乙肝表面抗原在分泌型毕赤酵母中的表达及纯化

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毕赤酵母分泌表达报告

实验报告毕赤酵母分泌表达报告订单号：«订单号»客户：«客__户»日期：«日__期»目录1 材料与方法 (1)1.1 菌株的保存与培养 (1)1.2 载体构建 (1)1.3 质粒电转毕赤酵母 (1)1.4 转化子筛选 (2)1.5 转化子表达小试 (4)1.6 最优转化子扩大表达 (6)1.7 蛋白鉴定与纯化 (7)2 结果与分析 (9)2.1 转化子筛选 (9)2.2 转化子表达小试 (9)2.3 最优转化子扩大表达 (10)2.4 蛋白纯化与浓度测定 (10)1．材料与方法1.1 菌株的保存与培养大肠杆菌（Eschrichia coli）菌株TOP10于LB培养液摇菌后保存成20%的甘油菌于-80℃冷冻保存。

大肠杆菌于37℃培养箱中培养。

毕赤酵母（Pichia pastoris）菌株X-33于YPD培养液摇菌后保存成25%的甘油菌于-80℃冷冻保存。

毕赤酵母于28℃培养箱中培养。

1.2 载体构建1）目的基因信号肽预测，采用SignalP 4.0和5.1预测，去除信号肽序列；2）根据毕赤酵母表达系统进行密码子优化，避开SacI酶切位点；3）基因合成至pPICZαA，目的基因紧挨着载体α-factor，C端带上6×His。

1.3 质粒电转毕赤酵母1.3.1 目的载体线性化1）按下表配制载体酶切体系：组分体积（ul）质粒（5-10 ug）6 ug10×buffer 5SacI 1 ulddH2O 补到502）37℃酶切过夜；3）琼脂糖凝胶电泳检测，以未酶切的质粒作为对照；4）检测酶切成功后，65℃ 20 min灭活。

1.3.2 线性化载体纯化回收1）按下表配置载体纯化体系：组分体积（ul）酶切产物50核酸助沉剂103 M NaAc，pH=5.2 6无水乙醇1652）-20℃静置35 min以上；3）4℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清，此时可以观察到壁上有白色沉淀；4）加入400 ul预冷的80%乙醇重悬沉淀；5）4℃ 12000 rpm离心10 min，弃上清，开盖干燥；6）加入10 ul ddH2O溶解沉淀。

野生及变异的 HBsAg 在毕赤酵母中的重组表达

ｆｒｏｍｗｉｌｄ— ｔｙｐｅａｎｄｔｈｒｅｅｖａｒｉａｎｔｆｏｒｍｓｏｆＨＢＶａｓｔｅｍｐｌａｔｅｓｗｅｒｅｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｏｆｐＰＩＣＺＡａｎｄ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＯＵＣｈｅｎｇ，Ｅ — ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｃｈ＠ｎｉｃｐ＠．ｏｒｇ．ｃｎ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｉｔｖｅＴｏｅｘｐｒｅｓｓｓｕｒｆａｃｅａｎｔｉｇｅｎ（ＨＢｓＡｇ）ｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍｔｈｅｗｉｌｄ — ｔｙｐｅｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓａｎｄＨＢＶｖａｒｉａｎｔｓ
ｐＰＩＣＺｃｔ．ＴｈｅｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎｔｏｔｈｅｙｅａｓｔｓｔｒａｉｎＧＳ１１５．Ｔｈｅｈｉｇｈｃｏｐｙｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅａｃｑｕｉｒｅｄｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆ
Ｚｅｏｃｉｎｅ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｆｏｒｈｉｇｈ— ｌｅｖｅｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｏｒｆａｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＯｎｅｗｉｌｄａｎｄｔｈｒｅｅｖａｒｉａｎｔｐｌａｓ —

