Construction of hepatocyte growth factor gene recombinant adenovirus vector and its expression

文章编号:1672-2019(2003)06-0085-02研究报告 肝细胞生长因子原核表达载体PU C18-HGF的构建及鉴定彭 健,张阳德,贾晓巍,黄秋林(卫生部肝胆肠外科研究中心,湖南长沙410008)摘要:目的 构建人肝细胞生长因子(hHG F)的原核表达载体。

方法 利用基因重组技术,将人肝细胞生长因子cDNA全长序列,定向克隆于表达型载体PU C18质粒的多克隆位点中,限制性内切酶酶切鉴定。

结果 重组PU C18-HG F原核表达载体经限制性内切酶电泳分析,与理论值相符。

结论 本实验成功将人肝细胞生长因子cDNA全长序列插入表达型载体PU C18多克隆位点BamHI和Xbal限制性内切酶位点之间,为通过基因工程获得外源性HGF提供实验依据。

关键词: 肝细胞生长因子;原核表达;PU C18-HGF载体中图分类号: R784 文献标识码: AConstruction and identification of the recombinantprokaryotic expression vector PUC18-HGFPENG Jian,ZHANG Yang_de,JIA Xiao_wei and HUANG Qiu_lin(N ational Hep atobiliary and Enter ic Surgery Resear ch Center,Centr al South Univer sity,Changsha H unan410008China)Abstract: Objective:T o co nstruct prokar yotic ex pressio n plasmid containing hepatocyte grow th factor.Methods:T o inser t human hepapocy te grow th factor cDN A in multiple cloning site of the prokar yotic plasmidPU C18by DN A recombinant technique and identify the sequence with restriction endonuclease digestion.Results:T he sequence of r ecombinant expression v ector PU C18-HGF digested with the enzyme corresponds to the expecta-tion.Conclusions:T he prokaryotic ex pression plasmid P UC18-HG F has been r econstructed successfully.It pro-vides the ex perimental base for producing ectogeneous HGF by g enetic engineering.Key words: hepatocyte grow th factor;prokar yotic ex pression;vector PU C18-HGFCLC number: R784 Document code: A肝细胞生长因子(hepatocyte g row th factor, HGF)又称扩散因子(scatter factor,SF)。

大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织初探张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【摘要】目的探讨大鼠肝细胞微球皮下移植生成肝组织的可行性，为构建组织工程肝寻找新的方法。

方法新鲜分离的SD大鼠肝细胞接种在琼脂糖包被的培养皿上进行培养，待其形成肝细胞微球后采用直接注射方式植入大鼠腹股沟处皮下腔。

1 周后取腹股沟处组织，HE 染色法观察生成的肝组织形态。

结果体外培养3 d，肝细胞形成致密的肝细胞微球，直径大小在43 ～ 185 μm，HE 染色显示微球中的肝细胞保持天然肝细胞形态特征。

将其植入大鼠腹股沟处皮下腔1 周，HE 染色显示植入的肝细胞成活，并呈三维肝样组织团，肝细胞保持其特有形态特征：胞体为圆形，核大而圆，多为双核。

结论肝细胞微球皮下移植可形成肝组织，为组织工程肝的构建创建了新的方法。

【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2014(035)005【总页数】3页(P493-495)【关键词】工程化肝组织;肝细胞微球;组织工程【作者】张兰;李则学;刘海亮;李沛雨【作者单位】解放军总医院普通外科研究所,北京100853;;;;【正文语种】中文【中图分类】R318.1对于先天性肝代谢紊乱及终末期肝病所致的急、慢性肝功能衰竭，肝移植是目前唯一有效的救治手段，但供体短缺严重制约该技术广泛应用[1-2]。

肝组织工程技术的发展为各种肝病治疗提供一种潜在方法[1-4]。

通过创建可植入工程化肝移植物体内再生工程化肝组织可为病损肝脏提供肝功能支持或直接对其进行修复[5-6]。

迄今为止已证实包括肝细胞/支架材料复合物、肝细胞片层等多种肝移植物体内植入后可再生有功能的工程化组织[7-12]。

肝细胞微球是肝细胞在非贴壁培养过程中相互聚集形成的三维类组织样细胞聚集体；体外研究表明肝细胞在形成微球后可更好的保持其活性和功能[13-15]，但尚未见将其用于体内构建组织工程肝的报道。

