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货号：QS1401 规格：50管/48样丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。
通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有最大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。
自备实验用品及仪器：可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配置：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；注意事项：临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。
MDA提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、吸取0.6mL 试剂一于1.5mL离心管中，再加入0.2mL样本, 混匀。
2、95℃水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心10min。
荧光光谱法测定大鼠肝组织中丙二醛含量的方法改进赵颖;朱宝亮;李冬芹;宋晓雯;李庆周;范晴晴【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2015(000)015【摘要】目的：探寻适用于一般实验室对肝组织丙二醛（MDA）含量微量差异的测定方法。
方法分别对正常和高脂的SDS 大鼠肝组织匀浆液上清先用95％乙醇消除肝糖原的影响，再与0．35％的硫代巴比妥酸在100℃条件下反应1 h，显色后用正丁醇吡啶（15∶1）混合液萃取，最后用F－4600荧光分光光度计以激发波长为530 nm，发射波长为553 nm 测定其荧光强度，计算出肝组织中 MDA 的含量。
结果改进后的方法灵敏度为204．9，且重复性较好，变异系数CV＝1．67％。
结论改进后的方法适用于一般实验室对肝组织MDA含量微量差异的测定，可用于过氧化脂质损伤对肝脏影响的机制研究方法。
【总页数】2页(P4165-4166)【作者】赵颖;朱宝亮;李冬芹;宋晓雯;李庆周;范晴晴【作者单位】济宁医学院生物科学系，山东日照 276800;济宁医学院生理教研室;济宁医学院生物科学系，山东日照 276800;济宁医学院生物科学系，山东日照276800;济宁医学院生物科学系，山东日照 276800;济宁医学院生物科学系，山东日照 276800【正文语种】中文【中图分类】R-331【相关文献】1.氢化物原子荧光光谱法测定牛奶中铅的方法改进与探讨 [J], 李宏;李洁;陈瑛2.冷原子荧光光谱法测定沉积物中总汞方法的改进 [J], 田衎;王玉双;邢书才;吴忠祥3.原子荧光光谱法测定水产品中无机砷前处理方法的改进 [J], 于文江;董瑞;赵发;刘艳明;张喜琦;祝建华4.氢化物发生原子荧光光谱法测定大米中总砷含量样品前处理方法的改进 [J], 刘春丽5.动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进 [J], 周琪;梁运祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毛细管电泳在酶联免疫分析及天然产物有效成分检测中的
应用的开题报告
毛细管电泳是一种常用的分离技术，广泛用于分离、分析和检测各种生物化学物质。
本文主要探讨毛细管电泳在酶联免疫分析及天然产物有效成分检测中的应用。
酶联免疫分析是一种生物化学检测方法，常用于检测生化分子在体内的含量。
酶联免疫分析利用抗原与抗体之间的特异性结合，可以快速、准确地测定目标物质的浓度。
而毛细管电泳则可将多种生物分子分离开来，以及对各种化合物进行分离和检测。
毛细管电泳和酶联免疫分析相结合，则可以快速、准确地进行酶联免疫分析检测。
例如，可以通过毛细管电泳技术对抗原与抗体进行分离，然后在酶标记抗体的作用下，
检测目标物质的浓度。
毛细管电泳通过分离方式，减少了电泳过程中产生的电化学反应，提高了酶标记试剂的稳定性和灵敏度，从而提高酶联免疫分析的检测效率和准确性。
此外，毛细管电泳也被广泛用于天然产物有效成分的检测。
天然产物是指来自自然界的多种化学物质，一般含有多种组分和多个活性成分。
对于复杂的天然产物，毛
细管电泳的分离能力尤为重要。
毛细管电泳可以有效地分离天然产物中的有效成分，
并对其进行检测和鉴定。
例如，对于中草药提取物，可以利用毛细管电泳技术对其中
的化学成分进行分离和鉴定，从而为药物研发和质量控制提供有效手段。
总之，毛细管电泳技术在酶联免疫分析及天然产物有效成分检测中具有广泛的应用前景。
未来，随着分析技术和分离方法的不断完善，毛细管电泳技术在生命科学领
域的应用将会得到进一步的推广和应用。
抗氧化酶测定实验方法植物组织中丙二醛（mda）含量的测定植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(mda)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。
mda从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。
因此，mda的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。
丙二醛(mda)就是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和低温度条件下，可以与硫代巴比那韦(tba)反应分解成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。
二酮)，其最小稀释波长在532nm。
但是测量植物非政府中mda时受到多种物质的阻碍，其中最主要的就是可溶性糖，糖与tba呈色反应产物的最小稀释波长在450nm，但532nm处也存有稀释。
植物遭遇旱情、高温、低温等逆境威逼时可溶性糖减少，因此测量植物非政府中mda—tba反应物质含量时一定必须确定可溶性糖的阻碍。
低浓度的铁离子能明显减少tba与蔗糖或mda呈色反应物在532、450nm处的喷光度值，所以在蔗糖、mda与tba呈色反应中须要一定量的铁离子，通常植物非政府中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，重新加入fe3+的终浓度为0．5umol·l-1。
二、方法直线回归法mda与tba显色反应产物在450nm波长下的吸光度值零。
相同浓度的蔗糖(0—25mmol·l-1)与tba呈色反应产物在450nm的喷光度值与532nm和600nm处的喷光度值之高变成正有关，酿制一系列浓度的蔗糖与tba呈色反应后，测量上述三个波长的喷光度值，谋其直线方程，纡算是糖分在532nm处的喷光度值。
uv-120型紫外可知分光光度计的直线方程为：y532＝-0．00198十0．088d450(44—1)d450、d532、d600分别代表450、532和600nm波长下的喷光度值。