重组人Hepassocin在毕赤酵母中的分泌型表达、纯化与活性鉴定

第二章材料和方法 ............................................................................................................................ 11
2.1 材料 ............................................................................................................................................. 11
摘要......................................................................................................................................................3
2.1.1 菌株和质粒 .............................................................................................................................. 11 2.1.2 引物 .......................................................................................................................................... 11 2.1.3 工具酶及相关试剂 .................................................................................................................. 11 2.1.4 主要仪器设备 .......................................................................................................................... 11 2.1.5 层析柱及填料 ..........................................................................................................................12 2.1.6 常用试剂的配制 ......................................................................................................................13

两种HBsAg／GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其免疫原性比较

中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心，京１０５）北０００
ｆｓｇｃｕｄｅｅｈｎｅｙｆｉＧＭ－ＳＦＨｕｇＳｅｒｔｏｅｐｒｓｉｎｎＰ／ｈａｐａｔｒｓ耐ｏＢＡｏｌｂｎａｃｄｂｓｎＣ．ｃｅｉｎｘｅｓｏｉｃ／ｓｏ／
ＣｉｅｅＡｃｄｍｙｏｄｃｃｅｃｓ＆ＵｉｎＭｅｉａｉｅｓｙｈｎｓａｅｆＭｅｉａＳｉｎｅｌｎｏｄｃＵｎｖｒｉ．ｌｔ
Ｋｕｎｍｉｇ６ｎ５０１８；Ｙｕ１ｎｎａＣｏｌｇｆＴＣＭ，Ｋｕｎｉｇ６２ｎｌｅｅｏｍｎ５０００；
ａｍｍｕｎｏｅｃｔｏｐａｉｏｆｔｗｎｄｉｇｎｉｉｙｃｍｒｓｎｏｏ
［ｅｗｏｄ］Ｈｓｇ；ＫｙｒｓＢＡＧＭ－ＦｆｓｎｐｏｅｎｉｉｐｓＣＳ；ｕｉｒｔｉ；Ｐｃａａ — ｏｈ
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ＩｓａｔＡ Ⅵ：０ｘｒｓｏｕｉｒｓｆｅａ－ｔｃＡｂｒｌ耵Ｔｐｅｓｗｓｎｏｍｐｔｅｔｆｏｆｏｈｉ
ｆｉｓｓｒｃｎｉｅｎ（ｊＢｖｒｕａｅａｔｓｕｆｇＨＢｓ．ｎ－ＡｇｓａｄｓＨＢｓＡｇ）ｊｈｎｔｅ
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！＝细胞与分子免疫学杂志（ｈｎＪＣｌＭｏＩｍｏ）０７２（０！Ｃｉｅｌｌｍａ１２０．３１ｎ

乙型肝炎表面抗原颗粒在毕赤酵母中的表达

乙型肝炎表面抗原颗粒在毕赤酵母中的表达
刘如石;邱义兰;杨坤宇;张智洪;梁良;张军;夏宁邵
【期刊名称】《中华微生物学和免疫学杂志》
【年(卷),期】2006(026)002
【摘要】毕赤酵母表达系统是一个高效异源蛋白表达工具，表达载体直接整合到酵母基因组上，可以产生遗传稳定的重组子，有类似于哺乳动物翻译后加工修饰的功能，可在成本低廉的无机盐培养基中进行高密度培养生产重组蛋白。

为提高重组菌株表达的稳定性，本研究选用毕赤酵母表达系统，成功地表达了22nm HBsAg 颗粒，为在毕赤酵母中开发生产乙肝疫苗提供了资料。

【总页数】2页(P143-144)
【作者】刘如石;邱义兰;杨坤宇;张智洪;梁良;张军;夏宁邵
【作者单位】410081,长沙,湖南师范大学生命科学学院;410081,长沙,湖南师范大学生命科学学院;361005,厦门,福建省医学分子病毒学研究中心;361005,厦门,福建省医学分子病毒学研究中心;361005,厦门,福建省医学分子病毒学研究中心;361005,厦门,福建省医学分子病毒学研究中心;361005,厦门,福建省医学分子病毒学研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R392
【相关文献】
1.鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因sag10在毕赤酵母中的表达及鉴定
2.乙型肝炎肝组织中乙型肝炎表面抗原、核心抗原的表达与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量及肝脏炎症的相关性研究
3.修饰的含前S1、前S2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达
4.弓形虫表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因在毕赤酵母中的分泌表达
5.羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因的构建及在毕赤酵母中的表达
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毕赤酵母表达基因工程抗体高效发酵及纯化工艺研究

