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微生物检验常见问题解答微生物检验常见问题解答一、方法验证1.做过验证的样品微生物检验方法是否都需要按照新的方法进行重新验证?答：对于微生物限度检查的产品而言，由于培养时间调整，应重新进行验证。
对于无菌检查的产品而言，如果方法未作实质性调整，可以不必重新验证。
个别产品在各论中收载了新的无菌检查方法，对这些品种，应对收载方法的适用性进行验证。
2.以前做过无菌验证的品种是否需要重新按照新的标准再验证?答：参见问题1。
3.“新增抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜”比如注射用克林霉素磷酸酯属于抗生素，是否需要重新选取滤膜再验证?答：目前采用的方法如果经验证表明可行，则可以继续使用该方法。
4.微生物方法学验证时，培养时间是否跟样品日常检验所培养时间一致?答：应该一致。
5.微生物限度验证时，如果一个方法只有金葡回收率达不到要求，该方法时是否可以用来做细菌霉菌的检测方法?答：按药典的规定，一个计数方法通过验证，是指所有试验菌的回收率均达到要求。
如果采用各种方法以及方法的组合仍无法使金葡回收率达标，则可以采用使金葡回收率最高的方法作为计数方法。
6.薄膜过滤的冲洗量不能超过1000ml，我公司的喹诺酮类产品原来的方法是每张膜冲洗量为1500和2000ml，请问有没有合适的方法将冲洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合规定?答：有几种办法可以降低冲洗剂的用量：1)降低接触滤膜的供试品的浓度;2)改进冲洗的方式，如少量多次地冲洗、降低蠕动泵的转速等;3)添加中和剂，如高价金属离子。
7.微生物限度检查法规定，技术方法验证时，采用上述方法若还存在一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行供试品检验。
请问，上述方法是指仅通过一种方法还是一定要通过几种方法联用的?答：应该要把可能采用的所有方法包括方法联用都进行验证。
8.供试品不溶于稀释剂，同时又有抑菌性，限度检查时应如何消除抑菌性?答：采用低速离心的方式，尽可能把供试品去除干净，取离心后的上层液，进行薄膜过滤。
微生物限度检查的影响因素探讨微生物限度检查是药品生产过程中非常重要的一环，它是确保药品质量和安全的重要手段之一。
微生物限度检查需要考虑许多因素，包括环境、样品预处理、检测方法等。
本文将就微生物限度检查的影响因素进行探讨，希望能够对相关领域研究人员有所帮助。
微生物限度检查的影响因素多种多样，首先要考虑的是样品的预处理方法。
样品预处理的不当可能会对微生物限度检查的结果产生很大的影响。
在进行微生物限度检查前，需要对样品进行适当的处理，包括挑选合适的培养基、添加适当的营养物质等。
还需要注意样品的保存条件，以免影响微生物的生长情况。
样品预处理的不当可能会导致微生物数量被低估或高估，从而影响药品的质量和安全。
另一个影响因素是环境条件。
微生物的生长受到环境条件的制约，包括温度、湿度、氧气含量等。
在进行微生物限度检查时，需要考虑到环境条件对微生物生长的影响，保证检测结果的准确性。
还需要考虑到检测环境的洁净度，避免外界微生物对样品的污染，影响检测结果的准确性。
在进行微生物限度检查时，还需要考虑到检测方法的选择。
不同的药品可能需要采用不同的检测方法，以确保检测结果的准确性。
常用的微生物限度检查方法包括菌落计数法、膜过滤法、分层接种法等。
选择合适的检测方法可以提高检测的准确性和可靠性，从而保证药品质量和安全。
样品的来源也是影响微生物限度检查的一个重要因素。
不同的样品可能受到不同程度的微生物污染，因此在进行微生物限度检查时需要对样品的来源进行充分的了解和分析，以选择合适的检测方法和预处理方法，保证检测结果的准确性。
