低温胁迫下甘蓝型冬油菜差异蛋白组学分析

低温处理下不同冬油菜品种的生理响应1.试验材料冬油菜品种陇油6号、陇油7号、陇油8号、陇油9号、天油2号、天油5号、天油7号、天油8号，甘蓝型2.方法：将种子点播于底部铺有滤纸的培养皿中，加水催芽，移栽到营养钵中，每处理播至少15 杯,长至一定大小，选取形态、长势、大小基本一致的幼苗株进行处理。

第1组在常温下进行各个指标的测定；另5份进行低温( 0℃, - 5 ℃, - 10℃, - 15 ℃,- 20 ℃)胁迫，时间为4h，之后切断电源,让冷冻箱温度逐渐回升至室温时取出材料,在室内静置10 h ,然后进行各个指标的测定。

3.测定指标：(根和叶片分别测定)：叶绿素；可溶性糖；可溶性蛋白；电导率；SOD；POD；CAT；游离脯氨酸；丙二醛；K+含量；根系活力；细胞膜脂脂肪酸,同工酶。

(每处理重复3次)1.叶片中内源激素(ABA，GA3:)含量测定:(参考外源ABA 对仁用杏花期抗寒力及相关生理指标的影响一文测定 )2. K+含量测定:((参考原子吸收光谱法测定与分析榛子抗寒性的研究一文)3.细胞膜脂脂肪酸测定:(参考用细胞膜脂脂肪酸成分分析法筛选抗寒巨桉种源一文)采取处理后叶, 105℃高温热杀5 m in 钝化脂酶, 剪碎混匀.称取混匀的样品3 g, 用20 mL 体积分数50% 氯仿的甲醇溶液浸泡, 研磨均浆, 转入试管中. 高速离心后,取上层清液. 残渣用溶剂洗涤、高速离心, 合并所有上层清液. 清液用10mL 质量分数1% 的食盐水溶液洗涤两次. 用分液漏斗分液后, 将有机层转入试管中, 水浴蒸发至干, 得总脂.在总脂中加入5 mL 正庚烷的饱和甲醇溶液和5 mL 甲醇的饱和正庚烷溶液. 在分液漏斗中分液后, 甲醇层用正庚烷的饱和甲醇溶液洗涤两次. 所得的甲醇层中加入1mL 体积分数4% 的KOH 甲醇溶液, 水浴浓缩至2 mL , 冷却后加入3 滴体积分数20% 的BF3 的乙醚溶液. 静置10m in 后, 用10mL 水洗涤, 加入4mL 重蒸正已烷萃取; 分出有机层, 用蒸馏水洗涤两次. 取2mL 有机层加入少许硅胶, 振荡后静置2m in, 取20 LL 清亮的有机层加入到含有1 mL 正已烷的具塞试管中, 作为气相色谱分析的样品.ABA/SA处理种子对冬油菜幼苗抗寒力及相关生理指标的影响1.材料：陇油6号，天油2号2.方法：试验设5个处理水平，分别为，以清水为对照，先用蒸馏水将药剂稀释至所需浓度，后将每组种子用不同浓度ABA（每组用量相同）处理2h，清水冲洗3遍，点播于底部铺有滤纸的培养皿中，加水催芽，移栽到营养钵中，每处理播至少15 杯,长至一定大小，选取形态、长势、大小基本一致的幼苗株进行处理。

低温胁迫下不同抗寒性甘蓝型冬油菜生理响应及DNA甲基化研究低温胁迫下不同抗寒性甘蓝型冬油菜生理响应及DNA甲基化研究摘要：低温胁迫是影响冬油菜生长和产量的重要环境因素之一。

本研究旨在探究不同抗寒性甘蓝型冬油菜在低温胁迫下的生理响应及DNA甲基化变化情况，以期为提高冬油菜的低温抗性提供理论依据。

通过对比分析两个不同抗寒性甘蓝型冬油菜品种“寒冰”和“秀美”在低温胁迫下的生理指标及DNA甲基化水平的差异，结果显示，低温胁迫显著影响了冬油菜的生理状态与DNA甲基化程度。

首先，低温胁迫导致不同程度的叶片受损，其中“寒冰”品种较“秀美”品种表现出更严重的叶片坏死和失绿现象。

同时，“寒冰”品种受低温胁迫后，其叶绿素含量显著下降，而“秀美”品种则相对较稳定。

这表明“寒冰”品种的抗寒性较差，容易受到低温胁迫的影响。

其次，在DNA甲基化方面，低温胁迫使得“寒冰”品种显著增加了DNA甲基化水平，而“秀美”品种的DNA甲基化水平变化较小。

这表明低温胁迫可能通过改变DNA甲基化程度来调节冬油菜品种的低温抗性。

进一步的研究发现，在低温胁迫下，“寒冰”品种相对于“秀美”品种在活性氧代谢和抗氧化酶活性方面显示出更大的变化。

低温胁迫条件下，“寒冰”品种活性氧含量增加，与此同时，过氧化物酶、超氧化物歧化酶和抗坏血酸过氧化物酶活性均显著升高。

而“秀美”品种在这些生理响应方面相对较为稳定。

这些结果表明，抗寒性较高的冬油菜品种能够通过激活抗氧化酶系统来减轻低温胁迫引起的氧化损伤。

综上所述，低温胁迫下不同抗寒性甘蓝型冬油菜表现出的生理响应和DNA甲基化水平存在明显差异。

抗寒性较高的品种“秀美”在低温胁迫下表现出更好的生理状态和较稳定的DNA甲基化水平。

这些结果为进一步解析低温抗性形成的分子基础以及克隆相关抗寒相关基因提供了重要的参考。

关键词：低温胁迫；甘蓝型冬油菜；抗寒性；生理响应；DNA甲基综合以上研究结果，我们可以得出以下结论：低温胁迫下，抗寒性较高的甘蓝型冬油菜品种“秀美”表现出更好的生理状态和较稳定的DNA甲基化水平。