Rat malondialchehycheFOR RESEARCH USE ONLY Drug NamesMDA))ELISA Kit Kit..Generic Name：Rat malondialchehyche(MDAPurposeThis kit allows for the determination of MDA concentrations in Rat serum,Tissue,cell culture supernatant and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Rat MDA level in the sample，use Purified Rat MDA to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add MDA to wells,Combined MDA antibody which With HRP labeled,become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of MDA in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Materials provided with the k itMaterials provided withthe kit48determinations96determinations Storage User manual11Closure plate membrane22Sealed bags11Microelisa stripplate112-8℃Standard：5.4nmol/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃wash solution （20ml×20fold）×1bottle（20ml×30fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serumserum--coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-min at the speed of 2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.2.plasmaplasma--use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20 mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidlyfrozen with liquid nitrogen,maintain samples at2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t, specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP active.Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100μl to the first and the second well,then add Standard dilution50μl to the first and the second well,mix;take out100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50μl to the third and the forth well,mix;then take out50μl from the third and the forth well discard,add50μl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50μl to the fifth and the sixth well,mix;take out50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50μl to the seventh and the eighth well,mix;take out50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50μl to the ninth and the tenth well,mix,take out50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50μl to each well after Diluting,(density:3.6nmol/L,2.4nmol/L,1.2nmol/L,0.6nmol/L,0.3nmol/L) 2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same).testing sample well.add Sample dilution40μl to testing sample well,then add testing sample10μl(sample final dilution is 5-fold),add sample to wells,don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30min at37℃.4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold)with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing,add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μl to each well,except blank well.7.incubate：Operation with3.8.washing：Operation with5.9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes inthe room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water helps dissolvewhen dilute.Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids theexperimental error.add sample within5mins,if the number of sample is much, recommend to use Volley.4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD is bigger than the firststandard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly,The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range0.1nmol/L -4nmol/LStorage and validity1．Storage ：2-8℃.2．validity ：six months.Take the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper,Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation,calculate the sample density,multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.This chart for reference only大鼠丙二醛（MDA）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，组织，细胞上清及相关液体样本中丙二醛（MDA）的含量。
