【精品】水杨酸钠半衰期的测定

川北医学院讲稿水杨酸钠半衰期（t1/2）的测定【实验前预习】药物代谢动力学。

【实验目的】用比色法测定水杨酸钠的血药浓度并计算半衰期。

【实验原理】药物血浆半衰期（或称消除半衰期，elimination half-life time，t）1/2是指血浆药物浓度下降一半所需的时间。

绝大多数药物是按一级动力学的规律消除，其血浆半衰期的数值是固定的。

水杨酸钠在酸性条件下与三氯化铁反应生成一种紫色络合物。

该络合物在波长510nm下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。

利用比色法测定药物在血中两个以上浓度值，即可求得药物的血浆半衰期。

【实验器材与药品】V1100分光光度计，离心机，10m1试管，试管架，5ml注射器及针头，吸耳球，计算器，10%水杨酸钠溶液，10%三氯醋酸溶液，10%三氯化铁溶液，0.1%肝素(heparin)溶液，蒸馏水。

【实验对象】家兔。

【实验方法与步骤】1．取离心管3支，分别标记为A、B、C，各加入10%三氯醋酸7ml。

2．取家兔1只，称重后由心脏(或颈动脉、耳缘静脉)取血2ml，置A管中(注射器内壁用0.5%肝素生理盐水溶液润湿)。

3．由耳缘静脉缓慢注射10%水杨酸钠2 ml/kg，并记录注射完毕的时间。

4．给药后10min和40min，先后自心脏取血2 ml，分别置入离心管B及C 中,记录取血的准确时间。

5．将3支离心管摇匀，以2000转/min的转速离心5 min。

准确吸取离心后的上清液各6 ml分别置入编号的试管中，每管加10%三氯化铁溶液0.5 ml，摇匀，显色。

6．以A管为对照，用V1100分光光度计在510nm波长处分别测定B管和C管的光密度值D1和D2，测定方法如下：1.接通V1100分光光度计电源，打开检测室盖板，调整波长为510mm；2.合盖→拉滑杆3.将黑体放入光路中→按MODE键到T档→按0%T键校零；4.将A管对准光路→按MODE键到A档→按100%T键调零；5.将B、C管依次对准光路→测出D1和D2值7．根据K＝CD将测得的D1和D2代入下面的公式计算水杨酸钠的血浆半衰期。

药代动力学参数测定水杨酸钠血浆半衰期的测定 【目的和原理】掌握用分光光度法测定水杨酸钠（sodium salicylate）的血药浓度,并学会用公式计算半衰期。

水杨酸钠在酸性环境中成为水杨酸（salicylic acid），与三氯化铁生成一种紫色络合物。

该络合物在520nm 波长下比色，其光密度与salicylic acid 浓度成正比。

反应式为：OH CO O H【实验对象】【实验器材和药品】 722分光光度计、离心机、50ml 烧杯、effendorff 管、加样器（1000μl）、试管、试管架、记号笔、兔手术台、手术器械一套、动脉插管、注射器（2ml、5ml、10ml）、BL-410生物机能实验系统。

10%水杨酸钠，0.02%水杨酸钠标准液，10%三氯醋酸，10%三氯化铁，0.3%肝素生理盐水，1%普鲁卡因等。

【实验步骤和观察项目】1. 取兔一只，称重，然后将其固定在兔手术台上。

2. 颈总动脉插管：用1%普鲁卡因在颈部正中局麻后，在气管上方将皮肤剪一纵向开口，用止血钳钝性分离皮下筋膜及肌肉组织，将气管暴露，在气管旁边可见较粗大的颈总动脉，将其与周围的组织分离，然后将充满肝素生理盐水的动脉插管插入，固定确切。

由颈总动脉缓慢给入0.2%肝素生理盐水，1ml/kg，防止凝血。

3. 取试管5只编号，各管中加入10%三氯醋酸3.5ml。

4. 由颈总动脉放血2ml，分别放入1号管（对照管）和2号管（标准管）内各1.0ml,摇匀静置。

5. 由耳缘静脉缓慢注射10%水杨酸钠，2ml/kg，给药后开始计时。

6. 给药后10min、25min、40min，先后取血1ml，分别置于3 、4、5号试管内，摇匀静置。

7. 以0.02%水杨酸钠标准液1ml 放入2号管内，其余各管加入蒸馏水1ml，摇匀。

8. 将5支试管离心5分钟（2000转/分），精确吸取上清液3.0ml，分别放入另一编号的试管中，每管加10%三氯化铁0.5ml，摇匀显色。

《食品毒理学》实验指导综合实验（四氯化碳）对肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT) 的影响实验实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期实验二血液红细胞、白细胞计数*所需实验仪器：电子天平、pH计（试纸）、显微镜、分光光度计、灌胃针头、（小）/（大）离心机、注射器。

实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期一、原理、目的药物血浆半衰期t1/2即血浆药物浓度下降一半所需的时间。

绝大多数药物是按一级动力学规律消除（恒比消除），因此每种药物都有固定的t1/2，不因血浆浓度高低而改变。

本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并计算t1/2。

水杨酸钠为抗炎药，经肝代谢，在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物，在520nm波长下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。

通过测定水杨酸钠的血浆半衰期，使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度，并掌握其血浆半衰期的测定方法。

半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数，对中毒和解毒有一定的实践意义。

二、试剂、器材及动物离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计；三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁；兔。

三、方法步骤1、取离心管和试管各5支，分别标为1~5号，备用。

5支离心管各加入10％三氯醋酸7ml。

2、取兔1只，称体重，从耳静脉取血2ml置入1号离心管，用玻璃棒搅拌。

然而自耳静脉注入10%水杨酸钠(剂量为150mg/kg)，并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml，分别注入2、3号离心管中，搅拌。

4、5号离心管分别加入蒸馏水和0.02%水杨酸钠2ml。

3、取上述5支离心管进行离心(2 000r/min，5min)，准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中，分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6m1)摇匀5min后比色。

4、用721型分光光度计510nm波长比色，以4号管调“0”，读得5号管光密度为x，再以1号管调“0”，读得2号管为x1，3号管为x2，将上述操作归纳为下表：水杨酸钠血浆半衰期的测定试管名编号三氯醋酸（ml）兔血（ml）0.02%水杨酸钠（ml）蒸馏水（ml）离心上清液（ml）三氯化铁（gtt）对照 1 7 2 —— 6 12 立即 2 7 2 —— 6 12 60min 3 7 2 —— 6 12 空白 4 7 —— 2 6 12 标准 5 7 — 2 — 6 125、计算半衰期①求k值：k=y/x; y=0.02②求水杨酸钠血浓度：给药后立即血浓度y1=kx l；给药后60min血浓度y2=kx2 。