本研究旨在评价肝细胞微球皮下移植形成肝组织的可行性。

·自身免疫性肝病·DOI：10.12449/JCH240311茵陈蒿汤对自身免疫性肝炎小鼠肝细胞铁死亡的抑制作用及其机制分析李竹蓉，陈晨，郭地，吕思学，武嘉文，杨娜，刘杨山西中医药大学基础医学院，山西晋中 030619通信作者：刘杨，*********************.cn（ORCID：0000-0002-6627-5002）摘要：目的　探讨茵陈蒿汤对自身免疫性肝炎小鼠肝细胞铁死亡的抑制作用及机制。

方法　选取SPF级雌性C57BL/6小鼠18只，采用随机数字表法分为正常组、模型组、治疗组，每组6只。

模型组和治疗组采用刀豆蛋白A（Con A）尾静脉注射制备自身免疫性肝炎小鼠模型，正常组注射生理盐水。

治疗组于造模前14天，给予茵陈蒿汤（4.68 g生药/kg）预防性灌胃治疗，末次灌胃给药后注射Con A。

分别检测ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、GSH、ROS、ATP、MDA水平，计算肝脏指数、脾脏指数，并观察GPX4、SLC7A11的表达；比较各组小鼠肝脏病理组织变化。

正态分布的计量资料3组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。

结果　与正常组比较，模型组肝脏指数、脾脏指数、ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、ROS、MDA水平均升高（P值均<0.05），GSH、ATP含量及GPX4、SLC7A11蛋白表达水平降低（P值均<0.05）。

与模型组比较，治疗组肝脏指数、脾脏指数、ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、ROS、MDA水平均降低（P值均<0.05），GSH、ATP含量及GPX4、SLC7A11蛋白表达水平升高（P值均<0.01）。

HE染色结果显示，与正常组比较，模型组小鼠肝脏出现大面积肝细胞变性、坏死、门管区炎细胞聚集，治疗组处理的小鼠肝脏坏死和炎性浸润程度较模型组有所减轻。

结论　Con A诱导肝组织损伤可能与铁死亡有关。

第37卷第6期农业工程学报 V ol.37 No.6282 2021年3月Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering Mar. 2021 高产生物膜乳酸菌抗逆性及其抗氧化特性张悦，贺银凤※，顾悦，王艳，郑砚学（内蒙古农业大学食品科学与工程学院，呼和浩特 010018）摘要：为了揭示乳酸菌生物膜抵抗不良环境的作用机制，该研究以2株乳酸片球菌RJ2-1-4、TG1-1-10和2株植物乳杆菌RJ1-1-4、RM1-1-11（菌株均高产生物膜）为研究对象，探究浮游态、被膜态菌株对酸、碱、胆盐、模拟人工胃肠液的耐受能力以及抗氧化能力。

结果表明：在极酸条件下，菌株生长受到抑制，但是pH值3.0时，被膜态RM1-1-11生长量显著高于浮游态（P<0.05）。

随着pH值递增，菌体密度增加，在pH值7.0-9.0时，碱性环境对除TG1-1-10外其他3株菌的生长有一定抑制作用；当胆盐浓度为0～0.03%时，菌株生长有小幅度上升，且被膜态菌株RJ2-1-4、TG1-1-10生长量显著低于浮游态（P<0.05）；但随着胆盐浓度继续增加，菌株生长受到抑制，除浮游态菌株TG1-1-10外，其余3株菌被膜态菌株生长量均显著高于浮游态；菌株在模拟人工胃肠液中处理3 h后发现，相比于浮游态菌株，被膜态各菌株在胃、肠液中的存活率均有所提高。

4株菌对于不同种类自由基均有一定清除能力，清除率从高到低分别为HO·、DPPH·、脂质过氧化、超氧阴离子，其中RJ1-1-4浮游态菌悬液对DPPH·清除率为214.12 μg/mL，RJ2-1-4被膜态无细胞提取物、TG1-1-10浮游态无细胞提取物对HO·清除率分别为713.81 μg/mL和637.01 μg/mL，RJ2-1-4浮游态无细胞提取物对超氧阴离子清除率为93.80 μg/mL，RM1-1-11被膜态菌悬液对脂质过氧化物的清除率为122.82 μg/mL。