pH示差法测总花青素含量

ph示差法测花色苷原理花色苷，听名字就感觉高大上，是吧？它们就是植物中的一种天然色素，通常藏在水果和花朵里，给我们带来那些迷人的色彩。

说到测量这些花色苷，大家听过“pH示差法”吗？这可是一种挺有意思的方法，像个小魔法一样，能让我们了解这些色素的秘密。

今天就来聊聊这个方法，轻松点，咱们不用专业术语，像聊天一样。

先来点背景知识。

花色苷其实是种有趣的东西，主要存在于植物中，负责色彩的传递。

你看到那些鲜艳的蓝莓、红葡萄，这些颜色可都是它们的功劳。

好吧，别光想着吃的，咱们得说说怎么测它们。

pH示差法可真是个神奇的工具，简单又有效。

它依靠植物色素对酸碱环境的反应，来判断花色苷的含量。

听起来像在做化学实验，但其实就像是在调饮料一样，酸酸甜甜的。

这个方法怎么操作呢？想象一下，你拿着一杯饮料，慢慢加入柠檬汁，颜色会变化，对吧？花色苷也是一样，pH值不同，它们的颜色就会出现大变脸。

比如在酸性环境下，颜色可能偏红；而在碱性环境下，颜色可能变成蓝色，甚至绿色。

是不是很神奇？就像小丑变魔术，令人目不暇接。

科学家们就利用这个变化来测量花色苷的含量，简单又直接。

使用这个方法，咱们需要一些仪器和试剂，像酸碱指示剂这些小家伙。

没啥复杂的，只要把样品调和后加点指示剂，就能看到颜色变化。

然后，再用比较的方法，把结果和标准样本对比，便能得出结果。

其实整个过程就像在玩颜色游戏，轻松又有趣。

只不过，这个游戏可以帮助我们了解植物的营养成分，对农业、药学都有很大的帮助。

很多人会问，为什么选择pH示差法呢？嘿，答案简单。

这个方法不需要高深的仪器，普通的实验室就能搞定。

结果精准，误差小。

它能快速出结果，像快餐一样，省时省力。

想想看，咱们做实验时，等个几天的感觉，真是让人抓狂。

用pH示差法，立马就能看到颜色变化，心里乐开了花。

大家可能想问，这个方法有没有局限性呢？当然有！就像一把双刃剑，既有优点，也有不足。

比如，对于某些复杂的植物样品，可能会出现干扰，导致结果不那么准确。

原花青素含量检测的概述原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。

【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。

自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。

研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。

且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。

目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。

1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。

正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。

1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。

在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。

而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。

在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。

对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。

此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。

随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。

pH示差法测定不同种类蓝果忍冬总花色苷含量王艺菲;辛秀兰;陈亮;霍俊伟【摘要】蓝果忍冬是一种营养丰富的小浆果，花色苷含量极高，其在我国有丰富的野生资源。

本文从吉林长白山地区，新疆阿尔泰地区分别收集了10株野生株系，利用pH示差法，对其总花色苷含量进行了测定。

测得吉林长白山地区的10株野生蓝靛果忍冬的总花色苷平均值为411.30 mg/100 g；新疆阿尔泰地区的10株野生阿尔泰忍冬的总花色苷平均值为403.28 mg/100 g。