人为因素也是影响微生物限度检查的一个重要因素。
在进行微生物限度检查时，需要保证操作人员具有专业的技能和严谨的态度，避免人为因素对检测结果产生影响。
还需要严格按照相关的操作规程和标准进行操作，保证检测结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查若干问题第一部分：引言微生物限度检查是药品生产过程中必不可少的环节，其主要目的是为了保证药品的质量和安全性。
在药品生产过程中，微生物污染往往会对药品的质量造成严重的影响，甚至会对人类的健康造成危害。
因此，对于药品的微生物限度检查也越来越受到重视。
第二部分：微生物限度检查的意义1、保证药品的质量微生物限度检查主要目的是为了保证药品的质量，避免微生物的污染对药品的质量造成影响。
只有经过合理的微生物限度检查，才能保证药品的质量符合国家相关的标准要求。
2、保护患者的健康药品是直接用于人体的物质，如果药品中含有微生物污染，有可能对患者的健康造成危害。
通过微生物限度检查，可以尽可能地保护患者的健康。
3、降低生产成本通过微生物限度检查，可以避免药品在生产过程中由于微生物污染而导致的损失，同时也避免因微生物污染而导致的退货和召回，降低生产成本。
第三部分：微生物限度检查的方法微生物限度检查主要有菌落总数测定法、霉菌和酵母数测定法、大肠杆菌测定法、金黄色葡萄球菌测定法等。
1、菌落总数测定法菌落总数测定法是一种常用的微生物限度检查方法，其过程是将待测样品接种在含有富营养的琼脂培养基上，通过恒温孵育后，计数培养基上生长的菌落数。
2、霉菌和酵母数测定法霉菌和酵母数测定法主要用于检测食品中霉菌和酵母的数量，其过程是将待测样品接种在富含酵母或霉菌菌株的培养基上，通过恒温孵育后，计数培养基上生长的菌落数。
3、大肠杆菌测定法大肠杆菌测定法是一种常用的微生物限度检查方法，其过程是将待测样品接种在含有大肠杆菌菌株的培养基上，通过恒温孵育后，计数培养基上生长的菌落数。
4、金黄色葡萄球菌测定法金黄色葡萄球菌测定法主要用于检测食品中金黄色葡萄球菌的数量，其过程是将待测样品接种在含有金黄色葡萄球菌菌株的培养基上，通过恒温孵育后，计数培养基上生长的菌落数。
第四部分：微生物限度检查的注意事项1、样品的处理样品的处理方法应根据不同的检测方法进行选择，不同检测方法的样品处理方法也不同。
非无菌药品微生物限度检查指导原则微生物限度检查是药品质量控制中的重要环节，尤其对于非无菌药品而言更为重要。
本文将对非无菌药品微生物限度检查的指导原则进行详细介绍，旨在提高药品的质量安全性。
一、检验项目及标准非无菌药品微生物限度检查的主要检验项目包括总生菌数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等。
每一项检验项目都有相应的标准来衡量合格与否。
以下是常用的标准：1. 总生菌数：根据药典要求，大部分非无菌药品每克不得超过1000 CFU（菌落形成单位）。
2. 大肠菌群：大肠菌群是肠道中的常见菌种，其存在可能暗示有肠源性污染。
检验结果一般要求不得检出大肠菌群。
3. 霉菌和酵母菌：霉菌和酵母菌是环境中广泛存在的微生物，在非无菌药品中的存在可能引发变质，甚至导致严重的药品质量问题。
一般情况下，每克药品中不得检出霉菌和酵母菌。
二、样品的选择和采集在进行微生物限度检查前，需选择合适的样品，并采取正确的样品采集方式。
以下是一些常用的样品选择和采集方法：1. 样品选择：根据药品的特性，选择代表性的样品进行检测。
选取多个批次的不同规格的样品进行检验更有利于全面评估该药品的微生物污染水平。
2. 样品采集：在采集样品前，先进行适当的表面消毒，以避免外源性污染。
采集时应遵循严格的无菌操作，确保样品的真实性和可靠性。
常用的样品采集方法包括划线法、切割法、稀释法等。
三、检验方法和操作流程微生物限度检查需要使用一系列严格的操作流程和检验方法，以保证结果的准确性和可比性。