第四军医大学硕士学位论文毕赤酵母表达基因工程抗体高效发酵及纯化工艺研究姓名：唐浩申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：陈志南;米力@缩略语表缩略语英文全称中文全称A absorbance 吸光值Ab antibody 抗体AK auto Ab anti-keratin auto antibody 抗角蛋白自身抗体 AOX alcohol oxidase 醇氧化酶bp base pair 碱基对CHO Chinese Hamster Ovary 中国仓鼠卵巢CV column volume 柱体积DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸DO dissolved oxygen 溶解氧Elisa enzyme linked immunosorbentassay酶标记免疫吸附试验Fab antigen-binding fragment 抗原结合片段 FDA food and drug administration 食品与药品管理局 FF fast flow 快速流GA glucoamylase 葡萄糖淀粉酶 HBsAg hepatitis B surface antigen 乙型肝炎表面抗原 HC heavy chain 重链HIC hydrophobic interactionchromatography疏水作用层析HPLC high performance liquidchromatography高效液相色谱HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IEC ion exchange chromatography 离子交换层析 Kd kilodalton 千道尔顿L liter 升LC light chain 轻链MAb monoclonal antibody 单克隆抗体独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

毕赤酵母的基因表达及其初步纯化

毕赤氏酵母作为表达载体的优点
1、表达效率高，遗传稳定性好 2、结构简单，表达调控机理比较清楚 3、有Pr加工系统 4、培养简单，成本低廉 5、表达产物可分泌至培养基中而自身蛋白的
分泌却很少，利于下游的纯化（毕赤氏酵母是近年来广泛应用的真核表达
系统。）
一、实验材料
• DH5α、pPICZαA 、GS115、TOP10、， pQE4Aβ15
• 离心收集沉淀，取适量沉淀进行12% SDSPAGE 分析。
• 并用Band Scan 软件进行蛋白质纯度分析.
蛋白质的分离纯化方法
——Alade
四种分离纯化方法
• 1、根据分子大小不同进行分离纯化 • 2 、根据溶解度不同进行分离纯化 • 3 、根据电荷不同进行分离纯化 • 4 、利用对配体的特异亲和力进行分离纯化
• TBST 洗涤 5 次，H来自P-DAB 底物显色试剂盒显色.
Western Blot 原理 a
• Western Blot与Southern印迹杂交或 Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色” 用标记的二抗。
Western Blot操作步骤
• 1、蛋白样品制备 • 2、蛋白含量的测定 • 3、SDS－PAGE电泳 • 4、转膜 • 5、免疫反应 • 6、化学发光，显影，定影 • 7、凝胶图象分析
6、重组蛋白的鉴定与分析
6.2 质谱分析
• 从考染（考马斯亮蓝R250CBR-250,用于检测Pr的氨基和羧基）凝胶上切下重组蛋白带，进行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析.
• 挑阳性克隆单菌落接种于BMGY(含酵母粉、甘油、生物素……）的培养基上摇床培养