在这20个野生株系中，总花色苷含量最低的为A2：238.24 mg/100 g，最高为C10，达到657.10mg/100 g。

%Lonicera cearulea L. is a nutrient-rich berry, its anthocyanin content is extremely high, and it has rich wildlife resources in China. Twenty high-quality wild varieties were collected from Changbai Mountain , Jilin and Altai area, Xinjiang in this article, and their total anthocyanin contents were determined by pH-differential spectrophotometry. The average of total anthocyanin content of 10 wild Lonicera edulis from the Changbai Mountains area was 411.30 mg/100 g, and the average of total anthocyanin content of 10 wild Lonicera altaica from the Xinjiang Altai area was 403.28 mg/100 g. of 20 wild Lonicera cearulea Linn., the lowest total anthocyanin content was A2:238.24 mg/100 g,the highest was C10:657.10 mg/100 g.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】4页(P75-77,78)【关键词】蓝果忍冬;总花色苷;野生资源;pH示差法【作者】王艺菲;辛秀兰;陈亮;霍俊伟【作者单位】东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030;北京电子科技职业学院，北京100029;北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室，北京100029;东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文蓝果忍冬（Lonicera caerulea L.）俗称山茄子、黑瞎子果、羊奶子等，在植物学分类上属于忍冬科（Caprifoliaceae）、忍冬属（Lonicera Linn.），主要分布在北半球的寒带浆果带，北美和北欧各国以及我国东北和新疆。

原花青素含量检测的概述【摘要】对目前原花青素常用的检测方法进行了对比并阐述了各种方法的优缺点，为探索更好的原花青素的测定方法奠定基础。

【关键词】原花青素；检测；含量原花青素是一类广泛存在于植物中的黄烷醇单体及其聚合体的多酚类混合物，具有抗氧化和自由基清除能力等生物活性。

自20世纪60年代以来，在保健品、医药和化妆品领域获得了广泛应用。

研究表明[1]，儿茶素和表儿茶素是构成原花青素的结构基础，继而形成缩合成二聚体、三聚体至高聚体。

且单体具有旋光性，因此要想测定每一种成分的含量非常困难。

目前国内外对原花青素含量的测定方法尚未统一，现介绍几种常用的方法。

1.可见分光光度法[2]原花青素最常用的测定方法是可见分光光度法，它分为KMnO4法[3]、正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法、铁盐催化比色法、和pH示差法等。

