河豚毒素性能特点及检测方法

[管理]河豚毒素河豚毒素前言河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是鲀鱼类(俗称河豚鱼)及其它生物体内含有的一种生物碱。

其分子式为C11H17O8N3，分子量为319。

该毒素经腹腔注射对小鼠的LD50为8μg/kg。

曾一度被认为是自然界中毒性最强的非蛋白类毒素。

河豚毒素对肠道有局部刺激作用，吸收后迅速作用于神经末梢和神经中枢，阻碍神经传导，从而引起神经麻痹而致死亡。

河鲀毒素对热稳定，盐腌或日晒均不能使其破坏，只有在高温加热30min以上或在碱性条件下才能被分解。

关键字河豚毒素致死毒性一河豚毒素的分布人们通常所指的河鲀(河豚)(puffer fish)，为鲀科鱼类。

中国的鲀科鱼类共有54种，其中东方鲀属22种。

根据伍汉霖等调查，中国共有35种河鲀具有不同程度的河鲀毒性，其中，在中国南海分布的有24种，在中国东海包括台湾沿海分布的有31种，在中国黄海分布的有14种，在中国渤海分布的有10种。

多数种类生活于淡水中,以热带和亚热带为最多.大约80种河豚鱼已知含有或怀疑含有河豚毒素。

在大多数有毒的河豚鱼身体中，毒素的浓度由高到低依次是卵巢、鱼巢、肝脏、肾脏、眼睛和皮肤，肌肉和血液中较少。

由于鱼的肌肉部分河豚毒素的含量很低，所以，中毒大多数是由于可食部受到卵巢或肝脏的污染，或是直接进食了这些内脏器官引起的。

河豚鱼的有毒主要存在于雌性河豚卵巢中，而且含量随着季节变化而有不同。

其含量的多少因鱼的种类及季节而有差异，一般在卵巢孕育阶段，即春夏季毒性最强。

在冬季。

毒素的浓度最高，有趣的是河豚鱼风味最佳也是在这个时候。

二、河豚毒素的毒性河豚毒素一种存在于河豚、蝾螈、斑足蟾等动物中的海洋毒素。

毒素主要存在于河豚的性腺、肝脏、脾脏、眼睛、皮肤、血液等部位。

在碱性溶液中易分解，在低的pH值溶液中也不稳定。

河豚毒素是强烈的神经毒素，很低浓度的河豚毒素就能选择性地抑制钠离子通过神经细胞膜。

河豚毒素还有其他药理作用，是神经生理学和肌肉生理学研究的有用工具。

河豚毒素河豚毒素（tetrodotoxin, TTX）是一种毒性很强、相对分子质量小的非蛋白毒素，最初从豚科鱼中发现，故被命名为河豚毒素。

TTX为典型的Na+通道阻断剂，中毒者往往肢体麻木、瘫痪、甚至死亡；但另一方面，TTX具有镇痛、镇静、降压等功效，在临床上的应用十分广泛。

1.河豚毒素的结构与性质河豚毒素的化学研究始于1909 年, 1964 年以后由Woodward 测定了TTX 的结构, 1972 年Kishi 等采用化学方法成功合成了河豚毒素。

河豚毒素分子式为C11H17N3O8, 分子量为319.27。

分子主要由3 个氮原子组成, 它们与氢氧原子形成特殊的结构。

其结构特征如图1, 含有1 个碳环, 1 个胍基, 6 个羟基, 在C—5 和C—10位有一个半醛糖内酯连接着分开的环。

有专家将其称为“自然界最奇特的分子之一”, 也是世界上最致命的毒药之一。

1 g 河豚毒素的毒性是1 g 氰化物的1 万倍。

TTX 粗制品为棕黄色粉末, 纯品为无色晶体, 呈针状或菱形, 无臭, 无味, 易吸湿潮解, 不溶于无水乙醇、乙醚、苯等有机溶剂, 微溶于水, 极易溶于稀酸水溶液。

TTX 在溶液中存在TTX、半缩醛型TTX、内酯型TTX动态平衡的三种结构。

TTX 理化性质比较稳定, 在中性和酸性条件下对热稳定, 240 ℃开始碳化, 但300 ℃以上也不分解。

在碱水溶液中易分解, 在5%氢氧化钾溶液中于80 ℃～100 ℃可分解成黄色结晶2- 氨基- 6- 羟甲基- 8- 羟基- 喹唑啉, 这也是TTX 化学检测法的理论基础。

2. 河豚毒素中毒机理2.1 中毒临床表现河豚鱼中毒发病急速而剧烈，潜伏期为0.5～3h(一般10～45min)。

初期有颜面潮红、头痛，继而出现剧烈恶习、呕吐、腹痛、腹泻等肠胃道症状。

然后出现感觉神经麻痹症状，口唇、舌、指端麻木和刺痛。

感觉减退。

继而出现运动神经麻痹症状，手、臂肌肉无力，抬手困难，腿部无力以致运动失调，步态蹒跚，身体摇摆；舌头发硬、语言不清，甚至全身麻痹、瘫痪。

生活中的分子---河豚毒素（TTX）：剧毒却不能阻挡食客的物质生活中的分子河豚毒素（TTX）：剧毒却不能阻挡食客的物质前言2020年的春节少了过去的喜庆祥和，举国上下都被一种新型冠状病毒引发的肺炎牢牢支配。