低温胁迫下白菜型与甘蓝型冬油菜抗寒基因表达差异马骊;孙万仓;刘自刚;方彦;武军艳;李学才;李欣;张淑娟;袁金海【摘要】为了解白菜型和甘蓝型冬油菜抗寒基因的表达差异,以6个抗寒性不同的冬油菜为材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析常温对照以及4℃、-4℃和-8℃低温处理5d后BnCOR25、BnICE1和Cu/Zn-SOD三个基因的表达差异.结果表明,常温时白菜型与甘蓝型冬油菜BnCOR25、BnICE1和Cu/Zn-SOD基因未被激活,处于同一水平;随着温度的降低,白菜型冬油菜BnCOR25、BnICE1和Cu/Zn-SOD的相对表达量均上升,且均在-4℃时到达峰值;而甘蓝型冬油菜BnCOR25在4℃时到达峰值,Cu/Zn-SOD在-4℃时到达峰值,BnICE1的相对表达量在低温胁迫过程中始终低于常温水平;-8℃时白菜型与甘蓝型冬油菜各基因表达量均下降.在整个温度降低过程中,始终表现为白菜型冬油菜BnCOR25、BnICE1和Cu/Zn-SOD的相对表达量显著高于甘蓝型冬油菜,抗寒性强的品种高于抗寒性弱的品种.说明,白菜型与甘蓝型冬油菜间抗寒性的较大差异与这3个基因的表达有关.【期刊名称】《中国油料作物学报》【年(卷),期】2016(038)002【总页数】7页(P135-141)【关键词】白菜型油菜;甘蓝型油菜;低温胁迫;实时荧光定量PCR;基因表达分析【作者】马骊;孙万仓;刘自刚;方彦;武军艳;李学才;李欣;张淑娟;袁金海【作者单位】甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070;甘肃省干旱生境作物学重点实验室,甘肃省油菜工程技术研究中心,甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室,甘肃农业大学农学院,甘肃兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】S565.403我国冬油菜主要为甘蓝型冬油菜和白菜型冬油菜。

甘蓝型油菜耐低温发芽种质资源鉴定甘蓝型油菜耐低温发芽种质资源鉴定甘蓝型油菜是我国主要的油料作物之一，广泛栽培于北方地区，尤其是在冬季，其作物产量达到极高水平。

然而，冬季油菜在低温状态下发芽，从而限制其生长和裂土防沙的作用。

因此，甘蓝型油菜的耐低温性成为了研究的热点。

本文将从甘蓝型油菜耐低温发芽种质资源鉴定角度出发，介绍了甘蓝型油菜耐寒耐醇发芽种质资源鉴定的研究进展和存在的问题。

一、耐寒性种质资源鉴定甘蓝型油菜耐寒性是保证其在冬季能够正常生长和防止其冷害的关键要素。

因此，科学家们探索了大量的耐寒性种质资源，以期能利用其抗寒优势来改良甘蓝型油菜的生长能力。

一些研究表明，低温下发芽的甘蓝型油菜主要与其种质资源的抗寒忍性相关。

通过对多个甘蓝型油菜生长发育过程中的差异性分析，科学家们重点研究了耐寒性种质资源的特定性，找到其冬季生长中的关键算法，从而提出实际应用的开发建议。

二、耐醇性种质资源鉴定除了耐寒性，耐醇性也是甘蓝型油菜生长中的重要因素。

污染物质如汽油、机油、农药等对植物生长发育的影响已经得到了广泛的关注。

目前，科学界对耐醇性种质资源的鉴定已经取得了不俗的进展。

通过对多栽培种间的耐醇性测定，科学家们发现，甘蓝型油菜具有耐醇性的主要原因是其多酚代谢过程的特殊性。

因此，基于这一发现，可以逐步开发出一些适合于抗醇耐寒的新品种和高效的栽培管理技术。

总之，甘蓝型油菜耐低温发芽种质资源鉴定是甘蓝型油菜育种研究中的重要环节。

科学家们通过不断尝试新型的邻甲酚菌组、生物元素育种技术以及模拟耐醇性的实验研究，并逐渐发现了一些新的耐寒耐醇种质资源，丰富了甘蓝型油菜育种的品种资源，增强了甘蓝型油菜的生长适应性，为实现我国机械化种植提供了更加坚实的技术基础。

