DNS法在普鲁兰多糖发酵液中糖测定的研究

DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定曾东方;杨帆;聂欢欢【摘要】选取广泛栽培的著名食用菌香菇、平菇和姬菇菌丝体为研究菌种,采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法检测供试食用菌的淀粉酶产生能力.以2%可溶性淀粉为唯一碳源的查氏液体培养基诱导发酵,供试食用菌产生的淀粉酶活力在1.513～3.417 U/mL,为食用菌工业发酵菌种的选育提供了参考依据和分析方法.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2011(000)011【总页数】2页(P16-16,18)【关键词】食用菌;发酵液;DNS法;淀粉酶;活力测定【作者】曾东方;杨帆;聂欢欢【作者单位】武汉工程大学真菌生理学实验室,湖北,武汉,430074;武汉工程大学真菌生理学实验室,湖北,武汉,430074;武汉工程大学真菌生理学实验室,湖北,武汉,430074【正文语种】中文【中图分类】Q935;Q556经过人工驯化培养的食用真菌的菌丝体，可以栽培扭结成食药用价值很高的子实体。

近年来，人们发现食用真菌菌丝体也可以仿效青霉菌发酵，大规模生产食用菌多糖、抗生素、酶制剂等亟待研发的生物活性物质[1]。

食用菌发酵有赖于适宜的工艺条件与生物反应器，但更取决于具工业开发价值的生产菌种的生理性状，其中包括食用菌生产菌种对环境的适应性，归结为食用菌的代谢能力，能够利用廉价原料迅速生长并大量合成目的产物。

许多工业发酵菌种不能直接利用淀粉，生物工厂必须对原材料进行预处理，通过液化、糖化生产微生物可以直接利用的淀粉水解糖。

如果选育出具有淀粉酶活力的生产菌种，就可以实现边糖化边发酵，可极大地提高生产效率。

因此，探讨灵敏而准确的食用菌淀粉酶活力的测定技术，具有重要的生理学意义和实践应用潜力。

淀粉酶活性测定方法较多[2]，但大致分为4类：一是测定底物淀粉的消耗量，有粘度法、浊度法和碘—淀粉比色法等；二是生糖法，测定产物葡萄糖的生成量；三是色原底物分解法；四是酶偶联法。

3,5-二硝基水杨酸法测定多糖含量的研究进展
王丽娜;陈水钫;张兵;王新成
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】2009(030)004
【摘要】3,5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)是一种新的多糖含量测定的方法,此法已被用于植物药、中成药、海洋生物药等药物中多糖成分的含量测定.DNS法测多糖含量具有操作简便、快速、灵敏度高、杂质干扰较小等优点.本文就近年来关于DNS法测定多糖含量的研究进行综述.
【总页数】3页(P232-234)
【作者】王丽娜;陈水钫;张兵;王新成
【作者单位】吉林医药学院,吉林,吉林,132013;吉林医药学院,吉林,吉林,132013;吉林油田总医院,吉林,松原,138006;吉林医药学院,吉林,吉林,132013
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.利用3,5-二硝基水杨酸法测定菜用甘薯叶中的多糖含量 [J], 张小贝;朱国鹏;祝志欣;南文卓;吴志鹏
2.3,5-二硝基水杨酸法测定多糖含量的研究进展 [J], 王丽娜;陈水钫;张兵;王新成
3.3,5-二硝基水杨酸法测定发酵液中多糖含量 [J], 王明瑞; 侯彦喜; 张亚丹
4.3,5-二硝基水杨酸法测定发酵液中多糖含量 [J], 王明瑞; 侯彦喜; 张亚丹
5.3,5-二硝基水杨酸法测定石斛多糖含量的研究 [J], 韦练;郭力;陈佳江;许莉;石媛慧;郝普彦;罗方利;张廷模;韩瑜
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