以下是一般的操作流程：1. 样品预处理：根据药品的特性，选择适当的预处理方法，如溶解、稀释、震荡等，以提高微生物的检出率。
2. 培养基选择：根据不同的菌种需求，选择适宜的培养基进行菌落的培养。
常用的培养基有营养琼脂平板、大肠埃希菌选择平板、马铃薯葡萄糖琼脂平板等。
3. 培养条件：根据菌种的生长特性和检验项目的要求，设定适当的温度、时间和培养条件，以促进菌落的生长。
4. 菌落计数：通过目视或自动计数法，对培养基上的菌落进行计数。
86 I FOOD INDUSTRY I理论THEORY微生物限度和无菌检查方法验证中存在的问题文 郭焕君河北省清河县食品药品检验检测中心的检查上，要根据药品的成分和特点进行分类检查，如对于无抑菌成分和作用的品种，就可按照常规方法进行验证；而对于有抑菌成分和效果的药品，则要根据其菌株特点进行分类验证。
三、方法验证资料尚未实现资源共享方法验证资料是反映药厂对药品的检测质量以及微生物控制效率的总结性文件。
但在实际的检验和审核工作中，由于方法验证资料的上交和共享中牵扯到了大量的人力、物力以及资金的投入，导致许多检验机构在实际的资料审核过程中，为了降低成本，减少工作任务，而忽视了方法验证资料共享的重要性。
并且，还有一部分药厂为了隐瞒自身的药品质量问题，故意拖延方法验证资料时间，从而导致药品的质检工作存在一定程度的纰漏，药品的微生物限度和无菌检查工作不符合规定。
为此，药品监督管理部门必须重视强化方法验证监督管理，严格要求药厂提供准确、可靠的方法验证数据，实现方法验证数据的实时共享，有效保障药品的安全性。
总结总而言之，药品的无菌检查和微生物限度检查是检验药品安全性和质量的重要工作。
为了能够确保药厂产品的安全性和质量，促使我国医疗事业实现可持续性发展，必须重视方法验证工作的实效性，及时反思与改正，以确保药品微生物限度和无菌检查方法验证工作有序展开。
由于目前的药品类型各不相同，其中有许多药品本身就带有一定的杀菌和抑菌作用，这就导致了在实际的微生物限度和无菌检查时会出现假阴性的检测结果，从而严重影响药品检测的真实性。
因此，为了能够更好地完善我国药品的微生物控制工作，除了要针对药品的特点进行差异化检测外，还应加强检测人员专业素养、优化方法验证形式。
一、检测人员专业能力有待加强在药品的微生物限度和无菌检查工作中，参与检测的工作人员是影响药品检测真实性的决定性因素。
由于这是一项程序较为复杂和烦琐的工作，相关工作人员不但要有一定的微生物专业基础知识，同时还要具备一定的操作技能。
药品微生物限度检查中的误差影响因素及改进措施探讨摘要：药品微生物限度检查是确保药品质量安全的重要环节。
药品微生物限度检查的目的是检测药品中是否存在对人体有害的微生物，如细菌、霉菌、酵母等。
通过对药品微生物限度的检查，可以避免微生物对药品产生负面影响，保证药品的安全性和疗效。
基于此，本文详细分析了药品微生物限度检查中的误差影响因素及改进措施，以供参考。
关键词：药品微生物；限度检查中；误差影响因素；改进措施引言：药品监管是保障公众健康的重要措施，而微生物限度检查作为药品质量监管的一项重要手段，其改进能够提高监管的准确性和科学性。
通过引入更为科学的检查标准和方法，可以更好地发现和防范药品质量风险，提高监管意义和价值。
1药品微生物限度检查中的误差影响因素1.1样品采集和处理过程可能引入误差在微生物限度检查中，样品的采集和处理是关键步骤。
不恰当的采样方法和样品处理步骤可能导致微生物数量的变化。
例如，样品采集过程中存在交叉污染的可能性，即不同样品之间的微生物相互传播。
另外，样品处理时温度、pH值、稀释倍数等因素的控制也十分重要。
不合理的处理条件可能导致微生物数量的误差。
1.2实验设备和试剂的选择与质量可能对检查结果产生影响实验设备的精度和试剂的纯度将直接影响检测结果的准确性。
设备的不准确度和试剂的杂质等可能导致检测结果偏高或偏低（如表1）。
此外，实验设备和试剂的使用也需要遵循标准操作程序，以保证结果的可靠性和可重复性。