小鼠丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒说明书小鼠丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被丙二醛（MDA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的丙二醛（MDA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8nmol/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
实验7-2丙二醛含量测定实验7-2 丙二醛（MDA）含量测定【实验目的】1、掌握植物组织中丙二醛含量测定的原理和方法。
2、了解丙二醛含量测定的意义。
【实验原理】植物器官在衰老或逆境胁迫时，会发生脂质过氧化作用，丙二醛（MDA）是其终产物之一，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。
在高温和酸性条件下，丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮（三甲川），在532nm 处有最大吸收波长。
植物在胁迫条件下可溶性糖增加，而糖与硫代巴比妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最大吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙二醛含量时需排除可溶性糖的干扰。
采用双组分分光光度法可分别求出丙二醛和可溶性糖的含量。
蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙二醛与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出二元一次方程：A450=C1×85.4A532- A600=C1×7.4+ C2×155000解此方程得：C1（mmol/L）=11.71 A450C2（μmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度C2——丙二醛的浓度A450、 A532、A600分别表示450、532和600nm波长下的吸光值。
【实验器材与试剂】1、实验材料受逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官、正常植物叶片或器官2、实验试剂 10%的三氯乙酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏水稀释定容至100mL）、石英砂、0.6%的硫代巴比妥酸（称取0.6克硫代巴比妥酸先用少量1mol/L氢氧化钠溶解，再用10%三氯乙酸定容至100mL）3、实验仪器分光光度计、离心机、研钵、电炉、试管、量筒、天平、移液管等【实验步骤】1、MDA的提取称取材料1g，剪碎，先加入2mL10%的三氯乙酸和少量石英砂研磨，再加入8mL10%的三氯乙酸充分研磨后，4000r/min离心10min，上清液即为样品提取液。
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。
丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA 在内的复杂化合物，此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。
丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。
丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 样本处理：① 清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血。
取待测液体样本20μl ，加入MDA 沉淀液4ml ，混匀，室温静置5min ，3500g 离心10min ，弃上清。
加入1ml 蒸馏水，振荡混匀2min ，以便充分溶解沉淀(MDA 样品)，即获得MDA 待测液。
② 组织、细胞等样本：组织或细胞可以使用PBS 或Leagene Western 及IP 细胞裂解液等进行匀浆或裂解。
匀浆或裂解组织时，组织重量占匀浆液或裂解液的比例应为10%；对于细胞，每106个细胞使用0.1ml 裂解液或匀浆液。
匀浆或裂解后，，取上清用于后续测定。
匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
加入1ml 蒸馏水，振荡混匀2min ，以便充分溶解沉淀(MDA 样品)，即获得MDA 待测液。
编号 名称TO1015 50T TO1015 100T Storage试剂(A): TBA0.4g 0.8g RT 避光 试剂(D): MDA 标准品(1mmol/L) 0.1ml 0.2ml -20℃ 避光 试剂(E): MDA 沉淀液 200ml 400ml RT 试剂(F): MDA 分离液 150ml300mlRT 避光使用说明书 说明书本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：试剂类别化学成分 是否干扰缓冲液HEPES (100mM) 否 Borate (50mM) 否 Phosphate (100mM)否 Tris (25mM)否 去垢剂CHAPS (≤1%) 否 Triton X-100 (≤1%) 否 Tween 20 (≤1%)否抑制剂/螯合剂PMSF (≤200μM) 否 EDTA (≤1mM) 否 EGTA (≤1mM) 否 Antipain (≤100μg/ml) 否 Chymostatin (≤10μg/ml) 否 Leupeptin (≤10μg/ml) 否 Trypsin (≤10μg/ml)否 其他Glycerol (≤10%) 否 Sucrose (250mM)是2、 TBA 工作液的配制。