病例数与日俱增、病毒溯源困难重重、疫苗和特效药物的研发更是任重道远，这些无不透露出人类在面临突发疫情时深深的无力感；普通百姓“谈虎色变，人人自危”，在铺天盖地并且真假难辨的信息面前身心俱疲。

导致肺炎肆虐的罪魁祸首新型冠状病毒近日被科学家证实极有可能来自野生动物，因人类食用野生动物，病毒实现了物种跨越从而导致疫情爆发。

回顾历史，在“吃”上栽跟头的绝非个例，河豚正是其中的典型代表，它身含致命毒素，丧命于河豚肉的人不在少数，时至今日却依然不能阻挡食客们的热情······一、历史悠久的河豚文化大文豪苏轼对美食颇有研究，除了人尽皆知的东坡肉，苏学士还格外钟情于河豚肉，有诗为证：“蒌蒿满地芦芽短，正是河豚欲上时”。

“拼死吃河豚”是中国民间广为流传的说法，相传过去吃河豚时餐桌旁一定要准备好稀释的粪便，一旦出现中毒症状便立即催吐。

哪怕采取如此“硬核”的方式都要吃河豚，背后一定有着不同寻常的原因。

河豚营养丰富，富含蛋白质、维生素、氨基酸、不饱和脂肪酸和微量元素，它口味香醇，具有健脾、利尿、镇痛等功效，在江浙沪一带更是与鲥鱼和刀鱼并称“长江三鲜”。

然而河豚的血液和内脏中含有致命毒素，若烹饪不当食用后有生命危险。

图 1 加工后的河豚肉（图片来源于网络）日本拥有悠久的“食鱼文化”，其中他们对河豚的喜爱达到痴迷程度。

然而，日本出现正规经营的河豚餐馆其实是近代以后的事情。

江户时代（公元1603-1868年）为避免食用河豚出现意外事件，日本曾颁布禁令不得食用河豚，直到明治维新后禁令才逐渐解除。

虽然日本政府制定了严格的河豚餐饮制度，也对从业人员的资质进行严格审核控制，但河豚中毒事件并未完全杜绝。

河豚毒素（TTX）免疫亲和柱说明书产品编号：MC01B1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的河豚毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。

亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，提高检测方法的准确度。

2、概述：河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一；其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0.5mg 即可致人于死命。

3、原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、稀释，缓慢的通过河豚毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内河豚毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。

用洗脱液洗脱河豚毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。

4、包装组成：盒中包括各种规格的河豚毒素免疫亲和柱及1份说明书。

5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----涡旋仪----离心机----25mL/50mL量筒----离心管----1mL移液器----刻度试管----针头滤器----注射器----样品瓶----转接头（配3mL免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇(样品处理用分析纯，分析用色谱纯)----乙酸（分析纯）----NaCl（分析纯）----十二水合磷酸氢二钠（分析纯）----二水合磷酸二氢钠（分析纯）----蒸馏水或去离子水。

6、注意事项：----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）；----亲和柱2～8℃储存，不得冻存；----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱；----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变；----柱容量：柱容量是1000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液体积，重新检测。

食品安全国家标准水产品中河豚毒素的测定1 范围本标准规定了水产品中河豚毒素的测定方法。

本标准第一法适用于鲜河豚鱼的肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素（tetrodotoxin，简写为TTX）的测定。

第二法适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤及鱿鱼中河豚毒素的测定。

第三法适用于鲜河豚鱼中TTX的测定。

第四法适用于河豚鱼中肌肉、肝脏、皮肤中河豚毒素的测定。

第一法液相色谱-串联质谱法2 原理试样经1%乙酸甲醇提取，免疫亲和柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 甲醇（CH3OH）色谱纯。

3.2 乙腈（CH3CN）色谱纯。

3.3 甲酸（HCOOH）色谱纯。

3.4 乙酸（CH3COOH）优级纯。

3.5 乙酸铵（CH3COONH4）色谱纯。

3.6 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。

3.7 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。

3.8 氯化钠（NaCl）。

3.9 氢氧化钠（NaOH）。

3.101%乙酸-甲醇溶液：量取10 mL乙酸（3.4），用甲醇定容至1000 mL。

3.112%乙酸-甲醇溶液：量取10 mL乙酸（3.4），用甲醇定容至500 mL。

3.120.1%甲酸溶液：量取0.1 mL甲酸（3.3），用水稀释并定容至100 mL。

3.130.1%甲酸溶液（含5 mmol/L乙酸铵）：取0.5 mL甲酸（3.3）和0.19 g乙酸铵（3.5），用水溶解并定容至500 mL。

3.14 0.1%甲酸-乙腈溶液（1：1，体积比）：取50 mL 0.1%甲酸溶液（3.12）加到50 mL乙腈中，混合均匀。

3.15 磷酸盐缓冲溶液（PBS溶液，0.05 mol/L）：称取磷酸氢二钠6.45 g（3.6），磷酸二氢钠1.09g （3.7），氯化钠4.25 g（3.8），用超纯水溶解并定容至500 mL。