表1文献研究药品微限检查中误差影响因素统计影响因素误差例数占比1%培养基27223.05检验设备、22218.81用具操作环境15713.31供试液制备29124.66菌落计数13111.10药品自身性1079.07质合计11801001.3操作人员技术水平和经验对检查结果的影响操作人员的技术水平和经验将直接影响到检测的准确性和可靠性。
技术不熟练的操作人员可能无法严格按照检测方法操作，或在操作过程中存在疏忽，从而引入误差。
微生物限度超标原因分析及预防整改措施一、微生物限度超标原因分析1.1生产设备经常使用的生产设备清洗不彻底，灭菌不充分，这些都会使生产的药品受到污染。
1.2生产工序在药品生产中，要经过配料、灌装等许多个环节，会受到各种因素的影响，容易使药品的质量发生改变。
如湿度太大，易使微生物繁殖；灭菌方法不当，会使微生物限度检查受到影响。
1.3原辅料以及中药材中药制剂多以生药材粉制备。
生药材粉没有经过消毒处理，所以在对微生物限度检查过程中，常会出现不合格现象。
1.4人员生产操作人员在药品生产过程中及微生物检验员在微生物检查过程中，如果操作不当都有可能污染药品，导致药品微生物限度检查不合格。
1.5检验方法微生物检验方法出现了错误导致无法得出直实的结果。
1.6环境药品生产的洁净区和药品检验的微生物限度检查室及操作台的环境监测必须符合规定，环境监测的项目包括沉降菌检测和悬浮粒子检测等，如果有一项不合格，都有可能导致微生物限度检查不合格。
二、药品微生物超标预防整改措施2.1药品生产的洁净区和药品检验的微生物限度检查室，必须定期消毒，如采用臭氧灭菌等。
洁净室每次使用完毕清洁干净，生产期间，每周臭氧消毒一次。
对药品的生产设备和检验设备每月交替使用0.2%新洁尔灭溶液和75%乙醇溶液进行日常擦拭消毒。
擦拭操作台和墙壁的丝光毛巾不能混用，应严格分开。
2.2控制制备时间，如提取时间、搅拌时间都不能太长，微生物限度检验时间也要控制在1h之内，以防染菌。
2.3制备含生药材粉的药品，应对生药材粉先进行灭菌处理。
采用紫外线照射法或高温干燥法灭菌。
2.4微生物检验员要确保检测方法正确，使菌落计数结果真实可信。
2.5药品生产操作人员和检验人员要严格执行GMP操作规程，上岗前进行培训。
2.6检验者每次操作前的消毒处理必须彻底，不留死角，对检验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌。
每年对干热灭菌法和湿热灭菌法所使用的设备进行验证，干热灭菌法一般用电热恒温干燥箱灭菌，采用生物指示剂枯草芽孢杆菌孢子进行验证;湿热灭菌法一般用高压蒸汽灭菌器灭菌，采用生物指示剂嗜热脂肪杆菌孢子进行验证。
无菌检测和微生物限度常见问题1、问:做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的.如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基.无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。
只是注意：1、避免人为污染。
2、阳性菌加入数量2、问:离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么?答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离;操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量.注意事项:真菌由于沉降系数比较小,500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法.3、问:稳定性实验的微生物及无菌检查,是否每次都要做?答:是;原因:一实验期内可能会染菌;二灭菌后微生物并不是就彻底"死亡",有些成为碎片,这些碎片在一定的条件和时间下,可以自我修复而复活.三稳定性的考察，也应包括药品有效期的考察，在此期间所有的项目都应是合格的，无菌也是其中之一，如果在有效期内无菌不合格，也可以说明该药品存在一定的缺陷，至少，有效期有问题。