正丁醇-盐酸法、香草醛-强酸法两种方法是目前普遍采用的相对专一、灵敏的、简单迅速测定原花青素的方法。

1.1 Porter法（Bate-smith法）又叫盐酸-正丁醇法，是依据原花青素在无机酸和加热的条件下被降解，产生红色花青素，在546nm处有最大吸收，原花青素的含量与吸光度值符合朗伯-比尔定律[4]。

在强酸作用下，聚合原花青素单元间的连接键易被打开，上部单元生成黄烷-3-醇，下部单元生成花色素。

而对于黄烷3，4-二醇单体原花青素来说，C-4位有极强的亲电性，其醇羟基与C-5，C-7上的酚羟基形成了一个苄醇系统，使得4位碳易于生成正离子。

在强酸作用下，正碳离子失去质子，生成花色素[5]。

对于黄烷-3-醇单体，不会有正离子形成，因此与儿茶素和表儿茶素的单体不发生显色反应。

此法对原花青素具有专一选择性，儿茶素、黄酮类、棓酸类及水解单宁类化合物皆不具备此反应，不适宜于低聚原花青素的测定，它与原花青素的高聚体反应也不完全。

随后，Porter等对该法的反应条件进行了探索，并认为Fe3+、Co2+、Cu2+等金属离子可催化加速自氧化过程，提高转化率，其中以Fe3+的催化效果最好。

黑果腺肋花楸浆果花青素质量比测定及稳定性张文君;信雪维;张国锋;梁爽;王晴;赵瑛【摘要】研究黑果腺肋花楸浆果中花青素的质量比,并考察光照、温度、pH值以及金属离子对花青素稳定性的影响.采用pH示差法测定黑果腺肋花楸浆果中花青素的质量比.黑果腺肋花楸浆果中花青素的质量比可达到2.1 mg/g.黑果腺肋花楸花青素溶液吸光度值随光照时间的增多以及温度的升高而减少;在pH值为2时黑果腺肋花楸花青素溶液的吸光度值最大,红色最明显,当pH≥4时颜色由红色趋向于无色;金属离子中Na+对黑果腺肋花楸花青素无影响,Al3+和Fe3+对花青素的稳定性有一定的破坏作用.pH示差法能简单精确的测定黑果腺肋花楸浆果中花青素的质量比,花青素在储存时要避光、低温保存,并保证其储存环境pH为3,避免金属离子的污染.%The effects of light,temperature,pH value and metal ion on the stability of antho-cyanin were studied.Determination of Anthocyanin in Aronia melanocarpa Elliot' berry was performed by pH difference method.The contents of anthocyanin of three batch of Aronia melanocarpa Elliot' berry was 2.1 mg/g.The absorbance of the anthocyanin solution of the genus Fraxinus mongolicum was decreased with the increase of the light time and the temper-ature.When the pH value was 2,the absorbance value of the anthocyanin solution was the highest,and the pH value was 4,the color tends to be colorless from red.The Na+has no effect on the anthocyanins of the genus Corydalis,and Al3+and Fe3+have a certain destruc-tive effect on the stability of anthocyanins.The pH difference method can be used to deter-mine the content of anthocyanins from Aronia melanocarpa Elliot' berry.The anthocyanin are preserved in thedark,stored at low temperature and the storage environment of pH 3,to avoid contamination of metal ions.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(034)002【总页数】5页(P159-162,182)【关键词】黑果腺肋花楸;浆果;花青素;pH示差法;稳定性【作者】张文君;信雪维;张国锋;梁爽;王晴;赵瑛【作者单位】哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076;黑龙江生物科技职业学院,哈尔滨150025;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】R284黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa Elliot) ，又名野樱莓，属于蔷薇科腺肋花楸属多年生落叶灌木，其果实为球形浆果，味道微涩、酸甜，果皮为紫黑色类似蓝莓，果肉为暗红色.根据文献报道，腺肋花楸类植物的果实中富含酚酸类与黄酮类等成分，主要成分以花青素、原花青素及其衍生物为主[1].通过研究表明花青素中含有的多酚化合物在防治心血管疾病、抗突变以及降血糖等方面具有良好的药理活性[2-3]，并且花青素在抗氧化，美容养颜等方面普遍得到人们的认可和青睐.因此，黑果腺肋花楸作为天然色素资源具有很大的开发价值.目前常用分光光度法测定总花青素的质量比，其中pH 示差法则是通过测定两个花青素吸光度差别最大且稳定的 pH 处的吸光度差异来计算花青素的总量，与其他方法比较，此方法检测花青素的质量比更为简便精准.黑果腺肋花楸中花青素虽然有良好的药理活性和功效但其稳定性却容易受到多种因素的影响，研究表明，对于玫瑰花的花青素而言，当pH 值在2～7时吸光度变化没有显著区别，pH越小颜色越鲜艳，当pH 值在7以上时花青素的吸光度变化较大，颜色也发生变化[4-6].资料显示花青素的热降解规律符合第一热力学公式，在加热时间延长，温度升高的情况下花青素的降解速率也随之加快[7].有研究发现不同离子对花色苷的影响不同，并且相同离子对于不同植物中的花色苷影响也不尽相同[8].