分析检测食品工业科技V ol .29,N o .02,20082008年第02期285　DNS 法在普鲁兰多糖发酵液中糖测定的研究韩德权,章佳佳(黑龙江大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150080)摘　要:普鲁兰是由出芽短梗霉菌株(Aureobasidium pullulans )发酵生产的胞外多糖,普鲁兰多糖含量多少是判断发酵成功与否的标志,而多糖含量的准确测定对发酵的过程控制特别重要。

本文研究了DNS 法在普鲁兰多糖发酵液中糖测定的应用,同时研究了色素和不同比例乙醇对DNS 法测定出芽短梗霉发酵液中残糖和总糖的影响。

结论为色素对总糖的测定有干扰,对上清液中的残糖的测定没有影响;不同比例乙醇对DNS 法测定糖含量没有影响。

关键词:出芽短梗霉,普鲁兰,DNS 法App licati on of DNS method t o the determ inati on of saccharide content in Pullulan fermentati on br othHAN D e -quan,ZHANG J i a -ji a(College of L ife Sciences,Heil ongjiang University,Harbin 150080,China )Ab s trac t:The Pu ll u l a n is e xop o l ys a c c ha rid e s (EPS )p rod uc e d b y fe r m e n ta ti on of A u re ob a s id ium p u llu la ns 1The c on te n t of Pu llu la ns is a n ind i c a tion tha t the fe r m e n ta ti on is s uc c e s s fu l o r no t 1The a c c u ra te d e te r m ina tion of the Po lys a c c ha rid e c on te n t i s ve ry i m p o rta n t to the p roc e s s c on tro l of fe r m e n ta ti on 1Th is p ap e r s tud ie s the ap p lic a tion of the DNS m e thod i n d e te r m in ing s a c c ha rid e c on te n t in Pu llu la n fe r m e n ta ti on b ro th a nd the e ffe c t of p igm e n t a nd e tha no l in d iffe re n t ra tio on d e te r m i n i ng re s id ua l s a c c ha rid e a nd to ta l s a c c ha ri d e in the A u re ob a s i d ium p u llu la ns fe r m e n ta tion b ro th w ith DNS m e thod 1The c onc lus i on w a s tha t the p i gm e n t i n te rfe re s the d e te r m ina ti on of to ta l s a c c ha rid e,b u t ha d e ffe c t on the d e te r m i na ti on of there s i d ua l s a c c ha ri d ein the s up e rna ta n t,a ndthed e te r m ina tion of s a c c ha ri d e c on te n t w ith the DNS m e thod w ill no t b e a ffe c te d b y e tha no l in d iffe re n t ra tio 1Key wo rd s:A u re ob a s id ium p u llu la ns;Pu llu la n;DNS m e thod中图分类号:TS20112+3 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2008)02-0285-03收稿日期:2007-07-23作者简介:韩德权(1960-),男,高级工程师,硕士,研究方向:生物制药、保健食品材料。

DNS法测定D-氨基葡萄糖含量方法的研究刘玥;刘晓兰;周利敏;郑喜群【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2014(000)010【摘要】建立了DNS法测定调味品中色素D-氨基葡萄糖含量的方法。

研究了反应的测定波长、DNS试剂用量、反应时间、反应温度、反应液体积以及反应产物在5h 内的显色稳定性对测定结果的影响。

结果表明：DNS法测定D-氨基葡萄糖含量的最适波长为520 nm，D-氨基葡萄糖浓度在100～300μg／mL时，DNS 试剂用量为1．0 mL，沸水浴反应8 min，反应液体积4 mL，反应产物在5 h内显色性质稳定，该方法精密度良好，RSD为0．08％，回收率为98．86％。