4、问:眼部给药制剂如何做卫生学检验?答:液体制剂:无菌检查;半固体及固体制剂:微生物限度检查5、问:滴眼液的微生物限度为何进行无菌检查?答:一滴眼剂产品系按照无菌工艺生产且终产品为灭菌产品,故其成品的微生物质量应要求统一为无菌;所以,滴眼剂产品的临床合理用药应与其卫生标准要求一致,即将其微生物质量要求统一为无菌,显然更为合理;二滴眼剂的微生物质量要求为无菌,是与各国药典在滴眼剂要求上的统一,及对《中国药典》此项规定合理性的补充及完善等方面看,滴眼剂成品的微生物质量要求统一为无菌具有必要性。
中药口服制剂微生物限度检查不合格的原因及解决办法这几年中药生产企业执行GMP 的力度愈来愈强，提升了产品质量。
但同时也出现了一些意想不到的问题，如一些企业发生了产品微生物限定检查不合格的质量事故。
2010版中国药典提高了制剂微生物限度检查标准，如增加培养基适用性检查，延长细菌培养时间。
GMP( 2010 年修订) 第四十八条要求，口服液体和固体制剂暴露工序区域，应当采取适当的微生物监控措施。
因此对中药制剂微生物限度超标进行有针对性的分析并提出解决问题的措施尤为重要，下面围绕中药生产的一系列环节分析微生物限度检查不合格的因素。
由于国家强制推行GMP，中药生产企业的厂房、设施等硬件设施越来越先进，软件管理水平也提升较快。
但一些设备如喷雾干燥、一步制粒大大缩短了物料干燥时间，除细菌、霉菌、控制菌的效果却不如烘房。
另外洁净区密闭加恒温恒湿的空气非常适合微生物的生长和繁殖。
人员是药品生产中主要的污染源，人体表面、衣服的污染物随着人的各种动作也会散发出来。
所以中药生产中药防止污染，首先要从人抓起。
进入生产区域的人员应与房间面积相匹配。
如人员数量较多，语言交流、咳嗽生产操作等活动会导致人体表面、衣服排出大量的污染物，这些污染物随着人体动作散发在空气中，增加了污染药品的可能性。
这些人员包括QA 检查员、设施检修人员、外单位检查参观人员等，一部分这类人员对微生物知识不甚了解，不规范的穿着、维修极易给生产区域带来新的污染源。
所以对非生产区域操作人员进行有关微生物、洁净区的培训很有必要。
制剂生产区域的人员应具有较高学历，应易接受内容繁多的微生物知识，并有较强的洁净生产意识。
对操作人员进行有效培训是很有必要，这些培训的着重点包括洗手、手消毒、洁净服的穿戴要求等。
规范化的操作能大大减少人直接或近距离与药品接触而带来的污染。
但是在实际操作中，操作人员操作存在诸多问题，如规范操作意识不强、洁净服不穿或穿戴不规范、用手直接接触最终灭菌物料、大声闲聊及野蛮操作。
微生物限度检查的影响因素探讨微生物限度检查是一种常见的质量检测方法，可用于检测食品、药品、饮用水等样品的微生物污染情况，以确保它们符合国家和国际标准要求，保护消费者的健康和安全。
然而，微生物限度检查的结果受多种因素的影响，需要进行综合分析和评价。
本文将探讨微生物限度检查的影响因素及其相关问题。
一、样品收集和保存样品的收集和保存是微生物限度检查的前提条件，其合理性对检测结果有重要影响。
收集时应遵循采样原则，如随机采样、同一批次采取多点采样、样品之间保持一定距离等，尽可能真实反映污染情况。
保存时应注意温度、湿度、氧气、光照等条件，并尽快送到实验室进行检测，以避免因保存不当导致结果失真。
二、抗菌剂的使用在微生物限度检查中，涉及到样品的富集和分离过程，常常需要使用抗菌剂，如青霉素、链霉素、氯霉素等。
这些抗菌剂对微生物生长具有抑制作用，可有效提高检测灵敏度。
然而，抗菌剂的选择、浓度和作用时间等因素会对检测结果产生影响，若使用不当，不但无法保证检测结果可信可靠，还可能导致假阴性或假阳性结果的出现。
