体外L02肝细胞氧化损伤模型的构建

过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建戴青里;孙贵虎;闫斌;郭涛;戴青原【期刊名称】《昆明医科大学学报》【年(卷),期】2018(039)004【摘要】目的利用过氧化氢(H202)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)构建体外氧化应激细胞模型.方法 H2O2分6个浓度梯度处理HUVECs不同时间,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,筛选H2O2的最佳作用浓度和时间.结果不同浓度H2O2处理细胞不同时间,对HUVECs均有损伤作用;400、600、800 μ mol/LH2O2处理HUVECs24h,细胞存活率显著降低(P＜0.05),800 μmol/L H2O2作用HUVECs不同时间,细胞存活率随处理时间延长逐渐降低(P＜0.01);各组H2O2处理HUVECs24 h,细胞凋亡率显著增加(1 000μmol/L除外,P＜ 0.05),坏死率亦显著增加(100 μmol/L除外,P＜0.05);800 μmol/L H2O2处理HUVECs不同时间,细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加,24h时达到最高(P＜0.05),细胞坏死率亦逐渐增加,48 h时达到最高(P＜0.05);各组H2O2作用HUVECs 24 h,浓度400 μmol/L 时,细胞内ROS水平达到最高(P＜0.01),800 μ mol/L H2O2处理HUVECs,胞内ROS水平随处理时间延长而递增(P＜0.01).结论800μ mol/L H2O2与HUVECs 作用24 h可构建体外细胞氧化应激模型.【总页数】6页(P34-39)【作者】戴青里;孙贵虎;闫斌;郭涛;戴青原【作者单位】大理白族自治州人民医院超声科,云南大理671000;昆明医科大学第一附属医院心内科,云南昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院门诊部,云南昆明650032;昆明医科大学第一附属医院心内科,云南昆明 650032;昆明医科大学第一附属医院心内科,云南昆明 650032【正文语种】中文【中图分类】Q505【相关文献】1.过氧化氢诱导HepG2细胞氧化应激模型的建立 [J], 张业尼;钱磊;陈雪;张志军;刘金福2.过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建 [J], 戴青里;孙贵虎;闫斌;郭涛;戴青原;;;;;;;;;;;3.过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立 [J], 文丽梅;卢帅;吕国栋;李亚芬;郑璇;田春艳;赵军;王建华4.过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建 [J], 戴青里;孙贵虎;闫斌;郭涛;戴青原;;;;;5.芒果苷改善过氧化氢诱导帕金森细胞模型的氧化应激损伤 [J], 王晓娜;许丽娜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