由于本课题组已对腺肋花楸的浆果进行了系列研究，并确定了最优提取方法[9]，故本试验首先提取黑果腺肋花楸浆果中花青素，再采用pH示差法测定其花青素的质量比，同时研究了不同光照、温度、pH值以及不同浓度金属离子对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响，旨在为黑果腺肋花楸的开发利用提供更加充分的研究基础.1 仪器与材料1.1 仪器UV-7504紫外可见分光光度计(上海精密仪器仪表有限公司)；LE204E/02电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；PB 10 pH计(德国赛多利斯公司)；TGL-16G台式离心机、超声清洗器(深圳市洁盟清洗设备有限公司).1.2 材料矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品(成都曼思特生物科技有限公司，纯度大于98%)；蒸馏水、盐酸、甲醇、无水乙醇(天津市协和昊鹏色谱科技有限公司)；氯化钾、醋酸钠、氯化钠、三氯化铝、三氯化铁(天津市天力化学试剂有限公司)等试剂均为分析纯.黑果腺肋花楸采收于黑龙江省黑河市，冷冻储藏备用.2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 pH=1.0缓冲液的制备称取0.93 g氯化钾于烧杯中并用蒸馏水稀释到490 mL，再用12 mol/L盐酸调整溶液的pH值至1.0±0.05，将溶液转移至500 mL的容量瓶中，用蒸馏水将溶液定容至刻度，即得.2.1.2 pH=4.5缓冲液的制备称取27.22 g乙酸钠于烧杯中并用蒸馏水稀释到490 mL，再用12 mol/L盐酸调整溶液的pH值至4.5±0.05，将溶液转移至500 mL容量瓶中，用蒸馏水将溶液定容至刻度，即得.2.1.3 对照品溶液的制备精密量取花青素对照4 mg于10 mL 棕色的容量瓶中，以甲醇为溶剂定容至刻度并摇匀，即得对照品的母液，质量浓度为0.4 mg/mL，于4 ℃冰箱中避光保存.2.1.4 供试品溶液的制备取新鲜的黑果腺肋花楸浆果，捣碎，称取汁液1 g，按照料液比1∶30加入体积分数为60%酸化乙醇，超声提取20 min后离心，取1 mL于10 mL容量瓶中定容至刻度，待用.2.2 测定方法考察2.2.1 平衡温度的确定花青素稳定性受温度的影响较大，研究表明[10]花青素的吸光度值随着温度的升高而下降，低温以及干燥状态使天然色素更趋于稳定，加热和高温则会导致花青素的变色反应，随着加热温度的升高变色反应加快，花青素的降解速度也随之加快[11].除此之外，适宜的温度对于花青素的保存起到保护作用，因此，本实验最终选择在室温下进行.2.2.2 平衡时间的确定随着介质pH的变化花青素会发生结构的变化，其过程是与时间关相关的化学平衡过程.当介质的pH值降低时，系统的平衡向红色的吡喃结构方向移动，而当pH值升高时，平衡向蓝色的醌式结构方向移动，与此同时花青素的化学结构也会发生相应变化[12].因此，加入不同pH缓冲液后需要一定的静置时间来控制溶液达到一种动态平衡，平衡后再进行相关吸光度的测定，考察相关文献后最终确定样品配制后30 min达到动态平衡，因此，本法选择的平衡时间为30 min.2.2.3 方法学验证线性关系考察：精密量取对照品溶液加甲醇制得质量浓度为0.2 mg/mL的母液.精密吸取0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 mL于5 mL 棕色容量瓶中分别加入制备好的不同pH 值缓冲液稀释至刻度，得到对照品溶液的质量浓度分别为2、4、6、8、10 μg/mL.以空白的pH=1.0和pH=4.5的缓冲液为对照，于510 nm和700 nm 处测定吸光度.计算吸光度A对质量浓度C 作回归方程得A=0.046 04C-0.00005(R2=0.999 5).精密度、重复性、稳定性和回收率试验：取6 μg/mL标准品液，按照“线性关系考察”项下的方法连续测定6次，吸光度的平均值为0.312，RSD 为0.338 %，由此表明该仪器的精密度良好.按2.1.4项下方法制备平行样品液6 份，按照“线性关系考察”项下的方法测定吸光度，平均质量比为1.57 mg/g，RSD 为2.31%，表明该方法重复性良好.按第“2.1.4”项方法制备样品液进行稳定性实验，在0、1、2、3、4 h 分别测定吸光度，每个不同时间均进行3次吸光度的测定，求平均吸光度，得到其RSD值为0.979%，由此表明4 h 内花青素的稳定性良好.按“2.1.4”项方法制备样品液，平均回收率101.15%，RSD值为0.672%，表明该方法回收率良好.2.2.4 提取工艺取黑果腺肋花楸果实捣碎，精密称量，用酸化乙醇(用盐酸调节至pH=2)作为提取液，以一定的料液比加入制备好的酸性乙醇，超声提取20 min[13]，离心，量取定量上清液，用缓冲液pH值为1.0和4.5的进行稀释定容，平衡一段时间后进行花青素的量的测定，每组在提取中均进行3次平行实验.2.2.5 黑果腺肋花楸浆果中花青素的质量比测定结果取三批黑果腺肋花楸浆果解冻后精密称取，用pH等于2的酸化乙醇进行超声提取，取上清液分别用pH值为1.0和pH值为4.5的缓冲液稀释定容，通过pH示差法测定三批黑果腺肋花楸浆果中花青素的量分别为2.06、2.10、2.13 mg/g.故可知黑果腺肋花楸中花青素平均可达2.10 mg/g.2.3 不同条件对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响将在最佳提取条件下提取的黑果腺肋花楸花青素溶液装在试管中，保持其他条件不变，分别考察光照(室温自然光和室温避光)、温度(20、40、60、80、100 ℃)、考察pH值(1、2、3、4、5、6)用10% HCl和2 mol/L NaOH溶液调节和不同浓度金属离子(Na+、Al3+、Fe3+)对黑果腺肋花楸中花青素稳定性影响.花青素的保存率按照如下公式计算：花青素保存率2.3.1 光照对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响由图1可知，在避光条件下花青素保存率较好，10 d后保存率依然在80%以上，而在室内散射光下，花青素的保存率照避光条件下下降较多，当在室内散射光保存10 d时花青素的保存率下降到60%左右.经方差分析，光照条件对花青素的稳定性有显著影响(P<0.05)，因此花青素在储存和加工中应避免光照的影响.图1 光照对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响2.3.2 温度对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响由图2可知，花青素的保存率随着温度的升高呈逐渐降低的趋势.当温度低于60 ℃时花青素的保存率都在80%以上，但是当温度大于60 ℃以后花青素的保存率显著降低，当温度达到100 ℃时花青素的结构被破坏，接近3 小时时花青素的保存率就趋近为零.由方差分析，温度对黑果腺肋花楸花青素稳定性的影响有显著性差异(P<0.05)，故黑果腺肋花楸的保存及加工过程中温度应该控制在60 ℃以下.图2 温度对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响2.3.3 pH对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响当介质的pH<2时花青素以2-苯基苯并吡喃阳离子的形式存在，而当pH值在4～6之间时花青素则以醌型假碱或者查而酮的形式存在.