三、实验方法的选择微生物限度检查包括总微生物数、大肠杆菌、真菌和酵母菌等指标，不同指标的检测方法也有所不同。
例如，总微生物数可采用平板计数法或滤膜法等，大肠杆菌可采用膜过滤法或培养法等。
实验方法的选择需要考虑检测灵敏度、特异性、重复性、经济性等因素，以保证检测结果的准确性和可靠性。
四、实验条件的控制实验条件的控制对微生物限度检查的结果也有很大影响。
例如，实验室温度、湿度、光照等条件应该控制在一定范围内，以保证实验环境的稳定性和一致性；实验室设备的选择和维护也很重要，例如，平板计数器、显微镜、培养箱等设备应该定期维护和校准，保持其精度和准确性。
微生物限度检查若干问题微生物限度检查若干问题微生物限度检查是对非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，是药品微生物学检验的重要内容之一。
中国药典2000年版二部附录ⅪJ“微生物限度检查法”、《中国药品检验标准操作规范》（2000年版）及参考书《药品微生物学检验手册》均做了详尽的阐述。
下面对几个比较重要的问题，谈一点工作学习体会，仅供参考。
一、实验室要求开展微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理，使用方便，操作安全的实验室，并且配有完善的实验设施和管理制度。
微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物检定实验室以及接种室（接种对照菌及菌种传代）均应严格分开。
（一）无菌室：1结构与要求：最好设在二楼以上（防潮、防霉、采光好），面积不超过10平方米，高度不超过24米，由2个缓冲间和操作间组成。
缓冲间与操作间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。
无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙、无死角。
无菌室内光照应不低于300勒克斯，缓冲间和操作间均应装有紫外线杀菌灯2-25w/m3作空气消毒用。
紫外线波长200-300nm者''具有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。
其杀菌机理可能是在DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰DNA复制，导致细菌变异或死亡。
紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳''每次开灯照射时间为20min。
其缺点：穿透力弱，一张纸可以挡住，不能穿透固体物，对人的皮肤眼睛有损伤，所以紫外线灯开关应装在无菌室外便于开关。
2温度、湿度：温度应控制在18-26℃''相对湿度40-60''操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正比''不低于49Pa。
3操作间：应安装空气除菌过滤层流装置，操作间不应安装下水道，洁净度不低于1万级，净化工作台局部应为100级。
操作间应准备电子称（感量01g''最大称量300g''乙醇灯''火柴''2碘酊及75乙醇棉球，大、小橡皮乳头，记号笔，灭菌的剪刀，镊子、注射器等。
4缓冲间：应有洗手盒、消毒液、无菌衣、帽、口罩，拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物。
（二）洁净级别及检查方法：通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法。
