)4.2 树舌灵芝多糖紫外扫描分析 (6)4.3 分子量测定分析 (6)4.4 单糖组成分析 (8)4.5 红外光谱分析 (9)4.6 抗氧化作用的研究 (9)4.6.1 对DPPH清除作用分析 (10)4.6.2 对羟基自由基清除作用分析 (11)5 结论与展望 (12)主要参考文献 (14)致谢 (15)1 引言1.1 树舌灵芝的研究灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草,是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。