第1篇一、实验目的1. 掌握细胞模型构建的基本原理和方法。

2. 学习使用细胞培养技术构建细胞模型。

3. 了解细胞模型在生物学研究中的应用。

二、实验原理细胞模型是研究细胞生物学、分子生物学等领域的重要工具。

通过构建细胞模型，可以模拟细胞内外的各种生物学过程，研究细胞在特定条件下的生物学行为和分子机制。

本实验采用细胞培养技术，以原代细胞为研究对象，构建细胞模型，并进行相关实验研究。

三、实验材料1. 原代细胞：如肝细胞、神经细胞等。

2. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素等。

3. 实验器材：超净工作台、细胞培养瓶、移液器、显微镜、CO2培养箱等。

四、实验方法1. 原代细胞分离与培养（1）取动物组织，用消化酶处理，得到单细胞悬液。

（2）用离心分离法获得细胞沉淀，用DMEM培养基洗涤细胞。

（3）将细胞接种于培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。

2. 细胞模型构建（1）观察细胞形态和生长情况，选择合适的细胞进行模型构建。

（2）根据研究目的，对细胞进行诱导或处理，如药物处理、基因沉默等。

（3）观察细胞形态、生长情况和生物学功能的变化，判断模型构建是否成功。

3. 实验指标检测（1）观察细胞形态和生长情况，记录细胞数量、形态变化等。

（2）进行细胞功能检测，如细胞增殖、细胞凋亡、细胞迁移等。

（3）进行分子生物学检测，如蛋白质表达、基因表达等。

五、实验结果与分析1. 原代细胞分离与培养实验成功分离出原代细胞，细胞生长状况良好，细胞形态正常。

2. 细胞模型构建通过药物处理和基因沉默等方法，成功构建了细胞模型。

观察细胞形态、生长情况和生物学功能的变化，发现细胞模型在特定条件下表现出与正常细胞不同的生物学特性。

3. 实验指标检测（1）细胞形态和生长情况：实验组细胞形态异常，生长速度较慢。

（2）细胞功能检测：实验组细胞增殖能力下降，细胞凋亡率升高，细胞迁移能力减弱。

（3）分子生物学检测：实验组蛋白质表达和基因表达发生改变，与正常细胞相比，某些关键蛋白和基因的表达水平发生变化。

1.3 多能干细胞来源的肝样细胞随着干细胞技术的革新，多个研究团队通过模拟胚胎发育过程中肝脏的发育过程，定向诱导胚胎干细胞(human embryonic stem cells，ESCs)为肝样细胞[17]，并能够表达包括药物代谢酶和外排转运蛋白在内的几乎完整的生物转化系统[18]然而，无论何种诱导分化方案，所获得的肝样细图1 2D培养的人原代肝细胞用于非酒精性脂肪肝病模型研究[31]图2 肝素-水凝胶三明治夹心培养体系[37]。

(A) 肝素-聚乙二醇水凝胶夹心法培养肝细胞体系制备示意图。

(B) 分别培养7天，15天后肝素-水凝胶夹心与胶原夹心体系MRP2（形成胆小管网络）表达水平Figure 2. Heparin-hydrogel sandwich. (A) Schematic diagram of preparation of heparin-polyethylene glycol hydrogel sandwich model. expression of MRP2 (forming a bile duct network) in the heparin-hydrogel or collagen sandwich system after 7 or 15days of culture基于生物支架的3D培养模型结合高内涵技术的药物安全性评价体系[42]。

(A) 基于生物支架的3D培养模型构建及高内涵成像分析示意图。

(B) 利用高内涵成像技术对多种潜在肝毒性药物可能引起的关键事件分析Figure 3. A 3D culture drug safety evaluation system based on biological scaffolds combined with a high-content . (A) Schematic diagram of 3D culture modelbiological scaffolds and high-content(B) Using high-content imaging technologykey events that may be caused bypotentially hepatotoxic drugs图4 多种细胞混合培养模型与微流控技术结合构建人工[51]。

茯苓枸杞组合多糖的抗氧化活性研究作者：王祈蘅谢志辉黄宏靓来源：《食品界》2024年第07期分别提取茯苓和枸杞多糖，将两者按照1：1组合得到组合多糖（PM），通过三种自由基清除试验以及过氧化氢氧化损伤的人正常肝细胞模型，检测多糖对细胞抗氧化活性。

两种多糖和组合多糖均显示了较好的抗氧化活性，在过氧化氢造成的损伤肝L02细胞，组合多糖显示了显著的抗氧化作用，在浓度为100μg/mL时，L02细胞存活率最高。

组合多糖可以明显下降过氧化氢损伤L02细胞的MDA浓度，并可以显著提高损伤细胞的两种抗氧化酶SOD和GSH-Px 的活力。

食品来源多糖（Polysacharide）结构复杂，具有多种生物学功能，包括抗氧化、减轻炎症、降糖、降脂等功能。

很多研究表明不同食品来源多糖具有较好的抗氧化的功能，其主要是通过促进抗氧化酶活性、减少自由基生成及抑制脂质过氧化来完成。

有研究表明，不同组合多糖共同应用的抗氧化效果更强。

人体肝脏的正常功能对于维持人体代谢非常重要，肝脏代谢非常活跃，其在不同生理状态下产生活性氧自由基，在一定的条件下引发的氧化应激认为会造成不同程度的肝脏细胞损伤，积累的自由基损伤会加速慢性肝病的形成和发展。

目前在体外使用肝L02细胞的过氧化氢损伤模型，能较为有效的评价食品中活性成分的抗氧化能力。

茯苓，为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，《名医别录》中记载其能“调脏气，伐肾邪，长阴，益气力，保神守中”。

枸杞味甘性平、补肾益精、补血安神。

枸杞和茯苓配伍，具有健脾益肾的效果。

前期实验中，我们对不同种类食品来源提取的多糖进行了抗氧化能力的初步评价，发现其中茯苓和枸杞制备多糖及两者组合的多糖，在自由基清除等抗氧化活性评价中显示了较好的抗氧化能力，在此基础上，我们使用人正常肝细胞L02的过氧化氢损伤模型进行检测评估，试图为今后进一步的组合多糖应用提供可能的依据。

1.材料与方法1.1 材料、试剂和仪器枸杞，产自宁夏，为茄科植物枸杞Lycium barbarum L的干燥成熟果实。