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２３ꎬ３９(１):１５￣２１ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ范军强ꎬ路晓明ꎬ王会文ꎬ等.低温胁迫下甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２３ꎬ３９(１):１５￣２１.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２３.０１.００２低温胁迫下甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性范军强１ꎬ２ꎬ㊀路晓明１ꎬ２ꎬ㊀王会文１ꎬ２ꎬ㊀武军艳１ꎬ２ꎬ㊀刘丽君２ꎬ㊀马㊀骊２ꎬ㊀蒲媛媛１ꎬ２ꎬ㊀李学才１ꎬ２ꎬ㊀孙万仓１ꎬ２(１.甘肃农业大学农学院ꎬ甘肃兰州７３００７０ꎻ２.省部共建干旱生境作物学国家重点实验室ꎬ甘肃兰州７３００７０)收稿日期:２０２２￣０４￣２０基金项目:甘肃农业大学干旱生境作物学重点实验室主任基金项目(ＧＳＣＳ￣２０２０￣Ｚ１)ꎻ国家现代农业产业技术体系项目(ＣＡＲＳ￣１２)ꎻ国家自然科学基金项目(３１８６０３８８㊁３１９６０４３５)作者简介:范军强(１９９８－)ꎬ男ꎬ甘肃通渭人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为作物遗传育种ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)２２６０６５１６９３＠ｑｑ.ｃｏｍ通讯作者:孙万仓ꎬ(E￣mail)182****1851＠１６３.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀为探究不同抗寒性甘蓝型冬油菜在应对低温胁迫时内源激素含量的变化ꎬ并阐明其抗寒性与叶片激素含量的关联性ꎬ选用感温性差异较大的４个甘蓝型冬油菜品种(品系)ꎬ分别于４ħ及０ħ处理不同时间后测定植株叶片内玉米素(ＺｅａｔｉｎꎬＺＴ)㊁赤霉素(ＧｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎＡ３ꎬＧＡ３)㊁水杨酸(ＳａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄꎬＳＡ)㊁生长素(Ｉｎｄｏｌｅ￣３￣ａｃｅｔｉｃａｃｉｄꎬＩＡＡ)和脱落酸(ＡｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄꎬＡＢＡ)５种内源激素的含量ꎬ并联系抗寒性评价指标进行相关性分析ꎮ结果表明ꎬ与对照(２４ħ)相比ꎬ低温处理后甘蓝型冬油菜叶片中ＩＡＡ㊁ＺＴ㊁ＧＡ３含量显著降低ꎬＡＢＡ含量较对照(２４ħ)上升２~３倍ꎬ不同品种(品系)ＳＡ含量增幅差异较大ꎮ相关性分析结果表明ꎬＡＢＡ㊁ＩＡＡ㊁ＧＡ３㊁ＳＡ含量的耐寒系数与抗寒性呈显著负相关ꎮ总之ꎬ内源激素含量会随外界温度变化而变化ꎬ且强抗寒性甘蓝型冬油菜品种(品系)叶片中激素含量的变化(上升或下降)幅度小于弱抗寒性品种(品系)ꎮ关键词:㊀甘蓝型冬油菜ꎻ低温胁迫ꎻ半致死温度ꎻ内源激素ꎻ抗寒性中图分类号:㊀Ｓ５６５.４０１㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２３)０１￣００１５￣０７ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｌｅａｆｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ｕｎｄｅｒｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓＦＡＮＪｕｎ￣ｑｉａｎｇ１ꎬ２ꎬ㊀ＬＵＸｉａｏ￣ｍｉｎｇ１ꎬ２ꎬ㊀ＷＡＮＧＨｕｉ￣ｗｅｎ１ꎬ２ꎬ㊀ＷＵＪｕｎ￣ｙａｎ１ꎬ２ꎬ㊀ＬＩＵＬｉ￣ｊｕｎ２ꎬ㊀ＭＡＬｉ２ꎬ㊀ＰＵＹｕａｎ￣ｙｕａｎ１ꎬ２ꎬ㊀ＬＩＸｕｅ￣ｃａｉ１ꎬ２ꎬ㊀ＳＵＮＷａｎ￣ｃａｎｇ１ꎬ２(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙꎬＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬａｎｚｈｏｕ７３００７０ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｒｉｄｌａｎｄＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅꎬＬａｎｚｈｏｕ７３００７０ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ｖａｒｉｅｔｉｅｓ(ｓｔｒａｉｎｓ)ｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒ￣ｅｎｔｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｕｎｄｅｒｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓꎬａｎｄｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｉｒｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｌｅａｆｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔꎬｆｏｕｒＢ.ｎａｐｕｓＬ.ｖａｒｉｅｔｉｅｓ(ｓｔｒａｉｎｓ)ｗｉｔｈｇｒｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄａｔ４ħꎬ０ħｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.Ｔｈｅｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｆｉｖｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆｔｈｅｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄꎬｓｕｃｈａｓｚｅａｔｉｎ(ＺＴ)ꎬｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎＡ３(ＧＡ３)ꎬｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄ(ＳＡ)ꎬｉｎｄｏｌｅ￣３￣ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ(ＩＡＡ)ａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ(ＡＢＡ)ꎬａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｍａｄｅｗｉｔｈｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘｅｓｏｆｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ(２４ħ)ꎬｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＩＡＡꎬＺＴａｎｄＧＡ３ｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＢ.ｎａｐｕｓＬ.ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｔｅｒｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔꎬａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆＡＢＡｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙｔｗｏｔｏｔｈｒｅｅｔｉｍｅｓ.ＴｈｅｉｎｃｒｅａｓｅａｍｐｌｉｔｕｄｅｏｆＳＡｃｏｎｔｅｎｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｖａｒｉｅｔｉｅｓ(ｓｔｒａｉｎｓ)ｏｆＢ.ｎａｐｕｓＬ.ｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔ.ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｔｈｅｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆＡＢＡꎬＩＡＡꎬＧＡ３ａｎｄＳＡｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ.Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎꎬｔｈｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｃｈａｎｇｅｓｗｉｔｈｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｅｘｔｅｒｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬａｎｄｔｈｅｃｈａｎｇｅ(ｉｎｃｒｅａｓｅｏｒｄｅｃｒｅａｓｅ)ｏｆｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＢ.ｎａｐｕｓＬ.ｖａ￣ｒｉｅｔｉｅｓ(ｓｔｒａｉｎｓ)ｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎｔｈａｔｏｆｖａｒｉｅｔｉｅｓ(ｓｔｒａｉｎｓ)ｗｉｔｈｗｅａｋｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ.５１Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ꎻｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓꎻＳｅｍｉ￣ｌｅｔｈａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎻＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｕｘｉｎꎻｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅꎻＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ㊀㊀低温逆境下植物内源激素会调控相关结构的建成与功能表达[１]ꎬ同时在植物适应逆境的过程中发挥重要作用ꎮ冬油菜种植区在向天水市以西㊁以北方向扩展的过程中ꎬ最早实施的就是甘蓝型冬油菜[２]ꎮ随着北移工作的推进ꎬ甘蓝型冬油菜作为蜜源植物㊁油料作物和观赏作物ꎬ具有极大的经济价值与生态价值[３]ꎮ冷胁迫后植物内源激素含量会发生明显变化[４]ꎬ脱落酸(ＡｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄꎬＡＢＡ)在低温环境下会大量合成[５]ꎬ这会引起相关抗逆蛋白质的合成[６]ꎮ多数学者认为植物激素是抗寒基因表达的启动因素[７]ꎮ阐明低温下抗寒性与激素调控的关系ꎬ将为推动冬油菜越冬研究提供新方向ꎮ本研究选取感温性差异较大的４个甘蓝型冬油菜品种ꎬ低温处理后测定内源激素水平及叶片低温半致死温度ꎬ以探究甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料选取４个感温性不同的甘蓝型冬油菜品种作为试验材料ꎬ详见表１ꎮ表１㊀试验材料基本情况Ｔａｂｌｅ１㊀Ｂａｓｉｃｓｉｔｕａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｍａｔｅｒｉａｌｓ品种(品系)类型感温性选育单位㊀㊀㊀ｇａｕ￣２４甘蓝型冬油菜强冬性甘肃农业大学ｇａｕ￣３０甘蓝型冬油菜强冬性甘肃农业大学天油２２６６甘蓝型冬油菜半冬性天水市农业科学研究所天油２２８８甘蓝型冬油菜弱冬性天水市农业科学研究所㊀㊀内源激素含量测定使用四元梯度超快速液相色谱仪(型号:ＡＣＱＵＩＴＹＡｒｃ)ꎮ５种植物内源激素标准品玉米素(ＺｅａｔｉｎꎬＺＴ)㊁赤霉素(ＧｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎＡ３ꎬＧＡ３)㊁水杨酸(ＳａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄꎬＳＡ)㊁生长素(Ｉｎｄｏｌｅ￣３￣ａｃｅｔｉｃａｃｉｄꎬＩＡＡ)和脱落酸(ＡｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄꎬＡＢＡ)ꎬ均采购于上海源叶生物科技有限公司ꎮ流动相溶液乙腈(色谱专用)㊁甲醇(色谱专用)㊁磷酸(分析纯)ꎬ均采购于上海西格玛奥德里奇贸易有限公司ꎮ１.２㊀试验设计试验材料以盆栽方式进行种植ꎮ各品种种子在２０２１年８月２１日于培养皿中进行萌发ꎬ并于２０２１年８月２５日统一移栽ꎮ移栽选用直径为２５ｃｍ㊁高度为１２ｃｍ的树脂花盆ꎮ每盆装入已加水搅拌均匀的育苗基质４ｋｇꎬ每盆设置３穴ꎬ每穴２株苗ꎬ株距１０ｃｍꎬ放置于自然条件下生长ꎬ地点位于甘肃农业大学ꎮ两叶一心期进行间苗ꎬ每穴定苗一株ꎬ待长至六叶期进行下一步试验ꎮ种植期间的栽培管理措施按常规方法进行ꎮ试验共设置５个处理ꎬ分别为２４ħ处理１２ｈ㊁０ħ处理１ｈ㊁０ħ处理１２ｈ㊁４ħ处理１ｈ和４ħ处理１２ｈ(全部盆栽均先置于２４ħ培养１２ｈ)ꎮ处理过程中尽量保证光照及水分条件的一致ꎮ处理结束后快速取出盆栽并采样ꎬ每株展开的第２张叶用于内源激素含量的测定ꎬ第３张叶用于低温半致死温度的测定ꎮ１.