乙型肝炎病毒PreS2S基因在毕赤酵母中表达的研究

ｐａｍｉｆＰＬ－／ｒＳＳｈｓｂｅｏｓｒｃｅｕｃｓｆｌｎｅｕｎｅａａｙｉｓｇｅｔｄｔａｈｎｅｔｄｆｒｌｓｄｏＨＩ — Ｄ２Ｐｅ２ａｅｎｃｎｔｕｔｄｓｃｅｓｕｌａｄｓｑｅｃｎｌｓｕｇｅｈｔｔｅｉｓｒｅｏ — ｙｓｓ．
达。通过ＰＲ扩增获得Ｐｅ２段，入含ＡＸＣｒＳＳ片插ＯＩ启动子的ＰｃｉＰｓｏｉ表达载体ＰＬＤ中，建重组ｉａａｔｒｈｓＨＩ— ２构表达质粒ＰＬＤ／ｒＳＳ转化酵母宿主菌Ｇ１５ＨＩ — ２Ｐｅ２，Ｓ１。挑取阳性克隆摇床培养，醇诱导表达。通过ＥＩＡ、甲ＬＳＲＨ鉴定表达产物。成功构建了ＰＬＤ／ｒｓｓ真核表达载体。过序列分析，入的基因为在中国流行ＰＡＨＩ— ２Ｐｅ２经插的ａｒｄ亚型。在毕赤酵母中重组载体表达了Ｓ蛋白，白的表达量为３．／Ｐｅ抗原检测为强阳性。Ｓ蛋４９ｍｇＬ，ｒ利用毕赤酵母表达系统能够有效地表达乙型肝炎病毒的Ｐｅ２ｒＳＳ蛋白，ｒＳＳ蛋白具有良好的生物学活性。Ｐｅ２
ＡｂｔａｔＩｒｅｏｃｎｔｕｔｒｃｍｂｎｎｌｓｄＰＬＤ２Ｐｅｚｎｘｒｓ－ｓｒｃｎｏｄｒｔｏｓｒｃｅｏｉａｔｐａｍｉＨＩ — ／ｒＳＳａｄｅｐｅｓＩＢＶｒｓｚｅｅｉｃｉＩＰｅＳＳｇｎｎＰｉｈａｐｓｏｉ，ｔｅＰｅ２ｅｅａｌｉｙＰｒｍａｔｒｓｈｒＳＳｇｎｍｐｉｅｂＣＲｆｏＰＭＤ一８ＳＳｗａｓｒｅｎｏｔｅＰ．ａｔｒｓｅｐｅｓｏｅｔｒｆｄ１Ｔ／ｚｓｉｅｔｄｉｔｈｐｓｉｘｒｓｉｎｖｃｏｎｏＰＬＤ２ｃｎａｎｎＨＩ－ｏｔｉｉｇＡＯＸ１ｐｏｔｒｒｍｏｅ．ＴｈｅｏｉａｔｅｐｅｓｏｌｍｉｅｒｃｍｂｎｎｘｒｓｉｎｐａｄＰＨＩ－／ｒＳＳｗａｏｓｒｃｅｎｓＬＤ２Ｐｅｚｓｃｎｔｕｔｄａｄｔａｆｒｄｉｔ１５．Ｔｈｏｉｉｅｔａｓｏｍａｔｒｎｕｅｙｍｅｈｎ１ｆｒｔｅｅｐｅｉｎｏｈｅＳｒｎｏｍｅｏＧＳｓｎ１ｅｐｓｖｒｎｆｒｎｓｗｅｅｉｄｃｄｂｔａｏｏｈｘｒｓｏｆｔｅＰｒｔｓｇｎ．ＰｏｕｔｆｅｈｎｕｔｎｗｅｅａａｙｅｔｅｅｒｄｃｓａｔｒｔｅｉｄｃｉｒｎｌｚｄｗｉＥＬＩＡｎＨＡ．ＴｈｅｕｔｈｗｅｈｔｒｃｍｂｎｎｏｈＳａｄＲＰｅｒｓｌｓｏｄｔａｅｏｉａｔｓ