98年国家药监局颁布药品生产质量管理规范''把药品生产洁净区空气洁净度划分为四个级别：空气洁净度级别表────────────────────────────尘埃数/立方米活微生物数个洁净级别─────────────────────≥05μm≥5μm浮游菌/立方米沉降菌/皿────────────────────────────100级≤3500≤0≤5≤11万级≤35万≤2000≤100≤310万级≤350万≤2万≤500≤10────────────────────────────尘埃数：用尘埃粒子计数器测定，取样高度离地面1米，间距05-2米''每个测试点连续采样3-5次，仪器显示结果。
沉降菌数测定：无菌室及净化工作台面消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将营养琼脂平板3个及改良马丁琼脂平板3个直径9cm，置净化台左、中、右各1个''开盖，暴露30min后将盖盖上。
分别在30-35℃培养48h及25-28℃培养72h''细菌和真菌总数不超过1个为100级。
无菌室应在每次操作前后均用01苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭台面及紫外线照射不到可能污染的死角；用消毒液湿拖地面。
实验室一旦被污染''洁净度达不到要求''可以清洗或更换净化工作台过滤器''甲醛或丙二醇''乳酸熏蒸消毒''方法：支架上放一个烧杯（内装少许甲醛，8ml/平方米''下面放一个装有少许乙醇的乙醇灯点燃后，关闭门窗，乙醇用尽后灯自灭，甲醛蒸气充满无菌室，密闭24h。
缺点：甲醛蒸气易锈蚀仪器，对人有刺激，可用氨水中和，减少对人眼的刺激。
二、无菌操作指在无菌的环境条件下，使用无菌的器材，防止微生物污染的操作技术。
从事微生物检验的工作人员必须经过无菌技术及基础微生物学专业知识培训，才具备上岗操作的资格。
所用的物品需清洗、干燥、包扎，无菌。
干烤箱160℃2h''适用于培养皿9cm、试管、吸管、锥形管、剪刀、镊子物品的灭菌；培养基及09氯化钠溶液用高压锅湿热灭菌''含糖培养基一般用113℃30min''以防温度过高成分被破坏；一般培养基115℃30min;09氯化钠溶液可用121℃20min即可。
操作者在缓冲间换拖鞋，用肥皂洗手后，穿戴无菌工作服、帽、口罩，操作前用01苯扎溴铵泡手''75乙醇棉球擦拭双手后''在乙醇灯火焰区操作。
操作中切勿用嘴直接吸吹吸管防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污染供试品。
三、药品微生物检验的特点（一）活体易变性：被污染的供试品中活的微生物具有繁殖能力，如细菌以二分裂法无性繁殖，20分钟繁殖一代，一个细菌10个小时后可变成10亿个细菌。
如糖浆剂细菌数标准为100个/ml，出厂时检验结果合格，由于贮存不当，放置一段时间成为不合格药品，由于营养成分耗尽细菌自身代谢产物所致的毒性或pH值改变''细菌逐渐死亡，又成为合格药品。
（二）分布不匀：由于生产环节多，从原料、中介体到成品，经过生产多个流程，与不同操作人员接触，特别是生产后期被污染，通常是局部的，药品微生物的污染存在着不均性。
要求：随机取样，二个包装以上，操作前，供试品摇匀后取样。
（三）受损状态：药品中污染的微生物，受到加工、加热过程的机械损伤，药品本身的抑菌杀菌作用，处于受损抑制状态，检验时必须创造适宜的生长环境（培养基的营养、pH值等）使细菌复苏，从而提高检出率。
如口服制剂，必须检查控制菌大肠杆菌，取1:10的供试液10ml加入胆盐乳糖增菌液中，胆盐乳糖增菌液是分离大肠杆菌的选择培养基，蛋白胨乳糖等成分提供氮源碳源外，胆盐是抑菌剂，对革兰阳性菌有良好的抑菌作用，从而使目的菌更好地生长。
（四）生态环境多样复杂性：药品的种类、剂型繁多，使污染的微生物生态环境多样而复杂。
故对不同的供试品分别采用不同的方法，正确地制备供试液，使药品中污染的微生物得以真实反映，是保证检验结果正确可靠的重要前提条件。
四、供试液的制备：将供试品制成供试液（一般为1:10），有利于供试品中污染的微生物分散，与培养基充分接触，提高阳性检出率。