由图3可知，当pH值在1～3之间时显示花青素保存率良好，稳定性没有受到太大的影响，10 d后花青素的保存率仍然控制在85%以上，pH=2时花青素的稳定性最好，而pH值在4～6之间花青素的稳定性显著降低.由方差分析可知，不同pH值对花青素的稳定性影响有显著性差异(P<0.05)，故黑果腺肋花楸花青素的保存应该控制在pH=3以下. 图3 pH值对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响2.3.4 金属离子对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响1)Na+对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响由图4可知，与四组实验结果没有显著差异，10 d以后其花青素的保存率均在80%以上，不同浓度的Na+对黑果腺肋花楸花青素溶液的保存率大致相同，没有显著性差异(P>0.05).图4 Na+ 对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响2)Al3+对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响由图5可知，图中只显示Al3+浓度为0.01 mol/L时黑果腺肋花楸花青素保存率的趋势图，这是由于在花青素溶液中加入Al3+时溶液由红粉色变成红棕色，随着浓度加大，颜色加深，产生少许沉淀，导致吸光度变大，故此时吸光度差值并不代表花青素的保存率.图6仅显示花青素溶液中加入Al3+时花青素保存率显著下降的趋势，由此可看出Al3+对黑果腺肋花楸花青素产生破坏作用，储存时应避免Al3+的污染.由方差分析可知，不同浓度Al3+对花青素的稳定性影响有显著性差异(P<0.05).图5 Al3+ 对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响3)Fe3+对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响在花青素溶液中加入浓度为0.01 mol/L的Fe3+时溶液颜色由红粉色变成青绿色，随着Fe3+浓度加大为0.1 mol/L时溶液变成棕褐色.由图6可知，不同浓度的Fe3+与对照组相比花青素的保存率大幅度下降，并且随着Fe3+浓度的增加，花青素保存率明显降低.当Fe3+浓度达到0.05 mol/L时花青素的保存率逐渐趋近为零，Fe3+浓度达到0.1 mol/L时花青素失去活性.由方差分析可知，不同浓度Fe3+对花青素稳定性的影响有显著性差异(P<0.05)，且高浓度的Fe3+对花青素的破坏性很大，在对其进行保存时要避免Fe3+的污染.图6 Fe3+ 对黑果腺肋花楸中花青素稳定性的影响3 讨论1)本实验采用pH示差法是依据花色苷发色团的结构转换是pH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随pH变化来测定花青素的质量比，pH示差法虽然不像UPLC法可分别测定不同花青素的质量比，但此方法安全性好、灵敏度高，较其他方法检测花青素的质量比更为简单精确.2)随着社会的发展和进步，人们对于食品安全更加重视，黑果腺肋花楸花青素作为天然色素得到人们更多的专注，但其不稳定性也成为开发利用的最大阻碍.深入研究影响黑果腺肋花楸花青素稳定性的因素并提高其保存率，是其长远发展的重要一步，通过本实验组的研究发现，影响黑果腺肋花楸花青素稳定性的因素包括光照、保存温度、储存环境的pH、以及高价金属的影响.所以如果要对黑果腺肋花楸花青素进行产品开发或深入探索需严格控制以上因素的影响，避免花青素的流失以及结构破坏.参考文献：[1] 于明, 李铣, 张丽, 等. 黑果腺肋花楸果实的化学成分 [J]. 中草药, 2010, 41(4): 544-546.[2] 张艳, 吴春. 原花青素微胶囊对花生油的抗氧化活性研究 [J]. 哈尔滨商业大学学报：自然科学版, 2006, 22(6): 14-19.[3] 侯锐, 陈琦, 王利, 等. 花青素及其生物活性的研究进展 [J]. 现代生物医学进展, 2015, 15(28): 5590-5593.[4] 张文君, 宋春晓, 张国锋, 等. 山楸梅浆果中花青素提取方法的优化和测定[J]. 中成药, 2016, 38(8): 1856-1858.[5] 杨万政, 陈慧英, 李道远. 玫瑰花红色素的提取和稳定性研究[J]. 中央民族大学学报：自然科学版, 2003, 4(1): 64- 69.[6] 朱新贵, 王霜, 郭勇. 单色光对玫瑰茄细胞红色素稳定性的影响[J]. 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桑椹片中多酚及花青素含量的测定林耀盛;刘学铭;杨荣玲;陈智毅;杨春英;赵晓丽;王思远【期刊名称】《现代食品科技》【年(卷),期】2013(29)4【摘要】采用Folin-Ciocaiteu法测定桑椹片中总多酚含量,通过HPLC法分析其中花青素的主要花青素单体及含量,及运用pH示差法测定其总花青素含量.该桑椹片的总多酚含量63.76 mg GAE/g,总花青素含量为6.63 mg/g;从HPLC花青素谱图中主要检测到矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香苷这两种单体,其含量分别为2.91 mg/g和2.55 mg/g,含量之比1.14∶1.该方法在2～500 μg.mL-1 有很好的线性关系1.0000～0.9999,平均回收率102.5～97.8％,RSD为0.93～1.01％.研究结果表明,该方法更为灵敏、准确、重现性好,通过HPLC方法建立,综合了多酚和花青素单体的含量及其比例的测定能够有效地对桑椹片的质量控制.【总页数】4页(P890-893)【作者】林耀盛;刘学铭;杨荣玲;陈智毅;杨春英;赵晓丽;王思远【作者单位】广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所省部共建国家重点实验室培育基地-广东省农产品加工重点实验室广东广州510610【正文语种】中文【相关文献】1.彩叶树种叶片中花青素含量的测定 [J], 莫巍2.彩叶树种叶片中花青素含量的测定及动态分析 [J], 莫巍3.铁盐催化比色法测定丽诺养颜片中原花青素含量 [J], 孙丽华;江月仙;王巧懿4.甘蔗叶片中原花青素含量测定及提取工艺的研究 [J], 石景雨;何丽莲;王先宏;刘鲁峰;陈疏影;李富生5.铁盐催化比色法测定丽诺养颜片中原花青素含量 [J], 孙丽华;江月仙;王巧懿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