人源性抗HBsAg抗体Fab段在酵母中的表达

人源性抗ＨＢＡｇ抗体Ｆｂ段在酵母中的表达ｓａ
邓宁粟宽源王殉章龙綮新杨林余宙耀
５００）１６２
（山大学生物防治国家重点实验室、物医药中心，州５Ｏ７）中生广ｌ１５
（放军第４８医院传染病研究中心，州解５广
ＶｎＤＡ聚合酶，４ＤＡ连接酶，ＮＰ及相应ｅｔＮＴＮｄＴ
的限制酶购自Ｇｎｅｅ有限公司；烯酰胺，Ｎ．甲丙Ｎ亚
防治新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播、脏移植病肝
人的病毒控制和用于制备治疗性乙肝疫苗等。。
摘要通过分步整合的方式，人源性抗乙肝表面抗原（ＢＡ）体Ｆｈ的轻、链基因分步整合到巴斯德毕赤将Ｈｓｇ抗ａ重（ｉｉｐＰｃａｈ）母Ｇ１５菌株的染色体上，甲醇诱导，功地分泌表达出抗ＨＢＡ酵Ｓ１经成ｓｇ抗体的Ｆｂ片段，达量达ａ表
公司；粒ＤＡ质Ｎ试剂盒购自华舜公司；抗人Ｆｂ羊ａ抗体及其碱性磷酸酶标记物购于Ｓｇｉｍａ公司；ＬＳＥＩＡ检测试剂盒购于中山生物工程公司；Ｂ／ＣＰ购自ＮＴＢＩＲｃｅ司。聚偏氟乙烯（ＶＦ膜购于Ｍｉｉｏｅ公ｏｈ公ＰＤ）ｌｐｒｌ司；ｉｒ亲和层析柱和快速液相蛋白层析仪Ｈｒａｒｐ（ＰＣ均为Ｐａｍｃｉ．司产品。ＦＬ）ｈｒａｉＢｏ公ａ

毕赤酵母表达研究进展

利用强效可调控启动子AOX，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因1工程抗体等多种外源基因［11、12、13］，证实该系统为高效、实用、简便，以提高表达量并保持产物生物学活性为突出特征的外源基因表达系统，而且非常适宜扩大为工业规模［14］11. 彭毅，杨希才，康良仪。

影响甲醇酵母外源蛋白表达的因素。

生物技术通报2000，4：33-3612. 11 3 Cregg JM . Tschopp JF Stillman C, et al .High-level expression and efficient assembly of hepatitis B surface antigen in the methylotrophic yeast pichia.pastoris Bio/Technology,1987,5:479-48513. Sreekrishma K , Nelles L ，Potenz R，et al .High-level expression ,purification ,and characterization of recombinant human tumor necrosis factor synthesized and characterization in the methylotrophic yeast pichia .pastoris ,Biochemistry ,1989,28:4117-412514. Siegel RS , Buckholz RG, Thill GP , et al .Production of epider growth factor in methylotrophic yeast cells, International Patent Application ,1990 ,Publication No:WO90/10697毕赤酵母是甲醇营养型酵母，可利用甲醇作为其唯一碳源。