常用稀释剂为09无菌氯化钠溶液，滴眼剂、王浆、蜂蜜制剂可直接用供试品（原液），作为供试液。
在作10倍递增稀释时，吸管插入第1级稀释液内不低于25cm，上下反复吸吹约10次。
吸液时，应先吸至高于吸管上部刻度少许，然后提起吸管，贴于试管内壁调整液量至刻度，再沿第2级稀释管的内壁在液面上1cm处缓慢吹出全部液体。
每个稀释级需更换吸管。
（一）一般供试品供试液的制备：1液体制剂：糖浆剂等取样10ml至含有玻璃珠的锥形瓶内，加入09无菌氯化钠溶液90ml1:10的供试液。
油剂：取样10ml''加聚山梨酯-805ml''再加稀释剂至100ml。
不提倡将稀释剂定量分装后再灭菌，因高压灭菌易使液体蒸发损失。
2固体制剂：片剂：称样10g至研钵量取稀释剂100ml，先加10ml浸没样品，研磨，将上层液倒入锥形瓶，再加少许稀释剂研磨，同上操作直至样品全部研细制成1:10的供试液。
丸剂及锭剂：中药蜜丸取4丸以上剪碎后称样10g''放置匀浆仪专用的不锈钢匀浆杯内，加入稀释剂100ml，3000转/分''2min制成1:10的供试液。
胶囊：硬、软胶囊，称样10g，加入稀释剂100ml''放45℃水浴10分钟后振摇''使溶解。
肠溶片（胶囊）、稀释剂用无菌磷酸盐缓冲液pH68100ml。
茶剂：称样10g加稀释剂100ml浸泡30min，用无菌纱布过滤取滤液（1:10的供试液。
袋泡茶取2袋称量''加稀释剂配成1:10浸泡30min。
胶剂：如阿胶，先放4℃冰箱1h''取出后立即称样10g，放入匀浆仪内捣碎或用无菌的不锈钢捣罐捣碎，放45℃水浴促溶。
气雾剂：不含抛射剂的可拧开取样10ml，加稀释剂90ml1:10含抛射剂，需先放4℃冰箱1h减压，然后用无菌钢锥钻孔（勿拨出钢锥），转动钢锥使抛射剂徐徐抛出，再用无菌注射器抽出全部药液，然后按标示量用稀释剂补足为原液，以下操作同液体制剂。
乳膏剂：称样10g，加聚山梨酯-805ml促溶''加稀释剂至100ml。
非水溶性供试品：司盘单硬脂酸甘油酯法：眼膏、软膏剂，以凡士林为基质，不溶于水需加乳化剂使供试品乳化。
用减量法称样5g，加入含已灭菌溶化并保温45℃左右的司盘-805g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯-8010g混合物的烧杯中，在45℃水浴中振摇使供试品中凡士林基质乳化''慢慢加入45℃左右的09无菌氯化钠溶液85ml''边加边振摇制成1:20供试液。
（二）抑菌性供试品供试液的制备抑菌及抗菌性药品，如抗生素、沙星类，既然有抑菌杀菌作用，为什么还要做微生物限度检查，其原因是：①被污染的微生物在抗菌药品中因生存环境不利，呈休眠受损状态，但未死亡，一旦用于人体，当条件改变或适宜时，便复苏仍可生长繁殖，对人体造成危害。
有的耐药性致病菌株可成为对该抗菌药的依赖株。
②抗细菌的药品，不能抗真菌，所以可能被真菌污染；抗真菌的药品不能抗细菌，所以可能被细菌污染，故2000年版药典要求口服抗生素抗细菌的药品检查真菌，抗真菌的药品检查细菌。
细菌数及真菌数的测定，供试品未经特殊处理，因三级稀释，基本上可起到稀释后消除抑菌成分的作用。
1稀释法：取1:10的供试液10ml加入增菌液在200ml以上2沉降法：制成1:10的供试液摇匀后静置10min，使药品中污染的微生物混悬于供试液中，难溶于水的抑菌成分自然沉降在容器底层，吸取上层液10ml至增菌液。
1、2法适合于抑菌性弱的药品。
3薄膜过滤法：由于细菌的直径约1μm''利用045μm微孔滤膜阻截细菌，滤除抑菌成分，冲洗膜上残留抑菌成分，达到消除抑菌成分之目的。
如氯霉素滴眼液，取1:10的供试液40ml，通过直径为50mm装有045μm孔径微孔滤膜的无菌滤器，过滤后用09无菌氯化钠溶液冲洗，冲洗量约1000ml，无菌手续取出滤膜放至无菌平皿内，剪成四等份，各取一片分别放置营养内汤增菌液二瓶（其中一瓶加入金黄色葡萄球菌50-100个及胆盐乳糖增菌液二瓶其中一瓶加入铜绿假单胞菌50-100个。