pH示差法测定黑枸杞花青素技术的研究
杨萍;李哲
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2017(000)010
【摘要】以黑枸杞为材料,运用pH示差法测定黑枸杞中的花青素.通过对测定波长、缓冲液pH(环境pH)、平衡温度和平衡时间影响因素的研究选择pH示差法最优实验参数:测定波长为525nm,吸光度测定时的缓冲液pH为1.0和4.5,平衡温度为40℃.pH=1.0时的平衡时间为30min,pH=4.5时的平衡时间为20min.运用pH示差法测得的黑枸杞花青素含量为60.59mg/L,平均加标回收率为100.32％,说明准
确度高,pH示差法方便快捷,成本低,更加适合运用于黑枸杞中花青素的测定研究.【总页数】5页(P107-111)
【作者】杨萍;李哲
【作者单位】吉林农业科技学院食品工程学院,吉林 132101;吉林农业科技学院食
品工程学院,吉林 132101
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.83+6
【相关文献】
1.ph示差法测定黑莓残渣中花青素含量的研究 [J], 石岳;张秀玲;邹阳
2.热带睡莲花青素pH示差法测定技术的摸索 [J], 黄秋伟;龙凌云;毛立彦;黄欣欣;
唐毓玮;石兰蓉
3.热带睡莲花青素pH示差法测定技术的摸索 [J], 黄秋伟;龙凌云;毛立彦;黄欣欣;唐毓玮;石兰蓉
4.pH示差法测定花青素含量的方法研究 [J], 王贝;侯益明
5.pH示差法与HPLC测定黑枸杞花青素方法比较 [J], 杨萍;李哲
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桑椹酒渣中花青素提取1材料与方法1.1材料桑椹果酒酒渣。