３㊀测定项目及方法１.３.１㊀半致死温度(ＬＴ５０)的测定㊀试验材料于２４ħ培养１２ｈ后ꎬ用打孔器在展开的第３张叶上打３个直径为５ｍｍ的叶圆片(避开叶脉)ꎮ将打好的３个叶圆片装入１０ｍｌ离心管中并加入０ ２ｍｌ去离子水ꎬ对照只加入去离子水ꎬ分别置于０ħ㊁－４ħ㊁－８ħ㊁－１２ħ㊁－１６ħ条件下处理３０ｍｉｎꎬ每个温度下设置３个重复ꎮ取出后再加入１０ｍｌ去离子水ꎬ室温振荡１ｈ后使用电导仪测出电导率(Ｃ１)ꎬ测得对照电导率为Ｃ０ꎮ最后置于１２０ħ烘箱中煮沸２０ｍｉｎꎬ取出冷却至室温后定容至１０ ２ｍｌꎬ测出电导率(Ｃ２)ꎬ按公式计算相对电导率ꎬ相对电导率(ＲＥＣ)＝(Ｃ１－Ｃ０)/(Ｃ２－Ｃ０)ˑ１００％ꎮ１.３.２㊀高效液相色谱(ＨＰＬＣ)法测定内源激素１.３.２.１㊀激素的提取㊀称取０ ５ｇ新鲜叶片ꎬ加入液氮快速充分研磨成粉末ꎮ加入４ħ预冷后的８０％(体积分数)甲醇(色谱专用)５ｍｌꎬ使用超声波清洗仪于２２ħ处理２ｍｉｎꎬ振荡混匀ꎬ置于４ħ浸提１２ｈꎮ浸提结束后于４ħ㊁１００００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ吸取上清液３ｍｌ转移至新离心管ꎬ使用真空离心浓缩仪完全浓缩至无液体残留ꎮ加入１ｍｌ８０％(体积分数)甲醇(色谱专用)ꎬ振荡混匀(保证提取物完全溶解于甲醇溶液)ꎬ过０ ２２μｍ有机滤膜ꎬ样品制备完成ꎮ６１江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第１期１.３.２.２㊀标准品的配制㊀准确称取５种激素的标准品ꎬ配制成１０μｇ/ｍｌ的高质量浓度单个标准品ꎬ用于出峰时间的确定及混合标准品的配制ꎮ将配制好的高质量浓度单个标准品混合稀释为１μｇ/Ｌ㊁９５μｇ/Ｌ㊁１００μｇ/Ｌ㊁２００μｇ/Ｌ㊁３００μｇ/Ｌ㊁４００μｇ/Ｌ㊁６００μｇ/Ｌ㊁８００μｇ/Ｌ㊁１０００μｇ/Ｌ的梯度混合标准品ꎬ用于绘制各激素的标准曲线ꎮ１.３.２.３㊀内源激素的测定方法㊀色谱柱Ｃ１８Ｗ柱ꎬ流动相由甲醇与０ １％磷酸按１ʒ９的体积比例混合配制而成(超声波处理１５ｍｉｎ脱气)ꎬ检测波长２８０ｎｍꎬ流速１ｍｌ/ｍｉｎꎬ柱温３０ħꎬ进样量１０μｌꎬ单个样品检测时间３０ｍｉｎꎮ１.４㊀数据处理及分析方法１.４.１㊀Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归方程分析㊀对测定的相对电导率进行Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析ꎬ回归模型为:Ｙ＝ｋ１＋ａｅｂｔ其中ꎬＹ为相对电导率ꎬｔ为处理温度ꎬｋ为细胞伤害率的饱和容量ꎬａ㊁ｂ为方程参数ꎮ因本试验中细胞伤害率消除了干扰ꎬ故ｋ＝１００ꎮ为确定ａ㊁ｂ值ꎬ将Ｌｏｇｉｓｔｉｃ方程转化为:ｌｎｋ－ｙｙæèçöø÷＝ｌｎａ－ｂｔꎬ令Ｙᶄ＝ｌｎｋ－ｙｙæèçöø÷则方程转化为Ｙᶄ与ｔ之间的线性方程ꎬ即:Ｙᶄ＝ｌｎａ－ｂｔ半致死温度计算公式为:ＬＴ５０＝ｌｎａｂ１.４.２㊀激素水平的计算方法㊀标准曲线的绘制:使用１０μｇ/ｍｌ的高质量浓度单个标准品确定每种激素的出峰时间ꎬ使用梯度质量浓度的混合标准品确定５种激素峰面积与质量浓度的线性关系ꎬ并绘制标准曲线ꎮ依据标准曲线得到样品质量浓度ꎬ通过公式计算叶片激素含量:Ｍ＝ＣˑＶ/ＭＳꎬ其中Ｖ是定容体积ꎬＭＳ是样品质量ꎬＣ为依据标准曲线得到的激素浓度ꎬＭ为最终叶片激素含量ꎮ单项指标耐寒系数(Ｋ)＝低温测定值/常温测定值ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀甘蓝型冬油菜叶片半致死温度相对电导率可表示细胞膜透性ꎬ离体叶片在一定温度范围内的渗透情况具有反映细胞膜受伤程度的作用ꎮ当处理温度低于半致死温度时ꎬ植物将受到不可逆的伤害ꎬ相对电导率快速升高ꎮ低温半致死温度的高低是反映植物抗寒性强弱的重要指标ꎮ根据ＬＴ５０测定结果(表２)鉴定４个油菜品种(品系)的抗寒性强弱为ｇａｕ￣２４>ｇａｕ￣３０>天油２２８８>天油２２６６ꎬ决定系数为０ ８６~０ ９３ꎬ可用于进一步分析ꎮ表２㊀不同低温下甘蓝型冬油菜叶片相对电导率及Ｌｏｇｉｓｔｉｃ拟合方程Ｔａｂｌｅ２㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｉｃｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＬｏｇｉｓｔｉｃｅｑｕａｔｉｏｎｏｆｌｅａｖｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ品种(品系)相对电导率(％)０ħ－４ħ－８ħ－１２ħ－１６ħ回归方程决定系数(Ｒ２)半致死温度(ħ)抗寒性排序天油２２６６１５.６２２８.５２８４.２２８６.４９８９.９３Ｙ＝１００/(１＋２.９９２０ｅ０.２３９１ｘ)０.８７－４.５８４天油２２８８１５.１４２８.５２８５.８６８６.９７９１.２７Ｙ＝１００/(１＋４.５３６０ｅ０.２７４１ｘ)０.８７－５.５２３ｇａｕ￣２４１３.２２１５.７２３４.８４８３.４４９１.５７Ｙ＝１００/(１＋１１.０５１０ｅ０.２９５７ｘ)０.９３－８.１２１ｇａｕ￣３０１７.１２２２.７２２６.４３８５.８３９２.４２Ｙ＝１００/(１＋８.５０６０ｅ０.２７９５ｘ)０.８６－７.６６２ｘ为峰面积ꎬＹ为激素浓度ꎮ２.２㊀标准曲线的绘制及回归方程的建立对单个标准品进行色谱分析ꎬＺＴ出峰时间为５ ０８４ｍｉｎꎬＧＡ３出峰时间为６ ５４０ｍｉｎꎬＳＡ出峰时间为７ ３０６ｍｉｎꎬＩＡＡ出峰时间为８ ０３９ｍｉｎꎬＡＢＡ出峰时间为８ ９８５ｍｉｎꎮ对照出峰时间获得各激素梯度浓度的峰面积ꎬ求得各激素浓度与峰面积的线性关系(表３)ꎮ２.３㊀不同抗寒性甘蓝型冬油菜激素含量０ħ㊁４ħ测得的激素含量分别列于表４㊁表５ꎮ表３㊀５种植物激素浓度与峰面积的线性关系Ｔａｂｌｅ３㊀Ｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｆｉｖｅｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｐｅａｋａｒｅａ植物激素标准曲线㊀㊀㊀㊀㊀㊀决定系数(Ｒ２)ＺＴＹ＝０.０１４７ｘ＋１２.０４２００.９９５４ＧＡ３Ｙ＝０.０２００ｘ＋３０.８０１００.９９３８ＳＡＹ＝０.０１３４ｘ＋１８.５３７００.９９３７ＩＡＡＹ＝０.０２１４ｘ＋３２.６８５００.９９０６ＡＢＡＹ＝０.０２７４ｘ＋３３.４８１００.９９４９ｘ为峰面积ꎬＹ为激素浓度ꎮＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ７１范军强等:低温胁迫下甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性分析发现部分激素含量在不同处理间差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ随低温(０ħ及４ħ)处理时间的增加ꎬＡＢＡ/ＩＡＡ值㊁ＡＢＡ/ＺＴ值㊁ＡＢＡ/ＧＡ３值㊁ＩＡＡ/ＧＡ３值表现出增大趋势ꎬ各激素间协同作用明显ꎮ表４㊀０ħ甘蓝型冬油菜叶片中内源激素含量及比值Ｔａｂｌｅ４㊀ＣｏｎｔｅｎｔａｎｄｒａｔｉｏｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ａｔ０ħ处理品种(品系)内源激素含量(μｇ/ｇ)ＺＴＧＡ３ＳＡＩＡＡＡＢＡ内源激素含量比值ＡＢＡ/ＩＡＡＡＢＡ/ＺＴＡＢＡ/ＧＡ３ＩＡＡ/ＧＡ３２４ħ１２ｈ天油２２６６１７.