【总页数】5页(P89-93)【作者】刘玥;刘晓兰;周利敏;郑喜群【作者单位】齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006; 农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室，黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006; 农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室，黑龙江齐齐哈尔 161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006; 农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室，黑龙江齐齐哈尔161006;齐齐哈尔大学食品与生物工程学院，黑龙江齐齐哈尔 161006; 农产品加工黑龙江省普通高校重点实验室，黑龙江齐齐哈尔 161006【正文语种】中文【中图分类】TS245.4【相关文献】1.HPLC示差折光分析法测定D-氨基葡萄糖盐酸盐中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖 [J], 王英锋;晏利芝;郭雪清2.滴定分析法和分光光度法测定保健食品中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量 [J], 骆治琼3.紫外可见分光光度法测定胶囊剂中D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量 [J], 刘士团;张芳;刘春霖4.高效液相色谱法测定2-氯-4-硝基苯基-β-D-半乳糖苷和2-氯-4-硝基苯基-N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷含量及其稳定性的研究 [J], 王玉洁;张莉5.滴定分析法和分光光度法测定保健食品中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量的研究 [J], 陈金东;李蔚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定1. 研究背景食用菌是一种常见的菌类食品，具有丰富的营养价值和药用价值。

而淀粉酶作为重要的酶类成分，在食用菌的发酵过程中起着重要作用。

对食用菌发酵液中淀粉酶活力的测定具有重要意义。

2. DNS法的原理DNS法是测定还原糖的方法之一，也是目前测定淀粉酶活力的常用方法之一。

该方法利用二糖苷键，能使α-醛基于2-氮杂己糖缺氧基和1-喹啉酮缓和形成稳定的红色络合物。

3. 实验方法（1）试剂准备：取得极少数数DNS试剂，製备酸水（2）样品处理：取得一定量食用菌发酵液样品（3）测定操作：操作过程如下...（4）结果处理：计算淀粉酶活力，公式如下...4. 实验结果和分析（1）样品A淀粉酶活力为X，样品B淀粉酶活力为Y（2）通过对比实验结果分析，得出...5. 结论本实验通过DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，得出了样品A和样品B的淀粉酶活力结果。

实验结果表明...6. 意义和展望该实验结果对于食用菌产业和相关研究领域具有一定的意义，同时也为淀粉酶活性的测定方法提供了一种有效的方案。

未来有望进一步探索...7. 参考文献（1）XXX，XX.（2018）。

（2） XXX，XX.（2019）...8. 附录实验原始数据表格...总结：本实验使用DNS法对食用菌发酵液中淀粉酶活力进行了测定，并得出了实验结果。

该方法具有操作简便、结果准确等优点，对于相关研究和生产实践具有一定的借鉴意义。

食用菌发酵液淀粉酶活力的测定，是一项具有重要意义的研究。

食用菌作为一种常见的菌类食品，不仅具有丰富的营养价值，还具有一定的药用价值。

而淀粉酶作为食用菌发酵过程中的重要酶类成分，对于提高食用菌发酵液的产率和质量起着关键作用。

准确测定食用菌发酵液中淀粉酶活力，对于食用菌产业和相关研究领域具有重要意义。

在实验中，DNS法是常用于测定淀粉酶活力的方法之一，其原理是利用二糖苷键，形成红色络合物来测定还原糖的含量。

DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度一、实验原理在碱性条件下，葡萄糖与DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂反应，葡萄糖被氧化成糖酸及其他产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，葡萄糖的量与棕红色物质颜色的深浅相关，利用分光光度计，在550nm 波长下测定吸光度值，查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。

二、材料与试剂1．仪器：50ml容量瓶，1000ml容量瓶，500ml烧杯，小烧杯，试管（带刻度25ml更好）10根，棕色瓶 2.试剂： 1）葡萄糖 2）2mol/LNaOH溶液 3）酒石酸钾钠（C4H4O6KNa﹒4H2O，Mr=282.22） 4）结晶酚（C6H5OH,Mr=94.11） 5）无水亚硫酸钠（Na2SO4,Mr=126.04） 6）蒸馏水 7）DNS 8）DNS试剂配制：准确称取DNS 6.3g于500ml烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入2mol/LNaOH溶液262ml，再加到 500ml含有酒石酸钾钠185g的热水溶液中，再加结晶酚 5g和无水亚硫酸钠 5g，搅拌溶解，冷却后移入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至，充分混匀。

贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。

9）葡萄糖标准溶液配制：取适量葡萄糖装入称量瓶，再85°C烘箱烘至恒重，放入干燥器冷却。

精确称取干燥后的葡萄糖 0.5g加蒸馏水溶解，至50ml容量瓶定容，制成10g/L的葡萄糖溶液。

分别取蒸馏水稀释成葡萄糖标准液，浓度为0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,1.2g/L,1.4g/L,1.6g/L,1.8g/L,2.0g/L 。

三、实验步骤1. 标准曲线制作分别取标准液1.0ml于25ml刻度试管中，按下表加入试剂，沸水中显色5min。

用冷水冷却到室温后，加水至25ml，摇匀，再550nm处用分光光度计测定上述各溶液的A550值。

以葡萄糖浓度为纵坐标，A550值为横坐标，作出标准曲线并回归出标准方程。

DNS法测定发酵液中总糖含量3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。

DNS试剂的配方（3，5-二硝基水杨酸试剂）：称取酒石酸钾钠18.2g，溶于50ml蒸馏水中，加热（不超过50℃），于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸0.63g，NaOH 2.1g（先配成溶液），苯酚0.5g，无水亚硫酸钠0.5 g, 搅拌至溶解完全，冷却后用蒸馏水定容至100ml，贮于棕色瓶中，室温保存。

0.1％葡萄糖标准液：准确称取100 mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱保存备用。

注意事项：1. 在配制的过程中，如果操作不合理，会出现溶液变黑，或者有鸡蛋花一样的絮状沉淀出现。

2.称取DNS（具体重量，按照你的配方来，下同），加水溶解，水浴45℃；3.逐步加入氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，直到溶液清澈透明；（a.药品中的氢氧化钠要配制成溶液；直接加颗粒，可能产生鸡蛋花；b.加入氢氧化钠溶液时，溶液的温度会上升，所以要慢慢加，不停地搅拌，同时溶液的温度不能超过48度；温度高了，溶液颜色变黑。

）4. 逐步加入四水酒石酸钾钠、苯酚和无水亚硫酸钠；（顺序最好不要更改！）5.继续45度水浴，同时补水，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解；（一定要有耐心地搅拌！）6. 停止加热，冷却至室温，用水定容。

7. 储存在棕色瓶中，避光保存。

室温下存放7天后使用。

有效期为6个月。

（时间不忙的话，最好按照时间来操作，时间紧迫了，时间提前个几天，推后几天，也可以用的）【操作方法】一、葡萄糖标准曲线的绘制取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计（520nm）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。

以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。

DNS比色法测还原糖标准曲线绘制及测定Tr21培养液中初始和最终还原糖及总糖含量实验报告1.研究背景木霉菌在发酵过程中，利用碳源导致发酵液中糖含量的变化，其中还原糖是一个主要的反映参数。

还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）在碱性条件下生成棕红色物质（3-氨基-5-硝基水杨酸），在一定范围内，棕红色物质颜色深浅的程度与还原糖的含量呈一定的比例关系。

糖含量的不同变化一定程度上体现着Tr21不同的生长阶段，从而为控制及优化发酵过程提供科学依据。

2.实验目的3，5-二硝基水杨酸比色法测定Tr21发酵液中还原糖含量，利用糖含量这个参数，控制发酵过程。

3.实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色4.实验材料发酵液（5天）：Tr121（A2）实验材料：3，5-二硝基水杨酸，氢氧化钠，苯酚，亚硫酸钠，酒石酸钾钠，葡萄糖，蒸馏水实验器材：可见分光光度计，电子天平，真空干燥箱，数显恒温水浴锅，离心机，移液器，枪头，500ML容量瓶，试管，500 ml 烧杯，1000ml量筒5.实验方法5.1试剂配制（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。