1.2试剂药品试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。

1.3主要仪器电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。

1.4方法（稀HCl+95%乙醇提取）样品称量，用提取剂提取，过滤（减压过滤/板框过滤），所得的提取液按一定比例稀释（pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀）释后在分光光度计上测出OD值，以OD值代表桑椹红色素的含量。

1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。

1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。

1.4.3温度对提取效果的影响以最佳结果作为桑椹提取剂，分别于60、50、40、30、20℃下提取1h。

1.4.4提取时间对提取效果的影响每隔20分钟取样测得OD值。

1.4.5正交实验1.4.6得率试验称取一定量样品，经提取后。

提取液经旋转蒸发仪蒸发，真空干燥，求得率。

方法一稀HCl+95%乙醇提取1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较固定浸提温度、提取时间、液料比，分别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）为提取剂进行浸提试验，色素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.2~0.8之间)，将稀释液静置15min，分别测定两种样品稀释液ODλmax和700nm处的吸光值A。

按公式计算桑椹花色苷含量，分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。

注：ODλmax的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。

花青素含量测定实验目的：掌握花青素含量测定的简单方法。

实验原理：花青素又称花色素，是苯并吡喃衍生物，属于多酚类化合物，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等通过糖苷键形成花色苷，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，也是树木叶片中的主要呈色物质，在植物细胞液泡不同的pH 条件下，呈现不同的颜色。