０２ʃ４.３７ａ１５５.３６ʃ４.６１ａ３６.８３ʃ１５.０４ａ３７.７２ʃ１５.６５ａ６.５５ʃ２.６２ａ０.１７０.３８０.０４０.２４天油２２８８１６.１２ʃ０.５３ａ１５１.９３ʃ０.９７ａ３０.７６ʃ４０.０９ａ５０.２８ʃ１７.４８ａ６.１６ʃ２.８７ａ０.１２０.３８０.０４０.３３ｇａｕ￣２４１９.２２ʃ０.９１ａ１４１.１８ʃ２２.７６ａ４３.０３ʃ１１.５４ａ３７.９０ʃ６.８０ａ６.７３ʃ５.３３ａ０.１８０.３５０.０５０.２７ｇａｕ￣３０２０.０４ʃ３.９６ａ１６０.５４ʃ１９.５４ａ３１.２６ʃ１３.３９ａ４０.５８ʃ９.０７ａ６.４９ʃ４.４６ａ０.１６０.３２０.０４０.２５０ħ１ｈ天油２２６６１２.３５ʃ４.９４ａ６９.５７ʃ２.３５ｂ６０.７０ʃ１９.０３ａ１３.２４ʃ９.１８ａ１７.３３ʃ３.６１ａ１.３１１.４００.２５０.１９天油２２８８１２.５８ʃ４.３１ａ７０.３０ʃ６.０１ｂ４２.８０ʃ２１.９０ａ１５.２５ʃ６.４０ａ１５.０５ʃ４.５６ａ０.９９１.２００.２１０.２２ｇａｕ￣２４１５.５６ʃ３.９４ａ８７.２０ʃ３.４６ａ７４.８９ʃ４４.５６ａ２９.８２ʃ４.４１ａ９.９６ʃ１.７８ａ０.３３０.６４０.１１０.３４ｇａｕ￣３０１７.２５ʃ３.５１ａ５６.７３ʃ９.５６ｂ６８.８９ʃ８９.２３ａ１８.８１ʃ７.１８ａ１０.３７ʃ４.９３ａ０.５５０.６００.１８０.３３０ħ１２ｈ天油２２６６９.３０ʃ２.１０ａ１３.６４ʃ６.６０ａ１００.６０ʃ２９.１９ｂｃ６.０２ʃ２.９０ａ２２.８８ʃ２.２０ａ３.８０２.４６１.６８０.４４天油２２８８１１.７８ʃ１.１７ａ１８.０８ʃ５.７９ａ６０.２０ʃ１７.１７ｃ８.３１ʃ１.３６ａ２０.５９ʃ３.６９ａ２.４８１.７５１.１４０.４６ｇａｕ￣２４１１.０４ʃ９.９７ａ３０.５５ʃ７.５５ａ１４１.６５ʃ１８.３６ａｂ１５.５１ʃ４.３２ａ２９.７１ʃ２.７５ａ１.９２２.６９０.９７０.５１ｇａｕ￣３０１４.３２ʃ２.５４ａ２８.９８ʃ９.２１ａ１７５.３０ʃ８.８３ａ１８.７０ʃ９.６０ａ２６.３１ʃ５.１９ａ１.４１１.８４０.９１０.６５不同小写字母表示同一处理不同品种间在０.０５水平下差异显著ꎮＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ表５㊀４ħ甘蓝型冬油菜叶片中内源激素含量及比值Ｔａｂｌｅ５㊀ＣｏｎｔｅｎｔａｎｄｒａｔｉｏｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ａｔ４ħ处理品种(品系)内源激素含量(μｇ/ｇ)ＺＴＧＡ３ＳＡＩＡＡＡＢＡ内源激素含量比值ＡＢＡ/ＩＡＡＡＢＡ/ＺＴＡＢＡ/ＧＡ３ＩＡＡ/ＧＡ３２４ħ１２ｈ天油２２６６１５.８４ʃ５.９５ａ２０７.８６ʃ８.７２ａ４９.６３ʃ２１.２４ａ４６.２１ʃ５.９６ａ６.８５ʃ４.６０ａ０.１５０.４３０.０３０.２２天油２２８８１８.７８ʃ６.５５ａ１６２.９２ʃ４１.４４ａ３９.３７ʃ３７.２２ａ３８.０６ʃ１２.０６ａ７.６０ʃ６.０８ａ０.２００.４００.０５０.２３ｇａｕ￣２４１９.００ʃ８.３５ａ１９８.９６ʃ２.８５ａ３６.８６ʃ１７.３０ａ５２.０８ʃ２０.３１ａ５.６２ʃ２.３１ａ０.１１０.３００.０３０.２６ｇａｕ￣３０２１.２５ʃ６.３６ａ２００.４４ʃ３１.２１ａ３９.８７ʃ８.５８ａ５０.３５ʃ３０.８９ａ６.６４ʃ２.２８ａ０.１３０.３１０.０３０.２５４ħ１ｈ天油２２６６１２.０３ʃ３.１６ａ１２６.２５ʃ３９.１２ａ５２.５２ʃ６.１３ａ３２.２１ʃ１５.５３ａ１４.８２ʃ３.５５ａ０.４６１.２３０.１２０.２６天油２２８８１６.１３ʃ１.９９ａ７７.２３ʃ２５.４４ａ５２.４０ʃ４４.３１ａ１９.８６ʃ１５.２３ａ６.１５ʃ１.７７ｂ０.３１０.３８０.０８０.２６ｇａｕ￣２４１５.６６ʃ７.０４ａ９９.３５ʃ３.６４ａ３７.３３ʃ２１.１４ａ３９.５８ʃ１７.４８ａ８.９１ʃ１.２３ａｂ０.２３０.５７０.０９０.４０ｇａｕ￣３０１８.４１ʃ４.６６ａ１０９.００ʃ２３.１５ａ３５.２６ʃ１２.７３ａ２５.５７ʃ６.９８ａ９.６５ʃ２.８４ａｂ０.３８０.５２０.０９０.２３４ħ１２ｈ天油２２６６１１.７９ʃ５.２０ａ４２.８７ʃ１２.９２ｂ５７.７７ʃ１７.８３ａ２５.９７ʃ１２.３８ａ１８.７８ʃ３.８７ａ０.７２１.５９０.４４０.６１天油２２８８９.３４ʃ１.３７ａ３９.２０ʃ８.７３ｂ５２.３２ʃ２５.６７ａ２０.３６ʃ３.２５ａ１４.６９ʃ４.１１ａ０.７２１.５７０.３７０.５２ｇａｕ￣２４１４.８２ʃ７.７６ａ６４.１１ʃ４.９６ａ７５.２８ʃ７.５０ａ３６.８７ʃ１０.２５ａ２２.０７ʃ４.５３ａ０.６０１.４９０.３４０.５８ｇａｕ￣３０１７.５８ʃ７.２５ａ５７.６７ʃ３.７１ａｂ６７.３８ʃ１０.０１ａ３０.７６ʃ１３.４８ａ２３.９９ʃ２.９１ａ０.７８１.３６０.４２０.５３不同小写字母表示同一处理不同品种间在０.０５水平下差异显著ꎮＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ２.４㊀不同水平低温对甘蓝型冬油菜内源激素含量的影响㊀㊀４个甘蓝型冬油菜品种(品系)内源激素对低温胁迫的响应如图１所示ꎮ与对照(２４ħ)相比ꎬ０ħ处理１２ｈ后ＺＴ含量平均降幅为３５ ８４％ꎬ高于４ħ处理的平均降幅(２８ ７９％)ꎮＧＡ３含量随低温处理时间延长呈下降趋势ꎬｇａｕ￣２４在０ħ处理１２ｈ后降至３０ ５５μｇ/ｇꎬ高于天油２２８８(１８ ０８μｇ/ｇ)ꎮｇａｕ￣３０在０ħ处理１２ｈ后ＳＡ含量与对照相比增加４６０ ８２％ꎬ天油２２８８增幅仅为９５ ７１％ꎮ在０ħ处８１江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第１期理１２ｈ后平均ＩＡＡ含量为１２ １３μｇ/ｇꎬ低于４ħ处理１２ｈ后的平均含量(２８ ４９μｇ/ｇ)ꎮ在４ħ及０ħ处理后ＡＢＡ含量明显上升ꎬｇａｕ￣２４的ＡＢＡ含量在０ħ处理１２ｈ后自ＣＫ的６ ７３μｇ/ｇ上升至２９ ７１μｇ/ｇꎬ增加了３４１ ４６％ꎬ高于天油２２６６及天油２２８８在０ħ处理１２ｈ后的增幅ꎮ０ħ处理１２ｈ后ＡＢＡ含量平均增幅为２８２ ６３％ꎬ４ħ处理１２ｈ后ＡＢＡ含量平均增幅为２０５ ３１％ꎬ０ħ上升幅度较４ħ大ꎮ总体上看ꎬ５种内源激素含量随低温处理强度变化而变化ꎬ低温处理后ＺＴ㊁ＧＡ３㊁ＩＡＡ含量下降ꎬＳＡ及ＡＢＡ含量升高ꎬ且４ħ处理的增加或下降幅度小于０ħꎮ图１㊀低温连续处理后甘蓝型冬油菜叶片内源激素含量的变化Ｆｉｇ.１㊀ＣｈａｎｇｅｓｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｌｅａｖｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ａｆｔｅｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ９１范军强等:低温胁迫下甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性２.５㊀低温胁迫后不同抗寒性甘蓝型冬油菜叶片激素含量与抗寒性的关系㊀㊀０ħ及４ħ处理１２ｈ后甘蓝型冬油菜叶片５种内源激素含量及比值的耐寒系数分别列于表６㊁表７ꎮＺＴ㊁ＧＡ３㊁ＩＡＡ的Ｋ值均小于１ ０００ꎬＳＡ㊁ＡＢＡ的Ｋ值均大于１ ０００ꎮ表６㊀０ħ甘蓝型冬油菜叶片中内源激素含量及比值的耐寒系数Ｔａｂｌｅ６㊀ＣｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｒａｔｉｏｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ｌｅａｖｅｓａｔ０ħ品种(品系)ＺＴＧＡ３ＳＡＩＡＡＡＢＡＡＢＡ/ＩＡＡ值ＡＢＡ/ＺＴ值ＡＢＡ/ＧＡ３值ＩＡＡ/ＧＡ３值天油２２６６０.５４７０.０８８１.１６４０.１６０３.４９６２１.９０３６.３９６３９.８０３１.８１７天油２２８８０.７３１０.１１９１.３２９０.１６５３.３４０２０.２１６４.５７１２８.０７３１.３８９ｇａｕ￣２４０.５７５０.２１６２.０４３０.４０９４.４１５１０.７８５７.６８３２０.４０３１.８９２ｇａｕ￣３００.７１５０.１８１１.６９００.４６１４.０５５８.８００５.６７３２２.４５９２.５５２ＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ表７㊀４ħ甘蓝型冬油菜叶片中内源激素含量及比值的耐寒系数Ｔａｂｌｅ７㊀ＣｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｒａｔｉｏｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ.ｌｅａｖｅｓａｔ４ħ品种(品系)ＺＴＧＡ３ＳＡＩＡＡＡＢＡＡＢＡ/ＩＡＡ值ＡＢＡ/ＺＴ值ＡＢＡ/ＧＡ３值ＩＡＡ/ＧＡ３值天油２２６６０.７４４０.２０６２.７３１０.５６２２.７４０４.８７４３.６８１１３.２８３２.７２５天油２２８８０.４９７０.２４１１.９５７０.５３５１.９３２３.６１１３.８８５８.０３０２.２２４ｇａｕ￣２４０.７８００.３２２３.２９２０.７０８３.９２６５.５４６５.０３４１２.１８５２.１９７ｇａｕ￣３００.８２７０.２８８５.６０８０.６１１３.６１４５.９１７４.３７０１２.５６２２.１２３ＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ㊀㊀利用半致死温度与９个内源激素相关指标的耐寒系数之间的相关性确定甘蓝型冬油菜抗寒性与叶片激素含量的关联性ꎮ０ħ处理１２ｈ后ꎬ与半致死温度相关性显著或极显著的指标有ＧＡ３含量㊁ＳＡ含量㊁ＩＡＡ含量㊁ＡＢＡ含量㊁ＡＢＡ/ＩＡＡ值㊁ＡＢＡ/ＧＡ３值的耐寒系数ꎬ４ħ处理１２ｈ后ꎬ与半致死温度显著或极显著相关的指标仅有ＧＡ３含量和ＡＢＡ/ＺＴ值的耐寒系数ꎬＧＡ３在０ħ及４ħ处理后１２ｈ后均与半致死温度极显著相关(表８)ꎮ表８㊀５种内源激素含量耐寒系数与半致死温度(ＬＴ５０)的相关性Ｔａｂｌｅ８㊀Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｏｌｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｆｉｖｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｓａｎｄｓｅｍｉ￣ｌｅｔｈａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ(ＬＴ５０)处理ＺＴＧＡ３ＳＡＩＡＡＡＢＡＡＢＡ/ＩＡＡ值ＡＢＡ/ＺＴ值ＡＢＡ/ＧＡ３值ＩＡＡ/ＧＡ３值０ħ１２ｈ－０.１４９－０.９９１∗∗－０.９６４∗－０.９４７∗－０.９２０∗０.９６５∗－０.４５２０.９３８∗－０.５７５４ħ１２ｈ－０.５２５－０.９８５∗∗－０.６３６－０.８３９－０.８２３－０.６８９－０.９３５∗－０.１９３０.７９５采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数计算ꎬ∗∗代表在０.０１水平下极显著相关ꎬ∗代表在０.０５水平下显著相关ꎮＺＴ为玉米素ꎻＧＡ３为赤霉素ꎻＳＡ为水杨酸ꎻＩＡＡ为生长素ꎻＡＢＡ为脱落酸ꎮ３㊀讨论与结论生长促进型激素和生长抑制型激素对于低温的响应趋势不同[８]ꎮ低温处理下云雾贡茶ＩＡＡ含量下降明显[９]ꎮＹａｍａｄａ等[１０]在５ħ低温处理的枳砧叶片中未检测出细胞分裂素ꎮ本试验在０ħ处理１２ｈ后的甘蓝型冬油菜叶片中虽能检测出玉米素(细胞分裂素的一种)ꎬ但含量降幅显著ꎮ严寒静等[１１]发现ꎬ栀子叶片中ＧＡ３含量在自然降温过程中下降明显ꎮ低温会促进植物体内脱落酸水平升高ꎬ环境温度降低后油菜叶片中脱落酸水平会不断升高[１２]ꎮ番茄在感受夜间低温后ꎬ脱落酸升高至白天的１.５倍[１３]ꎮ李亮等[１４]认为ꎬ低温胁迫后ＳＡ的积累影响黄瓜幼苗对低温的响应ꎮ本研究发现ꎬ０ħ处理１２ｈ后油菜叶片中ＡＢＡ含量较对照(２４ħ处理１２ｈ)上升２~３倍ꎬＳＡ含量也表现增长趋势ꎮ低温处理后抗寒性强的番茄品种ＡＢＡ含量高于抗寒性弱的品种[１５]ꎮ不同抗寒性油棕品种在１０ħ低温下叶片中的ＡＢＡ含量变化与番茄相同[１６]ꎮ王兴等[１７]认为ꎬ强抗寒性冬小麦品种能在低温下较０２江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第１期长时间维持高水平的ＩＡＡ含量ꎮ本试验证明ꎬ抗寒性越弱的品种叶片中ＡＢＡ含量在０ħ处理前后的相对上升幅度越小ꎬＩＡＡ含量在低温处理后降幅越小ꎬ抗寒性越强ꎮＡＢＡ/ＩＡＡ值的耐寒系数与抗寒性显著相关ꎬ证明ＡＢＡ与ＩＡＡ的协同作用与抗寒性也有关系ꎬ在葡萄中有相似结论ꎬ曲凌慧等[１８]认为ꎬ强抗寒性品种叶片中ＡＢＡ/ＩＡＡ值较高ꎮ植物会响应外界低温环境从而改变内源激素的含量[１９￣２３]ꎬ强抗寒性甘蓝型冬油菜品种叶片中生长促进型激素含量下降幅度小于弱抗寒性品种ꎬ生长抑制型激素含量上升幅度大于弱抗寒性品种ꎮ相关性分析结果表明ꎬ低温处理后ＧＡ３含量的相对变化可作为抗寒性评价的稳定指标ꎮ参考文献:[１]㊀董志强ꎬ舒文华ꎬ翟学军ꎬ等.棉株不同器官中几种内源激素的变化及相关关系[Ｊ].核农学报ꎬ２００５ꎬ１９(１):６２￣６７. 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我国北方甘蓝型冬油菜抗寒性评价及冷冻胁迫下转录组分析我国北方甘蓝型冬油菜抗寒性评价及冷冻胁迫下转录组分析导语：冬油菜是我国北方广泛种植的经济作物，但其种植过程中抗寒性是一个关键的限制因素。