河豚毒素百科名片海洋生物毒素的化学结构类型十分特殊,且各类毒素的化学结构差异极大,其中河豚毒素是近年来研究进展中最突出一种海洋毒素。

它是一种化学结构独特、毒性强烈并有广泛药理作用的一种天然毒素。

河豚毒素是一种能麻痹神经的剧毒，通常只需氰化钾五百分之一就可置人于死地的剧毒，中毒的人会因神经麻痹而窒息而死，其中，毒素直接进入血液中毒死亡速度最快。

目录编辑本段河豚的种类很多。

体长的河豚毒性相对高些，其组织器官的毒性强弱也有差异。

河豚毒素从大到小依次排列的顺序为：卵巢、肝脏、脾脏、血筋、鳃、皮、精巢。

冬春季节是河豚的产卵季节。

此时，河豚的河豚肉味最鲜美，但是毒素也最高。

随着科学的进步，令人恐惧的河豚毒素已步入了药学殿堂，并且在治疗人类疾病方面发挥着越来越重要的作用。

河豚毒素在医疗上可以用于治疗癌症。

河豚可以用于镇痛。

对癌症疼痛、外科手术后的疼痛、内科胃溃疡引起的疼痛，河豚毒素制剂均有良好的止痛作用。

使用河豚素的好处是用量极少（只需3微克），止痛时间长，又没有成瘾性。

特别是穴位注射，作用快、效果明显，可以作为成瘾性镇痛药吗啡和杜冷丁的良好替代品。

河豚毒素还可以止喘、镇痉、止痒。

河豚毒素可以治疗哮喘、百日咳。

对治疗胃肠道痉挛和破伤风痉挛有特效。

河豚毒素对细菌有强烈杀伤作用。

从河豚精巢提取的毒素，对痢疾杆菌、伤寒杆菌、葡萄球菌、链球菌、霍乱弧菌均有抑制作用，而且可以防治流感。

目前，在国际市场上，河豚毒素结晶每克已经高达17万美元。

现在，河豚毒素已经可以人工合成了。

最近，加拿大科学家却利用河豚毒素研制出一种能止痛的新型药物。

这种新型特效止痛药能够有效地缓解癌症病人的疼痛。

目前这个课题已经做完一期和二期的临床实验。

在临床实验中医生每天给病人注射两次这种药剂，一次几微克，连续注射4天。

当用药进入第3天后，患者的疼痛开始减轻。

结果，有将近70％的病人的病痛得到缓解。

研究人员还发现，最后一次注射停止后，止痛效果仍可延续。

河豚毒素的测定(tetrodotoxin, TTX)是豚毒鱼类中的一种神经毒素，为氨基全氢喹唑啉型化合物，分子式C11H17O8N3，相对分子质量319.27。

TTX是一种毒性极强的自然毒素，经腹腔注射对小鼠的LD50为8.7ug/kg，其毒性是的1000多倍。

TTX除在豚毒鱼类中广泛存在外，在两栖动物、软体动物、棘皮动物及甲壳动物等近百种动物中也广泛存在。

TTX作为一种钠离子通道阻断剂具有镇痛和解毒等生理功能。

TTX主要分布于河豚鱼的肝脏、卵巢、血液和皮肤中。

肌肉普通视为无毒，但如鱼体死后时光较长，内脏和血液中的毒素将会渐渐渗人到肌肉中，引起中毒。

河豚毒素的毒力单位普通以鼠单位(MU)表示，即在30min内杀死一只20g 左右的雄性ddy小鼠的毒素量，按照每克河豚组织中所含毒素的多少，可将河豚组织的毒力分成四个等级：20000MU以上为“猛毒”或“剧毒”；2000～20000MU之间为“强毒”；200～2000MU之间为“弱毒”；100MU 以下为“无毒，。

据测定，在产卵期间，红鳍圆豚肝脏的毒力为24×106MU，紫圆豚肝脏的毒力为65×106MU，毒性强烈。

TTX的检测办法主要有小鼠单位法、荧光分光光度法、高压液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、毛细管电泳法(CE)和液相色谱-荧光检测法等。

荧光分光光度法定量测定TTX的原理是，TTX在碱性条件下水解后生成2-氨基-6羟甲基-8羟基喹唑啉(简称C9碱)，该物质在370nm光激发下，在495 nm处有最大放射波长，通过检测该物质的荧光强度实现TTX的定量。

该办法的检出限为0.34～10.0mg/L。

除N,N-二甲酰胺可轻度增加荧光外，其他多种试剂对反应均无影响。

ELISA法检出限低，可达到0.01mg/L,但需要制备抗TTX的特异性单克隆抗体(McAb)。

本试验介绍液相色谱-荧光检测法(GB/T 23217-2008)定量测定TTX。