大量研究表明：花色苷具有很强的抗氧化作用，可以清除体内的自由基；降低氧化酶的活性；可以降低高血脂大鼠的甘油脂水平，改善高甘油脂脂蛋白的分解代谢；抑制胆固醇吸收，降低低密度脂蛋白胆固醇含量；抗变异、抗肿瘤、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能J。

苹果花青素主要存在于果皮中，是果皮颜色形成的重要物质。

苹果中的花青素由植物次生代谢重要途径一苯丙烷类代谢形成，同位素示踪揭示花青素的碳原子分别来自苯丙氨酸和乙。

苹果中的花青素由矢车菊素的三种糖苷组成，分别是矢车菊素-3一半乳糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素一7·阿拉伯糖苷J。

苹果中花青素的含量主要受温度、日照等因素影响，特别是紫外光可以明显提高花青素的合成效率，因此苹果的向阳面较背阳面红L4J。

Jerneja等研究表明富士苹果成熟前期是其花青素形成的重要阶段，其中矢车菊素一3一半乳糖苷占总花青素92 ％～98％J。

器材与试剂：实验仪器:分光光度计，电子天平，恒温箱，剪刀，烧杯，量筒，移液管实验试剂：0.1mol/L HCL, 矢车菊素一3一半乳糖苷,甲醇，蒸馏水实验材料：苹果实验内容：1、作标准曲线：采用l ％盐酸甲醇配置矢车菊素-3-半乳糖苷标准系列溶液，浓度分别为100、20．0、10．0、5．0、2．5、1．0 ~g／m L 。

用分光光度计测出OD值（波长530nm），计算出标准曲线。

2、选2个苹果，把苹果皮削出，称取5g的果皮加入10m L l ％盐酸甲醇溶液匀浆，在40 ℃下提取1h，离心后取上清液在波长530nm测出OD值。

3、计算出苹果中花青素的含量。

改进和优化黑果枸杞及其制品中花青素测定的pH示差法谭亮;杲秀珍;王环;赵静;李玉林【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2024(50)4【摘要】建立一种基于美国官方分析化学师协会(Association of Official Analytical Chemists,AOAC)方法检测黑果枸杞及其制品中花青素含量的改进pH示差法。

考察了黑果枸杞及其制品中花青素的最佳提取和检测条件,通过液相色谱-三重四级杆串联质谱法鉴别出黑果枸杞中花青素的具体化学结构,并计算出混合花青素的平均摩尔质量。

通过分光光度法测得混合花青素的平均摩尔消光系数,对改进后的pH示差法进行方法学验证和花青素的含量测定。

结果显示,最佳提取和检测条件如下:黑果枸杞花青素提取溶剂为盐酸-80%(体积分数)乙醇(3∶97,体积比),料液比为1∶100(g∶mL),提取温度为50℃,提取时间为30 min,缓冲溶液稀释5倍后静置平衡20 min。

液相色谱-三重四级杆串联质谱法鉴别黑果枸杞中主要以矮牵牛素类花青素为主(占97.96%),黑果枸杞特有的混合花青素平均摩尔质量为912.7 g/mol,平均摩尔消光系数为29591 L/(mol·cm)。

pH示差法改进后能够满足方法学验证要求,固体样品和液体样品最低检出限分别为28.2 mg/100 g、0.282mg/100 mL。

方法改进后花青素提取增长率均大于20%,静置平衡20 min后单次检测结果精密度小于0.3%。

以矮牵牛素类花青素代替矢车菊素-3-O-葡萄糖苷计算花青素含量平均提高了2.41倍,能真实地反映黑果枸杞及其制品中花青素的含量。

【总页数】12页(P267-278)【作者】谭亮;杲秀珍;王环;赵静;李玉林【作者单位】中国科学院西北高原生物研究所/青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.pH示差法测定黑枸杞花青素技术的研究2.响应面法对黑果枸杞中花青素测定条件的优化3.pH示差法测定红菊苣中花青素条件的优化4.pH示差法与HPLC测定黑枸杞花青素方法比较5.pH示差法测定紫荚豌豆中花青素条件的优化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。