本研究通过对我国北方甘蓝型冬油菜的抗寒性评价以及冷冻胁迫下的转录组分析，旨在揭示冬油菜抗寒性的调节机制，为提高冬油菜的抗寒性提供科学依据。

一、引言冬油菜（Brassica napus L.）是我国北方重要的油料作物之一，其具有丰富的油脂含量和营养价值，广泛应用于植物油和饲料加工等领域。

然而，由于北方冬季寒冷的气候条件，冬油菜在种植过程中容易受到低温的影响而减产甚至死亡。

因此，提高冬油菜的抗寒性是农业生产中迫切需要解决的问题之一。

二、抗寒性评价方法本研究选择了在北方地区广泛种植的甘蓝型冬油菜品种进行抗寒性评价。

通过不同温度处理，包括常温（25℃）、低温（4℃）和冷冻处理（-5℃），观察和记录不同处理下冬油菜的生长状况和生物学指标，如株高、叶面积、叶片颜色、生长速率等。

根据观察结果，可以评价不同品种的抗寒性差异，并筛选出抗寒性较好的品种作为研究对象。

三、冷冻胁迫下转录组分析为了进一步研究冬油菜在冷冻胁迫下的抗寒机制，本研究采用转录组分析的方法，深入探究胁迫过程中基因的表达变化。

首先，我们提取了冷冻胁迫前后的冬油菜叶片样品总RNA，利用高通量测序技术对其进行测序，并对测序结果进行数据分析和生物信息学处理。

其次，基于差异表达基因筛选和功能富集分析，我们研究了在冷冻胁迫下表达变化的关键基因，并对其进行了进一步的验证实验。

根据转录组分析的结果，我们发现冷冻胁迫下冬油菜叶片基因表达发生显著变化。

一方面，一些与抗寒性相关的基因在冷冻胁迫条件下被激活，从而增强了植物对低温的适应能力；另一方面，一些与生长发育相关的基因则受到了抑制，导致植物的生长速率减缓。

此外，我们还发现了一些新的候选基因，这些基因可能具有与冷冻胁迫相关的特殊功能，值得进一步的研究。

甘蓝型油菜黄籽双低抗耐低温（冻）不育系1923AB的选育摘要：为了选育优质、较耐低温冷（冻）的油菜不育系，现以两系隐性核育黄籽双低材料1927a为母本，以含油量较高的两系隐性核不育双低材料237b为父本，采用测交、系统选育的方法，转育而成稳定的黄籽双低高油份不育系1923ab。

不育系1923ab具有黄籽、品质双低（芥酸0.32%，硫苷20.3 μmol·g-1）、含油量高（平均含油率46.5%）、较耐低温冷（冻）等特点。

与恢复系18r选配的组合福油508于2011年11月通过国家上游区试审定。

关键词：不育系；黄籽；双低；低温；选育中图分类号：s634.3 文献标识码：a doi编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.018甘蓝型油菜隐性核不育材料具有不育性稳定彻底、育性不受外界温度影响、易选配强优势组合等特点。

近年来由于极端天气的频繁影响，如冻害天气，对油菜育种和生产带来了严重的影响。

所以选育抗耐低温冷（冻）隐性核不育油菜新材料和油菜新品种对于降低农民种植油菜受低温天气影响带来的危害，对于提高油菜种植业的经济效益，推动油菜产业的科技进步具有非常重要的意义。

黄籽双低不育系 1923ab是以两系隐性核育黄籽双低材料1927a为母本，以含油量较高的两系隐性核不育双低材料237b为父本，采用测交的方法转育而成的稳定的黄籽双低高油份不育系123ab。

1 不育系1923ab的来源及选育过程1.1 不育系的来源1923a是1997年春以黄籽双低隐形核不育两系材料1927a为母本，以含油量较高的两系隐形核不育双低材料237b为父本，采用测交的方法进行转育，进行多年多代田间成对测交系统选育和室内品质分析选育，于2003年转育成稳定的黄籽双低高含油量的隐形核不育两系1923ab。

1.2 选育过程1997年春用黄籽双低隐性核不育两系材料1927a和较矮的核不育两系材料23b杂交。