生物样本中丙二醛测定方法的研究进展张秋萍;吴霞红;郑剑恒;孙孟炜【摘要】A review on the progress of researches on methods for determination of malondialdehyde in biological samples (mainly including biological fluids,urine and tissues)was presented,relating especially to methods of UV-Vis spectrophotometry, fluorescence spectrometry, HPLC, GC-MS, ELISA,and Raman spectroscopy.Prospects on the trends of development in this field were also given (36 ref.cited).%综述了生物样本（主要包括生物体液、尿液、动物组织）中丙二醛的测定方法，主要包括紫外-可见分光光度法、荧光光谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、酶联免疫吸附法和拉曼光谱法等，并对生物样本中丙二醛的测定方法进行了展望（引用文献36篇）。
【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2016(052)008【总页数】7页(P979-985)【关键词】生物样本;丙二醛;测定方法【作者】张秋萍;吴霞红;郑剑恒;孙孟炜【作者单位】上海体育科学研究所国家体育总局竞技运动能力综合评定重点实验室，上海 200030;上海体育科学研究所国家体育总局竞技运动能力综合评定重点实验室，上海 200030;上海体育科学研究所国家体育总局竞技运动能力综合评定重点实验室，上海 200030; 复旦大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室公共卫生教育部重点实验室，上海 200032;上海体育科学研究所国家体育总局竞技运动能力综合评定重点实验室，上海 200030【正文语种】中文【中图分类】O65丙二醛(MDA)是脂质过氧化的主要代谢产物。
植物组织中丙二醛的测定植物组织中丙二醛的测定一、实验目的和要求1.了解植物叶片衰老过程中丙二醛（MDA）含量变化；2.掌握测定丙二醛（MDA）含量的常用方法。
二、实验内容和原理植物器官在逆境条件下或衰老时，自由基代谢失调，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常作为脂质过氧化指标，用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。
MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应，形成三甲基复合物，该复合物的最大吸收峰在532nm处，最小吸收峰在600nm处，消光系数为155 (mM)-1 cm-1。
三、实验材料和主要仪器材料：新老叶蛋白提取液仪器：移液枪，水浴箱，离心机，离心管，分光光度计试剂：磷酸缓冲液，TBA，TCA四、实验方法和步骤1.制取提取液（一周前进行）称叶龄差异明显的叶片各0.50g 左右，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8），于冰浴中研磨提取，匀浆液以8000g 离心力作用下（4℃）离心10min，其上清液即为提取液。
2.加试剂以及处理：实验管：分别向1mL新老叶提取液中加TBA与TCA混合液4.0mL （92oC水浴保温30min）空白管：1mL Pi-buffer +TBA与TCA混合液 4.0ml （92oC水浴30min）3.冷却后，平衡，离心5min（10000rpm）4.测吸光度：测定A532, A450和A600五、实验数据记录和处理由上一次实验可知，新叶质量为0.50g，老叶为0.53g实验数据记录如下：项目A532值A450值A600值新叶0.147 0.771 0.009老叶0.244 1.530 0.026数据计算：MDA含量计算公式：MDA(mmol/L)=(A532-A600)/(155*L)，L 为比色杯厚度(cm)，此次实验L=1cm。
蔗糖对MBA-TBA反应有干扰，可用下式消除：MDA(μmol/L)=6.45(A532-A600)-0.56A450进一步可以算出单位鲜重植物组织中的MDA含量。
动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进【摘要】目的初步探讨糖类物质对肝组织中丙二醛（MDA）含量测定的干扰并改进测定方法。
方法该实验以含糖量不同的小鼠肝匀浆作为实验材料，通过葡萄糖在450nm和532nm处吸光度值的正相关关系建立直线回归方程，校正MDA在532nm处的吸光度值。
计算出样品中MDA含量。
结果肝组织中糖类物质会干扰MDA 含量的测定，尤其是当样品中糖量含量间差异较大时，糖的干扰可能导致对机体受损程度的错误评判。
结论改进后的方法更为科学、准确，可应用于动物肝组织丙二醛含量的测定。
【关键词】丙二醛；灵芝多糖；葡萄糖；直线回归法丙二醛（Malomdialdehvde，MDA）是机体内的氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，形成的脂质过氧化物，测试MDA的量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度［1］。
传统的测定方法是利用过氧化降解产物中的丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）在高温和酸性条件下缩合，形成的红色产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）于532nm处有最大吸收峰来进行测定的。
这种方式常常受到多种物质不同程度的干扰［2］。
其中最主要的干扰因素是组织内的可溶性糖。
动物肝组织中含有大量的肝糖原，在测定时降解的葡萄糖会干扰测定。
而探讨动物组织中糖类物质对MDA测定的干扰及消除方法还未见报道。
本研究以含糖量不同的小鼠肝匀浆作为实验材料，初步探讨了葡萄糖对肝组织中MDA含量的测定的干扰并改进了测定方法。
1 材料1.1 动物清洁级昆明种雄性小鼠，18～20 g，由湖北省疾病预防控制中心实验动物研究中心提供。
动物饲养室温度为22～25 ℃，湿度为65%～80%。
1.2 试剂丙二醛（MDA）测定试剂盒，购于南京建成工程研究所。
其它化学试剂均为分析醇。
1.3 仪器752型紫外光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；飞鸽牌TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）；解剖剪。
2 方法2.1 动物分组及给药清洁级昆明雄性小鼠48只，体质量18～20 g。
微量丙二醛（MDA）测定
1，按照试剂盒说明书配制试剂
MDA含量测定与T-SOD活力测定用的血清是同一份。
2，仪器的选择
1)根据以下加样表加样
却，532nm处测定吸光值
先用4mlEP管作为容器，反应完全后，移入比色皿中测量OD值酶标仪
却，532nm处测定吸光值(A
=A)
蒸馏水
先用0.5mlEP管作为容器，反应完全后，移取200μl至96T板中测量OD值
*实验部分结数据见表中红色数据
2）结果分析；1，与T-SOD活力检测结果类似，酶标仪所测得的MDA含量的值要稍微大一些，但都相差不大，所以可以选择酶标仪
3，最佳取样量第二次预试
2)结果分析：加5μl的血清量得出的MDA含量合适，稀释倍数过大，MDA含量过少，
不利于比较
3)总结：统一选择5μl的原血样做为加样量
3，血样按照以上方法处理后分装，取出一份待测，其余的先放入4℃后放入-80℃冷冻。
再按以下加样表加样。