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基金项目：国家高技术研究发展计划基金资助项目（０５Ａ０２０２０Ａ２５２）
作者简介：王亚妮（９ｌ）女，１８一，陕西岐山人，西北大学硕士生，从事细胞生物学研究。
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备单克隆抗体。
关
键
词：乙肝表面抗原；泌表达；赤酵母分毕文献标识码：Ａ文章编号：００２４２０）４００－１０－７Ｘ（０８０－５０６４多用ｐＩｇ而在ｐＩＺｔＰＣＫ，ＰＣｏ中表达乙肝表面抗原尚未见报道。本实验在分泌型毕赤酵母表达载体
ｐＩＺｔＰＣｏ中表达乙肝表面抗原，为进一步制备高效的
乙肝疫苗，防病毒感染和制备抗乙肝表面抗原单预
的严重危害人类健康的疾病。据不完全统计，全世界大约有３５．亿乙型肝炎病毒感染者…。我国是乙肝高发区，约有１２亿的乙肝携带者。因此，．乙肝病毒的预防和检测目前备受关注。乙肝表面抗原（ＢＡ）Ｈｓｇ由乙肝病毒的Ｓ基因编码，乙肝病毒的是包膜蛋白，含有主要抗原决定簇ａ。病毒感染机体后４ｌ一０周即可检测到，且滴度很高。同时，它能产生保护性抗体Ｈｓｂ因此它是乙肝病毒的重要血ＢＡ，清学标志，目前乙肝疫苗的主要成分【３。 ’ 是２】．毕赤酵母（／／ａｔｒ）近几年来常用的真Ｐｃａｐｓｉ是ｈｏｓ
接近哺乳动物。将重组蛋白高效分泌出胞外是毕赤
酵母的又一优势。关于乙肝病毒表面抗原的细胞内表达已多有报道Ｊ分泌型毕赤酵母表达载体又，
收稿日期：０６０－２２０－３２
抽提及胶回收试剂盒均购自上海华舜；ＮＤＡ测序委托上海生工进行，引物由上海华诺公司合成。
ｒＮＷＵＪ
乙肝表面抗原在分泌型毕赤酵母中的表达及纯化
王亚妮，宗炎朱娟莉２董兆麟崔亚丽陈超黄，，，，
（．１西北大学生命科学学院／因股份公司，陕西西安
中图分类号：７６Ｑ８
乙型肝炎病毒（ｅａｔｉｓＨＢ是一种ＨｐｔｉＢｖｒ，Ｖ）ｉｓｕ不完全双链ＤＡ病毒，引起乙型肝炎的病原体。Ｎ是乙型肝炎（ｅａｉｓＢ，Ｂ）一种世界范围内流行ＨｐｔｉＨ是ｔ
核表达系统，既具备原核生物生长快速，培养基廉价和实验手段简单可行的特点，又具备典型的真核生物分子生物学特性，对表达的蛋白进行加工折叠可和翻译后修饰等。较酿酒酵母而言，基化程度更糖
克隆抗体，开发检测试剂盒打下基础。
１材料和方法
１１实验材料．
１１１茵株与质粒．．
公司。
ＰｃｉａｔｒＳ１ｉａｐｓｉＧ１５菌株及ｈｏｓ
表达载体ｐＩＺｔＥｃｌＴＰ０／ＰＣｏ，．ｏＯ１Ｆ均购自Ｉｉｏｅｉｎｔｇｎｖｒ
省眼科研究所，西安市第一医院，陕西西安７００）１０２ ‘
７０６；．１０９３陕西
摘要：目的
对分泌型毕赤酵母中表达乙肝表面抗原并进行亲和层析纯化。方法
从已确诊的乙
肝患者阳性血清中提取乙病毒ＤＡ，Ｃ肝ＮＰＲ扩增乙肝病毒表面抗原编码基因Ｓ将其插入含有仅，分泌信号肽序列和６个组氨酸纯化标签的毕赤酵母表达栽体ｐＩＺｔ成功构建了重组表达载体ＰＣｏ，
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西北大学学报（自然科学版）２００８年８月，３第８卷第４期，ｕ．２０，ｏ．８Ｎ．Ａｇ，０８Ｖ１３，ｏ４ＪｕｎｌｆｏｔｅｔｎｅｉＮｔｒｌｃｅｃｄｔｎｏｒａｏＮｒｗｓＵｉｒｔｈｖｓｙ（ａａＳｉｎｅＥｉｏ）ｕｉ
１１２材料和试剂乙肝患者阳性血清由陕西省．．
人民医院检验科提供，Ｈｓｇ抗ＢＡ单克隆抗体由西工大薛小平教授提供。Ｚｏｉ自Ｉｖｒｇｎ公司；ｅｃｎ购ｎｉｏｅｔ酵
母氮原为Ｇｎｉｗ分装；ａＮ聚合酶、４连接ｅｖｅＴｑＤＡＴ酶、限制性内切酶均购于宝生物工程有限公司；质粒
ｐＩＺｔＢｓ电转化酵母茵株Ｇｌ５得到重组乙肝表面抗原Ｓ的酵母表达茵株。结果诱导ＰＣｏＨＶ。 — Ｓｌ，
培养基ＢＭＭＹ中甲醇终浓度为ｌ，％诱导表达４重组蛋白表达量及抗原性达到最高。非变性条８ｈ件下亲和层析纯化后，薄层扫描分析得到纯度超过９％，５表达量约为２ｍ／ｇＬ的重组蛋白。结论Ｗｅｔ．ｌ和ＥＩＡ分析表明，ｓｒｂｏｅｎｔＬＳ所得产物为乙肝表面抗原Ｓ蛋白，纯度和产量足以免疫小鼠制其